人类X染色质(巴氏小体)制备与观察
人的X染色质的观察
作业：
绘出所观察到的Barr氏小体
Lyon假说
2、失活是随机的。 3、失活发生在胚胎发育的早期。例如：人类在胚胎发育
的16天X染色体一条发生失活。某一细胞的一条X染色
体一旦失活，这个细胞的所有后代细胞中的该X染色 体均处于失活。
4、杂和体雌性在伴性基因的作用上是嵌和体（mosaic）
----某些细胞中来自父方的X染色体上的基因表达，某 些细胞中来自母方的X染色体上的基因表达。
2．发根细胞的Barr氏小体显示方法。
用拔取女性带毛囊细胞的头发，将毛囊置于载 玻片上，加一滴95％乙醇:浓盐酸解离5分钟，吸 掉多余的解离液，用镊子将软化的毛囊剥下，加一 滴卡宝品红染色10分钟，而后盖上盖片，用拇指 压片，即可镜检。
X染色质的辨认：
低倍镜下检出典型的可数细胞，其标 准是①核质呈网状或细颗粒状分布；②核 膜清晰、核无缺损；③染色适度；④周围 无杂菌。选定后的细胞在高倍镜或油镜下 进一步检查，X染色质的形态一般表现为 一个结构致密的浓染小体，轮廓清楚，大 小约1u左右，常附着于核膜边缘或靠近内 侧，其形态有微凸形，三角形、卵形、短 棒形及双球形等。
实验八 人类X染色质的观察
和果蝇唾腺染色体观察
人类X染色质的制备与观察 果蝇唾腺染色体观察
X染色质的发现
早在1949年Barr等人发现在雌性猫的神经细胞 间期核中有一个染色很深的染色质小体，而雄 性猫中没有。 由于这种染色质小体与性别及其X染色体数目 有关，所以也称为性染色质小体（sex chromatin body）,又名巴氏小体（Barr body） 是失活的异固缩状态的X染色质，并发现它属 延迟复制的染色体。X小体的数目在正常女性 中是性染色体数目减去一。经观察，X小体一 般1-1.5微米，呈三角形或卵圆形，出现频率 是13-39％（男性的频率为1-2％）。
人类性染色质标本的制备和观察
实验一
X染色质
实验一
Lyon假说:
（1）正常女性体细胞内仅有1条X染色体有活性，另 一条X染色体在遗传上是失活的，在间期细胞 核中高度螺旋化而呈异固缩的X染色质。
（2）X染色体失活发生在胚胎早期。 （3）X染色体失活的随机性和恒定性。
实质：失活的X染色体 意义：X染色体的剂量补偿 X染色质的数目=X染色体数-1
1、几对基本概念 染色质——染色体 常染色质——异染色质 常染色体——性染色体
实验一
内容步骤
实验一
（一）性染色质的定义及形成机制
1、几对基本概念
性染色质（sex chromatin）：
在间期细胞核中性染色体的异染色质部分显示出 来的一种特殊结构，包括X染色质和Y染色质 。
内容步骤
（一）性染色质的定义及形成机制
隐性
紧貼脸颊 不能
无 拇指第一节向指背弯曲
较无名指短 无(单眼皮)
无 左手拇指在上
实验一
课后作业
1、绘制人类口腔黏膜上皮细胞（示X染色质） 2、自学理论书P114-115遗传平衡定律及遗传
平衡群体的判断，判定是否为平衡群体。
实验一
预习
实验二：人类染色体核型分析 （实验指导：P59；P62） 准备：非显带核型的照片染色体剪下
实验一
基因
tt Tt TT
实验一
（三）PTC尝味实验：
1、原理 人类味觉对苯硫脲（又称苯基硫代碳酰二胺，
PTC）的敏感性由一对等位基因（T、t）控制，属不 完全显性遗传。基因型不同的个体尝出含PTC溶液的 浓度有明显的差异。
6 7 10 11
①②③ ④
tt
实验五 人体细胞Barr氏小体的制备与观察
间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强 的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果 可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核 膜较远或接近核中央制备与观察
一、实验目的
掌握 X - 染色质鉴别方法，识别 X - 染色质的 形态特征及部位。
二、原理
巴氏小体，又叫巴尔体（Barr body），指雌性动物的体细胞在间期 时，在核膜内面的一块染色很深的染色质。巴氏小体实际上是浓缩 了的X染色体，其上的基因不转录。 哺乳动物的雌性细胞有两个X染色体，其中一条来自母方，另一条 来自父方，在胚胎发育的早期，这两个X染色体中的一条浓缩形成 巴氏小体，因此雌性哺乳动物的体细胞中都含有一个巴氏小体和一 个能转录的X染色体，而雄性哺乳动物的体细胞有一条可转录的X 染色体和一条Y染色体。随着细胞分裂，巴氏小体也要复制，但上 面的基因从不转录。如果这个动物是三倍体，体细胞中也只有一个 能转录的X染色体，其余的X染色体都会浓缩形成巴氏小体。 巴氏小体只有女性有，巴氏小体数=X染色体数-1。
三、材料
人口腔黏膜细胞
四、方法步骤——人体细胞Barr氏小体的制备与观察 用灭菌牙签刮取口腔黏膜细胞； 涂片与风干（涂抹一下，不要来回涂）； 染色及压片（滴卡宝品红压片）： 染色10min后，盖上盖玻片，一头蒸馏水冲 洗，另一头用滤纸吸干。
五、观察结果——Barr body
