关于肠道病毒检测技术的研究
肠道病毒71型抗病毒药物的最新研究进展
ｉｎｆａｎｔｓ. Ｉｎ ｒｅｃｅｎｔ ｙｅａｒｓꎬｔｈｅｒｅ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｌａｒｇｅ￣ｓｃａｌｅ ｏｕｔｂｒｅａｋｓ ｏｆ ＥＶ￣Ａ７１ ｅｖｅｒｙ ｙｅａｒ ｉｎ Ｃｈｉｎａꎬｐｏｓｉｎｇ ａ ｓｅｒｉｏｕｓ ｔｈｒｅａｔ ｔｏ ｔｈｅ
ｈｅａｌｔｈ ｏｆ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ａｎｄ ａｎ ｅｎｏｒｍｏｕｓ ｂｕｒｄｅｎ ｏｎ ｐｕｂｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ ｓｙｓｔｅｍ. Ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ
ＲＮＡ 进行依赖内部核糖体进入位点的翻译启动合
成ꎬ且多聚蛋白被 ２Ａ 和 ３Ｃ 蛋白酶切割成结构和非
结构蛋白ꎮ 然后将正义病毒 ＲＮＡ 装入衣壳ꎬ最后成
熟为感染性病毒颗粒ꎮ ２０１８ 年ꎬ国家卫生健康委员
会发布的« 手足口病诊疗指南(２０１８ 版) » 指出ꎬα 干
扰素、利巴韦林的早期使用有一定的抗病毒疗效ꎬ但
ＥＶ￣Ａ７１ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｄｒｕｇｓ ｉｓ ｍｏｓｔｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｃ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅꎬａｎｄ ｔｈｅ ｌａｃｋ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｄｒｕｇｓ ｉｓ ｓｔｉｌｌ ａｎ
ｕｒｇｅｎｔ ｐｒｏｂｌｅｍ ｔｏ ｂｅ ｓｏｌｖｅｄ. Ｔｈｅｓｅ ｂａｓｉｃ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｅｘｐｌｏｒｅｄ ａ ｌａｒｇｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｄｒｕｇｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ
摘要:肠道病毒 ７１ 型( ＥＶ￣Ａ７１) 是导致婴幼儿手足口病重症及死亡的主要病原体ꎮ 近年来ꎬ该病毒在中国每
年均有大范围的暴发ꎬ严重威胁婴幼儿健康并给公共卫生系统带来巨大负担ꎮ 随着生物工程和制药技术的迅速发
STAT3在新型肠道病毒71型(EV71)感染和复制中的作用初步研究
新鲜 培养 基覆 盖并孵 育 ７ ２ ｈ 。用 ０ ． １ 的 中性红 染 色４ ～６ ｈ后观 察蚀 斑形 成情 况 。为确 定 Ｓ Ｔ ＡＴ３对 Ｅ Ｖ７ １形成蚀 斑 能 力 的 影 响 ， 将 整 合 不 同 慢 病 毒 的 ＲＤ细胞 分别 接 种 于 ６孔 板 ， 然 后 用 相 同病 毒 储 存 液（ 经正常 Ｒ Ｄ细 胞测定后 病毒滴度 为 ４ ． ８×１ ０ Ｐ Ｆ Ｕ／ ｍＬ ） 经 指定倍 数 稀释 ， 分别用 ０ ． ５ ｍＬ病 毒 稀
病毒的细胞 株 Ｒ Ｄ － ｐ Ｌ Ｋ０． １ － ｓ ｈ Ｓ Ｔ ＡＴ３ 。 提 取 细 胞
同细胞 上形 成蚀 斑 的数量 和大 小 。 数据统 计分析 不 同组 间 的数 据使 用 Ｓ ｔ ｕ ｄ ｅ ｎ ｔ Ｓ ｔ 检验进行 数据 分析 ， 所 有数 据均 使用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ １ ． ０软
件 进 行 处 理 。Ｐ ＜Ｏ ． ０ ５为 差 异 有 统 计 学 意 义 。
