稀释涂布平板法原理
高中生物选修三：稀释涂布法与平板划线法的区别
高中生物选修三：稀释涂布法与平板划线法的区别
一、平板划线分离法
先倒制无菌琼脂培养基平板，待充分冷却凝固后，在无菌条件下，用接种环沾取少量待分离的含菌样品，在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。
划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。
通过这样在平板上进行划线稀释，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。
经培养后，可在平板表面形成分散的单个菌落。
但单个菌落并不一定是由单个细胞形成的，需再重复划线1-2次，并结合显微镜检测个体形态特征，才可获得真正的纯培养物。
●用途：一般多用于从菌株的纯化
●优点：简便快速，可以观察菌落特征
●缺点：不能用于计数
二、稀释涂布平板法
该法是将已熔化并冷却至约50℃(减少冷凝水)的琼脂培养基，先倒入无菌培养皿中, 制成无菌平板。
待充分冷却凝固后，将一定量(约0.1 ml)的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用三角形无菌玻璃涂棒涂布，使菌液均匀分散在整个平板表面，倒置温箱培养后挑取单个菌落。
●用途：一般多用于筛选菌株
●优点：可以计数，可以观察菌落特征。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。
●缺点：操作相对麻烦。
稀释涂布平板法要点
稀释涂布平板法要点一、引言在微生物学研究中，稀释涂布平板法是一种常用的实验技术，用于分离、纯化和计数微生物。
该方法通过将微生物悬液进行一系列稀释，然后将稀释液均匀涂布在固体培养基表面，使微生物在培养基上形成单个菌落，从而实现微生物的分离和纯化。
本文将详细介绍稀释涂布平板法的要点，包括实验原理、操作步骤、注意事项以及结果分析等方面。
二、实验原理稀释涂布平板法的实验原理主要基于微生物的繁殖和生长特性。
当微生物悬液被稀释到一定程度时，每个微生物之间的距离增加，使得它们在固体培养基上生长时能够形成单个菌落。
通过选择合适的稀释倍数，可以控制微生物在培养基上的分布密度，从而实现微生物的分离和纯化。
此外，通过对不同稀释倍数的平板进行计数，还可以估算出原始微生物悬液中的微生物数量。
三、操作步骤1. 准备培养基：选择适当的固体培养基，如营养琼脂、胰蛋白胨大豆琼脂等，按照说明书或实验要求配制并灭菌。
待培养基冷却至适宜温度后，倒入无菌平板中，使培养基在平板底部均匀铺展。
2. 稀释微生物悬液：取一定量的微生物悬液，用无菌生理盐水或其他适当的稀释液进行逐步稀释。
通常需要进行10倍系列稀释，以获得不同浓度的微生物悬液。
稀释过程中要确保无菌操作，避免微生物污染。
3. 涂布平板：取适量稀释后的微生物悬液，用无菌玻璃刮刀或涂布器均匀涂布在固体培养基表面。
涂布时要保持手法的稳定性和一致性，以确保微生物在培养基上分布均匀。
涂布后可将平板静置片刻，使微生物在培养基上充分吸附。
4. 培养微生物：将涂布好的平板倒置放入恒温培养箱中，设置适当的温度和湿度条件进行培养。
培养时间根据微生物的种类和生长特性而定，一般需要24~48小时。
培养期间要定期观察微生物的生长情况，记录菌落的数量和形态等信息。
四、注意事项1. 无菌操作：稀释涂布平板法要求严格的无菌操作环境，以避免微生物污染对实验结果的影响。
实验过程中要使用无菌器具和培养基，并在无菌工作台或超净工作台上进行操作。
微生物学 实验7 土壤中细菌的分离纯化及计数
3.78 ×104 2.71 ×104
5.13 ×105 2.70 ×102 采用科学计数 法；取两位小 数
６
无法计数
305
12
－
3.05 ×104
“无法计数”——指因稀释倍数掌握不好或其它原因造成不能计数， “0”——指平板上无微生物菌落生长。
五、作业
1、将每一个稀释度的三个平板上的菌落数填入下表，并计算结果
4、若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应 按稀释度(倍数)最高的平均菌落数乘以稀释倍数 （见下表，例4）。
5、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按 稀释度(倍数)最低的平均菌落数乘以稀释倍数 （见下表，例5）。 6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之 间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数 （见下表，例6）。
菌落计数原则（六条）
1、先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个 平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应 以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌 落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其 余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的 菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该 稀释度的平均菌落数。
三、实验材料
1、牛肉膏蛋白胨培养基、土壤样品、无菌 水 2、培养皿、玻璃试管、胶头滴管、涂布棒
四、实验步骤
1、细菌的分离纯化——稀释涂布平板法
（1）试管和培养皿编号 在试管壁上依次标上10-2、 10-3、10-4、 10-5、10-6。在培养皿养皿的底部依次标上10-4-1、 10-4-2 、 10-5-1 10-5-2 、10-6-1、 10-6-2。 （2）倒平板 将牛肉膏蛋白胨固体培养基融化（微波炉加热3min5min），待培养基冷却至不烫手时（约50℃），无菌倒入已编号的 培养皿中，室温凝固，备用。 （3）土壤稀释液制备。称取10g土壤至盛有90mL无菌水的三角瓶 中，震荡15-20min，静置约20～30秒，即成10-1的土壤悬液。用胶 头滴管移取1 mL菌悬液至标有10-2的离心管中，震荡混匀，制成102的菌悬液；从10-2管中取1 mL菌悬液至标有10-3的离心管中，震荡 混匀，制成10-3的菌悬液；同法依次制备10-4、10-5、10-6的菌悬液。
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
用途：一般多用于从菌种的纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。
经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。
此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，
故又称活菌计数。
一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。
用途：一般多用于筛选菌株。
一般用于平板培养基的回收率计数。
优点：可以计数，可以观察菌落特征。
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延。
如果菌液密度大的话，长不出单菌落。
平板划线法与稀释涂布平板法的区别
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平板划线法与稀释涂布平板法地区别
一、平板划线分离法
由接种环以菌操作沾取少许待分离地材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式地连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数地增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜地话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落.
