水中挥发酚-4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法方法验证报告
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法测定饮用水中的挥发酚含量.doc
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法测定饮用水中挥发酚含量1.1 范围本标准规定了用4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法测定生活饮用水及其水源水中的挥发酚。
本法适用于生活饮用水及其水源水中挥发酚。
本法最低检测质量为0.5μg 挥发酚（以苯酚计），若取250mL 水样，则最低检测质量浓度为0.002mg/L 挥发酚（以苯酚计）。
水中还原性硫化物、氧化剂、苯胺类化合物及石油等干扰酚的测定。
硫化物经酸化及加入硫酸铜在蒸馏时与挥发酚分离；余氯等氧化剂可在采样时加入硫酸亚铁或亚砷酸钠还原；苯胺类在酸性溶液中形成盐类不被蒸出；石油类可在碱性条件下用有机溶剂萃取后除去。
1.2 原理在pH10.0±0.2和有氧化剂氰化钾存在的溶液中，酚与4-氨基安替吡啉形成红色的安替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。
酚的对位取代基可阻止酚与安替吡啉的反应，但羟基（-OH ）、卤素、硫酰基（-SO 2H ）、羧基（-COOH ）、甲氧基（-OCH 3）除外。
此外，邻位硝基也阻止反应，间位硝基部分地阻止反应。
1.3 试剂1.3.1 本法所用纯水不得含酚及游离余氯。
无酚纯水的制备方法如下：于水中加入氢氧化钠至pH 为12以上，进行蒸馏。
在碱性溶液中，酚形成的酚钠不被蒸出。
1.3.2 三氯甲烷。
1.3.3 硫酸铜溶液（100g/L ）：称取10g 硫酸铜（CuSO 4·5H 2O ），溶于纯水中，并稀释至100mL 。
1.3.4 氨水-氯化铵缓冲溶液（pH9.8）：称取20g 氯化铵（NH 4Cl ）溶于100mL 氨水（ρ20=0.88g/mL ）中。
1.3.5 4-氨基安替吡啉溶液（20g/L ）：称取2.0g4-氨基安替吡啉（4-AAP ，C 11H 13ON 3）溶于纯水中，并稀释至100mL 。
储于棕色瓶中，临用时现配。
1.3.6 铁氰化钾溶液（80g/L ）：称取8.0g 铁氰化钾[K 3Fe(CN)6]，溶于纯水中，并稀释至100mL 。
生活饮用水挥发酚类方法验证报告
生活饮用水标准检验方法感官形状和物理指标挥发酚类方法验证报告（GB/T5750.4-2006）编制人：日期：审核人：日期：批准人：日期：挥发酚类方法验证报告1.目的为确保检验结果准确，统一操作方法，对GB/T5750.4-2006《生活饮用水标准检验方法感官形状和物理指标》中9.1 挥发酚类4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取法，以适应目前实验室生活饮用水中挥发酚类的检测要求。
2.检验方法的依据及原理在pHlO.O ± O.2有氧化剂铁氧化钾存在的溶液中，酚与4-氨基安替吡啉形成红色的安替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。
酚的对位取代基可阻止酚与替吡啉的反应，但羟基(-OH)、卤素、磺酰基(-SO2H)、羧基 (-COOH)、甲氧基(-OCH3)除外。
此外，邻位硝基也阻止反应，间位硝基部分地阻止反应。
3.方法适用范围本方法适用于生活饮用水及其水源水中挥发酚类的测定。
4.试剂与材料4.1 纯水。
4.2水中挥发酚类标准物质（标准物质信息编号：GBW(E)080241,批号：B22032,有效期至2023年03月9日，浓度：1000mg/L4.3 4-氨基安替吡啉溶液（20g/L）：称取2.0g4-氨基安替吡啉溶于纯水中，定容至100ml；4.4 氨水-氯化铉缓冲溶液(pH9. 8)：称取20 g氯化(NH4C1)，溶于100 mL氨水中；4.5 铁氰化钾溶液(80 g/L)：称取8.0g铁氰化钾,溶于纯水中，并稀释至100 mL；4.6 三氯甲烷；5.仪器与设备5.1紫外可见分光光度计。
