第5章免疫凝集试验
免疫学实验-凝集试验
免疫学实验-凝集试验实验一凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。
3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。
4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）试管凝集试验以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检血清有多份，对照只需做1份。
2. 被检血清稀释：第1管加入2.3ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水；然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
免疫凝集实验
生物检测作业免疫凝集试验免疫凝集试验颗粒性抗原与相应抗体特异性结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象，成为凝集反应。
直接凝集试验病原菌（如细菌、螺旋体等）颗粒性抗原与相应抗体特异性混合后，在适量电解质存在的条件下，经过一定的反应时间后，出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。
试验中的抗原称为凝集原；抗体称为凝集素常用的实验方法有玻片法和试管法。
1、玻片法：——细菌薄片凝集试验将已知的抗体滴加于洁净的载玻片或凹玻片孔内，自加入待检病原体悬液混合均匀，同时做生理盐水或正常血清对照。
放置室温内数分钟后即可观察实验结果，出现颗粒状凝集者为阳性反应。
优点：其操作简便、迅速，适用于血型鉴定及微生物的菌种鉴定和分型等。
特别是诊断肠道传染病时用于鉴定病人标本中肠道杆菌的感染。
细菌薄片凝集试验：（1）实验目的：该试验用于菌种的鉴定及分型.（2）实验材料：待测菌培养物、已知菌培养物和已知诊断血清（3）实验过程:1.取洁净玻片一张，用蜡笔画为四格。
2.用接种环无菌去诊断血清各两环分别置于第1、3格中。
3.用接种环取生理盐水各两环分别放于第2、4格中。
4.用接种环取已知菌少许放入第2格生理盐水中混匀，随即转移1环于第1格中混匀。
5.同样用灭菌的接种环取待测菌少许放入第4格生理盐水中混匀，然后移一环菌液于第3格中混匀。
灼烧灭菌。
6.结果：已知菌在诊断血清中应出现颗粒状凝集，若待测菌在诊断血清中也出现颗粒状凝集，表明两种菌为同一种或属。
2、试管法：——肥达试验（试管凝集实验）将已知的抗原与系列等比稀释的待检血清在小试管内混合，39℃温育2~24h后观察结果。
生理盐水加抗原作为对照，应用非特异性自凝现象。
以出现明显的颗粒状或絮片状凝集现象的待检血清最高稀释度作为抗体的效价。
试管凝集实验为半定量试验，常用于某病原微生物感染的免疫学诊断，亦可用已知抗体鉴定未知的抗原。
（1）材料：病人血清、肥达实验诊断抗原、生理盐水、试管、吸管、试管架等。
5章凝集反应 Microsoft PowerPoint 演示文稿
相应抗体
玻片法直接凝集反应示意图
(1)半定量试验-抗体效价测定。 (2)玻片凝集试验也可用试管法，如肥达外斐反应。 非特异性凝集可出现假阳性，必须做阴性对照(不加抗体， 只加抗原)。
1
2
3
4
5
6
6
7
1:2 1:4 1:8 1;16 1:32 1:64 1:64 1:128
临床检验中早期妊娠试验，现已被金标法替代。
三、间接血凝试验 间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结 合。常用绵羊、家兔等红细胞。
自身红细胞凝集试验 样本：患者全血(含有红细胞，血清中有待检的抗原或抗)。 试剂：抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接，检测未知抗 原。例如：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
载体颗粒
抗原致敏颗粒
凝集
正向间接凝集反应原理
已知 抗原
无抗体
胶乳 颗粒
载体颗粒
抗原致敏颗粒
无凝集
无相应抗体存在时无凝集现象发生
2.反向间接凝集反应 用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。
已知 抗体
待检 抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
凝集
反向间接凝集反应原理
已知 抗体
无抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
无凝集
待检血清 (RH抗体)
不完全抗体 (RH抗体)
Rh抗原
凝集 现象
Rh＋O型红细胞
抗人球蛋白
间接接coombs试验原理示意图
直接与间接Coombs试验的区别
试验 检测目的
样本
直接 红细胞表面的
医学免疫学 免疫凝集实验
4
血细胞状沉 淀，边 缘凝集 呈颗粒 状
67
无凝集， 无凝集， 血细胞 血细胞 沉于管 沉于管 底呈圆 底呈圆 盘状 盘状
实验结果
试管号 1
2
3
4
5
67
现象
凝集强度 ？ ++++ ++++ +++ ++ — —
结果分析
以血清最高稀释度仍能出现“++”凝集 现象者，作为该免疫血清的效价（滴度） 本次实验中，第5管（1：640）呈“++” 凝集，第6管（1：1280）呈“+”凝集， 对照管为“-”，则该血清效价为1： 640
中央呈较小圆盘状沉淀 稍浑浊 ，边缘凝集呈颗粒状
血细胞呈较大的圆盘状 较浑浊 沉淀，边缘有少量凝集 颗粒
无凝集，血细胞沉于管 浑浊 底呈圆盘状
对1号试管是否凝集的判断——改良
试管号 1
2
3
4
5
6
7
现象
凝集强 度 管底血 细胞
上层液 体
++++
血细胞 呈厚膜 状铺于 管底， 边缘略 不平滑
澄清
++++
浑浊
对1号试管是否凝集的判断——改良
• 用新标准算得的血清效价与之前相 同，仍为1：640
影响因素讨论——前后带现象
前后带现象
凝集反应，是 抗原抗体结合 反应中的一种 。在抗原抗体 特异性反应时 ，生成结合物 的量与反应物 的浓度有关， 只有在抗原抗 体分子比例合 适时才出生现 最强的反应
.
