主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验 第十一章 生物素-亲和素放大技术
第十一章生物素-亲和素放大技术
第一节生物素的理化性质与标记
生物素（biotin）、亲和素（avidin）是一对具有高度亲和力的物质，它们的结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。
生物素-亲和素系统（BAS）是一种以生物素和亲和素具有的多级放大结合特性为基础的实验技术，它既能偶联抗原抗体等大分子生物活性物质，又可被荧光素、酶、放射性核素等材料标记。
生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取。
一、活化生物素
利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物，称为活化生物素。
生物素活化后，可容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标志物。
（一）标记蛋白质氨基的活化生物素
此种活化生物素的制备方法是将生物素与N-羟基丁二酰胺在碳二亚胺的作用下进行缩和，生成生物素N-羟基丁二酰亚胺醣（BLAHS）。
BLAHS分子酯键中的—C-=0基团可与蛋白质分子中赖氨酸的氨基形成肽键。
从而使蛋白质标记上生物素。
（二）标记蛋白质醛基的活化生物素
用于此类标记的活化生物素有两种：生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BGHZ）。
BHZ是水合肼与生物素的合成物，主要用于偏酸性糖蛋白的生物素标记。
（三）标记蛋白质巯基的活化生物素
3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）是能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素试剂。
（四）标记核酸的活化生物素
活化生物素可通过缺口移位法、化学偶联法、光化学法及末端标记法等技术使生物素的戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连，构成生物素标记的核酸探针。
二、生物素标记蛋白质
（一）生物素化蛋白质衍生物的特性
生物素化蛋白质衍生物有两类：
1.生物素化的大分子活性物质，如抗原、抗体。
2.标记材料（如酶）结合生物素后制成的标志物。
（二）标记方法
1.标记抗体、抗原
选用第二抗体进行生物素标记，制备的标志物具有通用性。
2.标记酶
生物素标记辣根过氧化物酶
第二节亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记
亲和素和链霉亲和素是生物亲和素的天然特异性结合物。
亲和素或链霉亲和素的结合特性，是建立生物素-亲和素（链霉亲和素）放大技术的重要基础。
一、亲和素及其活性
耐热并耐受多种蛋白水解酶的作用，尤其是与生物素结合后，稳定性更好。
每个亲和素能结合4个分子的生物素，二者之间的亲和力极强。
二、链霉亲和素及其活性
链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子。
三、亲和素（或链霉亲和素）的标记
用于标记亲和素或链霉亲和素的小分子示踪物有125Ⅰ、胶体金、荧光素和化学发光物，大分子物质如酶、抗原或抗体、铁蛋白和荧光蛋白等，其中最常用的是酶、异硫氰酸荧光素（FITC）和胶体金。
可以通过与生物素化酶复合物中的生物素结合，间接地与酶形成结合物。
（一）亲和素的标记
1.HRP-亲和素结合物的制备。
（1）改良过碘酸钠法
（2）戊二醛法
2.亲和素-生物素化HRP复合物的制备
3.亲和素-生物素化碱性磷酸酶（ABAP）复合物的制备
（二）链霉亲和素的标记
1.HRP-SA结合物的制备采用过碘酸钠法直接标记
2.SA-生物素化HRP复合物的制备
3.AP-SA结合物的制备采用戊二醛二步法
第三节生物素-亲和素系统的特点
一、灵敏性
生物素与蛋白质和核酸类等生物大分予结合形戚的生物素衍生物，不仅保持了大分子物质的原有生物活性，而且比活度高，具多价性。
二、特异性
亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性。