基 因组 Ｄ ＮＡ 经 Ｐ Ｃ Ｒ进 一步 确认 病毒 整合情 况 。 为 构建 过 表 达 Ｓ ＴＡＴ ３细 胞 ， 将 Ｓ ＴＡＴ ３ ｃ ＤＮＡ （ 位
于 １ ３ ３ ～ ２ ３ ９ ６， ＮＭ
一
后 ３ ０和 ４ ５ ａｉ ｒ ｎ ， Ｓ ＴＡＴ ３磷 酸化 （ ｐ － Ｓ ＴＡＴ ３ ） 水 平 分
别下 调 １ ． ８ ６和 ３ ． １ ４倍 ， 并 长 时间持 续 下 降 （ 图 １ Ａ） 。而 总 Ｓ ＴＡＴ ３的 表 达 在 Ｅ Ｖ７ １感 染 后 无 显 著 变化 （ 图 １ Ｂ ） 。结 果 表 明 Ｅ Ｖ７ １感 染 可 迅 速 下 调 ｐ — Ｓ ＴＡＴ ３的水 平 ， 而对 总 Ｓ ＴＡＴ ３ 的 表 达 无 显 著
用cDNA:RNA斑点杂交法检测肠道病毒RNA的实验研究
用cDNA：RNA斑点杂交法检测肠道病毒RNA的实验研究沈茜;汪美先;章同华
【期刊名称】《第二军医大学学报》
【年(卷),期】1991(12)5
【摘要】用Biotin标记的Coxsackie B3病毒cDNA为探针,以25种肠道病毒标准毒株为检测病毒,建立了检测肠道病毒基因RNA的斑点杂交方法。
该方法的检测敏感性为50～80TCID_(50)斑点,操作较简便,试剂稳定安全、可长期保存。
所使用的pCB Ⅲ/35.51对肠道病毒有很广的杂交谱;pCBⅢ/29在严格条件下,仅与Coxsackie B3病毒RNA反应。
因此,这些探针所具有的杂交特性很适合作为临床标本中肠道病毒的检测探针。
【总页数】4页(P413-416)
【关键词】生物素;肠道病毒;斑点杂交
【作者】沈茜;汪美先;章同华
【作者单位】长海医院实验诊断科;第四军医大学微生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R373.24
【相关文献】
1.斑点杂交生物素法检测流行性出血热病毒RNA [J], 杨占秋
2.用原位杂交和RNA斑点杂交法检测人原发性肝癌层粘蛋白mRNA [J], 王要军;戴益民
3.RNA—RNA原位杂交检测心肌中的肠道病毒RNA [J], 彭天庆;杨英珍
4.RNA－RNA原位杂交检测和定量分析心肌中肠道病毒RNA [J], 彭天庆;杨英珍
5.用Cox B3 cDNA探针检测不同病毒感染Hela细胞及小鼠心肌炎组织细胞中的肠道病毒RNA [J], 牛美娟;郭彩玲;曲章义;王玉兰;李绍贤;赵晓书
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肠道病毒医学PPT
核酸检测
利用分子生物学技术，如 PCR、基因测序等，直接 检测病毒核酸。
抗原检测
通过免疫学方法检测病毒 抗原，快速简便，但可能 出现假阳性。
诊断与检测的注意事项
采集标本
实验室安全
准确性与可靠性
采集新鲜、无污染的标 本，避免交叉感染。
遵循生物安全操作规程， 防止病毒扩散和感染。
选择可靠的诊断方法和 检测技术，确保诊断结 果的准确性和可靠性。
治疗与预防的注意事项
及时就医
一旦出现肠道病毒感染症状，应立即就医，以便早期治疗和预防 并发症。
遵循医嘱
按照医生的建议进行治疗和预防，不要自行更改治疗方案或停药。
监测病情
在治疗和预防过程中，密切监测病情变化，如有异常及时就医。
04 肠道病毒与其他医学领域的关系
CHAPTER
与免疫学的关系
免疫应答
疾病控制
了解肠道病毒的传播方式和影响因素有助于制定 有效的防控策略，减少病毒传播和疾病发生。
3
公共卫生教育
针对肠道病毒的传播和预防进行公共卫生教育， 提高公众的防控意识和自我保护能力。
05 肠道病毒的未来研究方向
CHAPTER
新药研发和治疗方法的研究
抗病毒药物的研发
针对肠道病毒的抗病毒药物的研发是 未来的重要研究方向，旨在寻找更有 效、更安全的治疗药物，以降低肠道 病毒对人类的危害。
