弧菌科常讲义规检验
第十章弧菌科和气单胞菌科的常规检查
霍乱弧菌的革兰染色
霍乱弧菌米泔样粪便直接涂片镜检
培养和生化反应
பைடு நூலகம்
兼性厌氧，最适生长温度35℃，耐碱不耐 酸，在PH7.4-9.6范围内能生长，尤其在 PH8.8-9.0碱性蛋白胨水或碱性琼脂平板上 生长良好。
营养要求不高，在普通营养琼脂上生长良 好。初次分离时常用碱性蛋白胨水增菌， 由于其他杂菌受到抑制，而霍乱弧菌经6-9 小时可在液体表面大量繁殖，形成菌膜。
抵抗力
对氯、苯酚（石炭酸）、甲酚皂（来苏尔）等消 毒剂敏感，不耐热，65℃ 30分钟即被杀死。 在淡水中生存不超过2日，但在海水中能生存47天 以上，盐渍酱菜中存活30天以上。 耐碱不耐酸，在2%冰醋酸或食醋中5分钟死亡。
对氯霉素敏感，对新霉素、链霉素、多粘菌素、 呋喃西林、吡哌酸中度敏感，对青霉素、磺胺嘧 啶耐药。
如治疗不及时，患者常因肾衰竭和休克而 死亡，若及时补充液体和电解质，则大多 数患者可在数日内恢复。 霍乱弧菌古典生物型所致疾病较Eltor生物 型严重。近年来，由O139群霍乱弧菌所引 起的霍乱暴发流行有上升的趋势，应给予 高度重视。
霍乱病后可获得牢固免疫力，主要是体液免疫。
改善卫生条件，加强水源、食品、粪便的卫生管 理，不生食贝壳类水产品等是预防霍乱弧菌感染 和霍乱流行的重要措施。加强国境检疫。同时有 计划得进行疫苗接种，提高人群免疫力。 及时发现、隔离、治疗患者。治疗的关键是补液， 纠正水、电解质紊乱，预防大量失水导致的低血 容量休克和酸中毒。同时使用有效抗菌药物进行 治疗。
在血琼脂平板上形成的菌落较大，
Eltor生物型可产生β溶血环。 在SS琼脂平板上通常不长，麦康凯 琼脂平板上多可生长。
临床医学检验技术(师)：弧菌科
临床医学检验技术(师)：弧菌科1、单选对霍乱弧菌进行培养，选用的培养基是（）A.SS平板B.EMB平板C.中国蓝平板D.TCBSE.KVL血平板正确答案：D参考解析：霍乱弧菌营养要求不高，在普通琼脂上（江南博哥）生长良好。
初次分离常选用pH8.5的碱性胨水进行选择性增菌培养，常用TC BS、4号琼脂平板、庆大霉素琼脂平板等。
2、单选副溶血性弧菌的致病因子包括（）A.黏附因子B.胞壁C.类脂AD.脂多糖E.蛋白质正确答案：A3、单选对于可疑霍乱感染者，在粪便中霍乱弧菌含量较少时，为增加分离灵敏度，需要对标本进行增菌，取粪便进行碱胨水增菌时，在37℃培养一般至少培养（）A.2～3小时B .4～6小时C.6～8小时D.12小时E.16小时正确答案：C4、单选关于霍乱，错误的是（）A.属于烈性消化道传染病B.人类是霍乱弧菌的唯一易感者C.病愈后，少数病人可长期带菌D.病后的免疫力短暂E.接种霍乱死疫苗可增强人群的特异性免疫力正确答案：D参考解析：患过霍乱的人可获得长久的免疫力，再感染的较为少见。
5、单选关于霍乱的叙述，下列正确的是（）A.传播途径主要是通过呼吸道感染B.只需少量细菌（102~103）即可使人感染发病C.细菌侵入肠上皮细胞和肠腺而损伤肠壁D.霍乱弧菌的O1群和O139群的致病机制与过程是一样的E.致病是通过肠毒素作用于小肠上皮细胞受体引起剧烈腹泻和腹痛正确答案：D参考解析：霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原体，自然情况下，人类是霍乱弧菌的易感者。
正常情况下，胃液中的胃酸可消灭食物中的霍乱弧菌不至于致病，但在胃酸降低或摄入大量的霍乱弧菌，可以通过胃进入肠道。