因此，BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时，并不增加非特异性干扰。
三、稳定性
亲和素与生物素间的亲和常数比抗原-抗体反应至少高1万倍，二者结合形成的复合物的解离常数很小，呈不可逆反应性；而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。
四、适用性
生物素和亲和素均可制成多种衍生物，不仅可与酶、荧光素和放射性核素等各类标记技术结合，用于检测体液、组织或细胞中的抗原-抗体、激素-受体和核酸系统以及其他多种生物学反应体系；而且也可制成亲和介质，用于分离提纯上述各反应体系中的反应物。
第四节生物素-亲和素系统的应用
一、生物素-亲和素系统基本类型及原理
1.以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素化大分子的待检反应体系和标记生物素，称为BAB法；后来又在其基础上发展了亲和素一生物素化酶复合物技术（ABC）。
2.直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的BA法，或称标记亲和素-生物素法（LAB）。
依据待检反应体系中所用的是生物素化第一抗体或生物素化第二抗体，又分为直接法BAS和间接法BAS。
（一）BAB法
BAB法也称为桥联亲和素-标记生物素法（BRAB），是以游离的亲和素（或链霉亲和素）作为桥联剂，利用亲和素的多价性，将检测反应体系中抗原-生物素化抗体复合物与标记生物素（如酶标生物素）连接起来，达到检测反应分子的目的。
（二）ABC法
原理是预先按一定比例将亲和素与酶标生物素结合，形成可溶性的亲和素生物素-过氧化物酶复合物（ABC）。
当其与检测反应体系中的生物素化抗体（直接法）或生物素化第二抗体（间接法）相遇时，ABC中未饱和的亲和素结合部位即可与抗体上的生物素结合，使抗原-抗体反应体系与ABC标记体系连成一体进行检测。
二、生物素-亲和素系统在酶免疫测定中的应用
（一）BAS在ELISA中的应用
把BAS与ELISA偶联起来，可大大提高ELISA测定的灵敏度：每个亲和素可结合4个生物素，可使反应明显放大；亲和素与生物素间极高的亲和力，使反应结合更牢固稳定，而且特异性高；用小分子生物素代替酶标记抗体，可减少反应中的空间位阻。
（二）生物素-亲和素系统在均相酶免疫测定中的应用
三、生物素-亲和素系统在荧光免疫技术中的应用
BAS用于荧光抗体技术，通常采用BA法，即用荧光素直接标记亲和素（或链霉亲和素）；也可采用游离亲和素（或链霉亲和素）搭桥，两端分别连接生物素化抗体和荧光素标记的生物素（BAB法）或荧光标记的抗亲和素（或链霉亲和素）抗体的夹心法。
四、生物素-亲和素系统在放射免疫测定中的应用
BAS主要与免疫放射分析（IRMA）检测体系偶联，用于对终反应的放大（BA法）。
此外，BAS也可用于IRMA反应后B，F成分的分离。
该法的优点是克服了其他IRMA法需多次离心的麻烦，待测复合物与固相结合更牢固，操作更简便。
五、生物素-亲和素系统在分子生物学中的应用
BAS在分子生物学领域中的应用日渐增多，目前主要集中在以生物素标记核酸探针进行的定位检测，用BAS制备的亲和吸附剂进行基因的分离纯化以及将免疫测定技术与PCR结合建立免疫-PCR（immuno-PCR）用于抗原的检测等三方面。
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(生物素-亲和素免疫放大技术、免疫组织化学技术)-试卷1
临床医学检验技师初级（师）临床免疫学及检验（生物素-亲和素免疫放大技术、免疫组织化学技术）-试卷1(总分：74.00，做题时间：90分钟)一、 B1型题(总题数：1，分数：6.00)A．1～3B．2～4C．3～5D．2：1E．1：2（分数：6.00）(1).每个抗原标记几个生物素分子为宜（分数：2.00）A. √B.C.D.E.解析：(2).每个抗体标记几个生物素分子为宜（分数：2.00）A.B.C. √D.E.解析：(3).生物素与IgG比值为多少时，效果较好（分数：2.00）A.B.C.D. √E.解析：解析：每个蛋白质上标记的生物素分子数量应控制在一定范围。
二、 A1型题(总题数：26，分数：52.00)1.ABC—ELISA将酶标记在（分数：2.00）A.亲和素B.生物素√C.抗体D.补体E.抗原解析：解析：酶标记生物素分子，与亲和素按一定比例混合，形成亲和素一酶标生物素复合物。
