分离羊肚菌菌种方法
目前羊肚菌菌种分离主要采用子实体组织分离法和孢子
目前羊肚菌菌种分离主要采用子实体组织分离法和孢子分离法。
组织分离法由于f实体q1空和组织结构较薄，操作过
程要求极其精细．一般技术条件下分离的结果往往污染牢较
高。
因此必须进行反复分离提纯上作，实际操作起来相当繁锁“J。
孢子分离法首先要收集无菌的孢子，制备无菌孢了二液，并将其
稀释成一定浓度。
然后在平板或试管斜面培养基上堵养单孢
子菌落，分离并获得单绝子菌种一山于在孢子形成阶段经过减
数分裂过程．发乍基因的分离和泵组，获得的单孢子菌种不能
保证能否结实I“。
所以必须将／{i嗣单孢子菌落的菌丝进行融
合获得蚁孩菌丝菌种，再进行双饮菌丝的分离提纯、裕定如此
等，操作十分繁琐，
笔者于2009年3月在羊肚菌生态凋研过程中，将着牛
d
羊肚菌的土壤样本装入塑料盒内存放于lO℃的冰箱中，10
后发现甥料盒内的羊肚菌长出了很长的羊肚菌气生菌丝
(1
em长，平面延伸口，达7—8cn-)一针对这一现象，笔者丁．2009年3月将带有羊肚菌菌丝网的土壤样本放在倒置的平
板培养基下利用气生菌丝进行菌种分离，。
分离羊肚菌菌种方法
分离羊肚菌菌种方法本技术的目的在于提供一种不用消毒剂，既容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种的分离羊肚菌菌种方法。
为了实现上述目的，本技术方案采用了一种分离羊肚菌菌种的方法，包括以下步骤:将胶带封闭的羊肚菌用75%消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的刀具从菌柄顶端在火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过2-4下，用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织并送入抗生素平板培养荃上，于20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后，及时转接。
所述的刀具为手术刀片。
羊肚菌子实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把羊肚菌整个缠绕密封，中间不留空隙。
所述的抗生素平板培养基为:马铃薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氢钾lg,硫酸镁0. 5g,酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL,链霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5所述抗生素平板培养基的制作方法为:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮30min，过滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液1000mL，在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126'C,高压0. 1-0. 14MPa灭菌30min。
待冷却至50℃左右加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/ml.左右，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。
本技术的分离方法，先是对羊肚菌进行封闭式消毒，防止消毒酒精浸入菌组织，有利分离成功。
另外，割掉子实体头部后，露出的菌柄内侧为无菌组织，环割取内侧菌肉组织防杂效果较好。
采用抗生素培养基也有利于防止杂菌污染，培养基的组分营养非常全面，特别是加入草炭和酵母膏，为羊肚菌菌丝生长提供了保证。
本发明的整个操作过程不用消毒液，全用火焰消毒，萌发率较高，既保证了容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种。
羊肚菌的菌种分离与制作——组织分离
羊肚菌的菌种分离与制作——组织分离组织分离是最常用的分离方法。
