外周血蛋白激酶C受体蛋白表达对冠状动脉粥样硬化病变程度的影响_古学文

参考文献
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱＣ组
２９
１８．７±４．７ａｂｃ
２６．４±４．３
注：与健康对照组比较，ａＰ＜０．０１；与 Ａ 组比较，ｂ Ｐ＜０．０１；与 Ｂ 组 比 较 ，ｃ Ｐ＜０．０１。
３ 讨 论 目前较为流行的冠状动脉粥样硬化发病机制有平滑肌突
变学说、内皮损伤 学 说、脂 质 渗 入 学 说、炎 症 学 说 和 单 核－巨 噬 细 胞 作 用 学 说 等 。 ［５－６］ 除 了 上 述 的 发 病 机 制 之 外 ，普 遍 认 为 人 体 的 其 他 因 素 也 可 以 参 与 到 动 脉 粥 样 硬 化 当 中 ，其 中 包 括 人 体 内的氧化应激反应、内皮细胞功能紊乱、细胞异常增殖和凋 亡、 细胞基质失 调 等。 本 研 究 主 要 从 ＲＡＣＫ１ 分 子 基 因 水 平 研 究 其与冠状动脉粥样硬化的关系。
试剂盒说明进行实 时 ＰＣＲ 扩 增，目 的 基 因 表 达 阳 性 的 扩 增 曲
线为 Ｓ型，阴性标 本 为 不 规 则 波 浪 线。 目 的 基 因 ｍＲＮＡ 相 对
表 达 量 以２－ΔΔＣｔ表 示 ，其 中 ΔＣｔ＝样 本 Ｃｔ均 值 － 内 参 Ｃｔ均值 ，
ΔΔＣｔ＝ΔＣｔ－（阴性对 照 样 品 Ｃｔ 均 值 － 样 品 内 参 Ｃｔ 均 值 ）。
ＰＫＣ 是 Ｇ 蛋白偶联受 体 系 统 中 的 效 应 物，可 促 进 细 胞 的 生长、分裂和代谢，也 可 与 细 胞 内 多 种 蛋 白 相 互 作 用［７］。 其 在 非活性状态下是水溶性 的，游 离 存 在 于 胞 质 溶 胶 中；激 活 后 是 脂依赖性的，需要膜脂１，２－甘 油 二 脂（ＤＡＧ）的 存 在，同 时 又 是 Ｃａ２＋ 依赖的，需要胞质 溶 胶 中 高 Ｃａ２＋ 浓 度 。 当 细 胞 受 到 刺 激 后，ＰＫＣ 以 Ｃａ２＋ 依赖的形式从胞浆中移位到细胞膜上，医学中 以此作为 ＰＫＣ 激活的标志［８］。此 外，ＰＫＣ 能 够 与 其 他 激 酶 催 化产生反应，激 活 Ｎａ＋ －Ｋ＋ 交 换 系 统 ，从 而 提 高 细 胞 质 的 ｐＨ 值。ＰＫＣ 升高可导 致 血 管 平 滑 肌 细 胞 的 增 生 和 分 化 ，炎 症 水 平增高，免疫水平下降，心肌细胞膜功能改变，在动脉粥样硬 化 形成过程中发挥重要作用。
３２ 分 ，得 分 越 高 ，病 变 程 度 越 严 重 。
１．４ 方法 采 用 实 时 聚 合 酶 链 式 反 应 （Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ）检 测
ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 水平。引物序列，Ｔｒｉｚｏｌ试 剂，试 剂 盒，人 淋 巴
细胞分离液和 Ｒｏｔｏｒ－ｇｅｎｅ ３０００ 实 时 ＰＣＲ 仪 均 为 华 大 基 因 公
对 ＲＡＣＫ１ ｍＲＮＡ 表 达 水 平 检 测 进 行 检 测，检 测 试 剂 主 要 由
美 国ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ 公 司 提 供 ，扩 增 产 物 长 度 约 为 １３８～１４０ｂｐ。
１．５ 统计学处理 采用 ＳＰＳＳ１２．０ 软 件 对 相 关 数 据 进 行 统 计