用途：一般多用于从菌种地纯化；
优点：可以观察菌落特征，对混合菌进行分离；
缺点：不能计数；
二、稀释涂布平板法：
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成地单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计地计数方法，即一个菌落代表一个单细胞.计数时，首先将待测样品制成均匀地系列稀释液，尽量使样品中地微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量地稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中地培养基内.经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中地含菌数.此法所计算地菌数是培养基上长出来地菌落数，故又称活菌计数.一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源地污染程度地检验.
用途：一般多用于筛选菌株.一般用于平板培养基地回收率计数.
优点：可以计数，可以观察菌落特征.
缺点：吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延.如果菌液密度大地话，长不出单菌落.
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平板稀释法&血球计数板
四、操作步骤
1．编号：
取无菌平皿 9套,分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6各3套。另取6支盛有4．5ml无菌水的试管,排列于试管架上,依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释
用1ml无菌吸管精确地吸取0．5ml大肠杆菌悬液放入10-1的试管中,注意吸管尖端不要碰到液面,以免吹出时,管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸吹三次,吸时伸入管底,吹时离开水面,使其混合均匀。另取一支吸管自10-1试管吸0．5ml放入10-2试管中,吸吹三次,……其余依次类推。整个稀释过程如图Ⅷ-3。
3．取样
用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液0．2ml,对号放入编好号的无菌培养皿中。
4．倒平板
于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中,倒入溶化后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基约10—15ml,置水平位置,迅速旋动混匀,待凝固后,倒置于37℃温室中培养。
5．计数
培养24小时后,取出培养皿,算出同一稀释度三个平皿上的菌落平均数,并按下列公式进行计算：
每毫升中总活菌数=同一稀释度三次重复的菌落平均数×稀释倍数×5
一般选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释度计算每毫升的菌数最为合适。同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊。由10-4、10-5、10-6三个稀释度计算出的每毫升菌液中总活菌数也不能相差悬殊,如相差较大,表示试验不精确。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。此法常用于某些成品检定(如杀虫菌剂),生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。但平板菌落计数法的手续较繁,而且测定值常受各种因素的影响。
三、器材
大肠杆菌悬液,牛肉膏蛋白胨培养基, 1ml无菌吸管,无菌平皿,盛有4． 5 ml无菌水的试管,试管架和记号笔等。
微生物分离原理
微生物分离原理
微生物分离是一种常用的实验方法，用于分离和培养单一的微生物菌株。
其原理主要包括以下几个方面。
1. 稀释法：通过将微生物污染物或样品进行一系列的稀释，依靠概率的随机分布，使微生物个体分散在培养基上。
然后，通过无菌的针筒或平板涂布法将其分散均匀后进行培养。
2. 针对性分离法：针对自然样品中特定的微生物，根据其特性选择特定的培养基，包括特异的生理反应、生长因子等，并结合不同的温度、pH等环境条件，使目标微生物菌株生长而其他的微生物不能生长。
3. 选择培养基法：针对特定微生物的特异性要求，设计配制一种特定的培养基，只有特定的微生物能够在该培养基上生长而其他的微生物不能生长。
4. 纯化分离法：通过连续传代培养，将混合培养物中的微生物不断分离纯化，直至获得单一的纯培养物。
5. 涂布法：通过将微生物样品均匀涂布在培养基表面，利用微生物的生长特点形成独立的菌落，从而分离出单一的微生物。
6. 降温法：依靠微生物的生长特性和温度敏感性，通过一定的温度处理，使目标微生物因为生长受到抑制而其他微生物得到排除。
通过以上不同的分离方法，可以有效地从混合的微生物中获取纯净的单一微生物菌株，为后续的实验研究提供可靠的基础。
稀释涂布平板法分离纯化的原理
稀释涂布平板法是微生物分离纯化的常用方法，其基本原理包括两个方面：
1. 选择适合微生物生长的条件：选择适合待分离微生物的生长条件，如营养、酸碱度、湿度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
2. 形成单个菌落：微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。
因此，可以通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获取单个菌落的方法可以通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。
操作步骤主要包括：将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释，然后分别取不同稀释液少量，与已溶化并冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保培养一定时间即可出现菌落。
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稀释涂布平板法原理
稀释涂布平板法原理
稀释涂布平板法是微反应器中常用的一种方法,它利用涂布过程产生的熱效应来提高反应性能。
简单来说,原理是将反应物从液体变为固体形式,并将反应物涂布在一个温控平板上。
反应物按一定的浓度和体积布满在整个温控平板的表面上。
当平板的温度发生变化时,表面积会稍稍变大,从而熔融部分反应物,使反应物开始勃发反应,然后加热提高温度,从而转化为金属温度,使进一步熔融反应物,最终实现完全熔融。
由此可见,稀释涂布平板法可以有效地提高反应的连续化工程化能力。
稀释涂布平板法有以下几点优点：(1)该方法燃料经济;(2)可以提高反应连续化工程化能力;(3)可以实现产品的高精度控制。
另外,稀释涂布平板法是一种非常准确可控的热敏反应技术,可以相应时间很短,且变化范围广,温度处理范围0~1200度左右,精确控制温度涨落不超过10度。
总的来说，稀释涂布平板法是一种简单有效的方法,它能有效提高反应的连续化工程化能力,很好的满足了微反应器当今发展的需求。