优良菌种选育(杂交育种).
常用菌种选育原理的种植方法
常用菌种选育原理的种植方法今天给大家介绍一下常用菌种选育原理的种植方法！一、人工选种的方法：1.自然选种：该法是通过广泛异地引种、野生采集、孢子分离等途径获得菌种，将其进行驯化移栽，使其逐渐适应当地环境条件，并从中选优汰劣，选出性状优异的菌株。
在菌种生产以及试验性栽培中，反复进行比较和选择，最终确定优良的食用菌品种。
2.杂交育种：该法是通过将不同遗传性状的亲本之间进行交配，使遗传物质重新组合配对，通过双亲性状的优势互补或借助于以一个亲本的优点去克服另一亲本的缺点，产生具有其双亲优点的育种方法。
杂交育种一般有单孢杂交、多孢杂交、单双核杂交、原生质体融合等方法，一般科研、育种上多采用单孢杂交或原生质体融合，通过这些办法处理的菌种常常可表现出较强的“杂交优势”。
3.诱变育种该法是利用物理的或化学的方法处理细胞群体，促使菌种的细胞遗传物质发生性状的改变，然后从变异的菌种中选出具有优良性状的菌种的方法。
科研上常用的主要有辐射诱变育种，如紫外线照射、X射线等高能量射线，以及用一些化学药剂进行诱变育种。
4.基因工程育种该法是在基因分子水平上的遗传工程，又称基因操作、基因克隆、脱氧核糖核酸（DNA）重组技术等，基本原理就是把我们需要的目标基因通过载体DNA与原品种的DNA结合，然后人工导入一个受体细胞内，以让外来的遗传物质在其中“着生”，进行正常的复制，从而获得预先设计的新菌种。
二、菌种分离技术方法：多孢分离：该法是利用子实体弹射许多孢子在同一培养基上，让其萌发、自由交配，从而获得纯母种的方法。
该法简便易行，在食用菌选种中应用普遍。
（1）整菇孢子弹射法：该法适用于伞菌类的孢子采集。
在无菌室（箱）中，将经消毒处理的整只种菇插入无菌平皿孢子收集器里，之后使用透明玻璃钟罩将其罩住，于见光、适温下使菇自然弹射孢子。
24h后，将玻璃钟罩打开，从培养皿内获取孢子。
（2）试管插割法：在无菌箱内，迅速用无菌试管插割种菇有菌褶一侧，直至取下组织块。
237.3优良菌种的选育生物技术制药
➢ 生物诱变剂 噬菌体、转座子
菌种选育的方法——杂交育种
杂交育种一般指利用真核微生物 的有性生殖或准性生殖，或原核微生 物的接合、转化和转导等过程，促使 两个具有不同遗传性状的菌株进行遗 传物质交换和基因重组，以获得优良 性能或新的品种的生产菌株。
杂交育种是一个重要的微生物育 种手段。比起诱变育种，它具有更强 的方向性或目的性。
微生物代谢控制育种是指以生物化学和 遗传学为基础，研究代谢产物的生物合成途 径和代谢调节的机制，选择巧妙的技术路线， 通过遗传育种技术获得解除或绕过了微生物 正常代谢途径的突变株，从而人为地使用有 用产物选择性地大量合成积累。
菌种选育的方法——基因工程育种
基因工程育种技术是一种DNA 体外重组技术，是将人工方法获得的 一段外源DNA分子，用某一限制性内 切酶切割后，与载体DNA连接，然后 导入到某一受体细胞中进行复制、转 录和翻译，从而使受体细胞表达出外 源基因所编码的遗传性状的一种技术。
2.菌种选育
菌种选育是运用遗传学原理和技术
对某种具有特定生产目的的菌株进 行改造，去除不良性质，增加有益 新性状，以提高产品的产量和质量 的一种育种方法，使我们获得所需 要的高产、优质和低耗的菌种。
菌种选育的方法
菌种选育的方法
➢经验育种方法： 自然选育、诱变育种、杂交育种
➢定向育种方法： 代谢控制育种、原生质体融合、
基因重组
菌种选育的方法——自然选育