（经检定设备合格可用，设备编号：出厂编编号：）5.2 50ml具塞比色管；6.验证项目6.1制作标准曲线6.1.1配制一系列的标准溶液，根据GB/T5750.4-2006《生活饮用水标准检验方法感官形状和物理指标》中9.1 挥发酚类4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取法，配置下表中标准系列浓度标液，定容至50ml；在紫外可见分光光度计上测定，得到标准曲线，回归方程为：Y=0.0380x-0.0053，相关系数 R=0.9997;6.2检出限按照GB/T5750.3-2006《生活饮用水标准检验方法 水质分析质量控制》 6.3.3.1中规定，以吸光度（扣除空白）0.010,相对应的的浓度值为检出限，其检出限为0.4ug 。
水中挥发酚测定方法证实实验报告
饮用水中挥发酚测定方法确认实验报告1.方法依据水质挥发酚的测定 4-氨基安替吡啉分光光度法 GB/T5750.4-20062.方法原理在pH10.0+0.2和有氧化剂铁氰化钾存在的溶液中，酚与4-氨基安替吡啉形成红色的安替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。
3.仪器3.1可见分光光度计3.2 实验室常规玻璃仪器4.试剂详见GB/T 5750.4—20065.分析5.1 水样处理按照GB/T 5750.4—2006对水样进行处理。
5.2 比色测定5.2.1 将水样馏出液全部转入500mL分液漏斗中，另取酚标准使用溶液0、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL，分别置于预先盛有100mL纯水的500mL分液漏斗内，最后补加纯水至250mL。
5.2.2 向各分液漏斗内加入2mL氨水-氯化铵缓冲液，混匀。
再各加1.50mL4-氨基安替吡啉溶液混匀，最后加入1.50mL铁氰化钾溶液，充分混匀，准确静置10min。
加入10.0mL三氯甲烷，振摇2min，静置分层。
在分液漏斗颈部塞入滤纸卷将三氯甲烷萃取溶液缓缓放入干燥比色管中，用分光光度计，于460nm波长，用2cm比色皿，以三氯甲烷为参比，测量吸光度。
下表为标准曲线的测定结果：6讨论6.1适用范围：本标准适用于测定生活饮用水及其水源水中的挥发酚。
6.2测定范围：本法最低检测质量为0.5μg挥发酚（以苯酚计）。
若取250mL水样，其最低检测质量浓度为0.002mg/L挥发酚（以苯酚计）。
6.3检出限的评定：根据国际纯粹应用化学联合会IUPAC规定，检出限是指能以适当的置信水平检出的最小分析信号(X L)所对应的分析物浓度,这个最小仪器响应值(X L)由下式规定： X L=X b+ KS bL式中X b是空白溶液测量值的平均值，S bL是20次以上空白溶液测量值的标准偏差，K是一个选定的常数，一般K=3。
与X L-X b（即KS bL）相应的浓度或量即为检出限D.L。
挥发酚类 方法验证方法证实报告
监督人： 监督时间：
审批人： 审批时间：
3.2 比色测定
3.2.1 将水样馏出液全部转入500mL分液漏斗中，另取酚标准使用溶液0 mL,0.50 mL, 1.00mL, 2.00 mL, 4.00 mL, 6.00 mL, 8.00mL和10.00mL, 分别置于预先盛有100mL纯水的500mL分液漏斗内，最后补加纯水至250mL。
3.2.2 向各分液漏斗内加入2mL 氨水－氯化铵缓冲液, 混匀。再各加1. 50mL4-氨基安替吡啉溶液,混匀，最后加入1.50mL铁氰化钾溶液，充分混匀，准确静置10 min。加入10.0 mL三氯甲烷，振摇2min, 静置分层。在分液漏斗颈部塞入滤纸卷将三氯甲烷萃取溶液放入干燥比色管中，用分光光度计，于460nm波长，用2cm比色皿，以三氯甲烧为参比，测量吸光度。
紫外可见分光光度计
舜宇恒平
AYXL/YQ—04
校准 190~1100
注：仪器包括采样、前处理、分析过程涉及到的所有仪器。
使用试剂及溶剂登记表
名称
厂家、规格
有效期
开瓶日期
纯化处理方法
标准溶液、质控样、内标、标准参考物质
酚标准储备溶液
北京坛墨质检科技有限公司
2022.10.21
优级
硫代硫酸钠标准溶液
天津市科密欧化学试剂
1年
注：参加验证人员需要熟悉仪器结构、原理，熟练操作仪器，能独立完成整个分析过程。
使用仪器情况登记表
仪器名称
仪器厂家、规格型号
仪器编号
性能状况
（计量/校准状态、量程、灵敏度等）
备注
前处理仪器、设备
蒸馏装置
北京科伟永兴仪器有限公司
良好
水质挥发酚方法验证报告
