表面微生物检测SOP
微生物限度检查操作规程
1 目的规范微生物限度检查操作。
2 适用范围适用于微生物限度的检查。
3 职责质量检定部人员严格按本SOP操作。
4 工作程序4.1 仪器4.1.1 超净工作台4.1.2 微生物检测系统4.2 试剂所用培养基及缓冲液均按《中华人民共和国药典》2005版三部要求进行配制。
玫瑰红钠培养基、营养琼脂培养基4.3 试验方法采用薄膜过滤法4.4试验前准备试验过程中所有用的器材都应进行灭菌后方可使用；超净工作台使用前需进行紫外灭菌30min。
4.5 试验步骤4.5.1 将样品加入薄膜过滤器的滤杯中4.3.1.3 供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响4.3.1.4 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。
4.3.1.5 检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告。
4.3.2 检验量4.3.2.1 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。
4.3.2.2 除另有规定外，一般供试品的检查量为10g或10ml；化学膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
4.3.3 供试液的制备供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
4.3.3.1液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
油剂可加入适量的无菌聚山梨脂80使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
4.3.4 细菌、霉菌及酵母菌计数4.3.4.1 检查法薄膜过滤法采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45um，直径约为50mm。
选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。
滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。
使用时，应保证滤膜再过滤前后的完整性。
表面微生物测试标准操作规程
表面微生物测试标准操作规程
本方法适用于300, 000级的控制区和洁净区域的表面微生物检查。
1 制备培养基
1.1 肉汤琼脂培养基成分（g/L）：
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
牛肉膏 3g
水适量
琼脂 15～20g
1.2 制法：
取蛋白胨，氯化钠、牛肉膏，加入热水中溶解，调PH值7.4±0.2加入琼脂，煮沸，使溶化，加水补足1000ml。
分装，115℃灭菌30min。
1.3 浇注平板
将灭菌后的培养基，放冷约40℃左右，在净化台上无菌操作，把融化的培养基约20ml注入90mm的培养皿，稍冷后，盖上平皿盖子，待培养基凝固后，倒置送培养箱培养。
1.4 验证
1.4.1 细菌培养基需经35±2℃培养48h，证明无菌方可使用。
1.4.2 培养基经接种某一已知菌液，经培养后，应生长良好。
2 用具的灭菌
将棉球（棉签）、镊子等用具，包装好，在121℃±0.5℃高压灭菌30分钟。
物品取出后，勿立即置冷处，以免急速冷却，灭菌物品内蒸汽冷凝，易致染菌，应加温烘干。
3 取样
经培养后的培养皿放在密闭的不锈钢无菌箱送至取样地点用棉签或其它用具擦拭被测物件表面，然后将棉签擦拭面在培养基表面轻轻涂抹几下，迅速盖上平皿盖子，送至培养箱培养。
4 结果判定
取样后的培养皿置培养箱35±2℃培养约48h后，其菌落数应符合标准规定：
标准
区域
300000级
内容
标准平均≤ 15
测定位置关键操作点、墙面、地面记录
1 表面微生物测试检验记录
2 表面微生物测试检验报告单
记录空白样张附后。
微生物限度检查操作规程
微生物限度检查操作规程《微生物限度检查操作规程》一、目的微生物限度检查是用于确认产品是否符合微生物水平要求的一种分析方法。
本操作规程的目的是制定微生物限度检查的操作步骤，确保检查结果的准确性和可靠性。
二、适用范围本操作规程适用于所有需要进行微生物限度检查的产品，包括食品、医药和化妆品等。
三、操作步骤1. 准备工作：清洁实验室工作台面和仪器设备，准备所需的培养基和试剂，并确保仪器设备的正常运转。
2. 取样：按照产品的取样标准，从不同批次或不同位置进行取样，并确保取样的代表性。
3. 样品制备：将取样的产品进行样品制备，包括稀释、搅拌和过滤等步骤，以便于后续的微生物检查。
4. 培养：将样品接种在适当的培养基上，根据不同的微生物种类和要求进行培养，并进行恒温培养一定时间。
5. 计数：在培养一定时间后，对培养基上的菌落进行计数，并按照标准方法进行结果的记录和确认。
6. 结果判定：将检查结果与产品的微生物限度标准进行比对，根据结果作出是否合格的判定。
7. 结果记录：将微生物限度检查的结果进行记录，包括样品信息、操作步骤、检查结果和判定等信息，并将结果报告给相关部门或供应商。
四、注意事项1. 操作人员应具备一定的微生物检测知识和操作技能，严格按照操作规程执行。
2. 实验室应保持清洁、卫生，并进行定期消毒和验证。
3. 实验室设备应定期维护和校准，确保设备的准确性和可靠性。
4. 所使用的培养基和试剂应符合相关标准，存放在干燥、阴凉、避光的环境中。
5. 检查结果应及时报告，并根据结果采取相应的控制措施。
以上就是《微生物限度检查操作规程》的主要内容，希望能够帮助大家更好地进行微生物限度检查，确保产品质量和安全。
表面微生物测试标准操作规程
表面微生物测试标准操作规程（接触平皿法）1．目的建立表面微生物测试标准操作规程,保证测试人员操作规范化、标准化。
2．依据《药品生产质量管理规范》(2010年修订本）3．范围本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测.4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行5．内容5。
1洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：5。
1。
1空调系统验证的结果5.1。
2房间的大小和布局5.1。
3房间的用途5。
1。
4与产品的距离5。
1.5人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。
如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点.注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：1。