利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理， 通过分离、筛选排除衰退型菌株，从中选出维持或高
于原有生产水平菌株的过程称为自然选育。
缺点：效率低、进展慢 自然突变频率:10-6-10-10
微生物的天然进化不可能刻意去照顾人类的利益源自自然选育操作步骤： 生产菌种
优良菌珠的选育
五、诱变育种的具体方法
（一）菌悬液的制备，单核，单细胞（孢子10 6 个/mL）
1.菌悬液用生理盐水（ 物理因素处理 ）或缓冲液配
制（化学因素处理中pH不同诱变效果不同或pH
比较长） 容易改变、处理时间
2.用灭菌的玻璃珠把成团的细胞打碎 3.用灭菌的脱脂棉球进行过滤。
（二）诱变处理 根据诱变剂及诱变对象的特点选 用适当处理参数 。
第四章 优良菌株选育与提纯复壮
本章的重点是诱变育种及杂交育
种中几个值得注意的具有普遍意义的 基本问题，以及菌株提纯复壮技术。
内容提要
一、优良菌株的选育
二、优良菌株提纯复壮
第一节
优良菌株的选育
一、食用菌育种常规步骤
二、食用菌育种目标 三、食用菌选择育种 四、食用菌诱变育种
五、食用菌杂交育种
一、食用菌育种常规步骤
地控制生物的生殖，而不是随机进行，以不断累积和有
效利用自然发生的有益变异，进而保留适合人类需要的
个体，培育新品种的过程。
二、人工选择育种应注意的几个基本问题
（1）选择必须针对可遗传的变异
（2）侧重于在不同菌株之间进行选择 （3）必须广泛收集不同地域、不同生态型、
不同栽培特点的菌株
黑木耳耳片大小、厚薄和耳脉
在一定范围内，双亲间的亲缘关系、生
态类型和生理特性上差异越大的，双亲间的相
C、亚硝酸：通过强氧化作用，以氧代替腺嘌呤，
胞嘧啶C6位置上的氨基。
（3）空间诱变等因素
高空环境具有高真空、微重力和多种高能粒
子辐射等特点，具有诱变育种的多种因子。这种特
殊的物理化学环境，引起菌种DNA分子的变异和重
组，从而得到生产效价更优异的高产菌种。 我国空间诱变育种的搭载方式主要有两种，一 种是返地式卫星搭载、另一种是高空气球，高空气 球的条件一般为30～40km ，停留时间在10h 左右。
食用菌菌种选育的一般方法
食用菌菌种选育的一般方法食用菌是指人类食用的真菌。
为了满足人们对食用菌的需求，菌种选育成为推动食用菌产业发展的重要一环。
以下是食用菌菌种选育的一般方法：1.优良菌株的筛选：优良的菌株是选育高产、高品质、耐逆性强的食用菌的基础。
通过野生菌株、采集菌种或现有优良株系的筛选，选取菌株具有高产、耐逆性强、抗病能力强等特点。
2.杂交育种：杂交育种是将两个或多个具有不同特点的菌株进行人工杂交，以增加变异性和多样性。
通过对不同特征的亲本进行杂交，可以获得新的优良菌株。
例如，将高产菌株与抗病菌株进行杂交，可以获得既高产又抗病的优良品种。
3.辅助选择和基因工程：辅助选择是通过生理和生化方法，利用菌株的形态、生长特性、营养需求、代谢产物等性状进行选择。
同时，基因工程技术也可以应用于食用菌菌种选育。
通过转基因技术，可以将目标基因导入到菌株中，增加其产量、抗病性等性状。
4.连续培养和选育：通过连续培养和选育，可以选出适应培养条件和生产要求的菌株。
在不断培养的过程中，逐渐降低菌株对外界条件的依赖，提高其适应性和稳定性。
5.精细筛选和扩繁：通过对菌株进行精细筛选，选取具有理想特征的菌株，如高产、高品质、耐逆等。
同时，通过菌种的扩繁，可以使优良菌株得到大规模繁育。
