植物组织培养消毒方法
植物组织培养操作流程
初代培养步骤（以百合为例）
前期准备：
1、冲洗：先将百合球根掰成鳞片，之后将鳞片表面清洗干净，并筛选可用鳞片（无斑点，无霉，无腐烂）。
将清洗好的鳞片装入网袋中置于自来水下冲洗2-3小时（网袋可放于大烧杯中）。
之后根据实验操作人数分瓶，放于烧杯中（500ml烧杯）。
2、实验药剂：75%酒精，0.1%升汞，蒸馏水（4个培养瓶以上），用量均以鳞片数量为准（使液面漫过鳞片），以及若干培养基和烧杯。
3、消毒：将实验材料和药剂放入操作室中的操作台上，之后将操作台电源开启，打开高温灭菌器，并将紫外灭菌灯打开，关闭操作台的玻璃窗。
之后将储藏室玻璃门关闭，退出操作室，打开操作室紫外灭菌灯。
紫外灯光15分钟后，进入操作室将操作台通风设备开启，再打开玻璃窗（微微抬起15-20cm），通风10分钟。
实验操作：
通风结束后，开始操作。
首先将盛放鳞片的烧杯口内壁四周喷一些酒精，之后再向其倒入75%酒精（漫过鳞片），摇晃30s，再用蒸馏水洗1-2次。
废液倒入事先准备好的大烧杯（1000ml）中。
之后再倒入0.1%升汞（漫过鳞片），摇晃20min。
之后用蒸馏水洗3-4次，废液倒入大烧杯中。
之后进行鳞片处理，从烧杯中取出少量鳞片放于培养皿中操作，一般是将鳞片横切一刀，切口向下插入培养基中。
后期处理：
将装好的培养基放于暗处，定期查看。
植物组织培养灭菌方法
植物组织培养灭菌方法
植物组织培养灭菌是保证植物组织培养过程成功的关键之一。
以下是几种常用的灭菌方法:
1. 高压灭菌法(High压力灭菌法):在高压环境下,将培养基、接种杯、植物体等进行灭菌,可以达到121°C至132°C,持续16-20分钟,杀死各种微生物和病原体。
这种方法适用于广泛种类的植物组织
培养。
2. 巴斯德灭菌法(Baruch Process):巴斯德灭菌法是一种通过
加热和化学作用来杀死微生物的方法。
将培养基、接种杯、植物体等进行加热至80°C至85°C,并加入适当的消毒液,再持续加热至100°C,杀死细菌、真菌等微生物。
这种方法需要使用专业的设备,适用于
严格的消毒控制。
3. 紫外线灭菌法(UV灭菌法):紫外线灭菌是利用紫外线辐射来
杀死微生物的方法。
将培养基、接种杯、植物体等进行照射,一般照
射时间约为45-60秒。
这种方法可以使大多数微生物死亡,但对于一
些耐高温和耐高压的细菌,可能需要特殊处理。
4. 快速灭菌法(Quick-死亡法):快速灭菌法是指在较短的时间
内杀死微生物的方法。
将培养基、接种杯、植物体等进行快速加热,
一般温度为120°C至150°C,时间约为5-10分钟。
这种方法适用于快速处理和紧急灭菌。
需要注意的是,不同的灭菌方法适用于不同的植物和组织培养过程,具体使用方法需要根据具体情况来确定。
此外,为了确保灭菌效果,
需要严格控制灭菌环境和时间,避免灭菌失败或产生不良后果。
拟南芥植物组织培养
拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】拟南芥组织培养一、种子消毒：方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。
方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。
消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。
方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。
二、选用的培养基选用1/2MS培养基对种子进行培养。
（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。
糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。
如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。
）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。
