P21基因过表达对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制
c-Myc启动子结合蛋白1与肿瘤
c-Myc启动子结合蛋白1与肿瘤郭三君;谢勇恩【摘要】Human c-Myc promoter binding protein 1 (MBP-1 )is a molecule recently discovered located in cell nucleus.MBP-1 can modulate the expressing of multiple genes related to cell proliferation,apoptosis and tumor.This article summarizes the research progress of thismolecule,including its gene structure,cellular location,down streaming target molecules and its association to tumor.%人 c-Myc 原癌基因启动子结合蛋白1（c-Myc promoter binding protein 1，MBP-1）是新近发现的一个定位于细胞核内的调节分子，能靶向调控多种细胞增殖、凋亡和肿瘤相关基因的表达。
本文归纳和总结了其基因结构、细胞定位、调控的下游靶分子及其与肿瘤发生发展的相关性等方面的研究进展。
【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2016(031)005【总页数】4页(P773-776)【关键词】c-Myc启动子结合蛋白1;靶分子;肿瘤【作者】郭三君;谢勇恩【作者单位】川北医学院免疫与分子生物学研究所，四川南充 637000;川北医学院免疫与分子生物学研究所，四川南充 637000【正文语种】中文Ray等[1]从人类宫颈癌细胞HeLa细胞cDNA表达文库中克隆出一个新基因，其表达产物能与人类c-Myc原癌基因P2启动子特异性结合，阻止c-Myc的表达，因而将其命名为c-Myc启动子结合蛋白1(c-Myc promoter binding protein 1，MBP-1)。
TM4SF1在甲状腺乳头状癌淋巴结转移中的作用及机制研究演示稿件
研究发现，过表达TM4SF1可以促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖，而抑制TM4SF1的表 达则可以诱导细胞凋亡。
详细描述
通过建立稳定过表达或抑制TM4SF1表达的甲状腺乳头状癌细胞系，进行细胞增殖和凋 亡实验，结果显示过表达TM4SF1可以促进甲状腺乳头状癌细胞的增殖，而抑制
TM4SF1的表达则可以诱导细胞凋亡。这表明TM4SF1在甲状腺乳头状癌的生长过程中 也发挥重要作用。
TM4SF1作用的机制探讨
总结词
TM4SF1通过多种机制参与甲状腺乳头状癌 淋巴结转移过程，涉及细胞信号转导、细胞 骨架重排和肿瘤微环境等多个方面。
详细描述
研究发现，TM4SF1能够激活EGFR/MAPK 信号通路，促进癌细胞增殖和迁移。同时， TM4SF1还与细胞骨架蛋白相互作用，影响 细胞形态和运动能力。此外，TM4SF1还可 能影响肿瘤微环境中的细胞因子和基质成分 ，促进淋巴结转移。
详细描述
通过建立稳定过表达或抑制TM4SF1表达的甲状腺乳头状癌细胞系，进行细胞迁移和侵袭实验，结果 显示过表达TM4SF1可以促进甲状腺乳头状癌细胞的迁移和侵袭能力，而抑制TM4SF1的表达则可以 抑制其迁移和侵袭能力。这表明TM4SF1在甲状腺乳头状癌的转移过程中发挥重要作用。
TM4SF1对甲状腺乳头状癌细胞增殖和凋亡的影响
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本研究的局限性和未来研究方向
• 总结词：本研究仍存在一定局限性，如样本量较小、缺乏临床数据验证等。未来研究应进一步探讨TM4SF1在 其他类型甲状腺癌中的表达和作用，以及其在肿瘤免疫和耐药方面的机制。