6.田间试验和品种选育：选育出的菌株需要在田间进行试验，观察其在不同环境条件下的表现，如产量、品质以及抗病性等。
根据试验结果，进一步筛选和培育适应不同地区和需求的优良品种。
7.基因资源的开发和保存：基因资源的开发和保存是食用菌菌种选育的重要环节。
通过对食用菌的生态环境、野生资源及优良株系的研究，收集并保存多样的基因资源，为菌种选育提供多样性和可持续性的基础。
总之，食用菌菌种的选育是一个复杂的过程，需要通过多种方法和手段来进行。
选育出优良的食用菌菌种，既可以提高食用菌的产量和品质，也可以改善其抗病能力和适应性，促进食用菌产业的发展。
微生物工程期末复习题目及答案
名词解释1.富集培养：分为分批式富集培养和恒化式富集培养。
分批式富集培养指将富集培养物转接到新的同一种培养基中，重新建立选择性压力，如此重复转种几次后，再取此富集培养物接种到固体培养基上，以获得单菌落。
恒化式富集培养是通过改变限制性基质的浓度，来控制两类不同菌株的比生长速率2.自然选育：不经人工处理，利用微生物的自然突变进行菌种选育的过程。
3.诱变选育：用各种物理、化学因素人工诱发的基因突变4.杂交育种：将不同菌株的遗传物质进行交换、重组，使不同菌株的优良性状集中在重组体中，得到具有新性状的菌株。
5.原生质体融合技术：将遗传性状不同的两种菌(包括种间、种内及属间)融合为一个新细胞的技术6.前体：某些化合物加入到发酵培养基后，能直接被微生物在生物合成过程结合到产物分子中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物的产量却因加入而有较大的提高。
7.促进剂：那些非细胞生长所必须的营养物，又非前体，但加入后却能提高产量的添加剂。
8.抑制剂：在发酵过程中加入抑制剂会抑制某些代谢途径的进行，同时刺激另一代谢途径，以致可以改变微生物的代谢途径。
9.合成培养基：用化学成分和数量完全了解的物质配制而成，成分精确，重复性强，可减少不能控制因素。
10.天然培养基：采用化学成分不清楚或化学成分不恒定的各种动植物或微生物的浸出物、水解液等物质制成的。
11.孢子培养基：制备孢子用的培养基，营养不太丰富。
12.种子培养基：满足菌种生长用的。
营养丰富，氮源、维生素比例较高。
13.发酵培养基：满足大生产中大量菌体生长和繁殖以及代谢产物积累的营养物质。
14.发酵热：发酵过程中释放出来的净热量。
15.生物热：微生物在生长繁殖过程中，本身产生的大量热。
16.搅拌热：搅拌器的机械搅拌的动能以摩擦放热的方式使热量散发在发酵液中17.生理碱性物质：被微生物利用后，使PH上升的物质18.生理酸性物质：被微生物利用后，使PH下降的物质19.OTR：单位体积培养液中的氧传递速率[mol/(m3·s)]OTR=K L a（C*-C L）K L——以氧浓度为推动力的总传递系数（m/s）a——比表面积（m2/m3）K L a——容积传递系数（s-1）C*——与p平衡的液相氧浓度（mol/m3）C L——液相主体氧浓度（mol/m3）20.摄氧率：单位体积培养液，在单位时间内消耗的氧量21.临界氧浓度：在好氧发酵中，满足微生物呼吸的最低氧浓度。
《优良菌种的选育》课件
生理生化鉴定
通过测定菌种的生理生化指标，如糖发酵试验、 氧化酶试验、氨基酸脱羧酶试验等，对菌种进行 进一步的分类和鉴定。
分子生物学鉴定
利用基因测序、PCR扩增、DNA指纹图谱等技术 ，对菌种的基因组进行分析，从而准确鉴定菌种 的种属和分类地位。
测定菌种在不同环境压力下的存活率 、耐受性等，了解菌种的抗逆性能和 适应性。