学处理，计 量 资 料 采 用 ｘ±ｓ表 示，组 间 比 较 采 用ｔ检 验；计 数
资 料 采 用 百 分 率 表 示 ，组 间 比 较 采 用
２
χ
检验，相关性分析 采 用
Ｓｐｅａｒｍａｎ 等级相关ｒ检验，以 α＝０．０５ 为 检 验 水 准，Ｐ＜０．０５
为差异有统计学意义。
２ 结 果
随着 ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 的增高，Ｇｅｎｓｉｎｉ积分也相应 增 高，各
组间 ＲＡＣＫ１ ｍＲＮＡ 水 平 比 较，差 异 有 统 计 学 意 义 （Ｐ＜
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检 验 医 学 与 临 床 ２０１４ 年 １０ 月 第 １１ 卷 第 ２０ 期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１４，Ｖｏｌ．１１，Ｎｏ．２０
０．０１），见表１。将 ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 水平和 Ｇｅｎｓｉｎｉ积 分 进 行 等 级资料相关性 分 析，结 果 显 示 ＲＡＣＫ１ ｍＲＮＡ 水 平 与 Ｇｅｎｓｉｎｉ 积 分 呈 显 著 正 相 关 （ｒ＝０．４８３，Ｐ＜０．０１）。Ｇｅｎｓｉｎｉ积 分 为 不 连 续变量，两者的相 关 性 以 Ｓｐｅａｒｍａｎ等 级 显 示。 冠 状 动 脉 粥 样 硬化患者外周 血 ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 表 达 量 与 冠 脉 狭 窄 程 度 存 在 相 关 性 ，相 关 系 数ｒｓ＝０．５７（Ｐ＜０．０１）。
结缔组织疾病等。
１．３ Ｇｅｎｓｉｎｉ评分系统 根据冠状动脉病变的部位 评 定 系 数，
冠 状 动 脉 狭 窄 评 分 × 病 变 部 位 的 系 数，则 可 以 得 出 病 变 评
分 。 ［３－４］ 根 据 患 者 冠 状 动 脉 狭 窄 程 度 进 行 评 分 ，２５％ 为 １ 分 ；
５０％为２分；７５％ 为 ４ 分；９０％ 为 ８ 分；９９％ 为 １６ 分；１００％ 为
司提供。所有患者均采集静脉血４ｍＬ，枸橼酸钠抗凝剂 抗 凝，
人淋巴细胞分离液分离外周血单 核 细 胞，加 入 １ ｍＬ Ｔｒｉｚｏｌ，提
取外周 血 总 ＲＮＡ，在 提 取 ＲＮＡ 后，利 用 １％ 琼 浆 糖 凝 胶 电 泳
进行验证和反转 录。 用 １３μＬ 模 板 ＲＮＡ、２μＬ 模 板 ＲＮＡ 在 恒温３７ ℃下孵育１ｈ。反转录得到 ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ，之后按照
１．２ 纳入与排除标准 纳 入 标 准：（１）无 急 慢 性 感 染 性 疾 病、
严重肝肾疾 病、肿 瘤 和 结 缔 组 织 病 等 可 能 影 响 ＲＡＣＫ１ 的 因
素；（２）所有研究 对 象 均 需 签 署 知 情 同 意 书。 排 除 标 准：（１）患
有严重的肝、肾疾病；（２）患有严重的急性或慢性传染性疾 病 及
综上所述，ＲＡＣＫ１水平 与 冠 状 动 脉 粥 样 硬 化 病 变 程 度 有 重要影响，对寻找靶位点进行针对性基因治疗具有积极的参 考 意义。 此 外，ＲＡＣＫ１ 是 否 受 其 他 基 因 调 节，是 病 变 导 致 ＲＡＣＫ１水平增高，还 是 不 同 患 者 本 身 遗 传 的 ＲＡＣＫ１ 水 平 有 差异，从而导致发病 率、病 变 程 度、进 度 等 的 不 同，还 有 待 进 一 步研究。