该方法较孢子分离相对简单，获得的菌种性状相对稳定，分离后代的基因型和亲本基因型一致，可以在一定的世代范围内传承亲本的优良性状，因此组织分离是目前应用最广泛的分离手段，也是一些菌种定向选育的筛选方法，但是并非组织分离法适用于所有材料。
经验表明，一些种类的组织分离物，绝大多数丰产性有所下降，如平菇、双孢菇等。
长期从事羊肚菌的朋友一定也发现过，你采集的新鲜标本，存在着一定概率完全分离不出来的情况，这就是羊肚菌组织容易老化的一个表现，老化的菌株肯定是不能用于生产的。
组织分离的具体方法是：取半成熟至成熟的健壮新鲜子实体，0.1％升汞或75％酒精表面消毒。
如果是干标本，则用无菌水振荡冲洗、泡开后用再升汞或酒精进行消毒处理。
在消毒之前，还可以用吹风机冷风吹去表面的附着物和杂菌，用升汞或酒精表面擦洗，特别是菌柄部分。
在无菌条件下从子实体中间纵向掰开，用尖嘴镊子或解剖刀小心取菌盖与菌柄交界处或菌肉厚的部分（即远离组织表面）约1~3mm 大小的菌肉组织，置于适宜培养基上，在适宜温度下培养。
当菌落长至直径1~2cm时进行转管纯化。
下面根据羊肚菌的特点详解羊肚菌的组织分离步骤：1）用具和材料准备：酒精灯、打火机、75%酒精棉球、解剖刀、尖嘴镊子、顿口镊子、挑针或接种针、无菌吸水纸或滤纸、75%的酒精或0.1%的升汞（氯化汞）溶液、无菌蒸馏水、斜面试管或倒好培养基的平板、超净工作台，以及待分离的新鲜羊肚菌子囊果。
2）将上述用具置于超净工作台中，开紫外灯，表面杀菌20~30min；之后关闭紫外灯，放入待分离的子囊果标本；打开风机，中高档风速吹风5~10min。
3）打开超净工作台白炽灯，风速可以减少到中低档位；用75%的酒精棉球擦拭双手，进行表面消毒，再用新鲜的75%酒精棉球对超净工作台台面进行擦拭。
4）用略干的酒精棉球将子囊果菌柄特别是基部与土壤交界处的灰尘或泥土擦拭干净，擦拭过程中及时更换酒精棉球；将擦拭干净的子囊果用解剖刀切取菌柄0.5×1cm组织块2~3块，或取菌柄与菌盖交接处组织较厚的部位；将组织块置于0.1%的升汞溶液内浸泡0.5~1min（或75%的酒精内浸泡2~3min），根据材料不同，需要调整浸泡时间，可以先从短时间开始，依次检查效果，避免升汞或酒精将羊肚菌菌丝全部杀死。
一种羊肚菌菌种分离方法[发明专利]
![一种羊肚菌菌种分离方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d14fd45e1a37f111f0855b0e.png)
专利名称：一种羊肚菌菌种分离方法
专利类型：发明专利
发明人：李勇,史新敏,樊继德,李刚波,赵林,张婷申请号：CN201810540704.6
申请日：20180530
公开号：CN108812079A
公开日：
20181116
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种羊肚菌菌种分离方法，属羊肚菌分离方法领域。
利用这种方法，用特定规格透明长方体玻璃瓶作母种容器，按特定配方制得培养基。
把基部带土的羊肚菌种菇削至见斑状菌肉，挑取0.3毫米见方菌土混合体，直接接菌到容器内培养基平面的后部。
在特定温度下，经1‑2次提纯，即可得到羊肚菌纯菌丝体。
与现有羊肚菌菌种分离方法相比，这种分离方法操作简单，成功率高，解决了羊肚菌生产中菌种分离成功率过低的技术瓶颈问题。
申请人：江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心)
地址：221000 江苏省徐州市高铁站北
国籍：CN
代理机构：徐州市三联专利事务所
代理人：周爱芳
更多信息请下载全文后查看。
羊肚菌菌种分离技术
原始菌种分离自野生材料或栽培材料。
一般用野生或栽培果(子实体),也可用干子实体来进行分离,干子实体作菌料的成活率及子实体产量均比新鲜子实体作分离菌种的材更高。
栽培子实体达到商业化采收标准时一般还没有成熟和子囊孢子也都未完全成熟;孢子分离需要将子囊孢子培养到完熟的状态,子实体已经倾斜或快要倒伏,外观形态表现为子囊果面有白色、灰白色的孢子粉出现时比较可靠。
野生子实体成熟比较很小的子实体就已经形成了孢子,容易获得大量孢子粉。
