黄曲霉素B1检测卡说明书(完整版)
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素B1酶联免疫定量检测试剂盒 说明书
1ELISA kit for quantitative detection of aflatoxin B1一、概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。
这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。
黄曲霉毒素B1（AFB1）属于自然最强烈的致癌物质，它一般产生于花生、玉米、巴西坚果和棉花种子中。
本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物、饲料及其他食品中的AFB1含量进行快速、定量检测。
二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达0.1 µg/kg（ppb）。
样品或标准品中游离的黄曲霉毒素B1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素B1后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素B1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素B1的污染水平。
三、试剂盒构成1、反应板支架……………………………………………………………………………1块2 黄曲霉毒素B1抗体包被反应板……………………………………………………96孔3、黄曲霉毒素B1标准品溶液（0 ppb，0.1 ppb，0.25 ppb，0.5 ppb，1 ppb，2 ppb）…1套4、酶标记物…………………………………………………………………4瓶5、酶稀释液……………………………………………………………………1瓶6、样品稀释液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。
黄曲霉素B1AFB1酶联免疫分析ELISA
黄曲霉素B1（AFB1）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1 使用目的：本试剂盒用于饲料、谷物、血清等相关液体样本中黄曲霉素B1（AFB1）残留的定量检测。
2 实验原理本试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在微孔板包被有黄曲霉素B1（AFB1）偶联抗原，加入黄曲霉素B1（AFB1）标准品或样品，游离黄曲霉素B1（AFB1）与微孔条上预包被的黄曲霉素B1偶联抗原互相竞争抗黄曲霉素B1（AFB1）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中黄曲霉素B1（AFB1）含量成反比，通过标准曲线计算样品中黄曲霉素B1（AFB1）的含量。
3 试剂盒组成3.1 预包被的AFB1偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2 AFB1标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0 ng/ml，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml。
3.3抗AFB1抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
3.4显色液A：1瓶（6ml）。
3.5显色液B：1瓶（6ml）。
3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7样本稀释液：1瓶（10×, 6ml），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9说明书一份。
4 需要而未提供的材料4.1 设备4.1.1波长450nm酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存6 注意事项6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。
黄曲霉素B1检测卡说明书(完整版)
黄曲霉素B1检测卡说明书(完整版)-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN黄曲霉毒素B1 检测卡说明书【简介】黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物，最主要的4种分别为：B1、B2、G1、G2。
黄曲霉毒素具有很强的急性毒性，也有明显的慢性毒性及强致癌性。
黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品，其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品；其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻、茶叶等。
鉴于这些霉菌毒素的毒性，欧盟国家规定，黄曲霉毒素B1的残留限量值为5ppb。
【检测原理】该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。
【检测范围】花生、玉米、小麦、大米、茶叶、油脂、饲料等；【产品组成】黄曲霉毒素B1免疫胶体金快速检测卡(40份/盒)滴管（40支）干燥剂（40片）一次性手套（5只）【技术指标】检测下限：5μg／kg；【检测步骤】1．取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15ml离心管中。
2．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。
3．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液（吹风机或烘箱），然后用0.3ml体积稀释液复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液.4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
【结果判断】1、阴性:测试线(T)与对照线(C)都出现，表明样品中黄曲霉毒素的浓度小于5ug／kg。
