设计方法
设计方法有哪些
设计方法有哪些设计是一种创造性的活动，它需要一定的方法和技巧来实现。
设计方法是指在设计过程中所采用的一系列策略和手段，旨在解决问题、满足需求，并最终完成设计任务。
在设计领域中，有许多不同的方法可以被应用，每种方法都有其独特的特点和适用范围。
下面将介绍一些常见的设计方法。
首先，设计方法中的一种常见策略是原型设计。
原型设计是指通过制作一个初步的模型或样品来测试和验证设计方案的可行性和有效性。
这种方法可以帮助设计者及时发现问题和不足之处，并进行相应的改进和调整。
原型设计可以大大减少后期的修改成本，提高设计效率。
其次，用户体验设计方法也是设计领域中的重要策略之一。
用户体验设计是以用户为中心的设计理念，旨在创造出对用户友好、易于使用的产品和服务。
通过调研用户需求、行为模式和心理特点，设计者可以更好地理解用户的真实需求，从而设计出更符合用户期望的产品。
另外，敏捷设计方法也备受设计师们的青睐。
敏捷设计是一种快速迭代、持续改进的设计方法，它强调团队合作和快速反馈。
通过不断地尝试和调整，设计团队可以及时发现问题并做出相应的改进，从而更好地满足用户需求。
此外，系统化设计方法也是设计领域中的一种重要策略。
系统化设计强调整体性和系统性，它将设计任务视为一个整体系统，通过分析系统的各个部分之间的相互关系和影响，来实现设计的协调和统一。
最后，价值工程设计方法也是设计领域中的一种重要策略。
价值工程设计强调在设计过程中最大限度地提高产品或服务的性能和功能，同时最大限度地降低成本。
通过对设计方案进行全面的评估和分析，设计团队可以找到最优的设计方案，实现性能和成本的最佳平衡。
综上所述，设计方法是设计过程中的重要指导，它可以帮助设计者更好地解决问题、满足需求，并最终完成设计任务。
不同的设计方法适用于不同的设计任务和场景，设计者可以根据实际情况选择合适的设计方法来实现设计目标。
希望以上介绍的设计方法能够对您有所帮助。
常用的设计方法
常用的设计方法
一、价值发现
价值发现是设计方法在技术应用前的第一步，也是最重要的一步。
价值发现主要是要发掘用户的真实需求，从而为后续的设计和技术应用提供依据。
它可以利用深度访谈、体验活动、调研报告等方法，来了解用户的真实需求和期望，从而做出有效的解决方案。
二、功能设计
功能设计是设计方法的主体部分，是根据经过价值发现的用户需求，来设计产品的具体功能结构。
它可以利用百度脑图、知识库、原型设计等技术，来建立功能结构，并辅以文档描述，以确保功能的实现和设计的可持续性。
三、交互设计
交互设计是指在功能设计的基础上，考虑用户行为和使用习惯，来设计产品之间的用户交互方式，使之更加友好、人性化。
它主要利用原型设计、交互模型、仿真等技术，以及交互仿真、交互反馈等方法，来不断改善用户体验，以提高产品使用效率。
四、界面设计
界面设计是指在功能和交互设计完成后，根据具体的产品界面，来结合用户习惯来设计界面结构和细节。
它可以使用工具软件、图形设计、样式规范、交互动画等方法，通过不断迭代，把产品界面设计得更加美观、易用、友好。
五、性能设计
性能设计是指在功能、交互、界面设计完成后，根据产品的实际性能要求，来分析完成性能测试，以确保产品的稳定运行。
它可以利用性能基准测试、压力测试、功能测试、模拟测试等方法，来确保产品的性能和可靠性，以提供更好的用户体验。
创意设计个方法
创意设计的方法创意设计是一项创造性的任务，它要求设计师能够以独特和创新的方式解决问题。
以下是几种常见的创意设计方法，可以帮助设计师提高创造力和设计质量。
1. 倒置思维法倒置思维法是一种常用的创意设计方法，它要求设计师从与众不同的角度思考问题。
设计师可以尝试反过来看待问题，提出截然不同的解决方案。
例如，如果设计一个新的搅拌器，传统思维可能会考虑如何改善搅拌效果，而倒置思维则可能会考虑如何设计一个不需要搅拌的解决方案。