【摘要】 目的 探讨外周血蛋白激酶 Ｃ 受体 蛋 白（ＲＡＣＫ１）表 达 对 冠 状 动 脉 粥 样 硬 化 病 变 程 度 的 影 响。 方 法 选择广州市荔湾区芳村中医医院２０１２年３月至２０１２年 １０ 月 收 治 的 ９０ 例 冠 状 动 脉 粥 样 硬 化 患 者 为 研 究 对 象， 对所有患者进行冠状动脉造影，根据美国心脏学会（ＡＣＣ）指南中冠状动 脉 造 影，按 照 Ｇｅｎｓｉｎｉ评 分 系 统 将 患 者 分 成 Ａ、Ｂ、Ｃ 组。其中 Ａ 组３１例患者 Ｇｅｎｓｉｎｉ评分为１～１０分。Ｂ组３０例患者 Ｇｅｎｓｉｎｉ评分为１１～２０分。Ｃ 组２９例患 者 Ｇｅｎｓｉｎｉ评分大于２０分。另外选择同期体检的 ３０ 例 健 康 者 为 健 康 对 照 组。４ 组 均 采 用 实 时 聚 合 酶 链 反 应 （Ｒｅａｌ－ ｔｉｍｅ ＰＣＲ）检测外周 血 ＲＡＣＫ１ ｍＲＮＡ 水 平。 结 果 随 着 ＲＡＣＫ１ ｍＲＮＡ 的 增 高，Ｇｅｎｓｉｎｉ积 分 相 应 增 高，各 组 间 ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 水平比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。将 ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 水平和 Ｇｅｎｓｉｎｉ积分进行等级资料相关性 分析，结果显示 ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 水平与 Ｇｅｎｓｉｎｉ积分呈显著正相关（ｒ＝０．４８３，Ｐ＜０．０１）。结论 ＲＡＣＫ１水平与冠状动 脉 粥 样 硬 化 病 变 程 度 有 正 相 关 关 系 ，对 寻 找 靶 位 点 进 行 针 对 性 基 因 治 疗 具 有 积 极 的 参 考 意 义 。
表１ ４组 ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 水平和 Ｇｅｎｓｉｎｉ积分统计（ｘ±ｓ）
组别
ｎ ＲＡＣＫ１ｍＲＮＡ 水平
Ｇｅｎｓｉｎｉ积 分
健康对照组
３０
３．６±１．１
０
Ａ组
３１
１０．５±２．３ａ
７．３±２．７
Ｂ组
３０
１５．６±３．８ａｂ
１５．１±３．９
ＲＡＣＫ１直接参与到冠状动 脉 粥 样 硬 化 的 发 生 中，但 其 具 体 发 生机制却尚未明确，有 可 能 上 述 关 键 酶 活 性 的 不 断 增 高 ，从 而 进一步激发机体内的氧化应激反应，导致内皮细胞损伤等不 良 情 况 ，最 终 导 致 了 动 脉 粥 样 硬 化 的 发 生 。 ［１０－１１］
检 验 医 学 与 临 床 ２０１４ 年 １０ 月 第 １１ 卷 第 ２０ 期 Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１４，Ｖｏｌ．１１，Ｎｏ．２０
外周血蛋白激酶 Ｃ受体蛋白表达对冠状动脉粥样 硬化病变程度的影响
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·临床研究·
