人外周血单个核细胞分离液说明书
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。
下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。
- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。
- 为实验准备足够数量的外周血样本。
2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。
- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。
3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。
- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。
4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。
5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。
- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。
- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。
6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。
- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。
- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。
请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。
在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。
同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。
希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。
人外周血单核细胞(PBMC)分离及培养
⑤PBMC所在细胞层为白色。此时可以用吸管将该层细胞吸取在另一干净的15ml离心管中。
⑥加入PBS至10-15ml，1,500rpm，10min离心后去掉上清，再加入培养基进行相同操作的清洗；
⑦加入5-10ml培养基重悬细胞，进行后续计数培养或者铺板；
⑧细胞冻存：将细胞离心收集之后，用细胞冻存液重悬。取1-1.5ml细胞至冻存管中，放入冻存盒（冻存盒可事先在4℃冰箱预冷）。再将冻存盒放置于-80℃冰箱过夜。第二天将细胞转入液氮中长期保存。
双抗P/S （Penicillin/ Streptomycin) (GIBCO)
二甲亚砜（DMSO）（SIGMA）
预先装好异丙醇的冻存盒
方法/步骤：
①配制所需的溶液：
a. 细胞培养基：RPMI 1640+10% FBS+1% P/S；
b. 细胞冻存液：FBS中加入10%DMSO；
②将10ml全血转入50ml离心管中，加入10ml PBS溶液稀释，轻轻混匀；
PBMC（peripheral blood mononuclear cell），外周血单个核细胞，顾名思义，其主要细胞类型为血液里边具有单个核的细胞，主要包括淋巴细胞（Ｔ＼Ｂ），单核细胞，吞噬细胞，树突状细胞和其他少量细胞类型。其中淋巴细胞占很大一部分。分离ＰＢＭＣ的主要目的是为了将多核细胞和红细胞去除，从而能够很方便地模拟体外的血液免疫环境。
注意事项
全血溶液可以加在Ficoll上层或者下层，但是最终都必须保证两种溶液分层清晰。
分离PBMC第一步离心的时候，一定不能设置或设置低水平的制动。否则将分层混乱。
Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400,000，当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理性渗透压,也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。
人外周血单个核细胞的采集、分离和保存标准
人外周血单个核细胞的采集、分离和保存标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：人外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs）的采集、分离和保存是在医学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
PBMCs是一类具有免疫功能的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞和浆细胞，能够在机体的免疫应答中发挥重要作用。
为了保证试验结果的准确性和可靠性，对PBMCs的采集、分离和保存必须按照相应的标准进行操作。
一、采集1. 选择合适的采集方法：一般常用的采集方法包括静脉抽血和手指取血等，静脉抽血常用于采集较多血液量的情况，手指取血则适用于采集少量血液的情况。
2. 确保采集操作标准化：在采集PBMCs的过程中，应该遵守严格的消毒和无菌操作规程，以防止细菌和病毒的污染。
3. 采集完整的血液样本：为了确保PBMCs的纯度和稳定性，应该尽量避免气泡和血细胞破损导致的RNA降解等情况。
二、分离1. 使用适当的分离方法：一般常用的PBMCs分离方法包括密度梯度离心和磁珠分选等，密度梯度离心适用于分离较大量的PBMCs，磁珠分选则适用于分离特定类型的细胞。
2. 选择合适的分离液：密度梯度离心中一般使用的分离液包括Ficoll和Percoll等，磁珠分选中则需要选择特定的磁珠标记物。
3. 保证分离效率和纯度：在PBMCs的分离过程中，应该确保细胞的分离效率和纯度，避免细胞的损失和杂质的混入。
三、保存1. 选择合适的保存条件：PBMCs的保存条件包括温度、储存液和容器等要素，应该选择适合PBMCs存活的条件进行保存。
2. 快速冻存PBMCs：为了避免细胞的降解和失活，应该在采集和分离PBMCs后尽快将其冻存。
3. 定期监测保存效果：在存储PBMCs的过程中，应该定期监测PBMCs的存活率和纯度，以确保PBMCs的质量和稳定性。
对于人外周血单个核细胞的采集、分离和保存，在操作的过程中应该严格按照相应的标准进行，以确保PBMCs的质量和稳定性，为后续的研究和临床应用提供可靠的基础。
灏洋生物全血单个核细胞分离液说明书
www .tbdscience .com天津市灏洋生物制品科技有限责任公司 本品只能用于科学研究，不能用于临床检测 天津灏洋华科生物科技有限公司 本品于GMP 标准下生产天津市灏洋生物制品科技有限责任公司◆TIAN JIN HAO YANG BIOLOGICAL MANUFACTURE CO.,LTD - 1 -天津滨海高新区华苑产业区（环外）海泰华科一路15号3幢5层技术服务T el: 158****1119 158****1119139****1119◆ QQ:2768676807 ◆E-mail:*********************灏洋生物 TBD sciences 人全血单个核细胞分离液说明书【包装规格】200ml/瓶【实验前准备】1. 适用仪器最大离心力可达1200g 的水平转子离心机2. 抗凝剂的选择在动物实验采血时，很多实验者选择医用真空采血管获得抗凝血，医用采血管中的抗凝 剂只考虑血浆质量，但不利于高纯度细胞分离实验。
为此，天津灏洋特别开发出专利抗凝剂及抗凝管专用于细胞分离，改变使用普通采血管 获得抗凝血分离效果不佳，提取率及纯度低下的不良结果。