05 优良菌种的应用与案例分析
优良菌种在工业生产中的应用
01
02
03
生物能源
利用优良菌种将有机废弃 物转化为生物燃料，如乙 醇、生物柴油等，降低对 化石燃料的依赖。
生物化工
通过优良菌种生产高附加 值的化学品、材料和生物 聚合物，如柠檬酸、聚乳 酸等。
《优良菌种的选育》 ppt课件
目录
Contents
• 优良菌种选育的重要性 • 优良菌种的选育方法 • 优良菌种的保藏与复壮 • 优良菌种的鉴定与评价 • 优良菌种的应用与案例分析
01 优良菌种选育的重要性
菌种选育对生产效率的影响
菌种选育能够提高生产效率
通过选育具有优良性状的菌种，可以缩短发酵周期，提高产物的合成速度，从 而提高生产效率。
生物冶金
利用微生物从矿石中提取 有价值的金属，如铜、钴 等，具有环保和资源可持 续性的优势。
优良菌种在农业生产中的应用
生物肥料
01
通过微生物肥料提高土壤肥力和植物生长，减少化肥使用，降
低环境污染。
生物农药
02
利用有益微生物防治植物病虫害，减少化学农药的使用，保障
食品安全。
生物饲料
黑木耳优良杂交种的选育
20192020年第dible 育摘要以黑木耳优良栽培品种黑木耳29号及紫柏山野生黑木耳ZB-19为亲本，采用单孢杂交技术选育性能优良的黑木耳菌株。
单单配对杂交获得113个杂交菌株，通过拮抗试验、抗杂菌试验和出菇试验筛选出1株抗杂菌能力强、子实体性状佳、产量高的黑木耳菌株HZ-16，小试栽培该菌株产量稳定，杂菌污染率6.0%，折干率7.25%，平均生物转化率89.05%，产量高于亲本黑木耳29号、黑木耳ZB-19（70.16%、65.30%）。
关键词黑木耳单孢杂交抗杂性文章编号1000-8357（2020）06-0024-03黑木耳（Auricularia auricula ），又称木耳、云耳、光木耳[1]。
近年来，随着“北耳南扩”“科技扶贫”战略的实施，我国黑木耳产业发展迅猛，到2017年总产量达到了638.84万t ，占世界总产量的98%以上。
食用菌产业化快速、可持续发展的基础是要有优质高产的菌种资源，尤其以自然生态环境和传统农艺方式为基础发展起来的中国黑木耳产业，优良菌种对产业发展所占的技术份额起到举足轻重的作用。
杂交育种是食用菌优良品种选育最常用，也是最有成效的方法[2]。
研究以栽培性能优良的黑木耳29号、野生黑木耳ZB-19为亲本，采用单孢杂交技术选育优良黑木耳菌株。
1材料与方法1.1供试菌株亲本选用栽培性能优良的黑木耳29号及野生黑木耳ZB-19，均为陕西省微生物研究所微生物资源中心第三研究室保藏的菌种。
黑木耳29号：黑褐色，耳片中等，无耳根、根基小，抗杂菌，产量高，干湿比中等；黑木耳ZB-19：黑褐色，耳片较小，肉稍薄，背面少筋，耐水性好，干湿比高。
采自陕西凤县紫柏山自然保护区枯立硬杂木上。
1.2试验培养基（1）综合PDA 培养基：马铃薯200g （去皮煮汁），葡萄糖20g ，蛋白胨5g ，酵母膏2g ，MgSO 4·7H 2O 0.5g ，KH 2PO 41g ，琼脂20g ，蒸馏水定容至1000mL 。
三、 优良菌种选育,四菌种保藏的原理和方法
◆ 筛选检出抗药性突变株可用梯度培养皿法
温度敏感突变型筛选
TS（Ts; ts）突变株 （temperature-sensitive mutant）
指仅在某个温度范围内显示与野生型不同表型的突变型。
