DNA的提取和分离
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
DNA和RNA提取方法及原理
DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法及原理：1.酚/氯仿法：酚/氯仿法是最常用的DNA提取方法之一、其原理是通过酚类物质将细胞质膜破坏，使DNA从细胞内溶解出来，然后利用氯仿的重度稠化剂作用，将DNA上层的蛋白质、脂类等杂质与下层的DNA分离。
2.盐溶液法：盐溶液法是一种温和的DNA提取方法，适用于多种植物和动物样品。
其原理是将样品细胞裂解后，加入高浓度盐溶液中，通过离心分离出DNA上层液相。
3.硅胶柱法：硅胶柱法是一种高效纯化DNA的方法，可去除杂质并提高DNA的纯度。
该方法利用硅胶柱对DNA进行吸附，去除杂质，然后通过洗脱得到纯净的DNA。
这种方法常用于分离较小的DNA片段。
4.酶解法：酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，通过特定的酶切酶对细胞膜进行消化，将DNA释放出来。
常用的酶解酶有蛋白酶K和蛋白酶E等。
RNA提取方法及原理：1.酚酸法：酚酸法是最常用的RNA提取方法之一、它基于RNA和DNA的相对稳定性差异，利用酚酸破坏细胞膜、沉淀RNA，然后利用酚酸与蛋白质和DNA 形成复合物，分离RNA。
2.硅胶柱法：硅胶柱法也适用于RNA提取。
与DNA的硅胶柱法不同的是，RNA在硅胶柱上结合后会进行一系列的洗脱步骤，除去污染物。
该方法能有效去除DNA、蛋白质、盐和其他杂质。
3.离心收集法：离心收集法是一种简便、快速的RNA提取方法。
根据RNA在水相中的溶解性，通过离心将细胞裂解液中的RNA分离出来，然后加入酒精沉淀纯化。
4.硅酸盐法：硅酸盐法是一种特异性较高的RNA提取方法，通过利用试剂中的硅酸盐吸附RNA，并在洗涤步骤中去除杂质，从而得到纯净的RNA。
提dna步骤及原理
提dna步骤及原理DNA提取是一种分离纯化DNA的过程，它可以用于分子生物学的各种实验和研究。
以下是DNA提取的步骤及原理：步骤1：细胞破碎首先，需要将目标细胞破碎以释放DNA。
这可以通过机械方式（如刮取细胞）或者化学方式（如孵育细胞在酶溶液中）来完成。
破碎细胞的目的是破坏细胞膜和核膜，释放DNA。
步骤2：细胞溶解接下来，要将破碎细胞中的蛋白质和其他细胞组分溶解。
这可以通过加入表面活性剂（如SDS）来破坏蛋白质的结构，使其变为可溶解状态。
细胞溶解的目的是除去蛋白质和其他细胞成分，保留DNA。
步骤3：蛋白质沉淀通过加入盐类，可以使DNA溶液中的蛋白质形成沉淀。
盐类中的离子与蛋白质形成复合物，使其聚集在一起并沉淀到溶液底部。
这一步的目的是除去大部分蛋白质，净化DNA溶液。
步骤4：DNA沉淀将溶液中的DNA沉淀到管壁上，可以通过加入酒精或其他有机溶剂来实现。
这些溶剂改变了DNA溶液的物理性质，使DNA变得不溶于水而沉淀。
这一步的目的是分离纯化DNA。
步骤5：洗涤和纯化DNA最后，通过洗涤沉淀的DNA，可以除去残留的盐类和其他杂质。
洗涤可以使用乙醇或其他缓冲液。
洗涤后，可以用缓冲液溶解DNA并进一步纯化。
DNA提取的原理是基于DNA和其他细胞成分的物理和化学特性的差异。
其中，细胞破碎和溶解步骤破坏了细胞膜和核膜，并释放了DNA。
蛋白质沉淀和DNA沉淀步骤利用了盐类和有机溶剂对不同分子的溶解性差异，将蛋白质和DNA分离。
洗涤步骤则进一步清洁和纯化DNA。
整个过程旨在从复杂的细胞混合物中分离纯化出DNA，以便在后续实验中进行分析和应用。
DNA的粗提取和分离
（二）、DNA的鉴定原理 ① DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色， 因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 ②甲基绿 （绿色）
利用该特点，选择适当的盐浓度就能
使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相
反，以达到分离的目的。 DNA不溶于酒精，但细胞中某些蛋白
质则溶于酒精。利用这一原理，可以将
DNA与蛋白质进一步地分离。
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋 白，从而使提取的DNA与蛋白质分开； 方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性 的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离.