洁净区（室）的大小；2。
设备、管路等的复杂程度；3。
生产活动的重要性；4.易受污染的部位等.应考虑包含以下部位：每扇门、每个门把手、地板（至少两点）、墙壁（不易被清洁/消毒的部位，至少两点)、公用介质的管路（不易被清洁/消毒部位)、生产设备的关键性部位(如灌装针、易与人员接触的塑料帘膜、胶塞筒、传输带）等。
根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面)一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板，并且分别设定不同的微生物限度要求.表面微生物的每点取样面积宜控制在25cm2左右。
为避免干扰，宜在生产活动结束后取样.5。
2洁净区微生物测试频率和限度5.2。
1日常监控一月一次5。
2。
2接触碟(55mm）50cfu/25cm2 ，警戒40cfu/25cm2 ，纠偏45cfu/25cm2 .5.3洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）。
5。
3.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。
5。
3.2仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac(Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。
表面微生物检测标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基2.1培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿2.2培养基：营养琼脂培养基2.3生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
2.4自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、采样位置和采样点数3.1根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。
3.2表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。
如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。
3.3不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。
4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。
5、测试状态及时间：动态测试。
6、测试6.1依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
6.2将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。
6.3将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。
6.4翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。
但与前次擦拭移动方向垂直。
6.5擦拭方法如图：6.6擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。
车间微生物检验作业指导书
车间微生物检验作业指导书引言概述：车间微生物检验是指对车间环境和产品进行微生物学检验，以确保生产过程的卫生安全和产品质量。
本文将详细介绍车间微生物检验的操作指导，包括样品采集、培养方法、检测技术、结果解读和记录等方面。
一、样品采集1.1 采样点选择：根据车间布局和生产工艺，选择代表性的采样点，涵盖不同区域、设备和工序，以确保全面检测车间微生物污染情况。
1.2 采样器具准备：准备无菌的采样器具，如无菌棉签、无菌采样袋等。
在采样前进行灭菌处理，避免样品污染。
1.3 采样操作：在采样前，工作人员应佩戴无菌手套和口罩，以防止人员对样品的污染。
根据采样点特点，选择适当的采样方法，如直接接触采样、表面刮取采样等。
采样时要注意避免交叉污染，避免样品受到外界环境的污染。
二、培养方法2.1 培养基选择：根据不同微生物的生长特性和检测要求，选择适当的培养基。
常用的培养基有营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂、霍乱弧菌选择性琼脂等。
2.2 培养条件：根据不同微生物的要求，设置适当的培养条件，如温度、湿度、气氛等。
培养温度普通为37摄氏度，但也需要根据具体情况进行调整。
2.3 培养时间：根据微生物的生长速度和检测要求，确定培养时间。
普通情况下，培养时间为24-48小时，但对于某些微生物，如真菌，可能需要更长的培养时间。
三、检测技术3.1 基本技术：车间微生物检验常用的基本技术包括菌落计数法、涂布法、过滤法等。
根据检测要求和实际情况，选择适当的技术进行检测。
3.2 PCR技术：PCR技术可以对微生物进行快速检测和鉴定，具有高灵敏度和高特异性。
在车间微生物检验中，可以应用PCR技术进行快速筛查和定性分析。
3.3 生物传感技术：生物传感技术结合微生物学和传感器技术，可以实现对微生物的实时监测和定量分析。
在车间微生物检验中，可以应用生物传感技术进行实时监测，提高检测效率和准确性。
四、结果解读4.1 判断标准：根据相关标准和法规，对微生物检测结果进行判断。
表面微生物检测标准操作规程
目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。
范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。
职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。
自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。
表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。
如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。
不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。
4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。
5、测试状态及时间：动态测试。