进入肠道的霍乱弧菌通过鞭毛运动穿过肠黏膜表面的黏膜层，接近肠黏膜上皮细胞，通过菌毛定植。
霍乱弧菌的O1群和O139群的致病机制与过程是一样的。
6、单选一男性病人，43岁，剧烈腹泻水样便伴呕吐1天。
无腹痛，无里急后重。
查体，疲倦面容，皮肤、唇舌干燥，眼窝内陷。
临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第十五章_弧菌科及检验
第十五章弧菌科及检验本章内容一、弧菌属（一）霍乱弧菌（二）O139型霍乱弧菌（三）副溶血性弧菌（四）其他弧菌二、气单胞菌属与邻单胞菌属（一）气单胞菌属（二）邻单胞茵属革兰阴性直杆菌或弧菌有极端鞭毛氧化酶阳性动力阳性发酵葡萄糖弧菌属——分类根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型O1群霍乱弧菌:能被O1群血清凝集但不产生致病毒素；③非O1群霍乱弧菌；④其他弧菌：包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、创伤弧菌、麦氏弧菌和拟态弧菌。
大多数为非病原菌，对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。
霍乱弧菌——生物学特性形态与结构形态：弧形或逗点状，“鱼群状”。
人工培养后呈杆状。
染色：G-。
特殊结构：有菌毛，无芽胞，部分有荚膜。
一端有一根粗而长的鞭毛，悬滴观察可见穿梭样或流星状运动。
·培养特性营养要求：不高，可无盐生长。
气体环境：兼性厌氧。
菌落特征：耐碱不耐酸。
pH8.5的碱性蛋白胨水：培养6～9h，增菌形成菌膜。
碱性琼脂平板：较大圆形扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。
硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）：较大黄色菌落。
亚碲酸钾琼脂平板：还原亚碲酸钾成金属碲，使菌落中心呈灰褐色。
庆大霉素琼脂：形成的菌落中心呈灰褐色。
·抗原·变异性：有形态变异、菌落变异、溶血性变异和毒力变异。
·抵抗力：对热、干燥、日光、酸、消毒剂很敏感。
但耐碱力较强。
霍乱弧菌——微生物检验及鉴定·标本采集：以粪便（米泔水样便）为主，尽可能在用药之前采取。
及时接种适宜培养基。
常用的保存或运送培养基有碱性蛋白胨水、文-腊二氏保存液和卡-布运送培养基等。
·形态学检查：①动力观察：米泔水样粪便悬滴观察可见流星或穿梭状运动的细菌。
②制动试验：加霍乱多价诊断血清后弧菌凝集，运动停止。
③涂片染色：革兰染色，观察革兰染色阴性呈鱼群状排列的弧菌。
霍乱弧菌实验室检验技术
一、霍乱概述 二、霍乱病原学 三、霍乱弧菌常规检验 四、霍乱弧菌的快速诊断 五、霍乱弧菌的噬菌体-生物分型 六、霍乱菌株的管理、保存与上送
2024/1/3
一、霍乱概述
霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌 （V．cholerae）引起的急性肠道传染 病，发病急、传播速度快、波及范 围广、危害严重的甲类传染病。
2024/1/3
必须注意同一样品中O1、O139群霍乱弧 菌可能同时存在，有必要对所有选出的 菌落都进行凝集试验。
提倡所选菌落先经纯培养后再作相关鉴 定，除非情况特殊，一般不提倡直接使 用疑似菌落作玻片凝集。尤其对于TCBS.