观察人不同形态的X-染色体，并绘图
中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告
人类X染色质标本的制备与观察张皓予15335203一、实验目的1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。
2.正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。
3.说明人体细胞中核内X染色体的数目和性染色体数目之间存在的关系。
二、实验原理X染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。
在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。
用苯酚品红改良染液染色后，便可观察到染色较浓，多位于核膜内侧缘，呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形，直径约1μm大小的小体。
女性细胞核中出现率为40%~60%。
Barr和Bertram首先（1949）在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。
这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。
这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个X染色体。
因此原则上男性不应有性染色质。
但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。
同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。
因此，性染色质实质上是一个失活的X 染色体。
为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。
使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。
此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。
三、实验仪器与试剂1.仪器与用具显微镜，水浴锅，牙签，载玻片，盖玻片，镊子，吸水纸。
人类X染色质的制备与观察
人类X染色质的制备与观察摘要：人类X染色质（巴氏小体）是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋化），形成直径约1μm，贴近于核膜边缘的染色小体。
根据X染色体失活与Lyon假说，雌性哺乳动物的两条X染色体中，只有一条X染色体有转录活性，另一条X染色体无转录活性，呈固缩状，形成X染色质。
失活发生在胚胎发育早期，且失活是随机的。
本实验以人口腔颊部粘膜细胞、发根毛囊细胞为材料制备X染色质标本，通过硫瑾染色、压片等方法观察巴氏小体。
本次试验的目的是掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别X染色质，即Barr小体的形态特征及所在部位，了解X染色体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1.引言1.1巴氏小体人类有23对染色体，其中22对为常染色体，另一对为性染色体。
女性为XX，男性为XY。
X与Y染色体有一部分是同源的，在减数分裂时可以相互配对，其余部分则不同源。
Y 染色体含有很少的基因，而X染色体则含有大量的基因。
男性与女性的常染色体数目是一样的，所含有的基因数目也相等；但是女性含有两条X染色体，而男性一条X一条Y，因此女性性染色体所携带的基因剂量远高于男性，然而研究发现女性伴性遗传基因的表达剂量与男性是大体相同的，其原因可以用剂量补偿效应解释。
剂量补偿效应(dosage compensation effect)的定义: 在XY性别决定机制的生物中，使性连锁基因在雌、雄性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
也就是说，在雌性和雄性细胞里，由X染色体基因编码产生的酶或其它蛋白质产物在数量上相等或近乎相等。
剂量补偿存在两种情况，雌性哺乳动物一条X染色体异染色质化(失活)，只有一条X 染色体具有活性，使雌雄动物虽然X染色体数目不同但基因产物的剂量是平衡的；另一种是X染色质的转录速率不同，如果蝇雌性细胞中两条X染色体都有活性，但它们的转录速率低于雄性细胞X染色体的转录速率。
人类X染色质（巴氏小体）制备与观察
⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）制备与观察⼈类X染⾊质（巴⽒⼩体）的制备与观察摘要巴⽒⼩体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染⾊体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染⾊⼩体，在遗传学、细胞观察⽅⾯有重要意义。