（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。
MS培养基配料表：三：接种方法拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。
（如不行，可适当添加琼脂）。
四、培养得无菌苗接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。
3天后即可取材用于器官离体再生实验。
萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。
组培实验室消毒剂选择推荐
植物组织培养是人为控制培养条件，根据植物不同提供特定的培养条件。
组培可以使植物能按几何级数繁殖生产，平均成本低，能快速及时提供规格一致的优质种苗和脱病毒种苗。
植物组织培养需要在十分苛刻的无菌环境进行，组培实验室的环境和空气消毒十分重要，要做到杀孢子的级别（杀灭芽孢和孢子），否则实验室环境中的微生物极易使植物染菌，培养失败。
一．组培实验室常用消毒方式组培实验室常用消毒方式有酒精、升汞、次氯酸钠、漂白粉（次氯酸钙）、新洁尔灭、硝酸银等，虽然这些传统消毒剂各有特色，但也存在诸多缺点，往往造成灭菌不彻底或其它问题，主要有如下情况。
●杀菌率低，不能杀灭芽孢、霉菌孢子等高抗性微生物；●易产生耐药性，需多种消毒剂交替使用；●毒性和刺激性，传统消毒剂对操作人员健康有极大危害；●有残留，传统消毒剂对植物危害较大二．高效、生态的奥克泰士消毒剂Oxytech/奥克泰士作为过氧化氢银离子的倡领者，是多组分杀菌剂，协同微动作用，使用的氧化剂为过氧化氢，结合稳定剂形成复合溶液，作为催化剂添加的痕量银离子可以持久抑菌的效用。
过氧化氢与银结合形成强大的消毒杀菌与抑菌剂。
研究显示，Oxytech/奥克泰士是一种安全有效的抑菌剂和消毒杀菌剂，具有长久的效用，不会产生任何令人不愉快的外观、气味或味道。
更重要的是，奥克泰士-过氧化氢银溶液没有产生任何消毒副产物或其它有毒物质，其作用后完全分解为氧气和水。
三．奥克泰士用于组培实验室消毒的优势✧高效杀菌剂，杀局率大于99.999%，属于广谱消毒剂，能够杀灭细菌、真菌、霉菌、病毒等目前所知的所有类型微生物，且能够杀灭芽孢、霉菌等传统方式难以杀灭的微生物。
✧无色无味、无毒无残留，安全可靠，荣获国际专利的生态安全环保型消毒剂。
杀孢子剂对材料的兼容性很好✧杀菌性能稳定，不易受环境HP、温度及光照的影响，彻底杀灭微生物不会产生耐药性。
✧杀菌作用迅速，3-5分钟可以杀灭芽孢，大大节约时间，从而提高企业的生产效率。
植物组织培养的方法
植物组织培养的方法植物组织培养（Plant tissue culture）是指利用无菌条件下培养植物细胞或组织，以实现繁殖、繁育新品种、生物合成化合物、环境污染处理等目的的技术。
其不仅可以大幅度提高植物材料的品质和数量，还可以在无限制地产生同一种植物。
方法一：赤潮法（Embryogenesis）这一方法是利用赤潮细胞发生器官（如胚性板）的细胞分化，诱导植物组织的胚胎发生，进而实现植物再生。
该方法适用于很多种植物，如玉米、大麦、水稻等。
步骤为：1. 准备培养基：含有赤潮素、氨基酸、维生素、植物激素和适当的糖类和盐类的基础培养基。
2. 处理材料：将植物的姿态板或种子材料在高温（35-40C）下进行消毒，使其无菌。
3. 材料分离：将消毒材料放入无菌条件下进行材料分离。
4. 培养细胞：将细胞或组织放入含有培养基的无菌培养皿中，保持恒定的温度、湿度和光照条件，促进发生素感应化。
5. 发生胚胎体：促进胚胎形成，通过培养发生胚胎胶囊或胚胎体。
6. 块茎冷藏：利用低温存储胚胎体或胚胎胶囊。
方法二：组织培养（Organogenesis）组织培养方法是通过培养植物的基本组织如叶片、茎尖、芽分根进而再生整个植株。
步骤为：1. 材料处理：对种子或植株进行表层消毒处理。
2. 制备组织片：将消毒好的植株切成组织片段，如茎尖、叶片等。
3. 培养基准备：准备无菌的培养基，其中含有植物的必需胰凡陈列如糖类、氨基酸、维生素、生长因子和植物激素等。