3. PBMC 高效离心管（详见PBMC 高效离心管使用说明）【检验方法】全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
首先根据样本量大小，分以下几种情况：一、 使用15ml 离心管时：情况A ：血液样本量小于3ml 时，实验方法如下：1. 取一支15ml 离心管，加入3ml 分离液。
2. 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g ，离心20-30min （注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
3. 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。
第一层为血浆层。
第二层为环状乳白色单个核细胞层。
第三层为透明分离液层。
第四层为红细胞层。
人外周血白细胞分离液使用说明
人外周血白细胞分离液使用说明一、试剂的制备1.将人外周血样品采集入采血管中，并将其与抗凝剂轻轻混匀。
2. 采用无菌条件下，将采集的外周血放入离心管中，以2000 rpm的转速离心10分钟。
3.弃去上清液，保留沉淀，注意不要干扰底部白细胞沉积。
4. 向离心管中加入合适体积的分离液，通常建议将1 ml分离液加入约2 ml外周血样品中。
5. 使用离心机以2000 rpm的速度离心10分钟。
6.弃去上清液，并将其中的底泥转移到新离心管中。
7.向新的离心管中加入平衡液，与底泥充分混匀。
8. 使用离心机以2000 rpm的速度离心5分钟。
9.弃去上清液，并将底泥转移到合适的容器中。
10.向底泥中加入适量的培养基，细胞培养基通常是最常用的培养基。
二、试剂的存储1.试剂储存温度通常在2-8摄氏度之间。
2.开封后的试剂，建议在使用之前将其置于室温下适当回温。
3.试剂一旦开封，应避免重复的冻融循环，以防止对试剂活性造成损害。
4.尽量避免接触光线，以防止试剂活性的降低。
三、使用注意事项1.使用前，请确认试剂是否过期，过期试剂不得使用。
3.使用前，应先将分离液均匀搅拌，以保证其活性。
4.在试剂使用过程中，尽量避免受到湿气和阳光的影响。
5.将待提取的外周血样品严格根据提取方法进行操作，以获得高质量的白细胞。
6.在离心过程中，注意离心管的盖子要盖好，防止离心时离心液的外溢。
7.实验过程中，尽量避免反复提取，以避免对白细胞活性造成损害。
8.在培养细胞的过程中，注意细胞培养基的选择和培养条件的控制，以保证白细胞的健康生长。
四、注意事项1.本试剂仅供科研使用，禁止用于临床诊断等用途。
3.请按照相关实验室安全操作规范进行操作，做好个人防护措施。
4.请勿将试剂倒入下水道或垃圾箱中，应根据相关规定进行处理。
总结：通过以上的使用说明，我们可以了解到人外周血白细胞分离液的使用方法以及使用注意事项。
正确和规范使用试剂可以帮助我们获得高质量的分离液和细胞，进一步推动科学研究的进展。
外周血单个核细胞的分离
外周血单个核细胞的分离
概述
外周血单个核细胞是一种白细胞。
通过分离单个核细胞，可以进行多种分子生物学实验和临床应用。
本文将介绍两种分离外周血单个核细胞的方法。
方法
密度梯度离心
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.将 3 毫升 Ficoll-Paque™ PLUS 加入到 15 毫升离心管中。
3.轻轻加入同等体积的外周血到离心管，保持液面平整。
4.以 400g 的速度离心 40 分钟。
在离心温度达到室温前离心室门不得
打开。
5.用温和的力度将上清液吸出到新的离心管中，并在 1200g 的速度下
洗涤 2-3 次。
6.已经分离的单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程中加入生长
培养基以维持细胞质稳定。
磁性负选择法
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.加入红细胞淋巴细胞分离液，根据厂家指南染色。
3.加入磁性微珠混合液，使单个核细胞与微珠组合。
4.放入磁场中过滤掉未与微珠组合的细胞及其他血细胞。
5.经过多次洗涤和离心，单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程
中加入生长培养基以维持细胞质稳定。
密度梯度离心法和磁性负选择法是分离外周血单个核细胞的两种有效方法。
这些方法对于多种分子生物学实验和临床应用都非常有用。
人外周血中性粒细胞分离液试剂盒使用说明
人外周血中性粒细胞分离液试剂盒使用说明货号：P9040规格：2×200mL/kit保存：18℃-25℃保存，有效期两年。
人外周血中性粒细胞分离液试剂盒易感染细菌，需无菌条件下操作。
无菌条件下操作，启封后常温保存。
如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
试剂盒内容：试剂A200mL试剂C200mL清洗液（赠品）200mL红细胞裂解液（赠品）100mL说明书1份操作步骤：情况A:血液样本小于5mL时，实验方法如下：1.取一支15mL离心管，先加入3mL试剂A后加入2mL试剂C，制成梯度界面。
2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面之上，400-500g，离心20-30min（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。
）3.离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层为单个核细胞，下层细胞为中性粒细胞。
4.用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量的红细胞裂解液，将红细胞裂解，即得目的细胞。
5.将获得的细胞层移至另一15mL离心管中，向所得离心管中加入10mL清洗液，混匀细胞。
6.250g，离心10min。
7.弃上清。
8.用5mL清洗液重悬所得细胞。
9.250g，离心10min。
10.重复7、8、9，弃上清后以0.5mL后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B:血液样本大于等于5mL时，实验方法如下：1.取一支适当的离心管，依次小心加入试剂A、试剂C（试剂A与试剂C体积比为3:2，试剂总量与稀释后的样本量相等），制成梯度界面。
2.将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（最大离心力可至1000g），离心20-30min。
（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需要客户自己摸索，以达到最佳分离效果。
加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。
人淋巴细胞分离液说明书(3篇)
第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。
淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。
本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。
二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。
2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。
3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。
4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。