• 详细描述：首先，本研究仅针对甲状腺乳头状癌进行了研究，未能涵盖其他类型的甲状腺癌。因此，未来研究应进一步探讨TM4SF1在甲状腺癌中的普遍性和差异性。其次，本研究缺 乏临床数据验证，未能将研究成果直接应用于临床实践。未来研究应收集临床样本，对TM4SF1的表达水平与患者预后和治疗反应之间的关系进行深入分析。此外，本研究仅初步探讨 了TM4SF1作用的机制，未来研究应进一步挖掘其在肿瘤免疫和耐药方面的作用机制，为甲状腺癌的治疗提供更多潜在靶点。最后，本研究未能涉及TM4SF1的调控机制，如转录因子、 表观遗传学修饰等。未来研究可从基因表达调控角度深入探讨TM4SF1在甲状腺癌中的表达调控机制。
p21基因作用
p21基因作用P21基因是一种抑制细胞周期进程的关键基因，也被称为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A（Cip1）或骨架蛋白P21（Waf1/Cip1）。
这个基因编码的蛋白质P21是一种蛋白酶抑制剂，可以通过和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）结合以抑制其激酶活性。
在细胞内，CDK与其配体细胞周期蛋白（Cyclin）相结合后形成复合物，促进细胞周期的推进。
P21的出现可以抑制CDK的活性，从而阻断细胞周期的推进，使细胞停留在G1/S和G2/M转换期，保证了DNA修复和细胞凋亡的进行。
P21基因在人体细胞中广泛表达，它的表达受到多种信号的调控。
在细胞受到DNA损伤、细胞失去正常的生长因子刺激、细胞内出现异常增殖等情况下，P21基因会被激活并开始进行转录。
这样一来，P21蛋白就会在细胞核内大量积累，抑制CDK的活性，使细胞周期停滞，为细胞提供更多时间来进行DNA修复。
这是细胞对于DNA损伤的一种保护机制，可以避免受损的DNA进入有问题的细胞周期，从而避免细胞突变和癌变。
除了在DNA损伤修复过程中的重要作用外，P21基因还参与了多种细胞生理过程的调控。
例如，在细胞老化过程中，P21的表达上调可以抑制细胞的增殖，并促进细胞进入细胞凋亡程序。
这对于细胞的寿命和代谢稳定具有重要意义。
此外，研究表明P21还参与了多个信号通路的调节，如细胞凋亡通路、转录调节通路等，与细胞周期密切相关的转录因子和调节因子也有可能与P21相互作用，共同调控细胞的分化和发育。
P21基因作为一个细胞周期调控剂，具有广泛的生物学功能，对于维持细胞的正常功能和机体的健康至关重要。
近年来，关于P21基因的研究越来越受到关注，人们已经发现了许多与其相关的生理和病理学过程，并对其作用机制进行了深入研究。
首先，P21基因在细胞周期的控制中起着至关重要的作用。
正常细胞周期的进行需要严格的调控，细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）是细胞周期进行的重要调控分子。
细胞增殖相关基因的表达变化及其对生长发育的影响
细胞增殖相关基因的表达变化及其对生长发育的影响细胞增殖是人体生长发育、组织修复和癌细胞繁殖的基础。
而生物体内细胞增殖相关基因的表达变化决定了细胞增殖活力的高低和细胞命运的走向。
本文将探讨细胞增殖相关基因的表达变化及其对生长发育的影响。
一、细胞增殖相关基因的表达变化1.增殖相关基因的分类增殖相关基因主要包括促增殖因子（如胰岛素样增生因子1-1、表皮生长因子、神经生长因子等）、细胞周期调控基因（如Cyclin、CDKs等）、转录因子（如MYC、FOS等）和凋亡抑制基因（如BCL-2、Survivin等）等。
2.细胞增殖相关基因的表达变化在胚胎发育和组织修复时，增殖相关基因的表达呈现出高水平，而在成熟组织中则表达水平较低。
此外，体内外环境的改变也会导致增殖相关基因的表达发生变化。
例如，缺氧、营养不良、创伤和感染等外界刺激会刺激增殖相关基因的表达；而DNA损伤、细胞周期的调整和凋亡也会影响增殖相关基因的表达。
二、细胞增殖相关基因对生长发育的影响1.细胞增殖与生长发育细胞增殖与生长发育密切相关。
细胞增殖能够增加组织和器官的细胞数，从而使生命体积增大，细胞的分裂与生长紧密结合。
2.细胞增殖相关基因对生长发育的影响增殖相关基因的表达水平变化对生长发育有着至关重要的影响。
例如，缺氧和营养不良会抑制胰岛素样增生因子1-1的表达，从而影响生长激素的合成，导致生长发育受到抑制。