谢谢
THANKS
设计抗病毒药物。
药物筛选
02
利用肠道病毒进行药物筛选，可发现具有抗病毒活性的小分子
化合物或天然产物。
药物作用机制
03
研究肠道病毒与药物的相互作用有助于深入了解药物的作用机
制，提高疗效和降低副作用。
肠道病毒71型感染人Jurkat细胞诱导细胞因子表达研究
国际病毒学杂志 2020 年12 月第27 卷第6 期International Journal of Virology, December 2020, Vol. 27, No. 6• 469 ••基础研究•肠道病毒71型感染人J u rk a t细胞诱导细胞因子表达研究吕秋月韩焱刘丹红薄志坚大连市疾病预防控制中心微生物检验所116021通信作者：薄志坚，Em ail:155****0762@,【摘要】目的研究手足口病发病与细胞因子水平异常变化的关系，研究E V71病毒诱导细胞天然免疫的发生机制。
方法将J u r k a t细胞接种到24孔板中，设E V71病毒感染组和对照组，并用R e a l t i m e-P C R法检测感染不同时间段的细胞上清液中丨1,1-p、1L6、T N F-c x、I F N-1的m R N A表达含量。
用乙醜肉S•蔑佛波酯（p h o r h o l-12-m y r i s t a t e-13-a c r t a t e，P M A)预作用J u r k a t细胞不同时间后，接种E V71病毒，检测细胞上清液中病毒载量变化。
结果E V7丨病毒感染J u r k a t细胞后，I L l-p的m R N A在6h后达峰，I L-6的n i R N A在24h后达峰，T N F- a和I F N- 7的m R N A分别在48h和72h达峰；P M A预作用J u r k a t细胞后，I L1-P、I L6、T N F-a、丨F N-7的m R N A表达均上调，病毒载量下降。
结论随着E V71病毒作用时间的延长，I U- p、I L6、T N F-a、I F N- 7的m R N A表达均达峰值，J u r k a t细胞内E V71病毒载量呈递减趋势。
E V71可引起I L l-p、I L6、T N F-a、I F N-7细胞因子反应。
【关键词】肠道病毒71型；细胞因子；乙酰肉豆蔻佛波酯基金项目：大连市科技计划项目（2015E12S F133)DOI：10.3760/cma.j.issn. 1673-4092.2020.06.007Expression of cytokines induced by enterovirus 71 infecting human Jurkat cellsLyu Qiuyue, Han Yan, Liu Danhong, Bo ZhijianInstitute of Microbiological Detection, Dalian Municipal Center for Disease Prevention and Control,Dalian 116021, ChinaCorresponding author: Bo Zhijian, Email: 155****************,Tel: 0086-411-84335939【Abstract 】Objective To find relationship between the onset of hand, foot, and mouth diseaseand abnormal changes of cytokine levels, so as to clarify the mechanism of enterovirus 71 (EV71)-induced natural cellular immunity. Methods Jurkat cells were cultured in 