水质挥发酚的测定4-氨基安替比林分光光度法方法验证报告参数：水质挥发酚的测定检测标准：HJ503-2009仪器设备：智能一体化蒸馏仪自动液液萃取仪设备型号：STEHDB-106-3RWSTC-302B仪器条件：智能一体化蒸馏仪：加热功率500W；设定量250mL；时间设定120min.液液萃取仪：萃取强度10-20Hz;运行时间60s;停止时间30s；剩余次数2次实验时间：2016年10月8日一、方法验证步骤1.1试剂配制：按HJ503-2009配制。
1.2标准曲线绘制：按HJ503-2009规定的操作步骤绘制。
1.3精密度实验：用水中挥发酚标准物质（标准物质生产单位为中国计量科学研究院，标准物质批次编号为16042）配制浓度高、中、低3个梯度的水样，各平行测定六次，计算各浓度6个样品的相对标准偏差。
1.4准确度实验：用水中挥发酚标准样品（标准样品生产单位为环境保护部标准样品研究所，标准物质批号为200349）进行试验。
临用前小心打开安瓿瓶，用10mL干燥洁净移液管从安瓿瓶中准确量取10mL浓样至1000mL容量瓶中，用纯水稀释定容至刻度，混匀后立即使用。
分别取稀释后标准样品溶液25mL配制成6个平行样品，按照HJ503-2009实验步骤进行实验。
计算出标准样品浓度，并判定是否在误差允许范围内。
1.5样品测定：按HJ503-2009进行测定，具体步骤如下：1.5.1取250mL样品移入500mL全玻璃蒸馏器中，加25mL水，加数粒玻璃珠以防爆沸，再加数滴甲基橙指示液，若试样未显橙红色，则需继续补加磷酸溶液。
1.5.2连接冷凝管，开启循环水，加热蒸馏，收集馏出液250mL至容量瓶中。
1.5.3将馏出液250mL移入液液萃取仪的分液漏斗中，加2.0mL缓冲液，混匀(设置强度10-20Hz，运行时间60s，次数1次，以下混匀均如此)，pH值为10.0±0.2；加1.5mL4-氨基安替比林溶液，混匀；再加1.5mL铁氰化钾溶液，充分混匀后，密塞，放置10min。
水质挥发酚的测定(4-氨基安替比林分光光度法)
水质挥发酚的测定（4- 氨基安替比林分光光度法）酚类定义：苯及其稠环的羟基衍生物。
酚类分类：蒸馏时能与水蒸气一并挥发的酚类称为挥发酚，一般是指沸点低于230℃的酚类。
一、原理方法1 萃取分光光度法用蒸馏法使挥发性酚类化合物蒸馏出，被蒸馏出的酚类化合物，于pH （10.0 士0.2）介质中，在铁氰化钾存在下，与4-氨基安替比林（4-AAP ）反应生成橙红色的安替比林染料，用三氯甲烷萃取后，在460 nm 波长下测定吸光度。
显色反应：酚类化合物，在碱性含氧化剂条件下，与4- 氨基安替比林和，并以苯酚计，测试结果代表了样品中酚类的最低浓度本法包含了苯酚和其他酚类化合物与4-AAP 反应显色的总缩合形成安替比林染料（类似靛酚类染料）方法2 直接分光光度法用蒸馏法使挥发性酚类化合物蒸馏出，被蒸馏出的酚类化合物，于pH (10.0 士0.2) 介质中，在铁氰化钾存在下，与4-氨基安替比林 ( 4-AAP )反应生成橙红色的安替比林染料，在510 nm 波长下测定吸光度。
二、测试流程方法1 萃取分光光度法方法2 直接分光光度法1、水样保存样品应于4 ℃冷藏，24h 内测定2、水样预处理预蒸馏：根据水质标准，挥发酚测试，必须经过蒸馏；蒸馏可除去色度、浊度和重金属离子干扰。
①蒸馏过程，若蒸馏液橙红色退去，停止蒸馏，放冷，加几滴甲基橙。
若发现酸度不够，重新取样蒸馏。
②酚类化合物的挥发速度是随馏出液体积而变化，故馏出液与试样体积需相等。
③馏出液若出现白色浑浊，水样可能存在油类。
加氢氧化钠溶液，再有机萃取（四氯化碳），杂质在油层，酚保留在水层。
④水样中有挥发性酸，随水蒸气馏出，馏出液呈酸性，应用氨水调中性。
3、实验条件：①pH 影响：pH 过低，苯胺会出现显色干扰。
应用氨水控制在pH10 ±0.2。
②显色温度：温度过高易引起空白背景上升，故一般在常温下显色。
③试剂加入顺序：先加缓冲剂，再加氧化剂和显色剂。
④放置时间：水相空白随放置时间而增加，应及时测试；油相3h 内显色稳定，可放置短时间。
水质挥发酚的测定4-氨基安替吡啉分光光度法HJ503—2009方法验证报告
水质挥发酚的测定4-氨基安替吡啉分光光度法HJ503—2009方法验证报告辉哥聊质量管理我们的实验室日记 2022-07-28 09:00 发表于广东一、目的对实验室选用的HJ 503—2009水质挥发酚的测定4-氨基安替吡啉分光光度法方法进行确认，以证实实验室能够正确运用这些方法，并能证实该方法适用于预期的用途，在误差的允许范围之内，可在本实验室内运行。