4. 组织分化：将组织片段放入含有培养基的培养皿中，使其分化成根、茎、叶等。
5. 干涸与移栽：将培养的加上适量水后，移栽到含有生长素适量的培养基中，促进植物以正常生长的形式营养。
方法三：悬浮细胞培养（Suspension Culture）在此方法中，使用悬浮培养细胞进行植物细胞或组织的生物合成和生物转化。
步骤为：1. 培养基准备：通常使用植物基础培养基加入氨基酸、维生素和植物激素等。
2. 细胞处理：将细胞分散在含有培养基的匀浆器中，使其悬浮在培养基中。
中学探究实验--植物组织培养中关于消毒灭菌方法的总结
1问题引导在组织培养的实验课中首先进行的是胡萝卜与非洲紫罗兰的组织培养因为是初次接触这方面的实验缺乏经验笔者并未重视消毒灭菌这一环节并且无菌操作的动作也不是很规范和熟练在操作细节中漏洞很多
第１ Ｏ 卷 第２ ９ 期
Ｖ０ １ ． １ ０ Ｎｏ ． ２ ９
南方 农业
Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ａｇ ｎｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ
，
一
多次 ，彻底清除污物 ；第二 ，刷洗过程 中要勤换水 ；第 三 ，有 些植 物有 刺 ，可先 剪掉 刺再 刷洗 。 第三步 ：将植物按表１ 中的顺序进行消毒 。注意 ：第 酒精会损伤植物 ，因此在酒精 中的浸泡时间不能超
一
因 ，并把该问题作 为一个课 题研究 ，在后续的实验 中， 第 四步 ：以上３ 步完成后 ，立即将植物浸泡于无菌水 设计各种方案进行 比较 ，观察哪种方法能减少外植体 的 中 ，并 放 入 已灭菌 过 的超 净 工作 台 中 。 污染。笔者按照教材 中的无菌操作要求 ，分析 实验过程 ． ２ 培养 基 的灭菌 处 理 的 每 一 个 细 节 ，甚 至 包 括 操 作 动 作 中是 否 可 能 带 人 杂 ２ 锥形瓶 ：用刷子将锥形瓶彻底刷洗干净 ；培养基 ： 菌 。将可能导致实验失败的各细节分析清楚后 ，同时查 将 已配制好的培养基倒入锥形瓶 中并封好 口后 ，放人高 找资料 ，又提出一些解决办法 ，重新设计 了实验方案 ， 压蒸汽灭菌锅中进行灭菌 ，按照操作程序操作 ，在达到 重新 实 验 。 压力要求后灭菌２ ０ ｍ ｉ ｎ Ｅ Ｐ 可实现彻底灭菌的效果。灭菌完 ２ 探索 中得 出方案 ・ 成后 ，要立 即把培养基从高压蒸汽灭菌锅 中取出 ，并放 接 下来 要 进 行 的 是芦 荟 组 织 培养 。这 次 实 验前 ，针 入已灭菌后 的超净工作 台中。取出时要佩戴棉手套 ，以 对芦荟组织 的结构特征进行 了分析 ，并讨论出以下消毒 免烫伤。
植物组织培养的基本方法
首先，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分 仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗，硬的材料用刮刀刮。
第二步是对材料的表面浸润灭菌。 第三步是用灭菌剂处理。 最后一步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3分钟左右，视采用
(二）培养步骤：
1．初代培养：即接种某种外 植体后，最初的几代培养。初 代培养旨在获得无菌材料和无 性繁殖系。初代培养时，常用 诱导或分化培养基，即培养基 中含有较多的细胞分裂素和少 量的生长素。初代培养建立的 无性繁殖系包括茎梢、芽丛、 胚状体和原球茎等。
的方法 。该法设备简单，易行。但养分分布不均，生长速 度不均衡。并常有褐化中毒现象发生。
2．液体培养法 即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液
体中氧气含量较少，常需要通过搅动或振动培养液的方法以 确保氧气的供给，采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养， 其速度一般为50～100转／分，这种定期浸没的方法，既能 使培养基均一，又能保证氧气的供给。 静止培养：滤纸桥培养 振荡培养：磁力搅拌器、摇床、自旋式培养架