24-well plates and the EV71infection group and control group were set up. The mRNA expression levels of ILl-p, IL6, TNF-a andIFN-y in supernatants collected at different time after infection were detected by realtime-PCR. EV71 wasinoculated into Jurkat cells pre-treated with phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA) for different time toanalyze the changes of viral loads in supernatant of cell culture. Results After Jurkat cells infected byEV71, the mRNA of IL1-P reached peak level at 6h, the mRNA of IL-6 reached peak level after 24h whilethe mRNAs of TNF-a and IFN-y reached peak levels after 48h and 72h, respectively. For PMA-pre-treatedJurkat cells, the mRNA expressions of ILl-p, IL6, TNF-a and IFN-y were all up-regulated with decreasedviral loads. Conclusions With the prolongation of infection by EV71, all mRNA expressions of IL1-P，IL6, TNF-a and IFN-y reached peak levels while the viral loads in Jurkat cells decreased. EV71 can inducecytokine reactions, including ILl-(3, IL6, TNF-a and IFN-y.【K eyw ords】Enterovirus 71; Cytokine; Phorbol-12-myristate-13-acetateFund Program: Dalian Municial Science Planning Project (2015E12SF133)DOI：10.3760/cma.j.issn. 1673-4092.2020.06.007EV71病毒属肠道病毒，可引起以儿童为主要 感染对象的手、足、口部的疱疹，少数病例可引 起心肌炎、脑炎、呼吸道感染等严重并发症m，甚至死亡。
肠道病毒EV71新型VLPs疫苗的制备及鉴定
肠道病毒EV71新型VLPs疫苗的制备及鉴定董轲;王希;龙敏;王琳;张惠中【摘要】目的制备肠道病毒71型(EV71)的新型病毒样颗粒(VLPs)疫苗,为手足口病防治奠定基础.方法应用分子克隆技术构建外壳蛋白VP1融合基因cVP1,免疫细胞化学及Western Blot测定该融合基因在HeLa细胞表达情况;将cVP1克隆于杆状病毒表达载体pFastbac1,应用昆虫细胞TN5制备重组杆状病毒cVP1 rBV,再将此重组病毒与本室保存的gag rBV以不同MOI比例共感染昆虫细胞TN5,得到含有VP1的重组嵌合病毒样颗粒cVP1 VLPs,最后以Western Blot及电镜进行鉴定.结果免疫细胞化学及Western Blot结果显示构建的融合基因cVP1可在真核细胞内表达,并成功制备成cVP1 rBV,该重组杆状病毒和gag rBV共感染昆虫细胞制备的VLPs结构完整.