种菇的选择：选择菇形正常,菌盖圆整,顶端较尖,尖顶凸起完整,菌柄圆正,菌柄短而结实,大小适中,无虫害、霉变或杂菌感染的子实体,鲜品或干品均可。
种菇的采集：菌柄基部最好带少量土壤一起采集,用吸水纸包裹3层,再用报纸包裹,低温下带回实验室。
不要把菌柄基部剪掉留下空心的子实体进行分离新鲜子实体采集后放在室内桌面或吸水纸上自然晾,稍稍除去部分水分,若采集地点离实验室很远或工作时间较长,可以晾干到子实体含水量在15%以下。
标本用吸水纸包,再用报纸包裹,带回实将未成熟的栽培子实体采集后,可以放在室内假植几离。
方法是移栽在盐内湿上上,培养儿天直到有子弹射为止,以便集孢于注意一般不要把标本放入塑料袋内运送,也绝对不能用烘干的办法处理需要分离的标本。
菌种分离一般不要采用传统教科书所叙述的方法,传统的方法都容易导致污染和不生长。
为此本专著为大家特别介绍了下列的新方法。
常见的分离方法有：纯组织分离法,分别有菌盖组织、菌柄组织,菌盖菌柄结合部位组织、组孢混合分离法、膨大细胞分离法、纯多孢分离法、单孢分离法等等。
其中,上内菌丝分离比较困难。
纯组织分离法：采野生或栽培的幼嫩体,用无菌吸水纸包裹,放于无菌纸袋内。
0~4℃冰瓶保存。
送到实验室,放在无菌培养皿内,在超净工作外线照射20min,具体可以采用悬挂法、断斜面法。
组织块悬挂分离法：将羊肚菌子实体撕开或用刀片切成两片,刮肉内壁的膨大细胞层。
分别在菌柄内壁、菌盖内壁、菌柄与菌盖接部位取子实体内壁的中央菌丝组织。
羊肚菌菌种提纯工艺流程
羊肚菌菌种提纯工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!羊肚菌是一种珍贵的食用菌，其菌种提纯是保证羊肚菌质量和产量的重要步骤。
羊肚菌菌种规模化生产技术
羊肚菌菌种规模化生产技术
羊肚菌栽培的基础是优质的各级菌种，原始菌种来源必须非常可靠，生产时接种要严格执行环境灭菌和无菌操作，要创造良好的培养条件；栽培种原料配方中要有足够比例的小麦，栽培种和营养料袋的数量要足够。
菌种必须在最优的播种时节集中供应，从多方面保证栽培的成功和效益。
今日介绍一下羊肚菌原始菌种的选择，供广大生产者参考。
羊肚菌原始菌种的选择
1.菌种来源
羊肚菌菌种的分离方法包括鲜菇组织分离、干菇组织分离、多孢分离、单孢分离、单菌核分离、多菌核分离、组孢混合分离等，很多方法得到的菌种可能会不出菇、出菇率很低，或产量、品质不佳。
因此，生产者自行分离的菌种最好先通过出菇试验，能够大量形成原基后再进行推广，应用于生产。
一般来说，购自可靠机构经过出菇试验和大面积种植获得高产的原始菌株母种，较为放心。
对自行采集本地野生或栽培的新鲜成熟子实体，并用可靠的方法纯化得到的纯菌种，又经出菇试验的也可使用。
2.羊肚菌栽培物种的主要种类
常见的羊肚菌商业化栽培物种有：六妹羊肚菌、七妹羊肚菌、梯棱羊肚菌等。
其他黑色物种，如Mel-21、Mel-20等产量较低，不适合商业化栽培。
3.注意事项
建议采用当年的野生或栽培子实体通过单孢分离得到的纯菌种；不建议使用保藏多年的菌种，多次、无限转扩的母种，技术信誉度不高的机构的菌种，以及所谓多孢菌种、组孢混合、组织分离的菌种，或是分离方法不详、无法说清原理的菌种。
也不建议使用未经鉴定的野生物种进行分离和大面积栽培，特别是黄色的物种。
羊肚菌菌种生产和营养袋制作技术简介
羊肚菌菌种生产和营养袋制作技术简介羊肚菌菌种最大的缺点就是容易退化、变异，给羊肚菌栽培带来很大困难。
（一）菌种生产技术要点菌种生产流程如下：羊肚菌选择和采集>组织（孢子）分离>提纯培养>出菇试验>优良一级菌种>复壮培养>菌种扩繁>二级菌种接种>培养栽培菌种。
1.菌种分离羊肚菌的分离方法与其他食用菌大体相同，采用组织分离和孢子分离。
（1）组织分离选取成熟、具优良长势的羊肚菌子实体，在无菌环境中用接种针将组织块接入平皿培养基上，获得菌种。
①培养基制作。
配方为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18～20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、水1000ml。
将培养基装到500ml三角瓶中（每瓶装入200ml），115℃灭菌30min后在无菌条件下将培养基倒入平皿中（每个平皿约20ml），冷却备用。