实验中作者取⼈⼝腔颊部上⽪细胞与发根⽑囊细胞进⾏硫瑾染⾊操作，通过显微观察对巴⽒⼩体进⾏识别与计数，描述巴⽒⼩体的形态，并统计其在不同性别⼈体细胞中的出现率。
引⾔在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除⼀条X染⾊体外，其余的X染⾊体失活并呈异固缩状态，此即为巴⽒⼩体。
⼜称X⼩体、性染⾊质，直径约1µm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿⼤学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现⼀种染⾊很深的⼩体，⽽在雄性猫中则极少出现[1]。
通常⼈类男性细胞核中很少或没有巴⽒⼩体，⽽⼥性有1个，性染⾊体异常的患者如XXY、XXYY、XXX、XXXY等，巴⽒⼩体的数量＝X染⾊体数量－1。
综合巴⽒⼩体与哺乳动物性染⾊体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染⾊体只有⼀条在遗传上有活性，另外⼀条失活；(2)X染⾊体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合⼦中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染⾊体全部是⽗⽅的。
(3)失活发⽣在胚胎发育的早期，如⼈在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
⼀个细胞的⼀条染⾊体⼀旦失活，这个细胞的后代细胞中该染⾊体均失活。
Lyon假说虽然可以解释⼀些问题但不是全部，如⼈类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着⽣物学和医学的发展⼈们已经认识到单条X染⾊体失活现象是普遍存在的，但失活的染⾊体上存在失活区和⾮失活的。
如⼈类中位于X染⾊体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶⾎第Ⅷ因⼦）等是⾮失活的，⽽Xg⾎型基因是失活的。
人类性染色质小体的制备和观察
箭头所示为巴氏小体（女性细胞[左]中存在，男性细胞[右]中没有）
六、注意事项
1．在实验中取材时应该注意安全； 2．如果用毛囊细胞进行试验，采样前应清 洗头发，因出油后拔漱口数次，用洁净牙签 从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次， 第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片 上。 固定：口腔粘膜细胞加入新配置的固定液 （95%乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min （固定液勿干）以上，空气干燥。
3）染色、制片 滴加染液，室温10min（勿干）； 在95%的酒精中分色1-3分钟； 在无水乙醇中继续分色两次，每次1分钟 用二甲苯透明两次，每次约3分钟； 加盖玻片，压片。
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是1条X染 色体呈异固缩状态所形成，各实验室所统计的观察率不尽 相同，从30％一50％不等，有些实验室中在男性的细胞 中发现X小体有2%的出现率，但小体结构不规范、典型。 巴氏小体常位于核膜内侧。直径为1μm左右，其形状有微 凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。观察时需注意 巴氏小体与细胞的比例。 正常女性细胞中仅可观察到1个巴氏小体，而正常男性细 胞中无巴氏小体或仅在个别细胞中有不典型的巴氏小体存 在。
2）固定 口腔粘膜细胞加入新配置的固定液（95% 乙醇:冰醋酸＝3:1），固定30min以上，空 气干燥。
2）固定 毛囊细胞-拔取一根毛根比较大的毛发，在一张干 净的载玻片中央滴一滴45%的醋酸，静置约5分钟， 待毛根稍软后，用镊子尖把外层毛囊的组织细胞 轻轻刮下，弃去毛干。将细胞用解剖针在载玻片 上均匀摊平，并在空气中晾干。 实验改进意见：拿起上述发根的梢部，将其上毛 囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的 目的。（若用刀片或镊子将毛囊细胞刮下，可造 成细胞的堆积，同样会出现多层细胞的现象。1根 发根的毛囊细胞可以转移到3-4张载片上，以达到 充分利用实验材料的目的。观察时又可以看到清 晰的单层涂布细胞，便于观察统计。）
人类巴氏小体的制备及观察
X染色质检查的临床应用
正常女性间期细胞 核中X染色质阳性率 为10％－30％，而 男性则低于1％。 X染色质
核膜
性别的快速鉴定 胎儿性别鉴定
实验步骤
取口腔上皮细胞涂于载玻片上，自然干燥