高温敏感突变型：在某个温度以上显示出和野生型不同表型。 低温敏感突变型：在某个温度以下显示出与野生型不同表型。 如果发生这类突变的基因控制的特性是生长繁殖不可缺少 的，那么就会形成条件致死突变型。 温度敏感突变型（高温）是最常用的一类条件致死突变型 基因功能研究、育种
解除反馈阻遏
解除反馈抑制
通常抗反馈抑制和抗反馈阻遏突变株是通过 抗结构类似物突变的方法筛选出来的 ◆ 结构类似物与末端产物结构相似，能与阻遏蛋白或变构 酶结合，阻止产物的合成，引起反馈调节作用； 但不能代替末端产物参与生物合成 ◆ 抗结构类似物突变株即使在结构类似物存在下，仍可 合成末端产物
末端产物
许可温度(permissive temperature)
保持原来正常性状的温度
限制性温度(restrictive temperature〉 非许可温度 (non-permissive temperature)
显现突变型性状的温度
TS突变株 在许可温度下能正常生长，其表型和野生型没有区 别；在非许可温度下不能生长或微弱生长，表性与野生型不 同。
1
自然选育
• 不经人工处理．利用微生物的自然突变进行菌种选育的过程称为 自然选育（spontaneous mutation）：选育、定向培育 • 自然突变：多因素低剂量的诱变效应和互变异构效应 • 多因素低剂量的诱变效应：指在自然环境中存在着低剂量的宇宙 射线、各种短波辐射、低剂量的诱变物质和微生物自身代谢产生 的诱变物质等的作用引起的突变。 • 互变异构效应：指四种碱基第六位上的酮基或氨基的瞬间变构， 会引起碱基的错配。引起自然突变的几率为10-8-10-9 • 自然突变的结果：一种是菌种退化；一种是对生产有益的突变
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酵母菌的杂交育种
双单特性：存在单倍体和二倍体的生活史, 二倍体生活力强，生产能力高，可 通过杂交得二倍体来育种。 方法：获单倍体细胞进行杂交。 杂交方式： 孢子与孢子； 孢子与单倍体细胞； 单倍体细胞间。
《酵母菌的生活史》
《酵母菌的杂交》
杂交过程包括遗传标记菌株的选择，子囊 孢子诱导、接触、接合、接合子形成，直至 二倍体细胞出芽为止的一系列过程。
混合培养
异核体亲本分离子A Nhomakorabea异核现象
A
结合现象 染色体 连接 染色体 重组 分离
B
B
部分合子
异核系
重组体
《放线菌的杂交技术》
放线菌杂交方法: (一)平板杂交法（测定亲和性） (二)混合培养法 (三)玻璃纸法
《平板杂交法》
大量菌株（A组）与一个共同试验菌株（B）进行杂交 用来检测亲和性
A组 Ap-，phe+ B Ap+，pheA组和B的重组体
《分离子》
• 杂合二倍体经过染色体杂交和单倍化后产生的子细胞, 称为分离子。 • 亲本分离子：基因型和直接亲本一样 • 原养型分离子：同野生型，失去了亲本的营养缺陷型 标记，能在基本培养基上生长。进入筛选程序。 • 异养型分离子 :与两直接亲本的一个相同 亲本 杂合二倍体 分离子
A+BA-B+
A+BA-B+
A+B- + A-B+
A +B +
进入 筛选程序
A+B- or A-B+
名词解释
野生型 营养缺陷型 原养型 异养型 原养型分离子 异养型分离子 亲本分离子 A+B+ A+BA+B+ A+BA+B+ A+BA+BA+B+ A-B+ A-B+
A-B+ A-B+
4.3 杂交育种
1. 2. 3. 4. 细菌 放线菌 霉菌 酵母菌
优良菌种选育 杂交育种
优良菌种选育——要点