6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。
将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。
将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。
翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。
但与前次擦拭移动方向垂直。
擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。
7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
食品接触面微生物验证规程
食品接触面微生物验证规程目的：检测生产用水、车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。
范围：本标准规定了公司生产过程中的微生物控制要求以及验证计划。
本标准适用于公司食品生产过程中对微生物控制的验证活动。
规范性引用文件：下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本均适用于本标准。
GB 5749 生活饮用水卫生标准GB 14881 食品企业通用卫生规范GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准GB 4789.2 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB 4789.3 食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数GB 4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB 4789.15食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母计数卫生标准操作程序（SSOP）职责：工厂质量部对车间卫生状况进行监控，定期开展微生物验证，并根据检验结果对车间卫生进行管控，必要时，委托化验室抽样检测。
术语与定义食品接触面：指生产过程中与所生产食品直接接触的设备、工器具、人、水、空气、包材等；或间接接触的门把手、电源开关等。
1.内容1.1.工厂应按照GB 14881等相关国家规定，采取适宜的措施控制食品生产经营过程中微生物。
1.2.验证内容应包括食品生产经营过程中微生物控制的各个环节（如原材料、人员、生产环境等）及采取的各种措施（如清洗、消毒措施、提高生产车间洁净度要求等）。
1.3.食品接解面微生物控制标准应符合公司SSOP及食品安全国家标准要求；具体要求见附表1：《食品接触面微生物验证标准》。
1.4.可通过以下环节的检测进行微生物控制效果验证1.4.1.生产用水1.4.1.1.采样时间：生产过程中；1.4.1.2.生产用水取样：选定取样点，打开水阀门，5min后用灭菌的广口瓶取约200mL水样，立即送检。
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一. 目的：
本规程规定了COL洁净区（D级）、ME洁净区（D级）、万古霉素洁净区（C级）、菌种（A级、C级、D级）、QC（A级、C级、D级）、取样车（C级）等（包括五指手套和设备・设施等）表面微生物的检测。
二. 检测依据：
中国GMP 、日本药局参考信息、ISO14644、EU-GMP
三. 术语：
1.静态atrest
洁净设施建造完成，生产设备就位，并按客户与供应商议定的条件运行，但无人员在场的状态。
2.动态operational
洁净设施按规定方式运行，规定数量的人员按议定方式工作的状态。
四. 测试方法
1. 表面微生物测试用培养基：
（1）沙氏葡萄糖琼脂培养基：（也可使用市售配制好的培养基）：
按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为5.6±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。
（2）大豆酪蛋白消化物琼脂培养基：（也可使用市售配制好的培养基）：
按照使用说明书称取适量培养基于纯化水中，加热溶化后过滤，用PH计调节pH值至适当范围（略高0.2～0.4），保证灭菌后培养基pH值为7.3±0.2，按需要分装，在121±1℃灭菌15分钟，使用前进行培养基性能确认并做空白培养。
2 培养基平皿的制备
将需要灭菌的培养皿置于121±1℃湿热灭菌15分钟，将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿,培养基的注入量不能太多也不能太少,要尽量注满整个培养基。
待琼脂在室温下凝固后，在双碟上写上所检测位置的编号,将大豆酪蛋白
消化物琼脂培养基倒置于30℃～35℃恒温培养箱中培养5天，将沙氏葡萄糖琼脂培养基倒置于20℃～25℃恒温培养箱中培养7天，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
注：制备好的培养基平皿宜在2℃～8℃的环境中存放。
四. 采样及注意点：
1. 通过风险评估确定各区域的表面微生物的检测位置，各单位具体采样位置见附表-1。
另
外，对A、B级区域还要进行五指手套表面微生物的检测，一般为静态采样检测。
2. 表面微生物的采样量在24平方厘米--30平方厘米之间，每点采样1次，两种培养基要
分别在采样点的两侧进行采样,不能在同一位置采样。
采样时间不低于10秒。
对于比较弯曲的面，只按一个用力方向采样。
五指手套检测时将戴上手套的五指同时放入碟中, 双手各采样1次。
3. 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性，采样前应仔细检查每个培养皿
的质量，如发现变质、破损或污染，应剔除。
4. 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不
要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，如无法确认可用显微镜鉴别。
5. 表面微生物测试记录见附表-2，测试报告见附表-3。
五. 各房间具体采样位置：
六. 表面微生物测试时控制标准及定期测定频次见下表：
七
依据《环境检测基准书》VXX的规定进行处理。
八. 该规程的修订、废止
本规程的修订、废止由检验分析责任者起草，经品管部QA会签，由品质总责任者批准。
九. 附表
附表-1：表面微生物各单位具体采样位置
文件编号：
附表-2：（）洁净区微生物测试标准操作规程·记录
文件编号：
附表-3：（）洁净区微生物测试报告
文件编号：。