而MYC基因则是促进细胞增殖的核心转录因子，过高表达可以导致恶性肿瘤的发展；相反，对MYC基因的敲除或抑制会导致胚胎的发育和组织的修复能力下降。
3.细胞增殖在器官特化和功能分化中的作用细胞增殖在生命体的器官特化和功能分化中也扮演着重要的角色。
例如，不同生命阶段心肌细胞增殖能力的差异，导致心肌细胞分化和再生能力的不同。
总之，细胞增殖相关基因的表达变化与生长发育密切相关。
在人体发育、组织修复和癌细胞进展中都起着不可替代的作用。
随着对这些机制的深入研究，相信细胞增殖相关基因调控的神秘面纱也会逐渐揭开。
细胞增殖与凋亡途径及其在肿瘤治疗中的应用
细胞增殖与凋亡途径及其在肿瘤治疗中的应用细胞增殖和凋亡是生物体内最为重要的细胞信号传导途径之一。
它们对于生物的正常发育和组织修复、再生起到至关重要的作用。
而在肿瘤的形成和治疗中，细胞增殖和凋亡也扮演着非常重要的角色。
本文将对细胞增殖和凋亡途径的基本原理进行介绍，并阐述它们在肿瘤治疗中的应用。
一、细胞增殖途径细胞增殖是细胞在分裂周期中不断重复的过程，其分为四个阶段：G1期、S期、G2期以及M期。
在这个过程中，细胞必须依赖于复杂的信号传导途径来保证正常的增殖过程。
其中最为关键的信号通路是细胞周期调控蛋白（CDK）-细胞周期抑制蛋白（CKI）信号通路。
CDK与CKI是相互作用的蛋白，可以控制细胞周期的进程。
在G1到S期间，CDK的活性升高，CKI的表达下降，这时间细胞进入S期。
而在S和G2期间，CDK和CKI的相互作用表明细胞的生长阶段已经完成，而进入M期。
此外，各种外界环境因素（例如DNA损伤）也会影响CDK与CKI的相互作用，归纳为细胞应激信号通路。
现代肿瘤治疗中，细胞增殖途径的调控成为了关键的治疗手段。
例如，一些药物可以通过抑制CDK与CKI的相互作用来诱导细胞的凋亡，从而防止癌细胞增殖。
二、细胞凋亡途径细胞凋亡是由于DNA损伤、外界压力或其他原因引起的一种自我死亡的程序性途径。
细胞凋亡的主要机制包括线粒体途径和死亡受体途径。
线粒体途径主要是由于线粒体膜受到损伤，导致线粒体内部的细胞色素c溢出，从而触发细胞凋亡。
而死亡受体途径则是由于外界信号分子与细胞表面的受体结合，从而引起一连串的细胞内磷酸化反应，并最终导致细胞凋亡。
肿瘤细胞与正常细胞有一个重要的区别，就是其凋亡途径被失调了。
一般来说，肿瘤细胞会通过多种机制来逃避凋亡，使得它们无法被细胞凋亡途径所消灭。
因此，目前肿瘤治疗中，研究细胞凋亡途径的调控成为一个热门的领域。
三、细胞增殖与凋亡在肿瘤治疗中的应用在肿瘤治疗中，许多药物都是设计用来干扰细胞增殖和凋亡的途径，从而达到杀死癌细胞的目的。
肿瘤细胞中的过表达酶-概述说明以及解释
肿瘤细胞中的过表达酶-概述说明以及解释1. 引言1.1 概述概述肿瘤是一种异常增生的细胞群体，其发展和生长受到多个因素的调控。
过表达酶是一类在肿瘤细胞中异常高表达的酶，它们在肿瘤细胞的生长、分裂、侵袭和转移过程中起着重要的调控作用。
本文将对肿瘤细胞中过表达酶的定义、功能及其在肿瘤发展中的重要性进行详细探讨。
过表达酶是指在肿瘤细胞中表达水平异常增加的酶，与正常细胞相比，其活性和表达量明显增加。
这些过表达酶可以包括代谢酶、修复酶、信号传导酶等不同类型的酶，它们在细胞内参与了多个关键的代谢和调控过程。
由于过表达酶在肿瘤细胞中的异常高表达，其功能与调控作用也具有不同于正常细胞的特点。
肿瘤细胞中的过表达酶在肿瘤发展中起着重要的调控作用。
首先，它们参与了肿瘤细胞的增殖和生长过程。
某些过表达酶能够促进细胞周期的进程，使肿瘤细胞能够不受限地增殖，从而导致肿瘤的快速生长。
其次，过表达酶还参与了肿瘤细胞的侵袭和转移过程。
这些酶能够分解细胞外基质，促进肿瘤细胞的侵袭和转移，增加肿瘤的侵袭性和转移能力。
此外，过表达酶还与肿瘤细胞的耐药性和免疫逃逸等现象密切相关。
本文将在接下来的章节中详细探讨肿瘤细胞中过表达酶的相关知识。
首先，我们将对肿瘤细胞中过表达酶的定义和功能进行介绍，以便更好地理解它们在肿瘤发展中的作用。
接着，本文将重点讨论过表达酶在肿瘤细胞中的重要性，包括其在肿瘤细胞增殖、侵袭、转移以及治疗抗性中的作用。
最后，我们将总结本文的主要内容，并探讨过表达酶对肿瘤治疗的意义，希望通过对这一领域的研究，能够为肿瘤治疗提供新的思路和方法。