2、 DNA的鉴定 鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的 浓度为2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管 中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯 胺4ml 试剂。混合均匀后，将试管置于沸 水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试 管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶 液是否有蓝色．
与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等 条件要敏感得多，很容易失活；并且蛋白质的空
间结构多种多样，理化性质各不相同，使得蛋白
质的提取没有一种统一的方法，只能根据特定蛋 白质的特性摸索提取的条件，设计特定的方法。
三、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、 鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、 豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆 菌。（从中选取2～3种实验材料）
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的 某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原 理，可以将DNA与蛋白质进一步分离 3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响
②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高 温，而DNA在80°C以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂 质和蛋白质,但对DNA没有影响
DNA的提取方法
DNA的提取方法DNA提取是在分子生物学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
DNA提取的目的是获取足够纯净的DNA样本，以供后续实验和分析使用。
这篇文章将介绍几种常用的DNA提取方法。
1.高盐法：高盐法是最常用的DNA提取方法之一、它通过加入高盐浓度的缓冲液来破坏细胞膜并释放DNA。
首先，待提取的细胞或组织样本被收集并转移到离心管中。
接下来，加入裂解缓冲液，通常含有高浓度的盐并对抗离子泵，从而使细胞膜破裂并释放DNA。
裂解后，使用酒精或酚/氯仿萃取法来分离DNA与其他细胞组分。
最后，通过旋转沉淀法或乙醇沉淀法从溶液中提取DNA。
2.CTAB法：CTAB法是一种适用于植物和真菌等高纤维、低DNA含量的样品提取方法。
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为一种阴离子表面活性剂，可以结合在DNA和脂质上，并形成沉淀，从而使DNA分离出来。
首先，样本被粉碎并浸泡在CTAB缓冲液中，含有CTAB、盐和EDTA等。
接下来，DNA与其他细胞组分一起沉淀，通过聚乙二醇进行沉淀，并通过离心分离。
然后，洗涤DNA沉淀并通过乙醇沉淀法或旋转沉淀法提取DNA。
3.柱式纯化法：柱式纯化法是一种用于高质量DNA提取和纯化的流程。
该方法基于DNA与硅胶膜吸附和洗脱的原理。
首先，细胞或组织样品经过裂解后，溶液经过去蛋白酶和去RNA酶处理。
然后，将样品通过柱子，DNA与硅胶膜相互作用，并形成强烈的结合，同时其他细胞组分被清除。
接着，使用洗涤缓冲液去除杂质，最后使用低盐缓冲液来释放DNA。
这种方法可以提供高纯度的DNA样本，适用于大规模DNA提取和高通量分子生物学实验。
4.磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的DNA提取方法。