结论成功制备了EV71的新型VLPs疫苗,为后续研究打下了基础.【期刊名称】《中国妇幼健康研究》【年(卷),期】2015(026)006【总页数】3页(P1125-1127)【关键词】手足口病;肠道病毒71型;病毒样颗粒;制备及鉴定【作者】董轲;王希;龙敏;王琳;张惠中【作者单位】第四军医大学唐都医院临床实验与检验科,陕西西安710000;第四军医大学唐都医院临床实验与检验科,陕西西安710000;第四军医大学唐都医院临床实验与检验科,陕西西安710000;第四军医大学唐都医院临床实验与检验科,陕西西安710000;第四军医大学唐都医院临床实验与检验科,陕西西安710000【正文语种】中文【中图分类】R512.5手足口病(hand, foot and mouse disease，HFMD)为一组肠道病毒引起的传染性疾病，近年来在我国持续爆发，严重危害公众健康并带来巨大社会负担。
引发手足口病的肠道病毒包括A组柯萨奇病毒、埃可病毒和肠道病毒71型等，其中肠道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)病毒感染是部分患者出现中枢神经系统、呼吸系统和循环系统严重并发症并导致死亡的重要原因[1-2]。
诺如病毒检测方法研究进展
诺如病毒检测方法研究进展作者：何凤媛来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第07期【中图分类号】R529.3;;;;;;【文献标识码】A; ;;;;【文章编号】1672-3783（2019）07-0272-011 诺如病毒简介诺如病毒也叫诺瓦克病毒，是一种肠道病毒，主要引起腹泻和呕吐。
全年均可以发生感染，多发生在秋冬季，人们又称它为“冬季呕吐病”。
主要的感染对象是成人和学龄前儿童，诺如病毒主要通过病人的粪便和呕吐物排出，可通过粪口途径人传人，也可通过使用被病毒污染的食物和水感染。
病人在潜伏期便可排出诺如病毒，排毒高峰通常是在发病后的2到5天内，大约会持续2到3周的时间，据相关报道最长的排毒期已经超过了56天，特别是在免疫抑制病人中就更长了。
一旦出现了诺如病毒的感染，在环境和人群中将以多种方式并行传播，很快便可出现快速大面积的疾病爆发，此时及时快速的切断传播途径，是控制疫情扩大化最有效的办法。
找到传染源，确诊病原体则能为病人的临床治疗和用药提供准确的帮助。
诺如病毒感染需要通过流行的时间、地点、年龄等流行病学信息结合临床症状、实验室检测一起下诊断结果，诺如病毒的诊断从临床症状开始，符合临床诊断的病例，对其呕吐物或粪便等生物标本进行检测，若检测出了诺如病毒即可确诊。
2 诺如病毒的检验方法诺如病毒可采集患者或者疑似患者、密切接触了患者和疑似患者的人的粪便、肛拭子、呕吐物标本进行检测;因为诺如病毒具有食源性和水源性，可通过肠道传播，也可采集被污染的水、食物;诺如病毒也可人传人，故也可采集环境涂抹样，例如厨房、厕所、门把手、玩具等的涂抹样。
病人标本与其他类样品需要在不同的空间独立进行处理和检验，以防止实验室内交叉污染。
在众多标本中，食品、水、环境涂抹样检测方法的灵敏度不稳定，对病毒量有一定要求，样品处理方法复杂，且容易出现假阴性，其检测结果作为辅助诊断的依据。
病人的标本中，肛拭子标本不能长期保存，且检出率低于粪便标本，因此在检测病人感染诺如病毒时，首选粪便标本。
肠道病毒71型实验室诊断研究进展
原体 ， 多感染婴幼儿 ， 少数病例 可以并发 呼吸道感染 和心肌炎 、 无菌性 脑膜炎 、 脑炎 、 急性 弛缓性麻 痹等严 重疾病 ，
可致残 、 致死 。因此 Ｅ ７ 实验室诊断对 Ｅ ７ Ｖ１ Ｖ １引起疾 病的治疗 和防控具 有重要意义 。本 文将从核酸检测 、 抗体 检 测及其他检测等三部分对 Ｅ ７ Ｖ １的实验室诊断方法研究进展进行 了综述。
