人类巴氏小体的观察
浙江师范大学遗传学实验报告巴氏小体的观察
吴月婷学号13990115巴氏小体的观察1 目的学习掌握观察与鉴别人体X染色体的方法，识别其形态特征和所在的部位；进一步理解雌性哺乳动物X染色体失活的假说和剂量补偿效应。
2 原理巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞中存在的异固缩状态，形成直径约为1 μm的染色小体，贴着核膜或靠近核膜边缘。
XX型的女性细胞中含有1个巴氏小体，XY型的男性细胞中没有巴氏小体，巴氏小体的数目为细胞中X染色体的数目-1。
正常女性口腔粘膜细胞中巴氏小体出现的概率是30~50%。
3 步骤（1）取女生口腔上皮细胞，涂在载玻片上，男生口腔上皮细胞为对照。
（2）醋酸洋红染色约20min。
（3）制片显微镜观察。
4 结果在40倍视野下(图1)，观察到女性细胞中有1个巴氏小体，而男性细胞中没有巴氏小体。
巴氏小体贴着核膜表面，团状，染色较深。
统计了50个女性细胞，含有巴氏小体的细胞数为19个，比例为38%.50 μm50 μm图1 女性细胞(A)和男性细胞(B)的巴氏小体观察5 讨论我们观察到女性细胞有巴氏小体而男性细胞没有。
巴氏小体是失活的X染色体，女性有两条X染色体，而男性只有1条X染色体，因此女性在胚胎时细胞会有1条X染色体失活成为巴氏小体，从而使得X染色体剂量均等。
通常X染色体上的基因活性是常染色体活性的两倍。
女性的卵子细胞会使已经形成的巴尔氏体再次展开，转变回原始的状态。
我们观察到并非所有的女性细胞中都有巴氏小体，而是部分细胞存在。
控制X染色体失活的基因主要是X染色体上的Xist。
Xist基因表达的时候会使X染色体凝缩，当基因没有被转录或翻译的时候没有巴氏小体，凝缩后的巴氏小体缺少相应的结合蛋白也会重新展开，例如卵子中的Xist基因就会关闭，巴氏小体就重新展开形成X染色体。
在不同的组织中巴氏小体出现的频率也有所差异。
在哺乳动物中，形成巴氏小体能使X染色体的剂量均等。
其他动物有不同的方法，例如线虫不会进行X染色体去活化，而是把雌性两条X染色体的活性都减半；果蝇则是雌蝇的两条X染色体都有正常作用，但雄蝇的单一X染色体会发挥两倍的活性。
实验五 人体细胞Barr氏小体的制备与观察
间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强 的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果 可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核 膜较远或接近核中央制备与观察
一、实验目的
掌握 X - 染色质鉴别方法，识别 X - 染色质的 形态特征及部位。
二、原理
巴氏小体，又叫巴尔体（Barr body），指雌性动物的体细胞在间期 时，在核膜内面的一块染色很深的染色质。巴氏小体实际上是浓缩 了的X染色体，其上的基因不转录。 哺乳动物的雌性细胞有两个X染色体，其中一条来自母方，另一条 来自父方，在胚胎发育的早期，这两个X染色体中的一条浓缩形成 巴氏小体，因此雌性哺乳动物的体细胞中都含有一个巴氏小体和一 个能转录的X染色体，而雄性哺乳动物的体细胞有一条可转录的X 染色体和一条Y染色体。随着细胞分裂，巴氏小体也要复制，但上 面的基因从不转录。如果这个动物是三倍体，体细胞中也只有一个 能转录的X染色体，其余的X染色体都会浓缩形成巴氏小体。 巴氏小体只有女性有，巴氏小体数=X染色体数-1。
三、材料
人口腔黏膜细胞
四、方法步骤——人体细胞Barr氏小体的制备与观察 用灭菌牙签刮取口腔黏膜细胞； 涂片与风干（涂抹一下，不要来回涂）； 染色及压片（滴卡宝品红压片）： 染色10min后，盖上盖玻片，一头蒸馏水冲 洗，另一头用滤纸吸干。
五、观察结果——Barr body
观察人不同形态的X-染色体，并绘图
人类巴氏小体的观察
人类巴氏小体的观察遗传学实验报告题目:人体巴氏体观察名称:学生人数:班级:时间:1，实验目的:1。
掌握人类性染色质的检测方法；2。
观察人类性染色质的形态特征和存在位置，为进一步研究人类染色体畸变和疾病提供参考条件。
3。
了解雌性哺乳动物X染色体失活的假说和剂量补偿效应的机制第二，实验原理:人有23对染色体，其中22对是常染色体，另一对是性染色体。
XX 代表女性，XY代表男性。
一些X和Y染色体是同源的，可以在减数分裂过程中配对，而其余的则是不同的起源。
Y染色体包含很少的基因，而X染色体包含大量的基因。
男性和女性有相同数量的常染色体，并且包含相同数量的基因。
然而，女性有两条X染色体，而男性有一条X染色体和一条Y染色体，因此女性性染色体携带的基因剂量比男性高得多。
然而，研究发现女性性相关基因的表达量与男性大致相同。
这是什么原因？剂量补偿效应(剂量补偿效应)定义:在具有XY性别决定机制的生物体中，性连锁基因在雌性和雄性中具有相等或接近相等的有效剂量遗传效应也就是说，在雌性和雄性细胞中，x染色体基因编码的酶或其他蛋白质产物在数量上相等或接近相等剂量补偿有两种情况。