二、技术指标本方法（4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法）适用于地表水、地下水和饮用水中挥发酚的测定。
本方法（4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法）检出限为0.0003mg/l，测定下限为0.001mg/l，测定上限为0.04mg/l。
被蒸馏出的酚类化合物，于PH =10.0±0.2介质中，在氧化剂铁氰化钾存在下，与4-安替吡啉形成橙红色的安替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。
本方法（4-氨基安替吡啉直接分光光度法）适用于测定工业废水和生活污水中挥发酚的测定。
本方法（4-氨基安替吡啉直接分光光度法）检出限为0.01mg/l，测定下限为0.04mg/l，测定上限为2.50mg/l。
在PH =10.0±0.2和有氧化剂铁氰化钾存在的溶液中，酚与4-安替吡啉形成红色的安替吡啉染料，直接比色定量。
三、检测设施与环境条件实验室环境条件要求：四、检测过程受控文件vis-722N型可见分光光度计作业指导书vis-722N型可见分光光度计期间核查作业指导书HJ 503—2009水质挥发酚的测定4-氨基安替吡啉分光光度法分析原始记录表HJ 503—2009，水质挥发酚的测定4-氨基安替吡啉分光光度法样品前处理原始记录表标准储备溶液配制记录表地表水采样原始记录表污水现场原始记录表五、主要测量设备、配套设备、标准物质六、检测人员七、质量控制措施八、项目验证1、标准曲线1.1 4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法在460nm波长下，用3cm比色皿进行比色，以空白校正后的吸光度为纵坐标，以其对应的挥发酚含量（μg）为横坐标，绘制标准曲线。
实验二、水中挥发酚类的测定——4-氨基安替比林分光光度法
实验二、水中挥发酚类的测定——4-氨基安替比林分光光度法GB/T 7490-87，水质挥发酚的测定蒸馏后4-氨基安替比林分光光度法1987-8-1实施1、挥发酚来源和危害（1）含义：根据酚类能否与水蒸气一起蒸出，分为挥发酚和不挥发酚。
挥发酚通常是指沸点在230℃以下的分类，通常属于一元酚。
（2）来源：酚类主要来自炼油、煤气洗涤、炼焦、造纸、合成氨、木材防腐和化工等废水。
（3）危害：分类物质属于高毒物质，人体摄入一定量时，可出现急性中毒症状；长期饮用被分类污染的水，可引起头昏、出疹、瘙痒、贫血及各种神经系统症状。
水中含低浓度（0.1～0.2mg/L）酚类时，可使得鱼肉有异味，高浓度（＞mg/L）时则造成中毒死亡。
含酚浓度高的废水不宜用于农田灌溉，否则，会使农作物枯死或减产。
水中含微量酚类，在加氯消毒时，可产生特异的氯酚臭。
2、挥发酚测定方法的选择各国普遍采用4—氨基安替比林分光光度法。
含量较高时（＞0.5mg/L），采用直接法；含量较低时（＜0.5mg/L），采用氯仿萃取法。
3、水样的采集用玻璃仪器采集水样。
水样采集后应及时检查有无氧化剂存在。
必要时加入过量的硫酸亚铁，立即加磷酸酸化至pH=4.0（甲基橙指示），并加入适量（2ml）硫酸铜（1g/L），以抑制微生物对酚类的生物氧化作用，同时应冷藏（5～10℃），在采集24小时内进行测定。
4、预蒸馏[做（1）（2），再蒸馏]水中挥发酚经蒸馏以后，可以消除颜色、浑浊度等干扰。
但当水样中含氧化剂、油、硫化物等干扰物质时，应在蒸馏前先做适当的预处理。
（1）氧化剂：当水样经酸化后滴于碘化钾-淀粉试纸上出现蓝色时，说明存在氧化剂。
可加入过量的硫酸亚铁去除。
（2）硫化物：水样中含少量硫化物时，用磷酸将水样pH调至4.0（用甲基橙指示），加入适量硫酸铜（1g/L），使之生成硫化铜去除。
当含量较高时，将磷酸酸化的水样置于通风柜内进行搅拌曝气，使之生成硫化氢逸出。
（3）油类：将水样移入分液漏斗中，静置分离出浮油后，加粒状氢氧化钠调节至pH=12.0～12.5，用四氯化碳萃取（每升样品，用40ml四氯化碳萃取2次），弃去四氯化碳层，萃取后的水样移入烧杯中，在通风柜中于水浴上加温，以除去残留的四氯化碳，用磷酸调节至pH4.0 。