2.关于活化生物素，下列叙述错误的是（分数：2.00）A.利用生物素的羧基加以化学修饰制成的各种活性集团的衍生物B.可容易与各种抗原、抗体、酶及核酸相应集团耦联C.广泛分布于动植物组织，可从卵黄囊和肝脏中提取√D.有标记蛋白质氨基的活化生物素E.有标记蛋白质醛基的活化生物素解析：解析：生物素广泛分布于动植物组织，可从卵黄囊和肝脏中提取。
活化生物素是化学基团修饰后的生物素。
3.关于生物素标记蛋白质的注意事项，下列说法错误的是（分数：2.00）A.根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类以及分子的理化性质，选择相应的活化生物素和反应条件B.活化生物素与待标记抗原或抗体可以是任意比例√C.在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构可减少空间位阻影响D.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后不影响后者的免疫活性E.生物素标记酶时会影响其免疫活性解析：解析：生物素标记蛋白质的注意事项包括：①根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类以及分子的理化性质，选择相应的活化生物素和反应条件。
生物素-亲和素免疫放大技术
Dr. Wang Hui,
第四节 生物素 -亲和素系统的应用
生物素与亲和素间的结合亲和力高、特 异性强 , 且各自均可以与各型大小分子 偶联, 以及二者在结合反应时具有的多 级放大作用等优越性
Dr. Wang Hui,
Faculty of Laboratory Medicine in Xinxiang Medical College
一、生物素-亲和素系统基本类型及原理
BAS 在应用中的基本类型有二种 : 一类以游离 亲和素为中间物 , 分别连接包含生物素化大分 子的待检反应体系和标记生物素 , 称为 BAB 法 (biotin-avidin bind,BAB); 后来又在此基础上 发展了亲和素 -生物素化酶复合物技术 (avidinbiotin-peroxidase complex,ABC). 另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分 子反应体系进行检测的 BA 法, 或称标记亲和 素·生物素法 (labeled avidin-biotin,LAB)。
早在1916年Bateman第一個發現雞蛋蛋白 中有一種有毒物質，直到1927年Boas才發 現某種食物可以預防蛋白的毒性。之後 的研究，即將此種可抗蛋白毒性的物質--生物素分離出來。生物素的結構於1936 年被發明而出，也在1943年即能在實驗 室中合成此種物質。
Dr. Wang Hui,
Faculty of Laboratory Medicine in Xinxiang Medical College
Dr. Wang Hui,
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生物素-亲合素放大技术
标记核酸的活化生物素
光生物素(photobiotin)
侧链上连接的芳香基叠氮物基团, 经光照后,
变为芳香基硝基苯，可直接与腺嘌呤氨基结
合, 形成B（生物素）-核酸探针
生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP）
作为TTP（三磷酸胸苷）的结构类似物，可 采用缺口移位法掺入化 特 性
亲合素（A）
结构 四亚基糖蛋白 pI 10.5 结合位 色氨酸 生物素 4 K（亲和常数） 1015 活性(U) 13～15
链霉亲合素(SA)
四肽链蛋白 无糖基 6 色氨酸 4 1015 15～18
二、亲合素/链霉亲合素标记
标记物：酶、胶体金 异硫氰酸荧光素（FITC） HRP-AV(SA) 改良过碘酸钠法、戊二醛法 ABC/SABC 预制亲和素(AV)-Biotin、 链霉亲和素(SAV)-Biotin
BAS主要与免疫放射分析(IRMA)检测体系偶 联，用于对终反应的放大（BA法） BAS也可用于IRMA反应后B、F成分的分离
四、生物素-亲合素系统在分子生 物学中的应用
以生物素标记核酸探针进行的定位检测 用BAS制备的亲和吸附剂进行基因的分离 纯化 将免疫测定技术与PCR结合建立免疫PCR(immuno-PCR)用于抗原的检测。