（Ｆ Ｈ ＭＤ）ｉ Ｃ ｉ ａｅａ ｅｔｄｍｉｉ ｓａｄｐｔｎｉｌ ｌ ｄｔ ｌｅｔｒ ｔ ｉｇｃｍ ｌａｉ ｓｉ ｉｆｎ ．Ｆ ｒ ｅ ｒ， ｎ ｈｎ ｈｖ ｆ ｃ ｌｏ ｎ ｏ ｔ ｌ ｅ ｏ ｉ — ｅ ｅ ｎ ｏ ｐｉ ｔ ｎ ｎ ｎａｔ ｕｔ ｒ ｅ ａ ｆ ｅ ｌｎ ｅ ａｙ ａ ｆ ｈ ａ ｎ ｃ ｏ ｓ ｈ ｍｏ
ｔｎ ｒｓａｃ ｂｅｔ ｔ ｔｅｄｖｌ ｍ ｎ ｏ ｍ ｌｃｌ ｉｇｏｔ ｃｎｑ ｅ ｆ ｅｄｔ ｔ ｎｏ ｅｅｔｒｖ ｕｅ．Ｔ ｉ ｒ— ａｔ ｅｅｒ ｓ ｊｃｓｏ ｈ ｅｅ ｐ ｅｔ ｆ ｏｅｕａ ｄａｎ ｓｃｔ ｈ ｉ ｓ ｒ ｈ ｅ ｃｉ ｆｈ ｎｅｏｉ ｓｓ ｈｓ ｅ ｈｕ ｏ ｒ ｉｅ ｕ ｔ ｏ ｅ ｏ ｔ ｒ
ｔ ｅ ｅ ｏ ｔ ｒ ａ ｓｒｐ ｅ ｅ ｔａ ｓ ｎ ｆ ａ ｔ ｌｂ ｕ ｌ ｅ ｌ ｓｕ ｎ ｔ ｅ ｗ ｒ ．Ｔ ｅ ｅ ｃ ｍｍｏ ｎ ｅ ｔ ｎ ｒａ ｅ ａｓｇ ｉ ｃ ｎ ｈ ｓ ｕ ｂ ｅ ｋ ｅ ｒ ｓ ｎ ｉ ｉ ｃ ｎ ｏ ａ ｐ ｂ ｉ ｈ ａｔ ｉｓ ｅｉ ｈ ｏ ｄ ｇ ｉ ｇ ｌ ｃ ｈ ｌ ｈ ｓ ｏ ｎ ｉ ｃｉ ｓｃ ｅ ｔ ｉｎｆ ａ ｔ ｆ ｏ ｉ ｂ ｒ ｅ ｎ ｏ ｒｓ ｃｅｙ ａ ｄ ｈ ａ ｈ ａ ｅ ｓ ｓ ｍ． Ｏ ｒｕ ｄ ｒ ｔｎ ｉ ｇ ｏ ｉ ｉ ｏ ａ ｔ ｇｏ ｐ ｏ ｉ ｌｐ ｔ ｏ ｅ ｓ ｈ ｓ ｉ ｃ ｅ ｓ ｄ ｕ ｄ ｎ ｏ ｕ ｏ ｉｔ ｎ ｅ ｈ ｃ ｒ ｙ ｔ ｅ ｕ ｎ ｅ ｓａ ｄ ｎ ｆ ｔ ｓ ｍｐ ｒ ｎ ｒｕ ｆ ｖｒ ａ ｈ ｇ ｎ ａ ｎ ｒ ａ ｅ ｈ ｔ ａ ｄ ａ ｔ ａ ｌ ｈ ａ ｔ ｅ ａ ｅ ｈ ｕ ｎ ｉ ｔ ｅ ａ ｓ ｙ ｍｅｈ ｄ ｒｖ ｃ ｉ ｅ ａ ｔ ｅ ｎ ｅ ｔａｉｉ ｇａ ｔ ｏ ｙａ ｅ ｔ ｅｉ ｏ ‘ ｒ ｍａｉ ｌ ｉ ｔｅ ｐ ｓ ｃ ｄ ．Ｔ ｅ ｑ ａ ｔ ａ ｉ ｓ ａ ｔｏ ｓｆ ａ ｃ ｎ ｎｉ ｎ ａ ｄ ｎ ｕ ｒｌ ｎ ｎ ｉ ｄ ｒ ｍｐ ｒ ｃ ｙｎ ｄ ｔ ｖ ｏ ｇ ｚ ｂ ｈ
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关于肠道病毒检测技术的研究
肠道病毒(EV)可引发多种感染，并且发病又多以综合征出现，病情轻重悬殊，婴幼儿患者可暴发严重心肌炎或重症肺炎，尤其新生儿期的暴发流行可致死亡。
一种综合征可由不同病毒引起，同一种(型)病毒可以导致不同综合征是肠道病毒属病毒感染的普遍现象。
患者感染肠道病毒后多数为亚临床表现，不易被发现，因此，有效而及时地作出病原学诊断难度较大。
目前除脊髓灰质炎外，尚无疫苗可供预防，是当前严重影响人类健康的重要病原之一。
现将近年来国内外有关肠道病毒检测技术研究进展综述如下。
1 病毒分离培养
利用组织培养技术从感染部位或传染源分离出病毒并鉴定其特异性血清型是病毒性疾病诊断的金标准。
病人粪便标本是最常采集的标本，其他如咽拭子、脑膜炎患者的脑脊液、心包炎患者的心包积液、手足病患者的疱内渗出液、结膜炎患者的眼部分泌物等都是常用分离病原的标本。
分离时所选用的细胞系都系人源或猴源的细胞，它们都具有肠道病毒受体，对所要分离的病毒敏感。
常用的有Hep-2、Hela、巨核细胞(MK)和一些猴源的传代细胞如Vero等，肠道病毒能在敏感细胞中增殖并致细胞产生病变。
病毒培养对缩短抗生素治疗和住院期有积极作用，其定型诊断对流行病分析有重要意义，但是，病毒的分离鉴定繁琐、费力、耗时，一般需要1周才能观察到细胞病理反应，且费用高、敏感性低，并需要较高的专业知识及实验室设备，更重要的是许多肠道病毒不能进行细胞培养，或者可以培养但不出现细胞病理效应，如柯萨奇A组病毒，往往贻误特异性治疗，同时对诊断某些肠道病毒血清型和脑膜炎的敏感性也欠佳，给临床诊断和快速检测工作带来困难和挑战[1]。