如从分离培养基上直接挑取单个菌落进 行血清凝集试验，可能会有假阴性或假 阳性的出现，应谨慎判断结果，特别是 外环境样品。
挑取可疑菌落作玻片凝集
– 与O1群多价和单价血清作玻片凝集反应 – 与O139群抗血清做凝集反应
2024/1/3
血清鉴定：自分离培养基上挑取可疑菌 落与01群霍乱弧菌多价/单价诊断血清及 0139群霍乱弧菌诊断血清做玻片凝集试 验。玻片凝集用血清的效价一般应为 1∶40～1∶50。如可疑菌落在血清中很 快(一般在10s内)出现肉眼可见的明显凝 集，在生理盐水中不凝集者判为阳性。 可疑菌落较多时，应挑选5个以上的菌落 逐个进行玻片凝集检查，必要时，取原 划线菌落边缘透明部分再做玻片凝集， 均为阴性时方可报告未检出01群及0139 群霍乱弧菌。对首发病例菌株需送上一 级实验室做进一步鉴定或复查。
强调在选择培养上发现疑似菌后，首先 考虑进行01/0139群霍乱弧菌的玻片凝集 试验。必须从平板上各挑取5个以上的 （少于5个的全部挑取）疑似菌落进行 01/0139群霍乱弧菌玻片凝集试验。
不同类型的平板上，菌落形态有不同的 特征-----选择你最有把握的。
弧菌属常规鉴定
弧菌属常规鉴定:弧菌属分类上归弧菌科.生物学特性::革兰氏阴性菌,直或弯曲.月牙形大部分菌种为兼性厌氧.氧化酶实验为阳性.具有鞭毛.运动活泼如穿梭状.常规鉴定分两步:与相近的菌属鉴别.定属后在做种的鉴定一,与相似的菌属的区别:弧菌属的弧菌科,同科中有气单胞菌属,邻单胞菌属,均为氧化酶阳性,F,弧菌与其的区别,可依嗜血性,甘露醇,氧化酸盐O/129敏感性的区别见表:弧菌科3个菌属特性的鉴别特性气单胞菌属邻单胞菌属弧菌属甘露醇+ - +/-鸟氨酸- + +/-精氨酸+/- + +/-嗜血性- - +/-O/129敏感R R S弧菌属的鉴定:目前我院临床细菌室对霍乱弧菌的鉴定,一般的作初步鉴定,方法如下:1.直接涂片:2.悬滴检查:取患者粪便做悬滴标本(亦可用压滴法),检查细菌的动力,呈极活泼的穿梭性运动,O1型霍乱血清制动试验阳性,可做早期推测性报告.3.染色检查:取米泔样粪便的酶化物,黏液部分涂片,干燥后用乙醇固定,分别用革兰氏染液1/10稀释的石炭酸副虹染色,干后,油镜镜检,观察有无革兰氏阴性,呈鱼群排列的弧菌,涂片检查,只能做初步参考,不能作确诊依据.4.玻片凝集试验:自分离平板上挑取可疑菌落,与霍乱多价诊断血清(既O1群霍乱多价血清),做玻片凝集试验,所用血清效价应在1/80~1/160之间,如过浓,则稀释后再做凝集.将稀释的血清滴加在清洁的玻片上,挑取可疑菌落混匀于血清中,即刻(一般不超过10S),可见肉眼可见的明显凝集为阳性菌落应以出现销价对照,应不发生血凝为了提高阳性率应多挑取可疑菌落进行涂片凝集试验.做初步鉴定试验后将此疑似菌退卫生防疫站做最后鉴定.[编写者]:日期[科主任签字]:。
检验微生物学 弧菌科
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霍乱弧菌
致病物质
*霍乱肠毒素
A亚单位 活性亚单位 ctxA
B亚单位 ctxB
与受体结合，介导A亚单位进入细胞
1A+5B
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霍乱弧菌
致病机理
B亚单位与小肠粘膜上皮细 胞GM1神经节苷脂受体结 合，介导A亚单位进入细胞
A亚单位裂解为A1和A2两条多 肽，A1亚单位发挥毒性作用
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霍乱弧菌
致病机理 A1
庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）
同双洗
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霍乱弧菌
生化反应
迟发酵
霍乱红
+
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霍乱弧菌
抗原结构与分型
Ｏ抗原 耐热(100℃2h不被破坏) 特异性高，具有群特异性和型特异性， 是霍乱弧菌分群和分型的基础
Ｈ抗原 不耐热 弧菌属共同抗原，特异性低
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霍乱弧菌
分群、型
O抗原是霍乱弧菌分群和型的基础
血清型 小川型（AB） 稻叶型（AC） 彦岛型（ABC）
A抗原 + + +
B抗原 + +
C抗原 + +
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霍乱弧菌
生物分型：二个生物型
O1群根据生物学特性上的差异分为两个生物型
鉴别试验 50U/片多粘菌素B 鸡红细胞凝集试验 羊红细胞溶血试验
V-P Ⅳ组噬菌体裂解 Ⅴ组噬菌体裂解
古典生物型 S + -
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霍乱弧菌 霍乱弧菌常用培养基