可直接标记核酸， 但对碱基配对有影 响（影响氢键的形成）
二、生物素标记蛋白质
活化生物素通过侧链与蛋白分子连接 一个蛋白分子可被多个生物素标记－多价性 对BNHS多标记抗体, BHZ则多标记偏酸性抗原； 抗原、抗体标记后活性不变 可对标记材料（如酶）标记：碱性磷酸酶标记 后活性将降低
+ABC
Ab-Ag-Ab-B + ABC
Ab-Ag-Ab-B-ABC
主管检验师资格考试临床免疫学和免疫检验 复习习题 第十一章 生物素-亲和素放大技术(附答案解析)
主管检验师资格考试临床免疫学和免疫检验复习习题第十一章生物素-亲和素放大技术（附答案解析）一、A1型题1、每个亲和素能结合生物素分子的数目是（）A、4B、2C、1D、3E、82、以下关于生物素-亲和素系统（BAS）的说法错误的是（）A、1个亲和素分子可结合4个生物素分子B、1个生物素分子可以结合多个亲和素分子C、生物素易与抗体、酶、多聚核苷酸结合D、亲和素易与酶、铁蛋白、荧光素、核素结合E、亲和素和生物素.有极强的亲和力3、免疫组化技术的优点不包括（）A、高特异性B、高敏感性C、形态学的直观性D、精确定量分析E、能对抗原表达情况进行分析4、BAS在ELISA技术中应用最广泛的反应模式是（）A、ABAB、ABCC、BRABD、BAE、LAB5、免疫组化染色前，对标本进行固定的目的是（）A、保存组织细胞的抗原性B、防止细胞脱落C、防止细胞自溶D、终止胞内酶的活性E、使细胞内蛋白质凝固6、ABC-ELISA将酶标记在（）A、亲和素B、生物素C、抗体D、补体E、抗原7、关于亲和素-生物素系统的错误描述是（）A、用于间接包被B、用于终反应放大C、用于酶免疫测定D、用于胶体金测定E、不用于荧光免疫测定8、ABC-ELISA将酶标记在（）A、亲和素B、生物素C、抗体D、补体E、抗原9、关于生物素标记蛋白质的注意事项，下列说法错误的是（）A、根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类以及分子的理化性质，选择相应的活化生物素和反应条件B、活化生物素与待标记抗原或抗体可以为任意比例C、在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构可减少空间位阻影响D、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性E、生物素标记酶时会影响其免疫活性10、亲和素和生物素结合的特点是（）A、免疫反应B、不属于免疫反应C、特异性弱D、亲和力小E、不够稳定二、B型题1、 A.ABCBC.BABD.直接法BASE.间接法BAS<1> 、标记亲和素-生物素的方法为（）；<2> 、亲和素-生物素化酶复合物技术为（）；<3> 、生物素化第二抗体为（）；<4> 、生物素化第一抗体为（）。
生物素-亲合素放大技术
• 在生物素—亲合素（链霉亲合素）放大系统应 用中，无论采用酶、荧光素或发光物作为检测 示踪剂，均是待测抗原与生物素化抗体反应形 成复合物后，再利用生物素与亲合素间的多价 放大结合特性，或直接与标有示踪剂的生物素 结合（ BA 、 LAB 法），或依次与亲合素（链霉 亲合素）、生物素示踪标记物反应连接成聚合 物（BAB、ABC法），最终使待测反应信号被放 大，提高检测方法的灵敏度。
三、生物素-亲合素系统在荧光免 疫技术中的应用
BAS用于荧光抗体技术，通常采用BA法， 即用荧光素直接标记亲合素（或链酶亲 合素）；也可采用游离亲合素（或链酶 亲合素）搭桥，两端分别连接生物素化 抗体和荧光素标记的生物素（BAB法）或 荧光标记的抗亲合素（或链酶亲合素） 抗体的夹心法。
四、生物素-亲合素系统在放射免 疫测定中的应用
第十一章 生物素-亲合 素放大技术
第一节 生物素的理化性质与标记 一、活化生物素 二、活化生物素标记蛋白质
第二节 亲合素、链霉亲合素的理化性质与标记 一、理化特性 二、亲合素（或链酶亲合素）的标记
第三节 生物素-亲合素系统的特点 一、灵敏度 二、特异性 三、稳定性 四、适用性 五、其他 第四节 生物素-亲合素系统的应用 一、生物素-亲合素系统基本类型及原理 二、生物素-亲合素系统在酶免疫测定中的应用 三、生物素-亲合素系统在荧光免疫技术中的应用 四、生物素-亲合素系统在放射免疫测定中的应用 五、生物素-亲合素系统在分子生物学中的应用 思考题 小结
却了加B-E的步骤
3.