文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章结构部分旨在介绍整篇文章的组织结构，以帮助读者了解文章的脉络和内容安排。
本文按照以下结构展开讲述肿瘤细胞中的过表达酶的相关问题。
第一部分是引言部分，旨在引入文章的主题并给出整体的背景和目的。
引言部分包括三个方面的内容。
1.1 概述：在概述部分，我们将简要介绍肿瘤细胞和酶的基本概念，以及肿瘤细胞中过表达酶的现象。
AP-1与肿瘤、自身免疫性疾病、哮喘、肾脏疾病关系的研究进展
AP-1与肿瘤、自身免疫性疾病、哮喘、肾脏疾病关系的研究进展史珑，王向华，杨达胜（新乡医学院第一附属医院，河南新乡453100）摘要：激活蛋白1（AP-1）是机体内一种重要的转录因子。
近年来研究表明，AP-1活性失调与肿瘤、哮喘、自身免疫性疾病、肾脏疾病等多种疾病的发生、发展有关。
AP-1在前列腺癌、甲状腺癌、子宫内膜癌、胃癌等肿瘤中表达失调，其表达失调可导致肿瘤进展，且与预后相关。
AP-1在自身免疫性疾病如类风湿关节炎中过表达，而在系统性红斑狼疮患者中AP-1的表达降低。
AP-1高表达参与了支气管哮喘的发病，且与糖皮质激素抵抗有关。
AP-1可调节糖尿病肾病发生发展中起重要作用的基因的表达，还可介导糖尿病肾病标志蛋白纤连蛋白的合成。
另外，AP-1表达升高还与肾病综合征的发病有关。
关键词：激活蛋白1；肿瘤；自身免疫性疾病；哮喘；肾脏疾病doi ：10．3969/j．issn．1002-266X．2019．20．027中图分类号：Ｒ364文献标志码：A文章编号：1002-266X （2019）20-0093-04通信作者：杨达胜（E-mail ：yds0811@126．com ）激活蛋白（AP-1）是一种碱性亮氨酸拉链蛋白［1］，由Jun （c-Jun 、Jun-B 、Jun-D ）、Fos （c-Fos 、Fos-B 、Fra-1、Fra-2）、ATF （ATF2、ATF3、LＲF1、B-ATF 、JDP1、JDP2）和MAF （C-Maf 、MafB 、MafA 、Maf ）蛋白家族形成的同源或异源二聚体［2］。
AP-1家族中研究最多和最主要的是Jun 和Fos 蛋白家族。
AP-1是调节细胞增殖、分化和凋亡的关键转录因子［3］，作为基因转录启动的分子开关，AP-1信号转导通路可被细胞张力变化、电离作用、DNA 损伤、氧化应激、紫外线照射、细菌及病毒感染等刺激激活，活化的AP-1与TPA 反应元件（TＲE ）结合，促进多种炎症因子（如IL-2、IL-8、TNF-α、TGF-β1、IFN-γ等）的表达，进而影响细胞的生理功能、参与某些疾病的发生。
基因表达调控及其对细胞功能的影响
基因表达调控及其对细胞功能的影响基因表达调控是指细胞内部的一系列机制和过程，通过调控基因的转录和翻译过程，使得特定的基因在特定的时间和空间上表达出来。
这种调控机制对于细胞的功能和生物体的发育起着至关重要的作用。
本文将探讨基因表达调控的几种机制以及它们对细胞功能的影响。
1. 转录调控转录调控是指通过调控基因的转录过程来影响基因表达。
细胞内存在着多种转录因子和调控因子，它们可以结合到基因的启动子区域上，促进或抑制转录的进行。
这些调控因子可以响应环境信号或细胞内的信号通路，从而调节基因的表达水平。
例如，一些转录因子在细胞受到外界刺激时会被激活，进而启动特定基因的转录，从而调控细胞的生理反应。
2. 翻译调控翻译调控是指通过调控基因的翻译过程来影响基因表达。
在转录后，mRNA需要经过翻译过程才能产生蛋白质。
细胞内存在着多种调控因子，它们可以结合到mRNA上，促进或抑制翻译的进行。
这些调控因子可以调节翻译的速率和准确性，从而影响细胞内特定蛋白质的表达水平。
例如，一些调控因子可以选择性地促进特定mRNA的翻译，从而调控细胞的代谢和增殖。
3. 修饰调控修饰调控是指通过化学修饰基因组和蛋白质分子来影响基因表达。
细胞内存在着多种修饰酶和修饰酶，它们可以在DNA和蛋白质上添加或去除化学修饰基团。
这些化学修饰可以改变基因组的结构和染色质的状态，从而影响基因的可及性和表达水平。
例如，DNA甲基化是一种常见的修饰方式，它可以静默基因的表达，从而影响细胞的分化和发育。
基因表达调控对细胞功能的影响是多方面的。
首先，它可以使细胞在不同的环境和发育阶段中表达不同的基因，从而实现细胞的多样化和分化。