②选取头潮、新鲜、健壮、周围幼菇或原基多、朵形圆整、七八分熟的子实体。
③菇面用75%酒精棉球擦拭消毒。
④切取组织块（菌肉）。
用手术刀切开种菇，在菌盖或菌柄内侧用无菌手术刀或尖嘴镊子取5mm见方组织块（菌肉）接于培养基上。
⑤培养。
温箱18℃恒温培养，2天后组织块萌发，待菌落长到2cm，用接种针选取最优菌落的先端菌丝接入新培养基，进行尖端脱毒。
将菌丝生长快、产菌核适中、产色素少且晚的分离物挑选出来，作为第一代母种保存备用。
（2）孢子分离无菌条件下，使孢子在适宜的培养基上萌发成菌丝体而获得纯培养的方法。
多孢分离的菌株不能直接用于生产，要经过出菇试验。
采集孢子有多种方法，如整朵插种菇、三角瓶钩悬和试管琼脂培养基黏附法等，此处介绍整朵插种菇法。
①选取头潮、新鲜、健壮、八九分成熟的子实体。
②采集孢子。
将按照组织分离方法消毒子实体的整朵菇插入无菌孢子收集器里，在18℃下培养2～3天后子囊孢子落下，形成孢子印。
③孢子分离、培养。
无菌条件下，将少量孢子移入盛无菌水的三角瓶内稀释成孢子悬浮液，其浓度以1滴水中含5～10个孢子为宜。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
分离羊肚菌菌种方法
本技术的目的在于提供一种不用消毒剂，既容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种的分离羊肚菌菌种方法。
为了实现上述目的，本技术方案采用了一种分离羊肚菌菌种的方法，包括以下步骤:将胶带封闭的羊肚菌用75%消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的刀具从菌柄顶端在
火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过2-4下，用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织并送入抗生素平板培养荃上，于20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后，及时转接。
所述的刀具为手术刀片。
羊肚菌子实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把羊肚菌整个缠绕密封，中间
不留空隙。
所述的抗生素平板培养基为:马铃薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氢钾lg,
硫酸镁0. 5g,酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL,链霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5
所述抗生素平板培养基的制作方法为:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮
30min，过
滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液1000mL，在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126'C,高压0. 1-0. 14MPa灭菌30min。
待冷却至50℃左右加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/ml.左右，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。
本技术的分离方法，先是对羊肚菌进行封闭式消毒，防止消毒酒精浸入菌组织，有利分离成功。
另外，割掉子实体头部后，露出的菌柄内侧为无菌组织，环割取内侧菌肉组织防杂效果较好。
采用抗生素培养基也有利于防止杂菌污染，培养基的组分营养非常全面，特别是加入草炭和酵母膏，为羊肚菌菌丝生长提供了保证。
本发明的整个操作过程不用消毒液，全用火焰消毒，萌发率较高，既保证了容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种。