古 学 文 （广 东 省 广 州 市 荔 湾 区 芳 村 中 医 医 院 ５１０３６０）
【关键词】 冠状动脉粥样硬化； 蛋白激酶 Ｃ 受体蛋白； 病变程度 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１４．２０．０５２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２－９４５５（２０１４）２０－２９１３－０２
冠状动脉粥样硬化导致的心血管疾病是影响患者生活质 量 和 危 及 生 命 安 全 的 重 要 原 因 ，也 是 病 情 进 展 和 恶 化 的 重 要 原 因。关于冠心病 （ＣＨＤ）的 发 病 机 制，国 内 外 已 经 有 大 量 研 究 从器官、组织、细胞、分 子 和 基 因 等 不 同 层 面 加 以 阐 述，并 形 成 了各种学说。蛋白激酶 Ｃ 受体蛋白（ＲＡＣＫ１）是 ＷＤ 重复蛋白 家族的重要成员，是一种相对分子 质 量 为 ３６ ０００ 的 支 架 蛋 白， 呈 β－螺 旋 桨 结 构 状 ，广 泛 存 在 于 哺 乳 动 物 多 种 组 织 以 及 外 周 血 中 ，可 参 与 调 节 多 条 细 胞 内 信 号 转 导 通 路 。 ［１－２］ 蛋 白 激 酶 Ｃ （ＰＫＣ）系统又称为磷脂肌醇信号途径，功能主要在于对基 因 进 行控制和表 达，从 而 实 现 控 制 细 胞 膜 ，参 与 机 体 的 免 疫 调 节 。 血管平滑肌细胞的增生会导致 ＰＫＣ 活性增强，而 ＰＫＣ 活 性 增 强 在 动 脉 粥 样 硬 化 中 有 着 非 常 重 要 的 作 用 ，两 者 之 间 的 关 系 密 切。而 作 为 锚 定 蛋 白 的 ＲＡＣＫ１，在 冠 状 动 脉 粥 样 硬 化 发 生 过 程中是否有着重要的影响，在这方面的研究却非常少。本研 究 拟对不同病变程 度 的 冠 状 动 脉 粥 样 硬 化 患 者 ＲＡＣＫ１ 水 平 进 行检测，以探讨冠状动脉粥样硬化 患 者 血 液 中 ＲＡＣＫ１ 的 表 达 情况，从而分析其与冠 状 动 脉 狭 窄 程 度 之 间 的 关 系，现 将 结 果 报道如下。 １ 资 料 与 方 法 １．１ 一般资料 选 择 本 院 ２０１２ 年 ３ 月 至 ２０１２ 年 １０ 月 收 治 的９０ 例 冠 状 动 脉 粥 样 硬 化 患 者 为 研 究 对 象 ，对 所 有 患 者 进 行 冠状动脉造影，根 据 美 国 心 脏 学 会 （ＡＣＣ）指 南 中 冠 状 动 脉 造 影，按照 Ｇｅｎｓｉｎｉ评分系统 将 患 者 分 成 Ａ、Ｂ、Ｃ 组。 其 中 Ａ 组 ３１例患者 Ｇｅｎｓｉｎｉ评分为１～１０分；男１７ 例，女 １３ 例；平 均 年 龄（５７．６±１１．２）岁，病 程 （２．８±０．５）年。Ｂ 组 ３０ 例 患 者 Ｇｅｎｓｉｎｉ评 分 为 １１～２０ 分；男 １５ 例，女 １４ 例；平 均 年 龄 （５９．６±１１．９）岁，病程（３．６±０．７）年。Ｃ 组 ２９ 例 患 者 Ｇｅｎｓｉｎｉ 评 分 大 于 ２０ 分 ；男 １７ 例 ，女 １４ 例 ；平 均 年 龄 （６１．２±１２．１）岁 ， 病程（４．１±０．８）年。另外选择同期体检的３０例健康者 为 健 康 对照组，其中男１８例，女 １２ 例；平 均 年 龄 （５８．２±１１．５）岁。４ 组患者在年龄、性别等一般资 料 比 较，差 异 无 统 计 学 意 义 （Ｐ＞ ０．０５），组 间 具 有 可 比 性 。