甲醇，冰醋酸（3：1）固定15分钟， 干燥 依次放入95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇，蒸馏水中， 5NHcl分化5秒钟 蒸馏水漂洗3次，
相关概念：
剂量补偿效应：指在xy性别决定的生物中，使 性连锁基因在两种性别中有相等或近乎相等的 有效剂量的遗传效应。 主要类型： 1.X染色体的转录速率不同（果蝇）。 2.雌性体细胞中有一条x染色体是失活的。 （人、哺乳类）
Lyon假说： 1961年由Lyon提出，又称单个活性X染色体 假说。 1．正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染 色体中只有一条有活性(activation X, Xa)， 另一条失活(inactivation X, Xi)； 2．失活是随机的； 3．失活发生在胚胎发育的早期； 4．杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体 (mosaic)。
实验原理
X染色质的相关知识：发现过程及基本形态 形成过程 本质 临床应用
发现过程及其基本形态
1. 1949年Barr等在雌猫 的神经元细胞中发现 一种浓缩小体，而雄 猫无。而且在其他物 种的雌性个体组织细 胞核中都有。因此X染 色质又称Barr小体。
X染色质的形成过程
女性：46，XX 男性：46，XY
性别的快速鉴定胎儿性别鉴定取口腔上皮细胞涂于载玻片上自然干燥甲醇冰醋酸固定15分钟干燥依次放入95乙醇70乙醇50乙醇蒸馏水中5nhcl分化秒钟蒸馏水漂洗每次23分钟23分钟硫堇染色10分钟染色质的识别方法
实验一
人类细胞中巴氏小体的观察
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人类X染色质（巴氏小体）的制备与观察
摘要
巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
实验中作者取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫瑾染色操作，通过显微观察对巴氏小体进行识别与计数，描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言
在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体失活并呈异固缩状态，此即为巴氏小体。
又称X小体、性染色质，直径约1μm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现[1]。
通常人类男性细胞核中很少或没有巴氏小体，而女性有1个，性染色体异常的患者如XXY、 XXYY、XXX、XXXY等，巴氏小体的数量＝X染色体数量－1。
综合巴氏小体与哺乳动物性染色体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：
(1)正常的雌性哺乳动物两条X染色体只有一条在遗传上有活性，另外一条失活；
(2)X染色体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合子中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染色体全部是父方的。
(3)失活发生在胚胎发育的早期，如人在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
一个细胞的一条染色体一旦失活，这个细胞的后代细胞中该染色体均失活。
Lyon假说虽然可以解释一些问题但不是全部，如人类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着生物学和医学的发展人们已经认识到单条X染色体失活现象是普遍存在的，但失活的染色体上存在失活区和非失活的。
如人类中位于X染色体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血第Ⅷ因子）等是非失活的，而Xg血型基因是失活的。
巴氏小体的生物学观察，对于优生学中鉴别性别和预防性连锁疾病的发生，以及作为癌细胞核异常主要形态学特征之一鉴定癌细胞，有重要价值[1]。
本次实验将通过实验掌握鉴定人类X染色质的方法，在显微镜下正确识别巴氏小体的形态特征及所在部位，并了解巴氏小体失活的有关假说以及为失活X染色体上的基因所控制的遗传性状地特点。
1.实验材料
1.1.生物材料：人体口腔颊部上皮细胞，人体发根毛囊细胞。
1.2.器材：显微镜，解剖针，牙签，眼科镊，载玻片，盖玻片，滤纸条。
1.3.试剂：硫瑾，1mol/L HCl，蒸馏水，45%醋酸。
2.实验步骤
2.1.观察人口腔颊部上皮细胞巴氏小体
2.1.1.取材用灭菌的牙签轻刮口腔颊部上皮，涂片，晾干。
2.1.2.加1mol/L 的盐酸水解10-15分钟。
轻轻水洗，晾干。
2.1.