2 血清学鉴定
分离病毒和利用组合血清中和试验是对病毒定型的重要方法。
肠道病毒的血清学鉴定中，一般单份血清抗体效价无意义，因为健康人血清中都有一定效价；而取双份血清检测，恢复期抗体效价呈4倍以上升高，有诊断意义，因此，多选用组合血清。
此方法在检测中不适用于早期诊断，可作为回顾性诊断；且由于肠道病毒血清型别众多，临床使用检测价值有限，而多为流行病学采用[1]。
利用酶联免疫吸附试验(ELISA)捕捉法或间接法检测早期病人血清中的IgM和IgG抗体，是较常用的检测指标，尤其以柯萨奇B组病毒的感染诊断较多，病毒抗原可从心、脑、脾、胰、肝和胸腺等多器官检出。
3 PCR技术
由于各型肠道病毒具有共同基因组序列，因而PCR技术问世后即被用于检测肠道病毒。
PCR 可检出几乎所有血清型。
PCR检测材料用量少、快速、灵敏度高且具特异性，并可通过设计不同的引物进行病毒分型，用于检测相当宽的肠道病毒血清型。
EV-PCR一般可在收到标本后5～24h内提供诊断结果，是目前较理想的诊断技术[2]。
EV-PCR比传统细胞培养法的检出率高。
原因是不论病毒活性在标本处理过程中是否失活，或病毒增殖过程中形成的缺陷性病毒能否感染细胞而影响培养结果，其核酸相对稳定仍能被检出。
Sawyter等、Rotbart等、Hamiltion等和Muir等分别报道PCR从脑脊液、血、尿、粪、咽拭标本中检出肠道病毒，其灵敏度达88%～100%，特异性为83%～97%。
与细胞培养法比较，PCR检出率明显提高，估计敏感性增强10～1000倍。
在临床检测方面，Manzara等用免疫学和分子生物学综合方法，从临床标本中检测肠道病毒，并予以定型。
Kellogg等人建立的RT-PCR-DNA酶免疫法(RT-PCR-DEIA)，可进一步缩短检测时间，其特点是用一种对热稳定的rTh聚合酶代替转录酶和Taq聚合酶，用地高辛-dUTP标记终产物，然后用微孔杂交法验证，所需时间不到4h。
Jean等发展了基于核酸序列扩增的酶联免疫吸附法(NASBA-ELISA)， Nijhuis等利用肠道病毒属基因组5′端的高度保守序列设计引物，能够检测出肠道病毒属的所有血清型，并且与RNA科其他属(肝炎病毒属、副埃可病毒属)病毒无交叉反应，对来自临床的样本如血清、血浆、鼻咽拭物、脑积液等检测结果显示，其灵敏度与病毒的组织培养相当，甚至更好。
使用TaqMan PCR具有自动化、易标准化的特点，使其可能成为病毒检测中组织培养的替代方法。
虽然肠道病毒感染后通常无症状而被忽略，但其普遍分布于世界各地，感染广泛存在，并且常引起暴发，导致数量比平常更多的病人发展成为临床病例，甚至死亡。
因此，对肠道病毒的监测、检测应该给以足够重视。
PCR等检测技术的发展使得从血清、心肌细胞、粪便、脑脊液、环境水中均能检测出肠道病毒基因组，为其诊断提供证据；同时，也为研究肠道病毒与疾病的关系提供大量科学数据。
参考文献
[1] Stefania M,Michele M,Giuseppina L R,et al.Molecular identification and typing of enteroviruses isolated from clinical specimens［J］.J Clin Microbiol,2002,40(12):4554-4560.
[2] Sawyer MH,Holland D,Aintablian N,et al.Diagnosis of enteroviral central nervous system infection by polymerase chain reaction during a large community outbreak［J］.Pediatr Infect Dis J,1994,13:177-182.。