平板划线法与稀释涂布平板法的区别
高中生物选修一-第一章无菌操作技术实践-第1章 第2节
第二节分离特定的微生物并测定其数量1．认识各种微生物形成的菌落特征。
2．学会利用涂布平板法分离、培养微生物，并测定其数量。
(重难点)3．掌握利用选择培养基分离特定微生物的方法。
(重点)1．分离原理在实验室中利用选择培养基可以筛选和分离出某种微生物，然后在高度稀释的条件下，在固体培养基上培养该微生物形成的单个菌落，即为纯培养物。
2．分离方法(1)平板分离法：包括涂布平板法和混合平板法。
能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成单个菌落。
(2)选择培养分离：科学家针对某种微生物的特性，设计一个特定的环境，使之特别适合这种微生物的生长，而抑制其他微生物的生长。
这种通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术，称为选择培养分离。
(3)根据菌落特征初步分离：①菌落的含义：是指单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。
②菌落特征：不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般都具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等，这些可以成为对微生物进行分类、鉴定的重要依据。
[合作探讨]探讨1：在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌吗？提示：标准的单个菌落中只含有一种细菌。
探讨2：如果要分离厌氧菌，应在什么条件下培养？提示：在无氧条件下培养。
探讨3：在选择培养分离微生物的过程中，“选择培养”的培养基按物理性质划分属于什么培养基？为什么？提示：固体培养基。
便于选择、分离所需要的微生物。
[思维升华]1．涂布平板法与混合平板法的比较(1)原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。
(2)方法：①在培养基中加入某种化学物质。
例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。
②改变培养基中的营养成分。
例如，缺乏氮源时可以分离固氮微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物；用含无机碳源的培养基分离自养型微生物。
第1章 发酵工程(考点串讲课件)高二生物单元复习(人教版2019选择性必修3)
发酵温度为18-30 ,酿酒酵母最适生长温度约为28
最适生长温度为30-35℃
重点难点
制作流程
清洗、消毒装置
清洗原材料
榨汁、装瓶
酒精发酵
果酒
果醋发酵
果醋
将发酵瓶、榨汁机等器具用洗洁精洗干净，并用体积分数为70%的酒精消毒，晾干备用
取新鲜葡萄，用清水冲洗1-2次，再去除枝梗和腐烂的籽粒，沥干
榨汁，将葡萄汁装入发酵瓶中，留约1/3的空间，盖好瓶盖
①将温度控制在18-30℃②每隔12h左右将瓶盖拧松一次，此后再拧紧瓶盖③发酵时间为10-12d④从发酵瓶口取样，随时对发酵情况进行检测
a.葡萄酒制作完成后，打开瓶盖，盖上一层纱布b.发酵温度为30-35℃c.发酵时间为7-8d
三、果酒和果醋的制作
（2）在灼烧接种环之后,要等其冷却再进行划线,以免温度过高杀死菌种
（3）除第一次划线外,每次划线都从上一次划线的末端开始,这样能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最后一次划线不能和第一次划的线相接触
（4）划线时用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破
1.平板冷凝后,要将平板倒置,原因是防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；避免培养基水分过快挥发
知识梳理
一、发酵与传统发酵技术4.实例
知识梳理
项目
菌种
生物类群
代谢类型
菌种来源
腐乳制作
主要为毛霉
真核生物
异养需氧型
主要是空气中的毛霉孢子
泡菜制作
乳酸菌
原核生物
异养厌氧型
主要是附着在蔬菜
主要是附着在葡萄皮上的酵母菌
果醋制作
醋酸菌
原核生物
高中生物选修三：稀释涂布法与平板划线法的区别
高中生物选修三：稀释涂布法与平板划线法的区别
一、平板划线分离法
先倒制无菌琼脂培养基平板，待充分冷却凝固后，在无菌条件下，用接种环沾取少量待分离的含菌样品，在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。
划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。
通过这样在平板上进行划线稀释，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。
经培养后，可在平板表面形成分散的单个菌落。
但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的，需再重复划线1-2次，并结合显微镜检测个体形态特征，才可获得真正的纯培养物。
●用途：一般多用于从菌株的纯化
●优点：简便快速，可以观察菌落特征
●缺点：不能用于计数
二、稀释涂布平板法
该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基，先倒入无菌培养皿中, 制成无菌平板。
待充分冷却凝固后，将一定量(约0.1 ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用三角形无菌玻璃涂棒涂布，使菌液均匀分散在整个平板表面，倒置温箱培养后挑取单个菌落。
●用途：一般多用于筛选菌株
●优点：可以计数，可以观察菌落特征。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
●缺点：操作相对麻烦。
人教版高中生物选修一提分教程 专题2 微生物的培养与应用 课题1 第2课时 含答案
第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。
(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
[答案] A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
目的菌的分离 2
目的菌的分离
1.目的菌又叫目标菌，菌种
2.菌种分离的办法有稀释涂布平板法，平板划线法
3.原理：是让聚集在一起的细胞分散开来形成，由一个细胞形成的单菌落。
4.平板划线法只能用于菌种的分离，或是接种
5.稀释涂布平板法可以用菌种的分离，接种，计数
6.平板划线法的工具主要是酒精灯接种环
7.稀释涂布平板法，实际上是两步，第一部是稀释，第二部是涂布
8.稀释必须使用无菌水，而不是蒸馏水
9.涂布用到的工具是涂布棒
10.分离接种的全过程必须使用无菌技术
11.在平板划线时，每次都要将接种环灼烧灭菌，并且都要冷却
平板培养基制备流程
1.流程：计算称量溶化调PH 灭菌倒平板
2.平板培养基保存，微生物培养的过程中必须倒置
倒置的目的是减少水分蒸发，防止污染
3.微生物的培养需要恒温培养箱
4.菌种的保藏
临时保藏：固体斜面保藏（4℃）
长期保藏：甘油管藏（-20℃）
尿素分解菌的分离
1.选择培养基(p22)，
特殊，是由尿素作唯一氮源，
2.原理能够产生脲酶的细菌，能够在该选择培养基上生长繁殖
3.设计其他培养基证明该选择培养基具有选择作用
方法一牛肉膏蛋白胨培养基
方法二将尿素替换成硝酸铵。
细菌筛选实验报告
一、实验目的1. 熟悉细菌分离纯化的原理和方法。
2. 掌握平板划线法和稀释涂布平板法两种分离纯化细菌的方法。
3. 学会观察和识别不同类型的细菌菌落。
4. 提高无菌操作技能。