例如，在胚胎发育过程中，基因表达调控可以使细胞逐渐分化为不同的器官和组织。
其次，基因表达调控可以使细胞对外界刺激做出快速和准确的反应。
例如，当细胞受到外界刺激时，特定的基因会被启动，从而调控细胞的生理反应，如细胞凋亡和免疫应答。
此外，基因表达调控还可以影响细胞的代谢和增殖。
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P21基因过表达对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制翟健;胡万宁;李军;石福民【摘要】目的探讨过表达细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)基因对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法将人甲状腺癌细胞SW579分为对照组(未转染)、PCLneo-HK组(转染空载体)和PCLneo-P21组(转染真核过表达载体).采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力;采用流式细胞仪分析细胞的凋亡情况;采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞中P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达水平.结果PCLneo-P21组SW579细胞中P21蛋白的相对表达量明显高于对照组(P﹤0.01);PCLneo-P21组SW579细胞的增殖率明显低于对照组,凋亡率明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01);PCLneo-P21组SW579细胞中Bcl-2、cyclin D1蛋白的相对表达量均明显低于对照组,BAX蛋白的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).结论过表达P21基因可以通过影响细胞凋亡相关基因的表达抑制甲状腺癌细胞的增殖,并诱导其凋亡.【期刊名称】《癌症进展》【年(卷),期】2019(017)003【总页数】4页(P280-283)【关键词】P21;甲状腺癌;增殖;凋亡;细胞周期蛋白D1【作者】翟健;胡万宁;李军;石福民【作者单位】唐山市人民医院头颈外科,河北唐山 0630010;唐山市人民医院头颈外科,河北唐山 0630010;唐山市人民医院头颈外科,河北唐山 0630010;唐山市人民医院头颈外科,河北唐山 0630010【正文语种】中文【中图分类】R736.1甲状腺癌是内分泌系统较为常见的一种恶性肿瘤，其发病率逐年增加，约占全身恶性肿瘤的3%，约占头颈部恶性肿瘤的5%[1]。
据报道，全球甲状腺癌的发病率女性是男性的3.57倍[2]。
目前，甲状腺癌的治疗手段主要包括手术治疗、内分泌治疗和131I治疗等，但治疗后易出现复发[3]。
因此，寻找新的方法改善肿瘤的治疗和预后具有重要意义。
肿瘤的发生是一个复杂的过程，受多种因素的影响，如癌基因和抑癌基因的异常表达等均可导致细胞的恶性增殖，严重威胁人类的生命健康。
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（cyclindependent kinase inhibitor 1A，P21）可以抑制周期蛋白依赖性激酶的活性，对细胞周期发挥调控作用。
相关研究表明，P21在细胞增殖过程中DNA的损伤、修复过程中发挥重要作用，P21过表达可以使细胞周期停滞在G1、G2或S期[4-5]。
目前，关于P21在甲状腺癌中作用机制的研究相对较少，因此本研究通过过表达P21基因，探讨P21基因过表达对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制，旨在为甲状腺癌的诊断、治疗及预后提供新的思路。