2. 联想法联想法是通过将不相关的事物联系起来来激发创造力的方法。
设计师可以从各个领域寻找灵感，将它们与正在解决的问题联系起来。
例如，如果设计一款汽车，设计师可以从自然界中寻找灵感，将鸟类的翅膀形状应用于汽车设计中，以提高空气动力学性能。
3. 六顶思考帽六顶思考帽是爱德华·德·博诺提出的一种思考方法，通过观察问题的不同方面来激发创意。
设计师可以分别戴上六顶帽子，每顶帽子代表一种不同的思考方式，如：红帽代表情感和直觉，白帽代表事实和信息，黑帽代表负面和批评，黄帽代表乐观和积极等。
通过依次切换帽子，设计师可以从不同的角度思考问题，获得全面的解决方案。
4. 思维导图思维导图是一种以图形化方式呈现思维过程的方法。
设计师可以使用一张白纸和一支笔，在纸上画出问题的核心，并以分支的方式展开与之相关的想法和解决方案。
这样可以帮助设计师整理思路，发现潜在的关联和创意点。
5. 用户故事板用户故事板是针对用户需求与体验设计的一种方法。
设计师可以以用户的角度来思考，将用户的需求、情感和体验转化为故事板上的场景和情节。
这种方法可以帮助设计师更好地理解用户需求，设计出更贴合用户的解决方案。
6. 随机刺激法随机刺激法是通过使用随机的刺激物来激发创造力。
设计师可以从不相关的领域或物品中选择一个刺激物，然后尝试将其应用到正在解决的问题中。
这种方法可以打破固有思维模式，帮助设计师发现新的思路和创意。
7. 心理学理论应用心理学理论可以为设计师提供有关用户行为和感知的洞察。
设计中的三种方法
设计中的三种方法
设计是一种创造性的过程，要不断地寻找创新的方法来解决问题。
在设计中，有很多种方法可以帮助设计师实现自己的创意，以下是其中的三种方法：
1. 用户中心设计法：用户中心设计法是一种以用户需求为中心
的设计方法。
在设计中，首先要了解用户的需求、习惯和行为，然后根据这些信息来设计产品或服务，以满足用户的需求。
这种方法强调用户体验的重要性，能够帮助设计师更好地理解用户需求，提高产品的质量和用户满意度。
2. 系统化设计法：系统化设计法是一种以系统的角度来看待问
题的设计方法。
在这种方法中，设计师需要将问题分解为多个部分，然后逐个部分进行设计，最终将它们组合成一个完整的系统。
这种方法适用于解决复杂的设计问题，可以帮助设计师更好地理解系统的结构和功能，保证系统的稳定性和可靠性。
3. 创意式设计法：创意式设计法是一种通过创意和想象力来解
决问题的设计方法。
在这种方法中，设计师需要放松思维，尝试不同的思路和方向，寻找新的灵感和思路。
这种方法适用于解决一些比较独特或创新性的设计问题，能够帮助设计师发掘更多的可能性，创造出更加优秀的设计作品。
以上三种方法各有其优劣和适用场景，设计师可以根据具体情况选择合适的方法来解决问题，从而实现更好的设计效果。
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8种设计手法
8种设计手法设计是一门综合性的艺术和技术，其目的是为了创造出具有美感和功能性的作品。
在设计中，有许多不同的手法和方法可以帮助设计师达到预期的效果。
本文将介绍8种常见的设计手法，包括对比、重复、对齐、平衡、节奏、层次、比例和色彩运用。
一、对比对比是一种常用的设计手法，通过将不同的元素放在一起，达到强调和突出的效果。
对比可以是大小、色彩、形状、纹理等方面的差异，使得设计更加有层次感和吸引力。
例如，在网页设计中，可以使用对比色实现标题与背景的鲜明对比，吸引用户注意。
二、重复重复是一种重要的设计手法，通过重复相同的元素或模式，创造出统一和连贯的效果。
重复可以是形状、颜色、线条等方面的重复，使得设计更具有一致性和视觉冲击力。
例如，在海报设计中，可以使用重复的图案或文字，使整个作品更加有序和统一。
三、对齐对齐是一种能够使设计更具有整体性和协调性的手法。
通过将元素按照一定的规律进行排列，可以使设计更加稳定和易于理解。