碱性蛋白胨水
增菌６-９ｈ，液体表面大量繁殖形成菌膜
碱性琼脂平板
圆形、较大、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落
硫代硫酸钠-枸櫞酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）
2017年主管检验技师考试微生物检验讲义第15章弧菌科及检验
弧菌科及检验弧菌科共同特点是一群氧化酶阳性、具有极端鞭毛、动力阳性、发酵葡萄糖的革兰阴性直或微弯的杆菌。
弧菌科包括4个菌属，即弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和发光杆菌属。
前三属细菌均可引起人类感染，发光杆菌属对人无致病性。
弧菌属极端鞭毛、甘露醇、脂酶、生长需要NaCl、对O129敏感五项为＋＋＋＋＋，气单胞菌属为－＋＋－－，邻单胞菌属为－－－－＋，发光杆菌属为－－＋/－＋＋。
一、弧菌属弧菌属的细菌分布广泛，以水中最多。
世界卫生组织腹泻病控制中心根据细菌的抗原性、生化特性、DNA同源性、致病性和耐盐性等将弧菌分为四类：①O1群霍乱弧菌；②不典型O1群霍乱弧菌；③非O1群霍乱弧菌；④其他弧菌。
最后一类包括副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河弧菌、创伤弧菌、麦氏弧菌和拟态弧菌。
本属菌共有100余种，大多数菌种为非病原菌，对人类致病的主要有霍乱弧菌和副溶血性弧菌，分别引起霍乱和食物中毒。
（一）霍乱弧菌霍乱弧菌是霍乱的病原菌，该病为一种急性烈性肠道传染病，发病急，传染性强，死亡率高。
1.生物学特性（1）形态染色：本菌呈弧形或逗点状，大小为（1.4～2.6）μm×（0.5～0.8）μm。
新分离的菌株形态典型，经人工培养后易失去弧形而呈杆状。
无芽胞有菌毛，有些菌株有荚膜。
一端有一根粗而长的鞭毛，运动活泼。
取患者米泔水样粪便作悬滴观察，可见该菌呈穿梭样或流星状运动。
液体培养物滴片染色镜检，可见排列如“鱼群状”革兰阴性弧菌。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，耐碱不耐酸。
常选用pH8.5的碱性蛋白胨水增菌培养，以抑制其他细菌生长，有利于本菌的繁殖，可在无盐环境生长。
在碱性蛋白胨水中，经37℃培养6～9h，在液体表面大量繁殖形成菌膜，可达快速增菌的目的。
在碱性琼脂平板上，经培养18～24h，形成较大、圆形、扁平、无色透明或半透明似水滴状菌落。
在硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS）上，形成较大黄色菌落。
10第十章 弧菌属检验、气单胞菌属检验
唑巴坦、头孢唑啉、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢他啶、亚胺培南、 美罗培南、氯霉素、四环素、环丙沙星(ciprofloxacin)、氧氟沙 星、阿米卡星、庆大霉素、磺胺甲基异噁唑
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第二节 气单胞菌属
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一、临床意义
水中的常居菌，是夏季腹泻的常见病原菌。临床症状从较温 和的腹泻到严重的痢疾样腹泻（血样便），在成年人表现为慢性 化。致腹泻的气单胞菌可产生肠毒素，此肠毒素不耐热，加热 60℃30min即可失去活性。肠毒素分为细胞溶解性、细胞毒性和 细胞兴奋性三种。气单胞菌致病并非由单一的致病因子完成,而 是由多种致病因子协同作用的结果：侵袭和黏附因子是菌体进入 和定植于宿主体内的前提条件；菌体表面成分保护菌体在体内增 殖、扩散；多种胞外毒素因子等的协同作用使机体最终受损,导 致疾病的发生
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二、生物学特性
2．副溶血性弧菌
嗜盐性，培养基以含3%NaCL适宜，无盐不能生长。在 血平板（含羊、兔、马等血液）不溶血或只产生α溶血； 在含高盐（7%）的人O型血或兔血以D-甘露醇作为碳源的 Wagatsuma琼脂平板上可产生β溶血，称为神奈川现象（ Kanagawa phenomenon, KP）
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三、微生物学检验
2．副溶血性弧菌
粪便或呕吐物等标本接种分离或鉴别培养基，在分离菌落 上进行氧化酶试验、O-F试验（氧化-发酵试验），氧化酶阳性 、O-F试验发酵，进行弧菌科生化反应（弧菌科编码）。编码结 果为副溶血性弧菌，予以直接报告
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