雌性哺乳动物的一条X染色体异染色质化(失活)，并且只有一条X染色体是活性的，这使得基因产物的剂量平衡，尽管雄性和雌性动物的X染色体数量不同。
二是X染色质的转录率不同。
如果两个X染色体在苍蝇的雌性细胞中都是活跃的，它们的转录率就低于雄性细胞。
| M.L.Barr等人在雌性猫神经元的核膜中发现了浓缩的深染体，但在雄性个体细胞中没有发现。
这个结构叫做巴尔体进一步的研究发现，这种结构可以在所有哺乳动物的雌性细胞中看到。
巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中的X染色质随机失活形成的。
它们在间期细胞核中是异质的(染色质高度螺旋)，并且是靠近核膜边缘的染色小体。
里昂假说1961，玛丽·里昂提出了一个假说，阐明哺乳动物的剂量补偿效应和形成巴氏小体的X染色体的失活的主要内容包括:①雌性哺乳动物个体的两条X染色体之一在受精后失活；②两个X染色体中的哪一个随机失活；在同一哺乳动物的体细胞中，一些亲本X染色体失活，一些亲本X染色体失活。
巴氏小体染色观察
一、实验目的1.掌握人体性染色质的检测方法；2.观察人体性染色质的形态特征及存在部位，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考条件；3.了解雌性哺乳动物X染色体失活假说和剂量补偿效应的机制。
二、实验原理人类有23对染色体，其中22对为常染色体，另一对为性染色体。
女性为XX，男性为XY。
X与Y染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。
Y染色体含有很少的基因，而X染色体则含有大量的基因。
男性与女性的常染色体数目是一样的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X染色体，而男性一条X一条Y，因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的，这是由于剂量补偿效应导致的。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)定义: 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。
剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。
1949年M.L.Barr等研究发现雌猫神经元细胞核膜内有凝缩的深染小体，而雄性个体细胞中则没有，这一结构被称为巴氏小体(Barrbody)。
进一步研究发现：所有哺乳类雌体细胞中都可以见到这一结构。
巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中X染色质随机失活形成的，在间期细胞核中呈异固缩状态(染色质高度螺旋化),贴近于核膜边缘的染色小体。
三、实验材料1.器材：显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，牙签等。
2.试剂：硫堇染液，1M HCl，蒸馏水、生理盐水。
3.材料：口腔上皮细胞。
遗传试验4巴氏小体
人类巴氏小体的观察摘要巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态(染色质高度螺旋化),形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
显微镜观察到男性有巴氏小体的细胞为1%，而女性则高达30%。
本次实验中采用女性的口腔黏膜细胞或者毛囊细胞（男性的作为对照）为材料，通过染色再在显微镜下观察巴氏小体。
关键字：巴氏小体、X染色体、女性1.引言巴氏小体又称X小体：正常女性，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5 um，呈现三角或椭圆形小体。
巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。
具有两个（或以上）X染色体的细胞中，不活化的X染色体所浓缩形成的紧密结构。
它会依附在细胞核边缘的核膜内侧，虽然此染色体上的小部份区域能保持着活跃的状态，但大多数的基因都是不会表现的。
只有位于性腺之细胞内的巴尔氏体在进行减数分裂时会再度活化。
Lyon的剂量补偿学说认为：女性有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。
这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个是晚复制的，没有活性。
该失活的染色体在形态学上呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密，称之为巴氏小体。
X染色质的失活只是部分失活，仍然有部分基因具有转录活性，目前已知的大约有十几个基因有活性。