对齐可以是水平、垂直或斜向的，使得设计更加统一和平衡。
例如，在页面设计中，可以使用网格系统进行元素的对齐，使得页面整洁有序。
四、平衡平衡是一种能够使设计更加稳定和和谐的手法。
通过在设计中使用不同的元素和布局，可以实现平衡的效果。
平衡可以是对称或不对称的，使得设计更具有视觉上的平衡感。
例如，在室内设计中，可以通过在空间中布置家具和装饰品，使得整个空间更加平衡和舒适。
五、节奏节奏是一种能够使设计更加有动感和节奏感的手法。
通过在设计中使用重复、间隔和变化等元素，可以创造出节奏感和动态感。
节奏可以是快速或慢速的，使得设计更加生动和吸引人。
例如，在动画设计中，可以使用不同的帧数和速度，创造出不同的节奏感。
六、层次层次是一种能够使设计更加有层次感和深度的手法。
通过在设计中使用不同的元素和布局，可以创造出前景、中景和背景等不同的层次关系。
层次可以是明暗、大小或透视等方面的差异，使得设计更加丰富和立体。
例如，在插画设计中，可以使用不同的色彩和透视效果，创造出立体的效果。
一种物品十种设计方法
一种物品十种设计方法
1. 创新设计：发挥创造力和想象力，设计出独特和新颖的物品。
2. 功能设计：根据物品的用途和功能需求，设计出适合的方案。
3. 材料设计：选择合适的材料，根据其特性和特点进行设计。
4. 结构设计：设计物品的结构，使其能够承受一定的力量和压力。
5. 人体工学设计：根据人体的尺寸和人体工程学原理，设计出符合人体工学的物品。
6. 美学设计：注重物品的外观和美感，设计出具有艺术和审美价值的物品。
7. 可持续设计：考虑物品的环保和可持续性，设计出能够减少对环境的损害的物品。
8. 用户体验设计：从用户的角度出发，设计出能够提供良好用户体验的物品。
9. 制造工艺设计：考虑物品的制造工艺和工程要求，设计出易于加工和制造的物品。
10. 安全设计：考虑物品的安全性，设计出能够保障使用者安全的物品。
建筑的设计的方法
建筑的设计的方法
建筑设计的方法包括以下几个方面：
1. 论证法：设计师通过分析需求、调研场地、研究规范等方法，提出设计的理论基础和建议。
2. 线性法：按照设计的线条和形状进行思考和处理，强调建筑元素之间的连贯性和流线性。
3. 模块化法：将建筑划分为模块，通过组合、重复和变化模块来完成设计，以达到节省成本和提高施工效率的目的。
4. 质量法：将建筑品质作为设计的核心，注重材料的选择和使用，追求建筑美学和永续性。
5. 功能法：根据建筑的功能需求，以功能为导向进行设计，注重空间布局、流线和使用效能。
6. 内外合一法：将建筑内外空间的设计紧密结合，追求内外部环境的统一和协调。
7. 可持续发展设计法：注重可持续性设计原则，包括能源效率、环境保护、社
会责任等方面的考虑。
8. 社区参与法：通过与用户、社区居民的互动，获取他们的需求和意见，使设计更加符合使用者的期望。
综合利用这些方法，设计师可以从不同的角度出发，根据具体的项目需求和环境特点来进行建筑设计。
常见的设计方法
常见的设计方法
以下是 6 条关于“常见的设计方法”的内容：
1. 对比设计啊，这可是超棒的方法呢！就好比你在一个黑白色调的房间里，突然放进一个大红色的沙发，哇，那一下子就吸引眼球啦！比如那些网站排版，把重要信息用鲜艳颜色突出显示，跟周围形成强烈对比，不就能迅速抓住你的注意力了嘛！
2. 对称设计呀，是不是让你感觉很平衡呢？就像一对双胞胎站在那儿，看上去特别和谐！想想看那些建筑设计，左右对称的样子多整齐好看呀。
你家的客厅布置是不是也可以试试对称呢？
3. 极简设计厉害着呢！就像是给你的眼睛做了一场减法。
比如苹果的产品，简洁到极致，但就是超有魅力啊！没有多余的繁杂元素，一切都刚刚好，这多清爽呀，难道你不喜欢这种简洁之美吗？
4. 隐喻设计可有意思啦！它就像一个隐藏的小密码，等你去发现呢！比如一个标志设计成飞翔的鸟，那不就是在隐喻自由嘛。