ABC法
⑴ ⑵ A+B· E Ag+B· Ab A- B· E----ABC Ag-Ab· B
ABC
Ag-Ab· B-ABC
特点:将BAB法中的A先与B-E结合，制备成复合物 ABC
临床检验免疫学 生物素亲和素免疫放大技术
RIA的首选方法。
临床应用
• 激素 • 肿瘤标记物 • 内分泌功能 • 传染性疾病 • 其它
– 如VB12、叶酸、铁蛋白、肌钙蛋白、肌红蛋白、酶、 脂肪酸、维生素和药物等多种检测项目。
小结
BAS既可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性 检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于各类反应 体系中反应物的分离、纯化。
BAS在实际应用中如酶免疫测定、荧光免疫技术、 放射免疫测定及分子生物学中所具有的巨大优越性主要 表现在以下几个方面：灵敏度高、特异性强、稳定性 高、适用性广、无放射性污染。
谢
谢
酶联免疫斑点试验 —— ELISPOT
enzyme linked immunospot , ELISPOT
历史回顾
1971年荷兰学者van Weeman 和瑞典学 者Engvall最先建立嗨联免疫吸附试验 (ELISA)，递经完善和拓展，迄今已成为 免疫测定中应用最广泛的一项技术。
方法评价
• 采用的固相载体是带有磁性的直径约2.8 μm的聚苯乙烯微粒。其特点是反应面积 比板式扩大20－30倍，吸附效率高；在 液体中形成均匀的悬液，参与反应时类 似液相，反应速度大大加快；
方法评价
• “链霉亲和素-生物素”是是具有很强的非共 价相互作用的一对化合物，具有牢固而特 异的结合，应用此放大系统，使检测的灵 敏度大大提高；
• Specificity Altered at Will
1 2 2m 3
2 1 3 2m
Avidin
2m 3 1 2
3 2m 2 1
Provided by John Altman
生物素-亲和素免疫放大技术
第十一章生物素 -亲和素免疫放大技术一、生物素 - 亲和素系统的特点灵敏度高，特异性好，稳定性高，适用广泛。
二、生物素的理化性质与标记（一）生物素及其活化1.标记蛋白质氨基的活化生物素N- 羟基丁二酰亚胺酯（ BNHS）2. 标记蛋白质醛基的活化生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BCHZ）3.标记蛋白质巯基的活化生物素3- （ N-马来酰亚胺 - 丙酰） - 生物胞素（ MPB）4.标记蛋白质核酸的活化生物素常用于标记核酸分子的活化生物素有光生物素、生物素脱氧核苷三磷酸、BNHS和 BHZ。
（二）生物素标记蛋白质生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类：一种是生物素化的大分子生物活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。
标记方法：（ 1）标记抗体、抗原：常用于标记抗体的活化生物是BNHS；对于偏酸性的抗原，标记时多采用 BHZ。
（ 2）标记酶：以生物素标记HRP为例。
标记注意事项：（ 1）应根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类以及分子的理化性质，选择相应的活化生物素和反应条件；（2）标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；（3）为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；（4）生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。
三、亲和素、链霉亲和素理化性质与标记1.亲和素及其活性：活性基团 - 色氨酸。
2.链霉亲和素及其活性：活性基团- 色氨酸。
3.亲和素、链霉亲和素的标记：最常用的是酶、FITC 和胶体金。
亲和素的标记（链霉亲和素的标记）（1） HRP-亲和素结合物的制备：改良过碘酸钠法，戊二醛法；（2）亲和素 - 生物素化HRP复合物的制备；（3）亲和素 - 生物素化碱性磷酸酶复合物的制备。
四、生物素 - 亲和素系统的应用1.生物素 - 亲和素系统基本类型及原理：基本类型有两种，一类以游离亲和素为中间物，分别连接包含生物素大分子的待检反应体系和标记生物素，称为BAB法；后来又在此基础上发展了亲和素 - 生物素化酶复合物技术（ ABC）。