若失活X染色质为完全失活，则XXY（Klinefelter’s syndrome）及XO(Turner’s syndrome)型应表现正常。
Barr小体的数目=n-1(n为X染色体数目) 正常女人的体细胞间期核中Barr小体为1；正常男人的体细胞间期核中Barr小体为0；XXX女人的体细胞间期核中Barr小体为2；XXXX 女人的体细胞间期核中Barr小体为3。
2.实验材料2.1实验材料2.1.1实验材料：口腔粘膜细胞或者毛囊细胞2.1.2实验用品：显微镜、载玻片、盖玻片、1M盐酸溶液、蒸馏水、硫堇染液、吸水纸2.2实验步骤2.2.1用牙签轻轻地刮取口腔上皮细胞或拔一根头发将毛囊细胞，均匀的涂于干净的载玻片上，自然干燥5-10min；2.2.2 用1M HCl水解细胞3-5min；2.2.3 用水洗3次，每次1min；2.2.4用蒸馏水将HCl清洗干净后，再用硫堇染液染色20min；2.2.5水洗去染料，在显微镜下观察标本。
遗传实验报告3_巴氏小体
性染色质：人体X染色质观察实验日期：2013年3月28日一、实验目的通过实验掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别Barr小体的特征及其所在的位置。
了解X染色体失活的有关理论假说以及失活染色体上的基因所控制的遗传性状的特点。
二、实验原理Barr等人在1949年首先发现在雌性猫的神经细胞核内有一个浓缩的深染小体，但是在雄性猫中几乎检测不到。
以后通过研究发现，在有袋类、偶蹄类、翼手类、食肉类和灵长类动物的多种组织的细胞中都存在这种二态性特点。
雌性个体的细胞中2条X染色体中，有一条在间期是处在不活动的异固缩状态，从而形成了X染色质又称Barr小体。
这种情况在哺乳类动物的雌性个体都存在，即雌性哺乳类动物细胞内的X染色体在间期内仅有一条呈松散状态，参加细胞生理活动，另一条则保持异固缩状态。
Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细胞核边缘，这主要是因为这条染色体处在失活状态所致。
Morishima等利用放射性标记的方法证实了失活状态的性染色体与其他异染色质一样，在DNA复制时总落后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。
性染色体在人类中，正常男性个体不可能出现Barr小体，正常女性的细胞只可能出现一个Barr小体。
对于具有性染色体畸变的个体来说，Barr小体出现的数目等于细胞内X染色体的数目减1。
表1为性染色体组成与X小体数目的关系。
表1 性染色体组成与X小体数目的关系XO 女0XX 女 1XXY 男 1XXX 女 2XXXX 女 3剂量补偿效应是指XY型性别决定的生物，由X性染色体上的基因决定的性状在两性的表现几乎相同。
也就是说X染色体上的基因的表达产物在雌雄细胞中是等量的。
这种剂量补偿效应可以通过两种途径实现：一是X染色体的转录速率的差异，即雌性细胞中的两条X 染色体的转录速率低于雄性细胞中单条X染色体的转录速率，因而造成雌性和雄性细胞的总体表达水平接近；二是雌性细胞中有一条X染色体在功能上是失活的。
遗传学-巴氏小体观察
遗传学—人类性染色质体观察巴氏小体也被称为性染色质体或X染色质体。
在间期表现为浓缩致密的、深染的结构，在DNA复制期表现为晚复制。
女性细胞中观察到的频率为13～39％，正常男性0～2％。
研究发现巴氏小体的数目＝x染色体数-1Mary Lyon提出巴氏小体是通过异固缩形成异染色体而失活的X染色体，是达到雌雄两性X染色体上活性基因剂量平衡的一种补偿方式。
Lyon假说的要点：1. X染色体失活发生在胚胎发育的早期（受精后的16天左右，胚胎的细胞数达到5000～6000左右，植入子宫壁时），一旦失活，其上的大部分基因也失去表达活性；2. 每一体细胞中哪一条x染色体失活是随机的；3. X染色体的失活状态可以通过有丝分裂传递，即一旦某条X染色体失活，在其所有子细胞中都是同样一条X染色体失活。
修正：失活的X染色体上并非全部基因都呈莱昂化（失活）非莱昂化基因：③不完全的剂量补偿效应：。
31.生殖细胞中不发生X染色体失活。
2.失活的X染色体上有活性基因似乎是与失活基因相嵌存在。
1. 清洁口腔:细胞提供者需重复两三次用水漱口,以便去掉松动的上皮细胞和细菌。
用洁净的牙签在女性口腔颊部来回刮取粘膜细胞并涂在洁净干燥的载波片上。
涂片的范围与盖片大小相当。
静置10分钟晾干。
2. 滴加1 mol/L 的HCl水解10 min。
3. 从玻片反面用成45度角的流水冲洗。
晾干5-10 min。
4. 2％硫堇染色1-2 min。
5. 从玻片反面用成45度角的流水冲洗。
晾干。
6. 镜检，观察巴氏小体。
7. 若染色太深可用95％酒精成45度角流加在玻片正面染色区域脱色。
先在低倍镜下检出典型的可数细胞,其标准为:(1) 核质呈网状或细颗粒状分布;(2) 核膜清晰,核无缺损;(3) 染色适度;(4) 周围无杂物.选定细胞后再换高倍镜或油镜进一步观察.巴氏小体(直径大约为1μm) 具有典型的平凸的外形,其形态常表现为一结构致密的浓染小体, 轮廓清晰,常附着于核膜边缘或靠近内侧,其形状有三角形、球形、短棒状、卵形、微凸形等.。