四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。
2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。
3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。
五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。
- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。
- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。
2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。
- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。
- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。
- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。
- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。
- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。
- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。
六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。
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- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
分离后分离前
水平离心血浆层单个核细胞层分离液层
红细胞层人外周血单个核细胞分离液说明书
货号：P9010/P9011
规格：200mL
产品简介：
本产品是一种用于分离人外周血单个核细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。
外周血中单个核细胞（PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和粒细胞密度较大，为1.090g/mL左右，淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090g/mL，血小板为1.030~1.035g/mL。
为此利用一种密度介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液做密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。
产品指标：
密度
1.077±0.001g/mL 渗透压
290~350mOsm/kg H2O 无菌
0.1μm 滤膜过滤保存条件：
本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期2年。
无菌开封后，保存于室温。
操作步骤：
1.取新鲜抗凝全血（EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝
均可）或者去纤维蛋白血液，用等体积的全血
及组织稀释液或者PBS稀释全血。
2.在离心管中加入适量分离液（当稀释后血液体
积小于3mL时，加入3mL分离液；大于等于3mL，
加入等体积分离液。
但二者的总体积不能超过
离心管的三分之二，否则会影响分离效果），
将稀释后的血液平铺到分离液液面上方，注意
保持两液面界面清晰。
（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。
如果样品较多加样时间较长，在离心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。
）
3.室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（血液的体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳
的分离条件需摸索，离心转速最大不超过1200g）。
4.离心后将出现明显的分层：最上层是稀释的血浆层，中间是透明的分离液层，血浆与分离液之间的白
膜层即为单个核细胞层，离心管底部是红细胞与粒细胞。
5.小心的吸取白膜层细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤白膜层细胞。
250g，离心
10min。
6.弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。
7.重复步骤6
8.弃上清，细胞重悬备用。
注意事项：
A.开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物
污染。
B.分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。
4℃或者是温度较
低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。
C.血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2h以内），为保持单个核细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。
D.稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，大大降
低细胞得率及纯度。
E.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。
F.血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸索最佳
的分离条件。
G.吸取过多的单个核细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增
加；吸取过多的血浆层可能会导致单个核细胞中血浆蛋白及血小板污染。
H.如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。
I.不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提供所需
分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。
参考文献
1.Boyum A.Separation of leucocytes from blood and bone marrow.Scand J Clin Lab Invest
Suppl.1968;97:7.
2.Ting A,Morris PJ.A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood.Vox
Sang.1971Jun;20(6):561-3.
3.Boyum A.Separation of Blood Leucocytes,Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens.1974;
4(4):269-74.
4.Weisbart RH,Webb WF,Bluestone R,Goldberg LS.
A simplified method for lymphocyte separation.Vox Sang.1972;23(5):478-80.。