很多海报设计用这种方法，让你一下子就能领会到它要表达的深层含义，酷不酷？
5. 动态设计多有活力啊！就跟那活蹦乱跳的小孩子似的。
在网页设计中那些会动的元素，是不是让页面一下子生动起来了？好像在跟你互动一样，这多吸引人呀！
6. 个性化设计简直绝了呀！每个人都是独一无二的，设计也应该这样嘛！像那些定制的首饰，专门为你量身打造，就只属于你一个人呀！这不就是在展示你的个性嘛，多赞呀！
我觉得这些设计方法都各有魅力，能让我们的生活变得更加丰富多彩呀！。
创新设计方法集锦
创新设计方法集锦创新设计是指设计师在解决问题、满足需求的过程中，采用新颖、独特的思路和方法，以达到创新的目的。
在当今竞争激烈的市场环境下，创新设计已经成为各行各业中不可或缺的一部分。
本文将介绍一些常用的创新设计方法，帮助设计师在工作中发掘潜力，实现创新。
1.头脑风暴法头脑风暴法是一种最常见的创新设计方法。
设计师与团队成员集体讨论，集思广益，共同碰撞出各种新的创意和想法。
在头脑风暴的过程中，不要拘泥于现实和限制，大胆发散思维，激发创新灵感。
2.用户体验研究法设计师应该深入了解目标用户的需求和心理，通过观察和调查，了解用户的实际使用情况和感受。
基于用户体验的研究结果，设计师可以对产品进行有针对性的改进和优化，提升用户体验。
3.反转思维法反转思维法是一种将问题从不同角度考虑的方法。
设计师可以尝试将问题转换成相反或不相关的形式，以激发创新灵感。
例如，如果设计一个安全帽，可以考虑如何让人们在没有头发的情况下戴着它，或者如何让它成为一种时尚的配饰。
4.故事化设计法故事化设计法将设计过程与故事情节相结合，为产品赋予情感和故事性。
通过讲述一个有趣的故事，设计师可以吸引用户的关注并建立情感连接。
这种情感连接有助于提升用户对产品的认知和记忆。
5.原则思考法原则思考法是一种基于设计原则的创新设计方法。
通过研究和分析已有的设计原则，设计师可以找到改进和突破的方向。
例如，设计师可以考虑如何运用简约原则来设计一个更简洁、高效的界面。
6.联想法联想法是通过将不同领域的思维和概念相互联系，创造出新的创意和解决方案。
设计师可以通过参考其他行业的设计经验和灵感，为自己的设计带来新的视角和创新点。
7.协同设计法协同设计法是指设计师与其他相关人员共同参与设计过程，借助集体智慧达到创新目标。
通过与其他专业人员的交流和合作，设计师可以汲取各个领域的经验和知识，为设计提供更全面和创新的解决方案。
8.可持续设计法可持续设计法是一种注重环保和社会效益的创新设计方法。
平面设计创意十种方法总结
平面设计创意十种方法总结1.融合与对比：通过将不同元素融合在一起或通过对比来产生创意效果。
例如，将不同类型的图像、不同风格的字体或不同色彩相互融合，创造出独特的视觉效果。
2.运用色彩：色彩是平面设计中最重要的元素之一，可以通过运用不同的色彩搭配或运用色彩的对比来创造出吸引人的设计效果。
例如，运用相似的色调或运用互补色彩来制造对比效果。
3.运用文字：文字在平面设计中除了传达信息外还可以成为重要的视觉元素。
通过调整字体的大小、颜色、排列等，可以创造出有趣的设计效果。
4.运用负空间：负空间是指设计元素之间的空白区域，通过合理运用负空间可以突出设计元素，使整体设计更加简洁明了。
5.运用纹理和图案：通过运用不同的纹理和图案，可以为设计增添层次和触感。
例如，加入纹理背景或运用不同的图案元素等。
6.运用形状：形状是平面设计中很重要的一个元素，通过运用不同形状的组合或变形，可以创造出独特的设计效果。
例如，运用几何形状、有机形状或非传统形状等。
7.运用图像处理技术：图像处理技术可以为设计增添更多的创意效果。
通过运用滤镜、调整图像的色彩、对比度、饱和度等，可以创造出有趣的视觉效果。
8.运用时尚元素：时尚元素可以为设计增添时尚感和活力。
通过运用时尚的色彩、字体、排版等，可以使设计更具吸引力。