1 材料与方法1.1 材料人甲状腺癌细胞系SW579购自美国菌种保藏中心（American Type Culture Collection，ATCC）细胞库，胎牛血清（fetal calf serum，FBS）、L-15培养基、脂质体Lipofectamine 2000均购自美国Invitrogen公司，噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）购自上海碧云天生物技术有限公司，膜联蛋白V（Annexin V）-异硫氰酸荧光素（FITC）/碘化丙锭（PI）细胞凋亡检测试剂盒购自上海翊圣生物科技有限公司，P21抗体购自美国BD公司，B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）抗体、Bcl-2相关X蛋白（B cell lymphoma/leukemia-2 associated X protein，BAX）抗体、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.2 细胞培养将SW579细胞冻存管迅速置于37℃水浴中，不停晃动使细胞尽快融化，800r/min离心5 min，收集细胞，常规培养于含10%FBS和青链霉素的L-15培养基中，置于5%CO2、37℃饱和湿度的细胞培养箱中进行培养。
采用0.25%胰蛋白酶消化细胞，按1∶3的比例每3～4天传代1次。
1.3 细胞转染取生长状态良好的对数期SW579细胞，采用0.25%胰蛋白酶消化细胞，采用不含抗生素的L-15培养基重悬细胞，以2×105/孔细胞加入6孔板中，置于CO2孵箱中培养24 h，待细胞覆盖率为90%～95%时，将细胞分为对照组（未转染）、PCLneo-HK组（转染空载体PCLneo-HK）和PCLneo-P21组（转染真核过表达载体PCLneo-P21）。
具体转染方法：将4 μg PCLneo-HK或PCLneo-P21质粒与10 μl Lipofectamine 2000混合液加入培养板中，在37℃培养箱中培养6 h，然后将培养基更换为含血清与双抗的培养基，采用蛋白质印迹法（Western blot）检测转染效果。
1.4 MTT法检测细胞增殖活力取SW579细胞，调整细胞浓度至2×103/ml，将细胞接种于96孔板中，按照不同分组（对照组、PCLneo-HK组、PCLneo-P21组）分别处理后置于孵育箱中培养48 h，每孔加入20 μl 5 mg/ml MTT溶液，继续培养4 h后终止，小心弃去上清液，加入150 μl二甲基亚砜，振荡混匀10 min，使结晶物充分溶解，置于酶联免疫检测仪上检测各孔在490 nm处的光密度值（optical density，OD），每组织5个复孔，实验重复3次，处理组与对照组OD值的比值为细胞的增殖率。
1.5 流式细胞仪分析细胞的凋亡情况取1×105个SW579细胞接种于6孔板上，按照不同分组（对照组、PCLneo-HK 组、PCLneo-P21组）培养48 h后，采用胰蛋白酶消化，离心，收集细胞，磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）清洗2次，采用1×binding buffer 重悬细胞，在凋亡检测试剂说明书的指导下每孔加入5 μl Annexin V-FITC和5 μl PI，振荡混匀，常温避光反应10 min，置于流式细胞仪上检测细胞凋亡率。
1.6 Western blot检测细胞中 Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的表达量收集处理48 h后的对照组、PCLneo-HK组、PCLneo-P21组细胞，PBS清洗2次，加入细胞裂解液，12 000 r/min离心15 min，离心半径30 cm，保存于-80℃中，Bradford法检测蛋白浓度。
取样本蛋白与1×蛋白上样缓冲液充分混合后，在100℃中变性5 min，将提前配置的10%的分离胶和5%的浓缩胶固定于蛋白电泳槽中，每孔加入30 μg蛋白样品，90 V电泳至染料前沿进入分离胶，将电压提高至110 V，待溴酚蓝到达分离胶的底端时，停止电泳。
切去多余凝胶，在转移缓冲液中将蛋白凝胶转移至硝酸纤维素膜上，剪去多余部分，置于5～10 ml 5%脱脂牛奶封闭液中常温作用1 h，TBST缓冲液洗膜2次，加入脱脂牛奶稀释的一抗，4℃孵育过夜，TBST缓冲液室温下清洗3次，每次10 min，加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）标记的二抗，37℃持续振荡60 min，TBST缓冲液室温下清洗3次，每次10 min，滴加电化学发光显色试剂，暗箱中曝光，Image J软件观察蛋白的灰度值，目的蛋白的相对表达量=目的蛋白条带灰度值/内参蛋白条带灰度值。
