免疫放射分析.
放射免疫分析
RIA基本试剂
2、标准抗原（标准品）
是已知含量并呈梯度浓度的系列 标准抗原，作标准曲线用。 要求： 保证与被测物具有相同的免疫活 性和相同介质。
RIA基本试剂
3、抗体
RIA使用：多克隆抗体 单克隆抗体
衡量抗体质量的指标是：
亲和力:抗体结合的强度
特异性:不受交叉反应物质影响的程度 滴度:抗体的效价——抗体实际应用时
125I的特性：
碘元素共有 29 种同位素，其中 23 种放 射性核素，125I最为常用，优点：
半衰期适中（60天），易于商品化和储存， 也利于废物处理； 只发射28keV χ线和35keV γ射线（无β）， 容易测量，辐射自分解少，标记物足够稳定； 化学性质活泼，标记容易，可得到多种标记 物而广泛应用。
待测Ag与*AgAb呈负相关函数关系
RIA操作过程
配制已知浓度系列标准抗原（Ag）---现
多由厂家提供已配置好的标准品
加待测抗原（Ag）和抗体（Ab）--温育 加标记抗原（*Ag）和抗体（Ab）--温育 分离复合物*AgAb（B）和游离*Ag（F） 用γ计数器测量放射性计数 根据标准曲线或计算机直接算出
化学发光免疫分析（CLIA）
荧光免疫分析（FIA） 时间分辨荧光免疫分析（TrFIA） 颗粒计数免疫分析（PACIA） ……
主 要 内 容
一 . 二 .
概述 放射免疫分析（RIA）
基本试剂 操作过程 质量控制 基本原理 分离技术
三．免疫放射分析（IRMA） 四. 非放射性标记免疫分析技术
的稀释倍数，滴度越高，所需的抗血清量越 少，血清的稀释倍数越高，抗血清中杂质干 扰也少。一般滴度高到1：1000以上，血清 中干扰物质影响就很小。
放射免疫分析-课件
第4讲 放射免疫分析的应用
RIA除了用于测定胰岛素、胃泌激素外，还被用于测定维 生素B12和甲状腺素等。在临床上，用放射免疫分析可检 测β2-微球蛋白和铁蛋白等。可用RIA测定的物质如下： 一、肽类激素 垂体激素：生长激素、促肾上腺皮质素、促黑激素(α-促 黑激素、β-促黑激素)、糖蛋白类(促甲状腺素、促卵泡激 素、促黄体激素)、催乳素、促脂素、加压素、催产素 绒毛膜激素：人绒毛膜促性腺激素、人绒毛膜生长促乳素 胰腺激素：胰岛素、胰高血糖素、胰多肽
B/F
0
[Ag0]
标准曲线
根据加样顺序与温育次数的不同，放 射免疫分析可分为如下三种。 平衡法：将非标记抗原、抗体、标记抗原 依次加入反应管，混匀后一次性温育至反 应达到动态平衡，再加分离剂使B与F分离。
顺序加样法：先将非标记抗原与抗体在反 应管内作第一次温育，待反应达到动态平 衡后，加入标记抗原，作第二次温育，然 后分离B与F。
(1)液相双标记IRMA技术：将两株mAb分别 标记125I和异硫氰酸荧光素(fluorescein isothicyanate，FITC)作为标记试剂，检测时 将样品和标记试剂加至试管中，温育后加 入磁性固相抗FITC，5 min后，置于磁性分 离器上，洗涤后即测量放射性。抗原和标 记抗体在液相中反应生成双抗体夹心复合 物，免疫反应达到平衡所需时间比固相试 管法更短，各项技术参数均超过目前广泛 采用的IRMA法。
为了验证这种观点，S.A. Berson和R.S. Yalow等人(1956)给非糖尿病和糖尿病 受试者静脉注射131I标记胰岛素以研究其 代谢，他们比较了接受胰岛素治疗的病 人和从未接受过胰岛素的受试者的血浆， 发现前者胰岛素的消失速度比后者慢得 多，提出外源胰岛素的注射使病人体内 产生了抗体，与抗体的结合导致胰岛素 消失速度降低。
放射免疫分析
• b. 常用的分离方法
• 1. 双抗体法
– 特点： 分离完全，非特异结 合小，环境影响小， 效价高，但分离时间 长，成本高。
• 2. 沉淀法 聚乙二醇（w=6000）
– 特点： 快速，价廉，来源方便，受环境影响大
• 3. 双抗体PEG法
– 将双抗体和沉淀法两者结合进行分离。
– 本法具有两种方法的优点，并克服了双抗体分离时间 长和沉淀法非特异性结合高的缺点。
• b. 抗血清的制备：