(完整word版)初级检验技师临床免疫学和免疫检验(2017年讲义)第十一章生物素-亲和素放大技术
第十一章生物素-亲和素放大技术生物素、亲和素是一对具有高度亲和力的物质，它们的结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。
生物素-亲和素系统（BAS）是一种以生物素和亲和素具有的多级放大结合特性为基础的实验技术，它既能偶联抗原抗体等大分子生物活性物质，又可被荧光素、酶、放射性核素等材料标记。
第一节生物素的理化性质与标记生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244.31kD。
一、活化生物素利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物，称为活化生物素。
（一）标记蛋白质氨基的活化生物素（二）标记蛋白质醛基的活化生物素有两种：生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BGHZ）。
（三）标记蛋白质巯基的活化生物素：3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）。
（四）标记核酸的活化生物素：生物素戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连，构成生物素标记的核酸探针。
1.光敏生物素：用于DNA或RNA的标记。
2.生物素脱氧核苷三磷酸：将生物素与某种脱氧核苷酸连接成活化生物素。
用缺口移位法掺入到双链DNA中。
3.BNHS和BHZ：与核酸胞嘧啶分子中的N-4氨基交联，使核酸分子生物素化。
二、生物素标记蛋白质（一）生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类，一种是生物素化的大分子活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。
（二）标记方法1.标记抗体、抗原：由于一个抗体分子可连接多个生物素分子，因此一个生物素化的抗体分子在反应时可与多个亲和素分子结合。
通常选用第二抗体进行生物素标记，制备的标记物具有通用性。
2.标记酶：如生物素标记辣根过氧化物酶（HRP）。
（三）标记注意事项1.应根据抗原或抗体分子结构中所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的理化性质（酸性、中性或碱性），选择相应的活化生物素和反应条件。
2.标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例，使每个蛋白质分子上标记的生物素分子数量控制在一定范围，以免影响标记物的活性。
生物素-亲和素放大技术
生物素-亲和素放大技术生物素与亲和素之间结合的亲和力高、特异性强，各自均可以与各型大小分子结合，以及两者在结合反应时具有的多级放大作用等优越性。
生物素的理化性质与标记亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记生物素-亲和素系统的特点生物素-亲和素系统的应用生物素的理化性质与标记生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取，分子量244.31kD。
活化生物素利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物，使之容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标志物。
包括能标记蛋白质氨基、醛基、巯基和核酸的活化生物素。
常用于标记核酸分子的活化生物素有以下几种：1.光敏生物素它是一种化学合成的生物素衍生物，用于DNA或RNA的标记。
2.生物素脱氧核苷三磷酸先将生物素与某种脱氧核苷酸连接成活化生物素。
可采用缺口移位法掺入到双链DNA中。
3.BNHS和BHZ 二者均可以在一定条件下与核酸胞嘧啶分子中的N-4氨基交联，使核酸分子生物素化。
生物素标记蛋白质（一）生物素化蛋白质衍生物有两类，一种是生物素化的大分子活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标志物。