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4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法方法验证报告
本文通过一系列的验证分析，利用数理统计方法，计算得到了GB/T 5750.4-2006方法挥发酚的最低检出限和定量检出限、标准曲线相关系数、精密度和加标回收率。
一、方法原理
在pH10.0±0.2和有氧化剂铁氰化钾存在的溶液中，酚与4-氨基安替吡啉形成红色的安替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。
二、仪器设备与化学试剂
1. 紫外可见分光光度计；
2. 三氯甲烷溶液；
3. 硫酸铜溶液（100g/L）；
4. 氨水-氯化铵缓冲溶液（pH9.8）；
5. 4-氨基安替吡啉溶液（20g/L）；
6. 铁氰化钾溶液（80g/L）；
7. 溴酸钾-溴化钾溶液[c（1/6KBrO
3
）=0.1mol/L]；
8. 淀粉溶液（5g/L）；
9. 硫酸溶液（1+9）；
4. 酚标准溶液[ρ（C
6H
5
OH）=1.00ug/mL]
三、简要操作步骤
1．标准曲线绘制
取上述标准物质用纯水配成0mg/L、0.002mg/L、0.004 mg/L、0.008mg/L、0.016mg/L、0.024mg/L、0.032mg/L、0.040mg/L标准系列，用三氯甲烷萃取绘制标准曲线。
2. 测定
方法检出限用空白加标0.002mg/L标准工作液测试；精密度用空白加标0.016mg/L标准工作液测试，线性范围用0mg/L、0.002mg/L、0.004 mg/L、0.008mg/L、0.016mg/L、0.024mg/L、0.032mg/L、0.040mg/L标准工作液测试；空白加标回收率分别在限量附近、限量以上2个水平测试。
四、分析方法验证程序
1．方法检出限和定量限：因标准方法给出的检出限是：0.002mg/L，故将标准给出的检出限浓度配成实际样品进样，结果见表1。
以检出限10倍为定量限配制实际样品进样结果见表1
表1 实验数据统计及方法检出限、定量限
2．标准曲线的绘制（见表2）
线性范围用0mg/L、0.002mg/L、0.004 mg/L、0.008mg/L、0.016mg/L、0.024mg/L、0.032mg/L、0.040mg/L标准工作液测试。
标准曲线相关性系数如表2所示。
表2 标准曲线相关性系数
3．方法精密度实验（见表3）
精密度用空白加标0.016mg/L（挥发酚）标准工作液测试。
数据如下表3所示
表3 精密度实验
4.准确度实验
以前项精密度实验测定数据最大值为基础，做准确度分析。
表4 准确度实验
5.空白加标回收实验（见表5）
在限量附近和限量以上两个水平做2个加标回收率实验，数据如下表5所示。
表5 加标回收率
五、评价与验证结论
1．评价
1.1 方法检出限和定量限评价
本方法挥发酚的检出限为0.002mg/L，定量限为0.020mg/L。
参考GB/T5750.6-2006《生活饮用水标准检验方法感官性状和物理指标》和GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》对检测限的要求，本方法测定的检测限符合该要求。
1.2 标准曲线评价
本方法挥发酚的标准曲线相关系数为0.9995，参考GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》对标准曲线的要求，本方法标准曲线相关系数大于0.99，符合该要求。
1.3 精密度评价
本方法挥发酚的变异系数为0.52%，参考GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》对精密度的要求，本方法的精密度小于5.3%，符合该要求。
1.4 准确度评价
本方法挥发酚的偏差为1.25%，参考GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》对准确度的要求，本方法的偏差小于15%，符合该要求。
1.5 加标回收率评价
参考GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》对回收率的要求，本方法的加标回收率均在90%-110%之间，符合该要求。
2．结论
通过对上述各项指标的验证，表明该项目可在本实验室开展。