• 1.大分子物质可直接免疫动物诱导抗体产生，但 是小分子物质为半抗原，必须与载体结合制成人 工抗原（半抗原-蛋白质），才能进行免疫。 • 2．选择合适的免疫动物：兔、鼠、羊。 • 3．应用佐剂：福氏完全佐剂与不完全佐剂（羊毛 脂、石蜡油 +卡介苗）。 • 4．选择合适的免疫方法：剂量、接种途径（腹股 沟、腋窝、脊柱两侧皮内多点）、间隔时间（加 强）与次数。
放免分析的优点
• 灵敏度高
• 特异性强
• 精确度高
• 用血量少
• 缺点：污染；放射性核素衰变及不 稳定
第三章 放射免疫分析
放射免疫分析法 免疫放射分析法 临床应用
免疫放射分析法 （immunoradiometric assay， IRMA）
• 1968年，Miles和Hales创立了免疫放射分析法 （IRMA）。 • IRMA与IRA不同，它是将放射性核素标记在抗体 上，而不是标记在抗原上。同时所用的标记抗体 与待测抗原比较是过量的。
• CA50——胰腺癌、肝癌、结、直肠癌、卵 巢癌、子宫癌、胃癌、肺癌、食道癌。 • CA19-9——对胰腺癌和胆囊癌诊断有较高 特异性，阳性率＞80%，绝对值升高明显。 • CA125——非粘液性卵巢癌诊断特异性强。 • CYFRA21-1——肺癌的诊断和疗效观察。
免疫放射分析基本原理
免疫放射分析基本原理
免疫放射分析（Radioimmunoassay，简称RIA）是一种常用的生物化学分析方法，通过使用放射性同位素标记的抗体来测量样品中特定物质的含量。
其基本原理如下：
1. 准备试样：需要测量的物质（抗原）存在于待测样品中。
样品可以是血清、尿液、分离得到的纯化物质等。
2. 标记抗体：选择能与待测物质结合的特异性抗体，并将该抗体与放射性同位素标记结合。
常用的同位素标记有^125I和
^3H。
放射性同位素标记的抗体是利用放射性同位素的射线释放特性来进行测量的关键。
3. 反应体系：将标记抗体和待测样品中的抗原加入到一个反应管中，使抗体与抗原发生特异性结合。
这一步骤通常需要一定的时间（通常为数小时）来达到最大的结合效率。
4. 分离无结合物质：通过加入剩余的非标记抗体或其他方法，分离无结合的标记抗体和未结合的物质（无结合物质）。
这一步骤可用于增加测量的灵敏度。
5. 分离被结合的标记抗体：将反应体系分离，常见的方法是利用沉淀或吸附等技术，将被结合的标记抗体与其他成分分离开来。
6. 测量放射活性：通过放射计或闪烁计数仪等设备，测量分离得到的被结合的标记抗体的放射活性。
放射活性与待测物质的
浓度呈正相关关系。
7. 构建标准曲线：使用已知浓度的标准物质重复上述步骤，测量其放射活性，并作为标准曲线的数据点。
通过与标准曲线的比较，可以确定待测样品中物质的浓度。
总之，免疫放射分析是一种利用放射性同位素标记的抗体来测量待测样品中特定物质含量的分析方法。
通过与已知浓度的标准物质进行比较，可以准确地测量待测物质的浓度。
放射免疫分析
放射免疫分析摘要：放射免疫技术（radio immunoassay ,RIA）类型主要包括经典的放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)和免疫放射分析或免疫放射度量分析( immunoradiometric assay，IRMA)。
由于受接触放射性物质，损害操作人员的身体，测定完成后放射性材料的处置等问题的存在,再加上80年代初出现的非同位素标记技术得到了极大的发展和广泛应用，放射免疫技术的应用有下降的趋势。
0引言：放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。
目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用。
关键词：结构，原理，临床应用1检测的基本结构原理、结构及其探测原理核射线探测仪器由射线探测器和后续电子学单元两大部分组成。
核射线探测器是个能量转化器，其检测原理是当射线作用于闪烁体，闪烁体吸收了射线的能量而引起闪烁体中的原子或分子激发，当受激的原子或分子退激时，则发出光子进入光电倍增管光阴极，转换为光电子，光电子在光电倍增管电场作用下到达阳极，形成电脉冲。