7. 植物材料表面用消毒剂灭菌
外植体的选择:
外植体部位：不同植物以及同一植物的不同器官对诱导条件 的反应不一样；
取材季节：大多数植物应该在生长开始的时候采集； 器官的生理状态和发育年龄：幼年组织比老年组织具有较高
的形态发生能力； 外植体大小：茎尖培养中，外植体越小成活率越低。
外植体的灭菌方法:
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类。 物理方法如干热（烘烧和灼烧）、湿热（常
压或高压蒸煮）、射线处理（超声波、微 波）、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施。
植物组织培养灭菌方法
植物组织培养灭菌方法1.灭菌剂处理法灭菌剂处理法是最常见、最简便的植物组织培养灭菌方法之一、常用的灭菌剂有乙醇、漂白粉、ε-环状酯、紫草素等。
处理步骤如下：（1）将材料（如种子、茎段等）放入一个密闭容器中。
（2）向容器内加入一定浓度的灭菌剂，使材料完全浸泡其中。
（3）将容器密闭，放置一定时间。
（4）取出材料，用无菌水洗净，并在无菌条件下进行培养。
这种方法适用于对微生物敏感性比较低的植物材料，如种子。
但对于一些难以灭菌的种子和组织，灭菌剂处理法可能无法彻底灭菌。
2.高压灭菌法高压灭菌法是一种通过高温高压处理来灭菌的方法。
常用的设备有高压灭菌锅。
具体操作如下：（1）将材料放入高压灭菌锅中。
（2）加入适量的水，使锅内的水位超过材料。
（3）将锅盖盖好，调整压力和温度。
（4）根据不同材料的要求，进行一定时间的高温高压处理。
（5）取出材料，在无菌条件下进行培养。
高压灭菌法可以有效杀灭植物材料中的微生物，但是对于一些难以灭菌的菌种，如孢子，可能需要更高的温度和压力。
3.紫外线灭菌法紫外线灭菌法是一种利用紫外线照射杀灭微生物的方法。
（1）将材料放入无菌培养器皿中。
（2）将紫外线灯放在距离材料表面一定距离的位置上，照射一定时间。
（3）取出材料，在无菌条件下进行培养。
通过紫外线灭菌法可以快速灭菌并保持材料的无菌状态，但紫外线照射对于一些不易透过的材料，如种子表皮，效果较差。
总而言之，植物组织培养灭菌方法有很多种，不同的方法适用于不同的植物材料。
在进行组织培养之前，必须选择合适的灭菌方法来确保培养过程的无菌性，从而保证实验的顺利进行。
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植物组织培养消毒方法
植物组织培养是一种重要的生物技术，可以用于植物繁殖、基因转化等方面。
在进行植物组织培养时，消毒是非常重要的一步，可以有效地避免外源性污染，保证培养物的纯度和质量。
下面是植物组织培养消毒的方法：
1. 表面消毒法
表面消毒法是最常用的植物组织培养消毒方法之一。
首先，将植物材料用水冲洗干净，去除表面的泥沙和杂质。
然后，将植物材料放入含有70%乙醇的烧杯中，用力摇晃，使其充分接触乙醇。
接着，将植物材料转移到含有10%次氯酸钠的烧杯中，同样用力摇晃，使其充分接触次氯酸钠。
最后，将植物材料转移到含有无菌水的烧杯中，反复冲洗数次，去除次氯酸钠的残留物。
2. 氯气消毒法
氯气消毒法是一种高效的植物组织培养消毒方法。
首先，将植物材料放入密闭的容器中，加入适量的水，然后向容器中通入氯气，使其充分接触植物材料。
通气时间一般为30分钟至1小时。
接着，将容器打开，用无菌水反复冲洗植物材料，去除氯气的残留物。
3. 紫外线消毒法
紫外线消毒法是一种无化学残留的植物组织培养消毒方法。
首先，将植物材料放入无菌室中，然后将紫外线灯照射在植物材料上，照射时间一般为30分钟至1小时。
紫外线能够破坏细菌、病毒等微生物的DNA，从而达到消毒的效果。
但是，紫外线消毒法对于一些耐药菌和孢子并不十分有效。
以上是植物组织培养消毒的三种常用方法，不同的消毒方法适用于不同的植物材料和实验要求。
在进行植物组织培养时，应选择合适的消毒方法，并严格按照操作规程进行操作，以保证培养物的纯度和质量。