影响因素讨论——前后带现象
临床免疫学检验 课件 第5章 凝集反应
4.协同凝集试验 (coagglutination test )
载体 可溶性抗原
粒颗敏致
用特异性抗原致 敏载体，检测标 本中的相应抗体 的方法。
致敏
NS
待测抗体
结果判读：凝集，阳性(+)。 不凝集，阴性(-)。
粒颗集凝
粒颗集凝 粒颗敏致
载体
已知抗体
＋
致敏
用特异性抗体
致敏载体，检
NS
测标本中的相
? 结果判读： 已知Ab ＋ 未知Ag → 凝集，阳性 (+)。 不凝集，阴性 (-)。
? 方法评价： 特异性强; 简便、快速 ;敏感度低。 ? 应用：ABO 血型鉴定。
细菌的鉴别与分型 。
ABO血型的鉴定
1.已知抗体
抗A
抗B
2.未知抗原 (待检RBC)
3.结果：
凝集
不凝集
4.结论： 受检者血型为：A型
?致敏颗粒（sensitized particle) :吸附有已知抗 原或抗体的颗粒。
粒颗敏致
载体 可溶性抗原 致敏
NS
粒颗集凝
一、常用载体种类及其处理方法
?红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一
般先醛化后应用。
?聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学
活性基团的颗粒。
?活性炭： ?SPA：
? 方法评价：
– 特异性易受影响； 敏感性不高。
? 应用：
– 多用以测定 抗体的含量 （效价、滴度 ）。 –肥达氏反应 、外斐氏反应 、交叉配血试验 。
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
免疫学检验-5-凝集反应
五、凝集反应的类型
• 直接凝集反应。 • 间接凝集反应。 • 其他凝集技术。
第二节 直接凝集反应
（direct agglutination t颗粒性抗原 + 相应抗体 → 肉眼可见凝集块
（细菌，RBC等）
NS
参与反应的抗原称为：凝集原（agglutinogen） ； 抗体称为：凝集素（agglutinin） 。
非特异性凝集可干扰结果的判断：若抗原与抗体并 不对应，但存在非特异性凝集－可导致假阳性结果。
凝集反应和沉淀反应的不同点
不同点
凝集反应
沉淀反应
抗原性质 颗粒性或可溶性抗 原致敏颗粒，呈颗 粒悬液
反应时间 几分钟至十几分钟
稀释对象 稀释抗体
观察现象 凝集块，液体变清
可溶性，大多呈 透明胶状溶液
数小时至数天 稀释抗原 沉淀物
二、发生机制
分两阶段进行。 特异性结合阶段
抗原与相应抗体发生特异性结合。 速度快，不可见。
可见反应阶段－出现肉眼可见特异性凝集。
抗原抗体复合物进一步交联聚集所致。 受到多种因素的影响。
二、发生机制
分两阶段进行。 特异性结合阶段
抗原与相应抗体发生特异性结合。 速度快，不可见。
可见反应阶段－出现肉眼可见特异性凝集。
环境因素：
电解质（生理盐水） 酸碱度：避免酸凝集。 温度：37℃。
抗原与抗体的适当比例
• 易出现抗体过量－前带抑制。
四、凝集反应的应用
抗原（ Ag）或抗体（ Ab ）的定性检测
– 未知Ag（或Ab）＋已知Ab（或Ag）→是否出现凝集 若出现凝集，则表明有相应Ag（或Ab）存在； 若不出现凝集，则表明无相应Ag（或Ab）存在。
• 方法评价：
第5章免疫凝集试验
第五章 免疫凝集试验
凝集反应的发现
• 早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆 菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。--肥 达试验 • 至1903年，Landsteiner在特异性血凝现象的基础上 发现了人类ABO血型，并于1930年获得了诺贝尔医学 奖。 --血型鉴定
玻片凝集试验：常作定性检测。用已知抗体检测未知的颗 粒性抗原，主要用于细菌菌种的鉴定及分型、ABO血型鉴定等 。
试管凝集试验：可作为半定量检测。多用于测定血清中某 种特异性抗体的效价，以协助临床诊断或供流行病学调查；在 用颗粒性抗原免疫动物后，可用该法测定免疫血清中特异性抗 体的效价，判定抗体生成情况。
注：待检标本采用受检者的全血
自身红细胞免疫凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体。 将之与特异性抗原连接，可用于检测标本中的相应抗体 。
注：待检标本采用受检者的全血
第六节 免疫凝集试验的临床应用
重点提示
直接免疫凝集试验的临床应用 间接免疫凝集试验的临床应用
抗原的检测 抗体的检测
一、直接免疫凝集试验的临床应用