该方法使用特定大小和表面修饰的磁性珠子将DNA选择性地吸附到表面上。
首先，待提取的细胞或组织样本被裂解，并加入磁珠和DNA结合缓冲液。
接下来，通过磁力将磁珠与DNA结合物分离出来，并洗涤去除杂质。
最后，通过低盐缓冲液将DNA释放出来并收集。
DNA的分离制备
DNA的分离制备
不同来源的DNA分子，由于分子量、形状及细胞定位的不同提取的方法也不尽相同。
一、酚抽提法
以含有EDTA、SDS及RNA酶的裂解缓冲液裂解细胞，经蛋白酶K处理后，酚抽提DNA。
EDTA 可以抑制DNA酶的活性，还可降低细胞膜的稳定性；SDS为阴离子去污剂，可降解细胞膜和乳化脂质及蛋白质；蛋白酶K可水解蛋白质，消化DNA酶和细胞中的蛋白质；RNA酶降解RNA;酚使蛋白质变性或变成不溶性物质，经离心后沉淀，但由于酚不使核酸变性，所以核酸溶解在水相溶液中，加入氯仿后，能加速有机相与液相的分层，从而达到抽提DNA的目的。
二、甲酰胺解聚法
甲酰胺是一种离子化溶剂，既可以裂解蛋白质与DNA的复合物，还可使释放的蛋白质变性。
裂解细胞及水解蛋白质(方法同酚抽提法)后，使用高浓度的甲酰胺裂解DNA与蛋白质的复合物，再通过火棉胶袋的充分透析以除去蛋白酶和有机溶剂。
此方法操作步骤少，适用于大于200kb的大分子量DNA片段的提取。
三、玻棒缠绕法
以盐酸胍裂解细胞，基因组DNA沉淀于细胞裂解液与乙醇液的交界面，将沉淀的DNA缠绕于带钩玻棒上，并转移到pH值8.0的TE溶液重溶。
适用于大约80kb
的DNA片段的制备。
DNA提取方法和步骤
DNA提取方法和步骤一、常见的DNA提取方法：1. 酚/氯仿法（Phenol/Chloroform Extraction）：通过使用酚/氯仿等有机溶剂来分离DNA分子。
2. 盐水法（Salting out）：通过使用高盐浓度来析出DNA分子。
3. 硅胶柱法（Silica-based purification）：通过与硅胶矩阵相互作用，从混合溶液中纯化DNA。
4. 高盐法（High salt method）：通过使用高盐浓度来沉淀DNA。
5. CTAB法（Cetyltrimethylammonium bromide method）：通过使用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）来分离DNA。
二、通用的DNA提取步骤：1.样本收集：从所需生物体（如植物组织、动物组织、血液等）中收集样本。
样本的品质对提取后的DNA质量影响很大，因此需要保证样本的新鲜度和完整性。
2.细胞破碎：将收集到的样本进行细胞破碎，使DNA从细胞的内部释放出来。
这可以通过机械方法（搅拌、刮擦等）、溶解酶或离心等方法来实现。
3. 除去蛋白质和RNA：加入蛋白酶等酶解蛋白质，使其降解分解。
同时，也可以加入RNase酶降解RNA，以免在提取过程中受到污染。
4.DNA沉淀：加入盐溶液以增加DNA的溶解性，然后加入酒精来沉淀DNA分子。
酒精的加入可以调节盐溶液中Na+和DNA的酒精沉淀剂（如异丙醇或乙醇）的比例，从而沉淀出DNA。
5.洗涤：将沉淀下的DNA溶于适当的缓冲液中，以去除沉淀剂、盐等杂质。
6. 保存：最后，将DNA保存在适当的缓冲液中，如TE缓冲液（Tris-EDTA），并在低温下存储。
三、酚/氯仿法DNA提取步骤：1.细胞破碎：将细胞或组织加入到含有裂解缓冲液的试管中，使用机械方法（高速离心、搅拌等）或酶解来破碎细胞膜。
2.调整pH值：加入适量的酚/氯仿溶液，并快速倒转试管数次，使试管中的溶液充分混合。
酚会与细胞残渣中的蛋白质结合形成亲水性复合物，而氯仿可以帮助去除蛋白质。
DNA提取原理和方法
DNA提取原理和方法样本处理是DNA提取的第一步，主要目的是将样本处理成适合提取DNA的形式。
不同的样本需要不同的处理方法。
例如，从动物组织中提取DNA时，可能需要粉碎组织样本，使得细胞更容易破碎，从而释放DNA。
而从细菌培养液中提取DNA时，则需要先离心去除其他细胞组分，然后使用溶解酶破坏细胞壁。
细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一、细胞破碎的目的是释放DNA分子，使其能够在后续步骤中被分离和纯化。
常见的细胞破碎方法包括机械破碎、化学破碎和酶解破碎。