9.运用幽默和趣味：通过运用幽默和趣味元素，可以让设计更加有趣和吸引人。
例如，使用有趣的插图、搭配幽默的文字等。
10.运用创新的设计布局：通过尝试新的设计布局，可以创造出独特的设计风格。
例如，将不同的设计元素重叠、分割或错位等。
总之，平面设计创意是一个无限的领域，需要不断地学习和尝试。
通过运用不同的创意方法，可以创造出独特的设计效果，满足不同项目的需求。
对于平面设计师而言，不断的学习和创新是提高设计水平和推动行业发展的重要途径之一。
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一、DNA合成的方法和原理目前引物合成主要采用固相亚磷酰胺三酯法进行。
基于该方法的DNA合成仪有多种，由ABI/PE公司生产的高通量DNA自动合成仪得到了广泛的应用。
各合成仪进行引物合成的原理基本相同，主要区别在于合成产率的高低、试剂消耗量和单个循环用时等。
生工公司采用的合成仪主要机型为全新的ABI3900高通量合成仪。
固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速偶联以及起始反应物比较稳定的特点。
该方法是在固相载体上完成DNA链的合成的，DNA化学合成不同于酶促的DNA合成过程从5’ →3’方向延伸，而是由3’端开始，相邻的核苷酸通过3’→ 5’磷酸二酯键连接。
具体的反应步骤如图一。
1、脱保护基 (Deblocking)用三氯乙酸 (Trichloroacetic Acid，TCA) 脱去连结在CPG (Controlled Pore Glass) 上的核苷酸的保护基团DMT (二甲氧基三苯甲基)，获得游离的5'-羟基端，以供下一步缩合反应。
2、活化 (Activation)将亚磷酰胺保护的核苷酸单体与四氮唑活化剂混合并进入合成柱，形成亚磷酰胺四唑活性中间体 (其3'-端已被活化，但5'-端仍受DMT保护)，此中间体将与GPG上的已脱保护基的核苷酸发生缩合反应。
3、连接 (Coupling)亚磷酰胺四唑活性中间体遇到CPG上已脱保护基的核苷酸时，将与其5'-羟基发生亲合反应，缩合并脱去四唑，此时合成的寡核苷酸链向前延长一个碱基。
4、封闭 (Capping)缩合反应后，为了防止连在CPG上的未参与反应的5'-羟基在随后的循环反应中被延伸，常通过乙酰化来封闭此端羟基，一般乙酰化试剂是用乙酸酐和N-甲基咪唑等混合形成的。
图1: DNA合成原理示意图（固相亚磷酰胺三酯法）5、氧化 (Oxidation)缩合反应时核苷酸单体是通过亚磷酯键与连在CPG上的寡核苷酸连接，而亚磷酯键不稳定，易被酸、碱水解，此时常用碘的四氢呋喃溶液将亚磷酰转化为磷酸三酯，得到稳定的寡核苷酸。
经过以上五个步骤后，一个脱氧核苷酸就被连到CPG的核苷酸上，同样再用三氯乙酸脱去新连上的脱氧核苷酸5'-羟基上的保护基团DMT后，重复以上的活化、连接、封闭、氧化过程即可得到DNA片段粗品。
最后对其进行切割、脱保护基，合成的Oligo在脱去保护基后，目的Oligo纯度是比较低的，其中含有大量的杂质。
主要杂质有：所脱下的保护基与氨形成的苯甲酸氨和异丁酸氨，腈磷基上脱下的腈乙基，以及合成时产生的短链等。
以至于粗产品中全长Oligo DNA含量仅为25%左右。
尽管合成时每一步的效率都在98%～99%，但累积的效率并不高。
这些杂质成分，尤其是存在于粗产品中的大量盐和短链，不但造成定量不准，还会影响下一步的反应。
因此必须对Oligo DNA进行纯化、定量等合成后处理即可得到符合实验要求的寡核苷酸片段。
二、引物纯化的方法原理及其效果基于以上合成的原理和步骤，目前，常见的几种纯化方法如C18柱、OPC或HAP、PAGE、HPLC。
生工公司采用HAP、ULTRA PAGE、HPLC三种纯化方法，其纯化的原理及其效果分别如下，我们建议客户应根据不同的实验需求，选择合适、经济并有效的纯化方法。