实验七.人类巴氏小体的观察
巴氏小体鉴别特征
1. 2. 3. 4. 5. 一般出现在细胞分裂周期的间期； 直径为1μm左右； 一般位于核膜内侧边缘； 形状多样，多为半圆形，三角形等形状； 材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开 来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。
3. 观察
• 在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微 米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴 氏小体。材料不同，观察结果可能有不同 ，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核 膜较远或接近核中央部位）。
三、 实验材料： 男、女性口腔颊部粘膜上皮细胞、头发根部的毛囊细胞
粘膜上皮细胞个体较大，容易观察，但易污染细菌等杂质； 头发毛囊细胞个体稍小，观察稍困难，优点是不受细菌污染。
四、 实验器具及用品：
实验器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌牙签等。 实验药品和试剂： 1、1N或5N盐酸，或浓盐酸和95％乙醇 1：1的混合液。 2、改良苯酚品红染色液。
-- 细胞周围无细菌污染；
-- 细胞轮廓清楚、核膜清晰； -- 核无缺损；核染色清晰适度；核质呈网状或细颗粒状。 6. 今天需要使用油镜，用后请搽拭干净。
七、实验结果和作业：
1. 分别观察50个男、女性可数的细胞，计算各自的
带有Barr小体的细胞所占的百分比。 2. 在观察中画出1个典型细胞，标明Barr小体的部位。
八、思考题：
1．男性没有巴氏小体的理论基础。
2．男变女的变性手术后，该女性有无巴氏小体？
3．性别畸形的染色体模式可能有几种？
女性细胞1
2019/4/9 17
女性细胞2
2019/4/9 18
女性细胞3
2019/4/9 19
讲座信息
题 目：Imaging Life at High Spatiotemporal Resolution. 讲座人：Eric Betzig 时 间：3月24日（周四）上午9:00-10:30
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人类巴氏小体的观察
目的
1，掌握人类x小体（巴氏小体）玻片标本制作方法
2，观察识别巴氏小体形态特征及所在部位，
鉴定个体的性别。
二、原理
巴氏小体又称X小体：正常女性，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5 um，呈现三角或椭圆形小体，数量为x染色体数减一。
巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。
Lyon的剂量补偿学说认为：女性有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。
这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个是晚复制的，没有活性。
该失活的染色体在形态学上
呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密，称之为巴氏小体。
三、实验材料
口腔粘膜细胞，毛根鞘细胞显微镜，载玻片，盖玻片，牙签，吸管固定液（甲醇:冰醋酸＝3:1），生理盐水，
苯酚品红染液
四、实验步骤
1）取材
口腔粘膜细胞：受检者清水漱口数次，用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次，第一次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片上。
发根细胞：拔取女性带有毛囊的头发（约2cm），置于载玻片上。
2）固定
将置于离心管中的材料（口腔粘膜细胞），首先2000rpm离心20min，弃上清，加入新配置的固定液（甲醇:冰醋酸＝3:1），37℃下静置30min，再1000rpm离心15min弃上清，加入1ml固定液（甲醇:冰醋酸＝3:1）制成细胞悬液。
置于载玻片上，待材料干后滴加固定液（95％乙醇:乙醚＝1:1）固定1h，空气干燥。
3）染色、制片
细胞悬液一滴于载玻片上，固定20min，蒸馏水洗2～3min，1N盐酸37℃水浴20min，晾干，滴加1～2滴染液染色20～30min（勿干），细水洗去染液，晾干。
直接涂片的：滴加染液，室温20～30min（勿干），加盖玻片，压片。
发细胞：拔掉毛干，直接滴加5N盐酸于毛囊细胞处，处理5min，吸去盐酸，滴加染液，染色20min，加盖玻片，压片。
五、镜检
在高倍镜或油镜下观察（巴氏小体）。