2、阳性:只有对照线(C),无测试线(T)，表明样品中黄曲霉毒素的浓度大于或等于5μg／kg。
3、无效:对照线(C)和测试线(T)都不出现，或者对照线（C）不出现。
【注意事项】1、本产品在2～30℃密封干燥保存；忌冷冻；检测卡保存期18个月；2、在环境温度15～37℃下操作；检测卡极易受潮，打开小包装后应立即使用；3、乙酸乙酯为易挥发液体，保存为12个月，不用时要盖紧瓶塞；。
黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)说明书
黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)说明书【产品名称】产品名称：黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)英文名称：Aflatoxin B1 Rapid Test Card (Colloidal Gold)【产品简介】黄曲霉毒素是一类丝状真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）产生的有毒代谢产物，黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，其毒性作用主要是对肝脏的损害。
黄曲霉毒素B1污染的食物主要是玉米、稻谷、小麦、花生、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区污染最为严重。
本产品用于快速检测玉米油、花生油、葵花籽油等食用油中黄曲霉毒素B1残留，检测过程只需要20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构的快速筛查。
【包装规格】5次/盒。
【产品组成】黄曲霉毒素B1快速检测卡（5条）；1mL刻度吸管（10支）；提取瓶（内含黄曲霉毒素B1提取液2mL，5瓶）。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检出限】本产品检测方法对玉米油、花生油黄曲霉毒素B1检出限量为20μg/kg，对其他食用油黄曲霉毒素B1检出限量为10μg/kg。
根据《食品真菌毒素限量GB2761-2011》规定，玉米油、花生油黄曲霉毒素B1检出限量为20μg/kg，其他食用油黄曲霉毒素B1检出限量为10μg/kg。
【使用方法】1、玉米油或花生油检测：用1mL刻度吸管向提取瓶中加入油样2mL（用吸管移加2次）；其他食用油检测：用1mL刻度吸管向提取瓶中加入油样4mL（用吸管移加4次）。
2、盖紧提取瓶盖，用手上下振荡30-60秒，静置10分钟，待样品分成上下两层。
3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用另一只新吸管从提取瓶中吸取少量下层液体，垂直滴加3滴（约100μL）于检测卡加样孔（S孔）中。
4、室温环境计时约10分钟，根据示意图判定结果。
【结果判定】阴性（-）：T线显色比C线深或一样深，均表示样品中黄曲霉毒素B1浓度低于检出限。
阳性（+）：T线显色比C线明显变浅或T线不显色，表示样品中黄曲霉毒素B1浓度等于或高于检出限。
黄曲霉毒素B1试剂盒操作流程图
该操作是根据江苏省苏微微生物产品应用编制的，具体使用请参照产品附带说明书！黄曲霉毒素B1操作流程示意图
1.
；
2.1‐6号孔分别按次序由小到大加入浓度为0‐‐2ppb 标准品溶液各50ul ，剩余孔从7号开始分别加入要测定的样品的稀释液；然后从1号开始的所有孔分别加入50ul 稀释后的酶标抗原溶液，加盖后放入37℃培养箱，进行30分钟温育；
3.孵育完成后，倒掉孔内所有试剂，每孔加入约250ul 洗涤液，洗板5次；
4.5次洗板后拍干酶标孔（拍干后残留的气泡可用吸头戳破），按照先后顺序，所有孔先加入50ul 底物a ，然后所有孔再加入50ul 底物b ，加盖后放入37℃培养箱，进行15分钟温育；
显色反应后每个孔基本都会呈现出不同程度的蓝色，肉眼能明显的看到1‐6号孔的蓝色是由深到浅的（毒素含量越低，蓝色越深；反之亦然。
），样品孔则由于毒素含量的不同，呈现出
显色示意图
5.显色反应完成后，在每个孔中加入50ul 的终止液，蓝色变成黄色，混匀后上450nm 波长的酶标仪读取吸光度值。
(整理)黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法
黄曲霉毒素B1检测试剂盒操作方法2/50 ppb一、样品的准备/萃取1. 获取具有代表性的样品，使用Romer 系列II型研磨机研磨，使至少95%的研磨样品能够通过20目筛网，彻底混合并对样品进行二次取样。
2. 称取4g 研磨样品于干净并可密封的广口瓶中。
加入20mL 70/30（v/v）甲醇/水萃取溶液并密封广口瓶。
注意：样品与萃取溶液比例应为1：5（w:v），振荡或均质3分钟。
3. 静置样品，用滤纸过滤萃取上清液，收集待检滤液。
4. 用提供的分析缓冲液对滤液进行1：2稀释。
例如，将50μL待检滤液加入50μL分析缓冲液中，混匀准备进行随后检测。
二、检测步骤1．将适量的标记颜色的稀释孔条放入微孔板架上，稀释条孔的数目需使每个标准品（0, 2, 5, 20 & 50ppb）或样品能够对应一个稀释孔。
2．将等量的有抗体包被的微孔条放入微孔板架上，未使用的有抗体包被的微孔条需放回装有干燥剂的原铝箔袋内并密封保存。
3．按照240 μL/孔或2 mL/条的体积计算所需的酶联偶合物用量。
从绿色瓶盖的瓶中量取所需用量的酶联偶合物至一个酶联偶合物试剂槽中（如多道移液器所用的试剂槽）。
使用8道移液枪移取100μL酶联偶合物至每个稀释孔中。
4．使用单道移液枪，移取50μL标准品和样品至已装有100μL酶联偶合物的稀释孔中。
用移液枪反复吸送3次以充分混合孔中液体。
每当移取一个标准品或样品时，单道移液枪必需更换上新吸头。
注意确保最后将吸头中的液体排空。
5．使用换有全新吸头的8道移液枪，快速移取每个稀释孔中的液体各100μL至相应的有抗体包被的微孔中。
室温下放置15分钟。
注意不要摇动微孔板去混匀孔中液体，以免引起孔与孔之间的污染。
6．将孔中的液体甩入水槽中，用去离子水或蒸馏水冲洗每个孔，然后将微孔中的水甩入水槽中。
如此方式反复冲洗5次。
注意在冲洗过程中不要将微孔条从微孔板架上取下，每条微孔条带应被固定在微孔板架上。
黄曲霉毒素AFB1_说明书
6. 浓缩洗涤液 （10×） …………………………… 40ml 7. 样品稀释液（10×） ……………………………… 20ml 8. 操作说明书一份