1. HAP纯化方法HAP（HighAffinityPurification）是生工生物自主开发的新型oligoDNA纯化方法。
该方法已取得国家专利（专利号：200310208040.X）。
其原理是利用合成引物5'-端DMT基团对HAP树脂专一性吸附，而不含DMT的短链DNA不被吸附，从而达到分离纯化的目的。
HAP纯化柱中装有对 DMT 具有亲和力的树脂，合成DNA 片段时保留 5'端最后一个碱基上的 DMT，所有合成产物吸附在柱上以后，用稀的有机溶剂洗柱，带有 DMT 的片段吸附能力强，不易被洗脱，不带有 DMT 的片段吸附能力弱，被洗脱。
然后用三氟乙酸 TFA 或三氯乙酸 TCA 脱去 DMT 基团，再用浓一点的有机溶剂洗脱 DNA。
这种方法具有多快好省的特点。
制品纯度可达到80~90%，可以满足杂交探针、测序、常规PCR（不再做进一步克隆实验）等用途了。
但是因为其专一性吸附 DMT 能力有限，不免仍然有短片段带入的可能，而且负载量小。
特别是对长于39 碱基以上的片段纯化效果不好。
此级别只提供长度在10-39mer以下的合成oligo DNA制品。
序列更长时，制品的纯度得不到保证。
若考虑节约经费，对于要求较低的实验，如简单的PCR反应，则采用HAP纯化即可。
2. ULTRA PAGE纯化方法PAGE (Polyacrylamide Gel Electrophoresis)，该方法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对DNA片段进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA的方法。
PAGE纯化基于尺寸和构象分离全长产物和失败序列，可以分离相差一个碱基的引物(120碱基以内)，从而提供高纯度的引物。
纯化后的DNA纯度大于90%，相比与其他两种方法，PAGE纯化对长链Oligo DNA (大于50 mer)的纯化特别有效，制品纯度保证90 ~ 95%。
如订购的DNA欲用作RT-PCR引物、各种探针，或用于PCR克隆测序、定点突变等，请选用PAGE纯化制品。
ULTRA PAGE：理论上分析型PAGE变性电泳，可以区分引物之间一个碱基的差别。
经过PAGE纯化的引物，特别是长引物要的量都比较高，上样量都是非常大，电泳时的条带往往比较宽，带与带之间有重叠，分辨率有所下降，电泳后割带回收目的引物时，导致割的条带有时可能比较宽，很难避免割到差别仅一个或几个碱基的引物。
因此生工生物为了给客户更好解决以上问题，将原有的PAGE纯化方式升级优化为现在的ULTRA PAGE纯化方式，即在PAGE纯化的同时配合质谱对DNA进行定性分析，以保证回收片段的正确性。
3. HPLC纯化方法HPLC (High Performance Liquid Chromatography)是使用高效液相色谱的原理，依据DNA 的疏水性来分离产物的。
合成粗产物中不同长度的 DNA 片段的疏水性不同，一般来说较长的片段具有较强的疏水性，AT含量高的片段也具有较强的疏水性。
先将粗产物检测主峰位置，再增加加样量，回收主峰位置的部分。
该方法用于分离纯化时能达到很高的纯度和灵敏度，可以有效的去除大部分N-短片段，因而可以除去失败序列或未结合的标记物，从而对DNA片段进行纯化。
同时配合质谱对DNA进行定性分析，以保证回收片段的正确性。
由于HPLC产品的纯度非常高，使用本法纯化的DNA制品可适用于各种基因工程实验。
主要用于PCR克隆、定点突变、人工合成基因、长链和修饰引物的纯化等。
它的优点是自动化程度高、省人力；弱点是纯化量通量小、成本较高。
三、纯化方法与应用指南表1: HAP、ULTRA PAGE和HPLC三种纯化方法的特点比较根据不同的实验要求，您可以选用以下适合的纯化方法，具体见表2。