机械破碎是使用物理力量（例如，搅拌、磨碎、超声波等）来破坏细胞壁，从而释放细胞内的DNA。
化学破碎是使用化学物质（例如，洗涤剂、酸、碱等）来破坏细胞壁和细胞膜，从而释放DNA。
酶解破碎是使用特定酶（例如，蛋白酶、胰酶等）来降解蛋白质和核酸，从而破碎细胞。
核酸纯化是DNA提取的核心步骤，其目的是将DNA与其他细胞组分（如蛋白质、RNA、杂质等）分离。
核酸纯化的方法有很多种，常见的包括酚-氯仿提取法、离心柱纯化法和磁珠纯化法。
酚-氯仿提取法是最常用的DNA纯化方法之一、该方法先使用酚提取样品中的核酸，然后使用氯仿去除蛋白质。
离心柱纯化法是使用离心管柱进行分离和纯化，其中DNA结合到离心柱上的固相载体上，而其他细胞组分则被洗脱。
磁珠纯化法是使用表面被修饰的磁珠与DNA结合，并使用磁场来分离和纯化DNA。
DNA提取完成后，需要对提取得到的DNA进行测量。
DNA的浓度和纯度测量是判断DNA质量的重要指标。
常用的测量方法包括比色法、荧光分光光度法和凝胶电泳法。
比色法是使用特定的染料与DNA结合，并通过比色读数来测量DNA的浓度。
荧光分光光度法是使用荧光分光光度计来测量DNA与DNA结合染料的荧光强度，进而计算DNA浓度。
凝胶电泳法是将DNA经过电泳分离，然后使用负载荧光染料或核酸染料在凝胶中可视化DNA，从而判断其浓度和纯度。
总之，DNA提取是从生物样本中分离和纯化DNA的重要步骤。
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1.(2014· 江苏，16)下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的
叙述，错误的是( C ) A.酵母和菜花均可作为提取DNA的材料
B.DNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水 C.向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒上有白色絮状物 D.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝
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质。其原理是DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质却 可以溶于酒精溶液，可以推测溶于酒精中的物质可能 有 蛋白质、脂质 。
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(4)一般DNA的鉴定试剂为二苯胺，沸水浴后溶液中有DNA则
颜色为蓝色。
加蒸馏 ②加到含DNA的2 mol/L的NaCl溶液中，使
水2次
NaCl溶液的物质的量浓度下降到0.14
mol/L，使DNA析出
用纱布
过滤3次
①过滤血细胞破裂液，得到含细胞核物质的滤液； ③过滤溶有DNA的2 mol/L的NaCl溶液 ①加2 mol/L的NaCl溶液，溶解提取的细胞核物质； ②用0.14 mol/L的NaCl溶液使DNA析出； ③用2 mol/L的NaCl溶液，溶解滤取的DNA黏稠物；
②滤取0.14 mol/L的NaCl溶液中析出的DNA(黏稠物)；
用NaCl
溶液4次
④用2 mol/L的NaCl溶液，溶解丝状物用于鉴定
DNA
要语强记
1.DNA在NaCl溶液中的溶解度随着NaCl溶液浓度的改变而改
变，在物质高考 明确考向
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5.下列操作中，对DNA的提取量影响较大的是( ②搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动
①使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，释放出DNA等核物质 ③在析出DNA黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠
C
)
物不再增多