转换模式是放射能→光能→电能→脉冲。
液体闪烁测量是在闪烁杯内进行的，放射性样品主要被溶剂和闪烁剂分子包围，射线能量先被溶剂分子吸收，受激溶剂分子退激时释放出能量激发闪烁剂，当激发态回到基态时释放出光子到达光阴极，光阴极产生光电子，在光电倍增管的电场作用下，在阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。
放射性活度测定方法放射免疫分析中经抗原抗体反应和B、F分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。
放射性量的检测需特殊的仪器，放射免疫分析仪实际上就是进行放射性量测定的仪器。
测量仪器有两类，即晶体闪烁计数仪（主要用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等）和液体闪烁计数仪（主要用于检测β射线，如3H、32P、14C等）。
《放射免疫分析》课件
放射免疫分析是一种广泛应用于医学与生物领域的实验技术，结合放射性同 位素和免疫反应，用于检测和定量测量生物样本中的特定分子。
简介
1 什么是“放射免疫分析”
放射免疫分析是一种使用放射性同位素标记的抗体或分子探针进行定量测量的实验技术。
2 有哪些应用场景
放射免疫分析广泛应用于临床诊断、生物学研究和药物开发等领域，特别是在肿瘤标志 物检测、激素水平测量和免疫检测方面。
3 放射免疫分析的过程
放射免疫分析包括样本 前处理、标记试剂制备、 样品配制、反应体系建 立和实验操作步骤等多 个步骤。
实验流程
1
样本前处理
对样本进行处理，使其符合放射免疫
标记试剂制备
2
分析的要求，例如去除干扰物质、浓 缩或稀释样品。
将放射性同位素与特定抗体或分子标
记在一起，以便在免疫反应中检测和
发展趋势
未来，放射免疫分析可能朝 着更高灵敏度、更低辐射和 更简化实验操作的方向发展， 也有望应用于新领域，如点of-care测试和分子影像学。
结论
结合实验结果，总结放 射免疫分析的特点和应 用，并对未来发展进行 展望。
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定量目标分子。
3
样品配制
将待测样品与标记试剂进行适当的混
合与反应，使目标分子与标记试剂发
反应体系建立
4
生特异性的结合。
为免疫反应提供适宜的环境，调整pH
值、温度和离子浓度等参数，以促进
免疫反应的进行。
5
实验操作步骤
按照合适的实验步骤和时间要求，进 行免疫反应、洗涤、分离等操作，以 获得准确的测量结果。
放射免疫分析临床应用刘冬
放射免疫分析临床应用刘冬放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种以放射性示踪剂和免疫反应结合技术来测定生物标志物的一种方法。
该技术已广泛应用于临床医学中用于检测和测量患者体内的一些特定物质含量，如激素、抗体、肿瘤标志物等。
本文将重点介绍放射免疫分析在临床应用中的一些例子。
一、激素测定激素是机体内起调控作用的重要化学物质。
通过测定患者体内激素的水平，可以评估一些疾病的发生和发展，以及患者对治疗的反应。
常见的激素测定项目包括甲状腺激素、生长激素、性激素等。
放射免疫分析可以通过测定血液或尿液中激素的浓度，来帮助医生进行确诊和治疗方案的制定。
例如，对于甲状腺功能亢进患者，可以通过测定血液中的甲状腺素水平来确定是否需要进行手术或药物治疗。
二、肿瘤标志物测定肿瘤标志物是一种可以在肿瘤患者体内检测到的特殊物质。
通过测定血液中的肿瘤标志物的水平，可以帮助医生进行肿瘤的筛查、诊断和监测治疗效果。
放射免疫分析可以对常见的肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）、前列腺特异性抗原（PSA）等进行快速、准确的检测。
例如，在临床上，对于可能患有肺癌的患者，测定血液中的CEA水平可以帮助医生进行早期诊断和有效治疗。
三、感染性疾病诊断感染性疾病的早期诊断对于患者的治疗和康复至关重要。