表2: HAP、ULTRA PAGE和HPLC三种纯化方法的应用四、常见问题的原因分析及相应的对策Q-1. 拿到引物后，想在实验室检测纯度，如何实现？A-1:实验室可通过变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳进行引物纯度的检测：使用加有7M尿素的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，碱基数≤12个的引物用20%的胶，12-60个碱基的引物用16%的胶，＞60个碱基的引物用12%的胶。
取0.2-0.5 OD的引物，用尿素饱和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到饱和，上样前加热变性（95℃，2 min）。
加入尿素的目的一是变性，二是增加样品比重，容易加样。
600V电压进行电泳，一定时间后（约2-3小时），剥胶，用荧光TLC板在紫外灯下检测带型，在主带之下没有杂带，说明纯度是好的。
（有时由于变性不充分，主带之上可能会有条带，是引物二级结构条带）Q-2. 测序发现引物有突变或缺失是什么原因？A-2:测序发现引物区有突变，主要考虑三个方面的原因：测序，PCR/克隆过程，引物本身。
A、测序引入的错误对于PCR产物进行的克隆而言，无论是TA克隆或酶切克隆，引物区往往位于载体两端，如果用载体引物进行测序，此时克隆引物区离测序引物区的距离比较近，处于测序起始阶段或正好处于测序染料峰所在的区域内（90-120 bp），这两个区域也是最容易产生测序错误的地方。
因此，首先要看原始的测序峰图在引物区内是否清晰，碱基的错误或缺失是否是由于峰图不清楚而导致的计算机误读。
B、PCR/克隆过程尽管使用高保真聚合酶进行PCR出错的可能性比较少，但不排除PCR错配或者克隆过程中突变的可能。
有的人会问，PCR的突变怎么会出现在引物区呢？这是因为，引物是单链，PCR产物引物区的互补链同样是以引物为模板进行扩增得到的，因此，有可能存在引物正确但其产物出错的情况。
针对这种情况的解决方法是进行测序时，请送2-3个独立的克隆子进行测序，这样可以排除PCR过程出错或克隆产生突变的情况。
C、引物本身错误如前面所述，引物合成是一种多步骤的化学反应，即使每一步合成效率达到99%，仍有1%的序列不能连接或错误地连接下一个碱基，这些序列在经过Capping后脱离循环，成为缺碱基的失败序列；对于缺失突变，一般认为是一般认为是带帽(capping)反应不彻底造成的，Caping反应主要是封闭极少数5'-羟基没有参加反应单体。
被封闭的引物，在下一轮偶连时将不能继续参与合成。
对于实验中测序发现的较常见碱基缺失的可能原因如下：1. 由于DNA合成是沿着3'→5'端方向将碱基逐个连接上去的，每连上一个碱基，都需要经过 (Detritylation、Coupling、Capping、Oxidation)一个循环。
Coupling是上一个碱基的5'-OH与下一个碱基的3'活性部分发生反应，该反应的效率最高可达99%，即便如此，仍有1%的序列不能连接下一个碱基，这些序列在经过Capping后脱离循环，成为缺碱基的失败序列；2. Capping是将没有连接上下一个碱基的5'-OH乙酰化，Capping的效率不可能达到100%，没有被乙酰化的5'OH会进一步发生反应，造成中间缺碱基的失败序列；3. Detritylation是脱掉上一个碱基5'-OH上的保护基，准备连接下一个新碱基，Detritylation的效率也不可能达到100%，没有脱保护的5'-OH会跳过该循环而直接进入下一个循环，造成中间缺碱基的失败序列；至于插入突变，引物序列中往往是碱基重复，一般认为，偶连过程中，正在偶连的部分碱基发生丢失DMT，处于活性状态的新碱基在没有与上一个碱基反应前发生自连，将会造成碱基重复，故会发生插入同一碱基的突变的失败序列。