• • • • • 微生物优良生产菌种的特征 工业菌种的育种方针 自然突变选育 诱变选育 杂交育种 细菌 放线菌 霉菌 • 原生质体融合 • 基因工程技术
酵母菌
4.3 杂交育种
杂交(hybridization)
优点: • 改变亲株的遗传物质基础,扩大变异范围,使两 亲株的优良性状集中于重组体内,获得新品种。 • 丰富并促进遗传学理论的发展。
《霉菌杂交的过程》
亲本
异核体
杂合二倍体 原养型分离子
A+B-
A+B+ A-B+
A+B+
A+B+
《异核体》
同核体:同一种基因型的细胞核 异核体:是指两个基因型不同细胞核处在同一个细胞质里, 在生长过程中由对方提供所缺陷的营养因子,因而 营养得到互补。 要排除喂养现象 两个具有不同营养标记的亲本同时接种在一个培养基 上,互相间没有接触,但十分靠近,在生长过程中,双方产 生的代谢产物都为对方提供不能合成的营养物质,通过 培养基渗透扩散,得到补充,可以在基本培养基上生长繁 殖形成菌落这种现象称为喂养或互养。
(b)基本培养基衔接法 两亲本分别接种到基本培养基斜面两端， 适温培养后,衔接部分长出异核体菌丝丛。
《杂合二倍体的形成和检出》
• 杂合二倍体的形成和诱发：异核体内自发 核融合形成杂核二倍体的频率极低,一般为 10-6。常以人工诱变方法来提高频率 （紫 外照射、高温培养、樟脑熏蒸）。 • 杂合二倍体常常在异核体菌落上以角变或 斑点形态出现。
３、霉菌的杂交育种
《在固体培养基上的一些形态》
《霉菌杂交的原理和杂交技术》
• 霉菌杂交育种是利用准性生殖过程中的基因重 组和分离现象。 • 准性生殖过程：不通过有性生殖的基因重组过 程。 • 将不同菌株的优良特性集合到一个新菌株中。
• 原理和技术和放线菌相似
《霉菌杂交的过程》
异核体的形成：两不同性状细胞（菌丝）连接，导致一 细胞存在两个不同遗传型核。 杂合二倍体形成；异核体偶尔发生不同核的融合，形成 杂合核，为双倍体。 体细胞重组：杂合二倍体只具有相对稳定性，繁殖过程 发生染色体交换，单倍化，形成各种分 离子。
《选择直接亲本》
亲和力强、明显营养标记 亲和力试验可采用衔接法:将两个菌株共同接种于 基本斜面培养基中若能形成异核体菌丝丛,则表明 此两菌株具有亲和力,该组合即可用于杂交试验。
《异核体合成方法》
(a)完全培养基的混合培养法 两亲本混合接种于液体完全培养基中, 适温培养1-2d,待长出菌丝后,用生理盐水 洗涤,离心数次,把菌丝撕碎于基本培养基 平板上,培养7-8d后,长出异核体的菌丝丛, 挑取其上孢子置于基本培养基斜面保存。
1. 2. 3. 4. 将两个直接亲本菌株,分别培养至对数期 取同样量混合，过滤在滤膜上 将滤膜（菌面朝上）平放在平板培养基上 置于37℃培养,让亲本菌株间结合，染色体进 行连接、交换和重组
此法的效率比液体混合法效率高。
4.3 杂交育种
1. 2. 3. 4. 细菌 放线菌 霉菌 酵母菌
２、放线菌的杂交育种
1. 原始亲本：具有不同遗传背景的优质 出发菌株。 2. 直接亲本：具有遗传标记和亲和能力， 直接用于杂交配对的菌株。
《杂交育种的遗传标记》
1、营养缺陷型标记
其中A株为生物素、苯丙氨酸和半胱 氨酸缺陷,B株为苏氨酸、亮氨酸和 硫胺缺陷型。双亲本都不能在基本 培养基上生长,但杂交后代基因重组 后产生营养互补的原养型重组体可 在基本培养基上生长
《实验室子囊孢子的获得方法》
杂交配对的菌株必须是单倍体,所以首先要得 到单倍的子囊孢子，常用的孢子培养基为:无水醋 酸钠0.8%,氯化钾O.2%,琼脂2%,制成试管斜面。 子囊孢子获得采用蜗牛酶处理,水解子囊壁, 然后剧烈振荡,释放出子囊孢子,接着加人液体石 蜡,摇匀后孢子就聚集于液体石蜡层。