通过测定患者体液中的抗体水平，可以判断患者是否被特定的病原体感染。
放射免疫分析可以用来检测和诊断一些常见的感染性疾病，如乙肝、艾滋病等。
例如，对于可能患有乙型肝炎的患者，可以通过测定血液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）和乙肝病毒表面抗体（HBsAb）来判断患者的感染状态和治疗效果。
综上所述，放射免疫分析技术在医学临床应用中发挥着重要的作用。
通过对患者体内特定物质含量的测定，可以帮助医生进行疾病的早期诊断、有效治疗和预后评估。
随着医学技术的不断发展，放射免疫分析技术在临床应用中的前景将会更加广阔。
放射免疫分析名词解释
放射免疫分析名词解释放射免疫分析（Radioimmunoassay，RIA）是一种用于检测和定量分析生物样品中特定抗原或抗体浓度的方法。
它是将放射性同位素标记于抗原或抗体上，在放射性同位素发出的放射线与样品中的抗原或抗体发生特异性结合后进行测定，从而得出相应物质的浓度。
放射免疫分析的基本原理是免疫反应，即抗原与抗体之间的特异性结合。
在RIA中，通常选择具有放射性的同位素标记物作为追踪试剂。
标记物可以是同位素标记的抗原或抗体，其中最常用的是放射性同位素碘-125（^125I）或碘-131（^131I）。
这些放射性同位素会发出特定能量的射线，可以通过辐射探测器测量。
RIA的步骤包括样品预处理、标记物制备、抗体反应和分离、洗涤、放射测定等。
首先，需要将待测物标记为放射性同位素，常见的方法是用碘-125标记。
然后，将标记物与样品中的抗原或抗体进行相互反应，形成抗原-抗体复合物。
接着，通过分离和洗涤步骤，去除未结合的放射性同位素。
最后，使用辐射探测器测量放射性同位素发出的射线，由此可以得到样品中特定抗原或抗体的浓度。
放射免疫分析的优势在于其高灵敏度和高特异性，可以检测到极低浓度的物质。
它广泛应用于医学、生物学、生物化学等领域，用于检测和量化各种生物分子，如荷尔蒙、抗体、蛋白质、癌标志物等。
RIA还可以用于研究免疫反应、疾病诊断、药物筛选和治疗监测等方面。
然而，放射免疫分析也存在一些问题。
首先，使用放射性同位素会造成辐射危害，对实验操作人员和环境有一定风险。
其次，放射性同位素的半衰期较短，需要定期更换，增加了实验的复杂性和成本。
此外，由于放射性同位素的使用受到严格的监管和限制，一些实验室可能无法获得所需的放射性同位素。
总体而言，放射免疫分析是一种广泛应用的生物分析技术，具有高灵敏度和高特异性。
随着科技的进步，更多无放射同位素的免疫分析方法被开发出来，如酶免疫分析、荧光免疫分析等，逐渐取代了放射免疫分析的应用。
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(一) (二) (三)
8
5
四、掌握影响免疫放射分析方法的主要因素 (一) (二)结合在固相抗体上的抗原稳定性。 (三) (四) (五) (六)血清、电解质和其它质的非特异性效应
6
第三节 免疫放射分析的特点及其数据处理
一、 (一)IRMA是用标记抗体作为示踪剂。 (二) (三) (四) (五) (六)
7
二、了解免疫放射分析的数据处理的三种
3
三、 剂量效应曲线形态直接受标记抗体浓度 和亲和力的影响。 (一)抗体浓度对剂量效应曲线的影响。 ( 二 ) 抗体亲和力对剂量效应曲线、掌握双位点免疫放射分析方法及特点。 其中重点掌握双抗体夹心法，了解标记 第三抗体法。 二、 三、双位点免疫放射分析操作流程可分为 正向两步法和反向两步法。
第五章 免疫放射分析
第五章 免疫放射分析
目的与要求：掌握免疫放射分析(IRMA)原 理以及与RIA的区别及方法学。 内容：免疫放射分析 (IRMA) 是利用 125 I 标 记抗体与相应待测抗原进行非竞争性名 结合反应，以达到定量分析的目的。
2
第一节 一、 IRMA 是一种非竞争性的放射免疫分析法， 其原理属于非竞争性免疫结合反应。 (一)单位点IRMA原理及其反应式。 (二)双位点IRMA原理及其反应式。 (三)掌握RIA与IRMA的区别。