1.7 统计学分析采用SPSS 22.0统计软-件对数据进行分析。
计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用LSD-t检验。
以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果2.1 P21蛋白表达水平的比较PCLneo-HK组SW579细胞中P21蛋白的相对表达量与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；PCLneo-P21组SW579细胞中P21蛋白的相对表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（t=6.989，P＜0.01）。
（图1、表1）图1 Western blot检测SW579细胞中P21蛋白的表达水平表1 不同组别SW579细胞中P21蛋白的表达水平（±s）组别对照组PCLneo-HK组PCLneo-P21组P21蛋白相对表达量0.335±0.052 0.417±0.0630.733±0.0892.2 沉默P21表达对细胞增殖率的影响PCLneo-HK组SW579细胞的增殖率与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；PCLneo-P21组SW579细胞的增殖率明显低于对照组，差异有统计学意义（t=4.596，P＜0.01）。
（表2）表2 不同组别SW579细胞的增殖率（%，x-±s）对照组PCLneo-HK组PCLneo-P21组100.021±0.065 96.458±2.755 86.326±5.6862.3 沉默P21表达对细胞凋亡能力的影响PCLneo-HK组SW579细胞的凋亡率与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；PCLneo-P21组SW579细胞的凋亡率明显高于对照组，差异有统计学意义（t=7.899，P＜0.01）。
（图2、表3）图2 流式细胞仪检测SW579细胞的凋亡情况注：左上象限为细胞碎片；左下象限为未凋亡细胞；右上象限为晚期凋亡细胞；右下象限为早期凋亡细胞表3 不同组别SW579细胞的凋亡率（%，±s）组别细胞凋亡率2.4 沉默P21表达对细胞中Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的影响PCLneo-HK组SW579细胞中Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的相对表达量与对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；PCLneo-P21组SW579细胞中Bcl-2、cyclin D1蛋白的相对表达量均明显低于对照组，差异均有统计学意义（t=3.760、4.457，P＜0.01）；PCLneo-P21组SW579细胞中BAX蛋白的相对表达量明显高于对照组，差异有统计学意义（t=3.918，P＜0.01）。
（图3、表4）图3 Western blot检测SW579细胞中Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的表达情况表4 不同组别SW5-79细胞中Bcl-2、BAX、cyclin D1蛋白的相对表达量（x±s）组别对照组PCLneo-HK组PCLneo-P21组Bcl-2 0.332±0.068 0.362±0.0570.158±0.042 BAX 1.152±0.108 1.188±0.176 1.669±0.189 cyclin D11.346±0.188 1.305±0.101 0.876±0.0673 讨论基因的稳定性与细胞周期、细胞凋亡之间的相互作用，维持了细胞增殖的有序性，其中基因的稳定性对细胞的增殖调控起到根本作用[6]。