④在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放 入冰箱中冷却 ⑤在DNA的溶解和再溶解时，要充分搅拌 A.①②④⑤ B.①②③④ C.①③④⑤ D.②③④⑤
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13. 自 1973 年博耶和科恩成功地使外源基因在原核细胞中表
达开始，基因工程正式问世了，人们对 DNA 的关注也越来
越多。分析并回答下列问题：
(1)从生物组织中提取DNA时，若要获取含有DNA的滤液， 需破碎细胞；若为鸡的成熟红细胞，可以加入一定量的蒸馏 水，原因是细胞 吸水膨胀而涨破；若为植物细胞可以加入一 定量的洗涤剂。
题组一 DNA的粗提取与鉴定过程分析
解题探究
1.“DNA的粗提取与鉴定”实验中，操作正确的是(
c
)
A.取制备好的鸡血细胞液5～10 mL注入烧杯中，迅速加入物质的量浓度 为0.14 mol/L的NaCl溶液20 mL，同时用玻璃棒沿同一方向快速搅拌5 min， 可使血细胞破裂，释放出DNA B.整个DNA提取过程中，两次加蒸馏水的目的都是为了降低溶液中NaCl 的浓度，使DNA分子的溶解度达到最低，析出DNA分子 C. 整个 DNA 提取操作中，两次加入 2 mol/L 的 NaCl 溶液，目的都是使 DNA尽可能多地溶解在NaCl溶液中 D.DNA鉴定操作中，只要向溶有DNA的NaCl溶液中加入4 mL的二苯胺 试剂，即可出现蓝色
2. 做 DNA 粗提取和鉴定实验时，实验材料用鸡血而不用猪
血的原因是(
A.鸡血的价格比猪血的价格低
B.猪的成熟红细胞没有细胞核，不易提取到DNA
B
)
C.鸡血不凝固，猪血会凝固
D.用鸡血提取DNA比用猪血提取操作简便
归纳提升
DNA的粗提取与鉴定实验中的“2、3、4、5”
①加到鸡血细胞液中，使血细胞吸水涨破；
DNA的提取和分离及鉴定
知识梳理
1.DNA的粗提取与鉴定 (1)基本原理
0.14mol/LNaCl
二苯胺
酒精
(2)操作流程 材料的选取：选用 DNA 含量相对较高的生物组织 ↓ 破碎细胞(以鸡血为例)：鸡血细胞→加 蒸馏水→用玻璃棒搅 拌→用纱布过滤→收集滤液 ↓ 通过控制NaCl溶液的浓度去除杂质
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4.下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其 作用，表述正确的是( C ) 试剂 操作 作用
A 柠檬酸钠溶液
B C 蒸馏水 蒸馏水
与鸡血混合
与鸡血细胞混合 加入溶解有DNA的NaCl中
防止DNA凝固
保持细胞形状 析出DNA丝状物
D
冷却的酒精
过滤后的DNA加入其中 产生特定的颜色反应
去除杂质：利用DNA在 不同浓度的NaCl溶液 中溶解度不同，
↓
DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等
的、冷却的体积分数为95%的 酒精 溶液
↓
DNA的鉴定：在溶有DNA的溶液中加入二苯胺试剂，混合
均匀后将试管在沸水中加热5 min，溶液变 成 蓝色
思维诊断 (1)进行DNA粗提取和鉴定实验时，加入洗涤剂后用力进行 快速、充分的研磨(2013· 江苏，4A)( × (2012· 江苏，18A)( × ) ) ) (2)洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度 (3)将制备的含有DNA的滤液加入60～75 ℃的恒温水浴箱中 保温10～15 min，可以将DNA析出( ×
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(2) 利用DNA 和 RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方
面的差异，可以将它们分离。如 DNA 的溶解度在 NaCl 溶液
浓度为 0.14 mol/L 时最小，可以使DNA与其他杂质初步分离。
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(3)为了纯化提取的DNA，可以用95%的酒精去除滤液中的杂