注意：标准品含有低浓度黄曲霉毒素、终止液含 2M HCl， 需小心取用。勿在有效期外使用本试剂盒。
【需要而未提供的设备及试剂】
设备： ┅┅微孔板酶标仪 450nm/630nm ┅┅振荡器 ┅┅涡旋仪 ┅┅离心机 ┅┅天平：感量 0.01g ┅┅微量移液器：单道 20μl～200μl、200μl～1000μl 多道 250μl ┅┅滤纸
【样本前处理步骤】
（一） 谷物（大、小米，玉米等脂肪含量少的谷物）（稀 释倍数：10）
┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml50%甲醇/水溶液混合均 匀；
┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取400μl 上清液，加入600μl 样品稀释液进行稀释， 充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （二） 花生（稀释倍数：10）
1
┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 2.0ml 石油醚混合均匀； ┅┅再加入 4ml50%甲醇/水溶液混合均匀； ┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取 400μl 下层清液，加入 600μl 样品稀释液进行稀 释，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （三）食用油（稀释倍数：10） ┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml 石油醚混合均匀； ┅┅再加入 4ml50%甲醇水溶液混合，振荡 1min； ┅┅静置 10min； ┅┅取 400μl 下层清液，加入 600μl 样品稀释液进行稀 释，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （四）饲料（稀释倍数：5） ┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml50%甲醇/水溶液混合均 匀； ┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取上层清液 2.0ml，加入 2.0ml 三氯甲烷用 1.5ml 样 品稀释液进行稀释； ┅┅取 1ml 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 500ul 50%甲醇/水（1:1）溶液溶解，并加入 750ul 样品稀释液，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （五）面粉（稀释倍数：10） ┅┅取 1g 面粉样品，加入 4ml 50%甲醇/水溶液； ┅┅充分振荡 3min； ┅┅5000g 离心，10min； ┅┅取上层清液 500ul 并加入1ml 三氯甲烷，轻摇三分钟， 静置分层； ┅┅取 500ul 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 250ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入 375ul 样 品稀释液，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （六）葡萄酒（稀释倍数：5） ┅┅取 1.0ml 葡萄酒样品，加入 4.0ml 三氯甲烷； ┅┅轻摇三分钟，静置分层； ┅┅取 1ml 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 500ul50%甲醇/水溶液溶解，再加入 750ul 样品 稀释液，充分混匀；
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黄曲霉毒素B1 检测卡说明书
【简介】
黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物，最主要的4种分别为：B1、B2、G1、G2。
黄曲霉毒素具有很强的急性毒性，也有明显的慢性毒性及强致癌性。
黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品，其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品；其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻、茶叶等。
鉴于这些霉菌毒素的毒性，欧盟国家规定，黄曲霉毒素B1的残留限量值为5ppb。
【检测原理】
该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。
【检测范围】
花生、玉米、小麦、大米、茶叶、油脂、饲料等；
【产品组成】
黄曲霉毒素B1免疫胶体金快速检测卡(40份/盒)
滴管（40支）
干燥剂（40片）
一次性手套（5只）
【技术指标】
检测下限：5μg／kg；
【检测步骤】
1．取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15ml离心管中。
2．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。
3．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液（吹风机或烘箱），然后用0.3ml体积稀释液复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液. 4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
【结果判断】
1、阴性:测试线(T)与对照线(C)都出现，表明样品中黄曲霉毒素的浓度小于5ug／kg。
2、阳性:只有对照线(C),无测试线(T)，表明样品中黄曲霉毒素的浓度大于或等于5μg／kg。
3、无效:对照线(C)和测试线(T)都不出现，或者对照线（C）不出现。
【注意事项】
1、本产品在2～30℃密封干燥保存；忌冷冻；检测卡保存期18个月；
2、在环境温度15～37℃下操作；检测卡极易受潮，打开小包装后应立即使用；
3、乙酸乙酯为易挥发液体，保存为12个月，不用时要盖紧瓶塞；
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。