二、实验原理细菌分离纯化是微生物学实验中的重要技术，其目的是从混杂的微生物群体中分离出单个或少数几个纯培养的细菌。
常用的分离纯化方法有平板划线法和稀释涂布平板法。
平板划线法：将混合菌液涂布在琼脂平板上，用接种环划线，使菌液在平板上逐渐稀释，最终在划线末端获得单个菌落。
稀释涂布平板法：将混合菌液进行系列稀释，然后将不同稀释度的菌液涂布在琼脂平板上，经过培养，观察和计数菌落，计算出原菌液的含菌量。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美蓝培养基、麦康凯培养基等。
3. 实验器材：无菌操作台、接种环、涂布器、酒精灯、镊子、试管、试管架、显微镜等。
四、实验方法1. 平板划线法（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。
（2）用接种环在平板上划线，从一端开始，划到另一端，每次划线前用火焰灼烧接种环。
（3）重复划线，使菌液在平板上逐渐稀释。
（4）将平板倒置，放入恒温培养箱培养。
（5）观察菌落生长情况，记录菌落特征。
2. 稀释涂布平板法（1）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上。
（2）将菌液进行系列稀释，如1:10、1:100、1:1000等。
（3）用涂布器将不同稀释度的菌液涂布在平板上。
（4）将平板倒置，放入恒温培养箱培养。
（5）观察菌落生长情况，记录菌落特征和菌落数。
五、实验结果与分析1. 平板划线法（1）金黄色葡萄球菌在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上生长出的菌落呈金黄色，表面光滑，边缘整齐。
（2）大肠杆菌在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上生长出的菌落呈红色，表面光滑，边缘整齐。
（3）枯草芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上生长出的菌落呈白色，表面粗糙，边缘不整齐。
微生物菌种操作方法汇总
常用的几种微生物接种方法接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。
接种环与接种针为用白金丝或合金丝所制，亦可用电炉丝代替，因它能耐高热且散热快，便于接种前后通过火焰灭菌（整个接种环烧红即达到灭菌目的）。
在使用接种环时一般用右手持笔式较为方便，左手可持培养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环→稍冷→沾取细菌样品→进行接种（包括：启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环灭菌等五个程序。
不同培养基，接种方法也不同，分述如下：一、平板划线接种法（分离培养法）是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。
平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。
（一）分段划线法平板分段划线(左)及培养后菌落分布图本法多用于含菌量较多的标本。
方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45度角），然后将接种环置火焰上灭菌，俟冷（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。
这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得单个菌落，划线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37℃温箱中培养。
（二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。
方法是先将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。
二、斜面接种法此法主要用于移种纯菌，使其增殖后用于鉴定或保存菌种。
通常是从平板培养物上挑取某一单独菌落或者从一支已长好的斜面菌种，移种至斜面培养基上，接种步骤如下（以从已长好的斜面菌种转接为例）：（一）左手拿两支试管，一支为经灭菌的斜面，另一支为已长好的菌种。
纯培养方法
纯培养方法1、稀释倒平板特点：菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。
但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。
2、涂布平板法特点：操作相对简单，是较常使用的常规方法。
但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。
3、平板划线法特点：操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。
应用：这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。
并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。
和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这3种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。
4、稀释摇管法特点：稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。
应用：在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。
哪些方法可获得微生物的纯培养微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。
根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同，并联系生产和实验上的具体要求，可有不同的培养方法。
可分好气培养法和厌气培养法两类。
中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法，常用：①摇床培养法，即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后，放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡，使空气不断进入培养液中，促其良好生长②浅盘培养法，又称表面培养法，在盘内放一浅层培养基，使微生物能够充分接触空气，而有利于生长繁殖，但此法所需空间大，并且容易污染杂菌③深层培养法，适用于好气微生物的大规模发酵培养，在大容积的液体培养基中，通入无菌空气，并不断搅拌，可使微生物充分接触空气，迅速繁殖并积累代谢产物。
二是厌气微生物培养法，实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧，也有用静止状态的深层培养法。
在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。
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平板划线法与稀释涂布平板法的区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
用途：一般多用于从菌种的纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
用途：一般多用于筛选菌株。
一般用于平板培养基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
如果菌液密度大的话，长不出单菌落。