3.硫瑾染色10-20分钟，洗净，晾干。
2.1.4.显微镜观察。
巴氏小体应靠近核膜边缘，染色较深。
2.2.观察发根毛囊细胞巴氏小体
2.2.1.拔取带毛囊头发一段，45%冰醋酸解离5分钟。
2.2.2.剥取毛囊，硫瑾染色10分钟，洗净。
2.2.
3.压片（压片前可先用解剖针敲片，使细胞分散），镜检。
毛囊细胞密度比口腔上皮细
胞标本较低，但较为集中。
3.实验结果
3.1.结果图示
图1 人口腔上皮颊部上皮细胞（男性标本，未显示巴氏小体，10×10）
图2 人体人口腔上皮颊部上皮细胞（女性细胞，圆圈中示巴氏小体，10×40）
3.2.结果分析
巴氏小体为女性细胞中所特有的染色体结构，是l条X染色体呈异固缩状态所形成。
其直径为lμm左右，其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形和双球形等。
巴氏小体一般位于核膜附近，颜色比周围的核物质深。
一般正常女性口腔粘膜细胞中，X染色质约15%左右，平均16.4%，不超过30～35%，仅含1个X染色质。
男性的细胞中发现X小体有小于2%的出现率，但小体结构不规范、典型。
本次试验中对男性口腔颊部上皮细胞标本与女性口腔上皮标本都进行了硫瑾染色法观察，其操作过程引入杂质较多，导致显微镜视野中不够整洁。
男性口腔颊部上皮细胞标本中出现大量深染色的颗粒状结构（如图1），对X染色质的观察与判断造成一定影响。
经过仔细辨别，没有在标本中发现X染色质，男性X染色质检出率为0。
女性口腔颊部上皮细胞标本共发现含X染色质细胞核5个，细胞核计数结果45~50个，X染色质出现频率为10%~11%，较标准数值偏低。
可能原因：挑取标本过程有一块口腔上皮完整剥下，造成后来制片时出现大量细胞粘连在一起，对辨认X染色质、计数及显微观察都造成一定影响。
4.注意事项
本次实验的难点在于标本杂质的控制，视野中细胞清晰，杂质少的装片标本视为质量较好。
1.载玻片要非常干净，洗净酒精浸泡后晾干或烤干，以免制片后杂质过多。
2.实验前先用水将口漱净，第一遍刮取的样本弃去，尽可能除去口中杂物。
注意不要刮破上皮，涂片后要等材料晾干后在染色或解离，否则丢失材料。
3.使样品中混入其他细胞（如真皮层细胞，其细胞核较大，染色较深）。
4.注意视硫瑾浓度确定染色时间，否则造成染色过浅或背景着色皆影响观察。
参考文献
[1] 杨大鹏主编. 遗传学实验, 果蝇唾腺染色体标本的制备与观察, 2010年9月.
（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）。