而且一个蛋白质分子可连接多个生物素分子，从而使其具有较高的比活性，在与亲和素的反应中成为多价。
生物素化大分子的多价性，是BAS多级放大作用的物质基础。
生物素化蛋白质衍生物有两类，一种是生物素化的大分子活性物质（如抗原、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标志物。
（二）标记注意事项1.选择正确的活化生物素和反应条件；2.应有适当的比例，以免影响被标志物的活性；3.可在生物素与被标志物间加入交联臂样结构；4.不影响被标记物的免疫活性。
亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记亲和素（AV）和链霉亲和素（SA）是生物亲和素的天然特异性结合物。
而且，二者均为大分子蛋白，几乎所有用于标记的物质均可以与之结合。
生物素—亲和素免疫放大技术目的要求和教学内容
第十一章生物素—亲和素免疫放大技术第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：生物素—亲和素免疫放大技术、生物素、亲和素的概念，生物素—亲和素免疫放大技术的主要类型，原理和临床应用；熟悉：生物素—亲和素免疫放大技术的类型、原理及临床应用；了解：生物素及亲和素特性及其结合抗体的制备方法，各检测技术方法的技术要点。
二、教学内容1．胶体金与免疫金制备：生物素及亲和素特性及其制备，生物素的制备。
2．生物素—亲和素免疫放大技术的类型、原理。
3．生物素—亲和素免疫放大技术临床应用与评价。
第二部分测试题一、选择题(一)单项选择题(A型题)1.既能用于标记蛋白质氨基,又能标记蛋白质醛基的活化生物素是A.BNHSB.BCHZC.BHZD.MPBE.BCNHS2.间接法BA的反应模式为A.Ag-(Ab-B)-A*B.Ag-Ab1-(Ab2-B)-A*C.Ag-(Ab-B)-A-B*D.Ag-(Ab-B)-AB*CE.Ag-Ab1-(Ab2-B)-A-B*3 下列哪一项属于长臂活化生物素A.BNHSB.BHZC.BCNHSD.BCHZE.MPB4.MPB是氯化生物胞素与3-(N-马来酰亚胺-丙酰)-N-BNHS在什么溶液中反应后制得的A.二甲基甲酰胺B.碳二亚胺C.N-羟基丁二酰亚胺D.马来酰亚胺E.水合肼5.每个亲和素能结合多少个分子的生物素A.1B.2C.3D.4E.56.生物素通过噻吩环戊酸侧链上的什么部位与多种大分子偶联A.羰基B.-NHC.羧基D.-CH3E.-NH27.常用于标记抗体的活化生物素是A.BNHSB.BHZC.BCNHSD.BCHZE.MPB8.在生物素标记抗体时,生物素:IgG 的比例(mg/mg)为多少时,效果较好A.1:1B.3:1C.4:1D.2:1E.5:19.在用生物素标记酶时,酶活性会降低的是A.HRPB.葡萄糖氧化酶C.β-GalD.APE.LDH10.亲和素-生物素化碱性磷酸酶(ABAP)复合物的制备是将亲和素溶液与生物素化AP按多少浓度比反应后制得A.1:1B.2:1C.3:1D.4:1E.5:111.标记蛋白质氨基的活化生物素是A.BHZB.MPBC.光生物素D.生物素脱氧核苷三磷酸E.BNHS12.标记蛋白质巯基的活化生物素是A.MPBB.BNHSC.BHZD.光生物素E.生物素脱氧核苷三磷酸13.制备ABC复合物时,亲和素的浓度不能高于A.10ug/mlB.20ug/mlC.30ug/mlD.35ug/mlE.40ug/ml14.标记核酸的活化生物素,下列哪项除外A.MPBB.光生物素C.生物素脱氧核苷三磷酸D.BNHSE.BHZ15.用活化生物素标记核酸的方法,下列哪项除外A.缺口移位法B.光化学法C.化学偶联法D.放射免疫法E.末端标记法16.下列说法不正确的是A.标记反应时,活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当比例B.一般每个抗原或抗体分子标记1-3或3-5个生物素分子较为适宜C.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后,不影响后者的免疫活性D.生物素与酶结合后,酶活性不受影响E.为减少空间位阻影响,常在生物素与被标记物间加入交联臂样结构17.下列哪种方法不能用于制备生物素标记的核酸探针A.缺口移位法B.化学偶联法C.光化学法D.末端标记法E.电化学法二、填空题1.不受位阻效应影响,更易发挥生物素活性作用的是（）。