《单倍体接合能力及接合型的鉴定》
细菌
放线菌 杂交后
霉菌
酵母菌
筛选优良菌种
优良菌种选育——要点
• • • • 微生物优良生产菌种的特征 工业菌种的育种方针 自然突变选育 诱变选育 原理 基本方法 • 杂交育种 细菌 放线菌 霉菌 • 原生质体融合 • 基因工程技术
酵母菌
作业 为什么对杂交亲本标记？
有哪些遗传标记？ 原养型和野生型的区别？
本科生 Bachelor 讲 听
硕士研究生 Master 老师 ↓ 课题 ↓ 实验 ↓ 结果 ↓ 论文
博士研究生 Doctor
解决方案1 解决方案2
结果1 结果2
接合 （Conjugation）
“雄性”菌株（F+），
F+
有性菌毛
“雌性”菌株（F-），
《杂交的方法，直接混合法》
1. 分别培养直接亲本菌株, 至对 数期 2. 离心，洗涤，加新鲜培养液 3. 混合，离心，放置：让亲本菌 株间的染色体进行连接、交换 和重组 4. 稀释，涂布于平皿 5. 筛选
《杂交的方法，滤纸上混合》
４、酵母菌的杂交育种
通常有球状、卵圆状、柱状或假丝状等多种。
啤酒酵母
《酵母菌的代表属及利用价值》
（1）酵母菌属 例：啤酒酵母 利用价值： 食品加工 生产多种药剂
（2）裂殖酵母属
（3）假丝酵母属 例：热带假丝酵母 解脂假丝酵母 产朊假丝酵母
进行石油脱蜡
生产有机酸 处理污水及综合利用 监测重金属
（4）球拟酵母属
• 将获得的单倍体菌株分别与标准a型、α型 菌株混合培养, • 与标准a型菌株形成哑铃形接合子的待测菌 株为 α型。
α型
标准a型
《杂交》
• 将 a 型与 α型单倍体菌株混合接种于 YEPD 液体培养基中, 于 30 ℃摇床培养, 观察接 合子的形成情况,培养 20 h 后收集菌体, 涂 布 YEPD 平板, 挑取较大的单菌落, 鉴定菌 株的产孢能力, 能够产孢的菌株为二倍体杂 交株, 编号保存。
《微生物杂交育种基本程序》
1. 选择原始亲本 2. 诱变筛选直接亲本 3. 直接亲本之间亲和力鉴定 4. 杂交 5. 筛选重组体 6. 重组体分析 7. 鉴定。
《微生物杂交育种基本程序》
亲本的选择 亲本的标记和 亲和力测定 二倍体形成 重组及 重组体的分离
原始亲本
直接亲本
《杂交过程中亲本的选择》
基因重组过程近似细菌，育种方法与霉菌相似．
放线菌的遗传体系和杂交原理：
异核现象：同一细胞（菌丝）含不同基因型的染色体
接合现象：发生部分染色体转移（交换），形成部分合子 异核系的形成：部分合子产生的无性繁殖系。染色体融合 能在基本培养基上生长 重组体的形成：异核系不稳定。经过重组，分离，得 到重组子
《放线菌杂交过程》
接合 （Conjugation）
机制
(大肠杆菌的接合机制)
接合作用是由一种被称为 F因子的质粒介导 • F因子：是一种质粒，存在 与细胞质中，一般以游离状 态，有时又和染色体以结合 状态存在，是一种稳定的遗 传物质。为环状DNA双链结构。 上面有编码细菌产生性菌毛 及控制接合过程进行的20多 个基因。
影印
影印
完全培养基
基本培养基 + Ap
《混合培养法》
和细菌一样
A株
B株
原养型重组体，MM上生长
《玻璃纸法》
玻璃纸：有微孔可以吸收玻璃纸下的营养
A Ap-，phe+
在显微镜下收集异核系的菌丛
重组体 异核系
玻璃纸
玻璃纸
B Ap+，phe-
基本培养基 （Ap+）
基本培养基
完全培养基
4.3 杂交育种