采用不同颗粒作为载体的间接免疫凝集试验。 胶乳颗粒凝集试验(LAT)：载体为聚苯乙烯胶乳颗粒 明胶颗粒凝集试验(GAT)：载体为明胶颗粒 炭颗粒凝集试验(CAT)：载体为炭粉微粒 甲苯胺红颗粒凝集试验：载体为甲苯胺红颗粒
第四节 抗球蛋白红细胞免疫凝集试验
重点提示
又称为Coombs试验： 直接Coombs试验 间接Coombs试验
第二节 直接免疫凝集试验
重点提示
直接免疫凝集试验的概念 玻片凝集试验 试管凝集试验
直接免疫凝集试验
直接免疫凝集试验（direct agglutination test）：细 菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下直接与 相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象
医学免疫学：第五章(2) 凝集反应
第五章（2）凝集反应Chapter 15 Agglutination Test第一部分教学内容和要求一、目的要求·掌握：凝集反应的原理、类型及临床应用；熟悉：凝集反应的技术要点、实验影响因素、方法评价、间接凝集常用的载体；了解：凝集反应各阶段的特征。
二、教学内容1。
凝集反应的特点与类型。
2。
直接凝集反应：玻片凝集试验，试管凝集试验。
3。
间接凝集反应：间接凝集反应的类型，间接血凝试验，胶乳凝集试验，间接凝集试验的临床应用。
4．自身红细胞凝集试验。
5．抗球蛋白试验。
第二部分测试题一、选择题（一）单项选择题（A型题）1．直接抗球蛋白实验用于检测A．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体2．玻片凝集实验A．只能检测抗原，不能检测抗体B．既能检测抗原，又能检测抗体C．只能检测抗体，不能检测抗原D．为半定量实验E．不能用于ABO血型鉴定3。
下列哪一项不属于玻片凝集试验A。
菌种鉴定 B。
血清学分型 C。
人类ABO血型鉴定D．定量检测前筛选试验 E。
血清抗体效价测定4.试管凝集试验的效价判断标准是依据出现肉眼可见的如下凝集现象A．“+”B．“+或++”C．“++”D．“+++”E．“++++”5．间接抗球蛋白实验用于检测A．血清中结合的抗体B．血清中游离的不完全抗体C．红细胞表面结合的不完全抗体D．红细胞表面结合的完全抗体E．血清中游离的完全抗体6．协同凝集试验所用的载体是A．新鲜红细胞B．洗涤红细胞C．醛化红细胞D．聚苯乙烯颗粒E．金黄色葡萄球菌7．自身红细胞凝集试验红细胞是A．标准新鲜红细胞B．标准洗涤红细胞C．标准醛化红细胞D．受检者未致敏红细胞E．受检者致敏红细胞（二）多项选择题（X型题）1．实验中,促进凝集现象的措施有A．低温离心 B．增加电解质或蛋白质 C．加入右旋糖酐或葡聚糖D．用胰酶处理 E．加入抗原2。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第二节 直接免疫凝集试验
重点提示
直接免疫凝集试验的概念 玻片凝集试验 试管凝集试验
直接免疫凝集试验
直接免疫凝集试验（direct agglutination test）：细 菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下直接与 相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象
凝集原 agglutinogen 凝集素 agglutinin 玻片凝集试验：定性 试管凝集试验：半定量
原理图
混 合
SPA
IgG
SPA- IgG待测抗原 凝集颗粒
SPA- IgG 待测抗原
二、间接免疫血凝试验
间接免疫血凝试验：以红细胞作为载体的间接免 疫凝集试验。
用已知抗原或抗体致敏红细胞，检测标本中相应 的抗体或抗原。
根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱，以 出现明显凝集的孔为滴度终点。
三、颗粒免疫凝集试验
玻片凝集试验：常作定性检测。用已知抗体检测未知的颗 粒性抗原，主要用于细菌菌种的鉴定及分型、ABO血型鉴定等 。
试管凝集试验：可作为半定量检测。多用于测定血清中某 种特异性抗体的效价，以协助临床诊断或供流行病学调查；在 用颗粒性抗原免疫动物后，可用该法测定免疫血清中特异性抗 体的效价，判定抗体生成情况。
二、间接免疫凝集试验的临床应用
抗原的检测： 用于病原体可溶性抗原的检测：如乙型肝炎病毒表面抗原 ，细菌、腺病毒及流感病毒等的抗原鉴定和细菌可溶性产物如 外毒素等。 用于检测各种蛋白质成分：如尿液绒毛膜促性腺激素、纤 维蛋白原等血浆蛋白成分等。
间接免疫凝集试验的临床应用
抗体的检测： 用于检测细菌、病毒、螺旋体、寄生虫等感染后产生的抗 体：如抗人类免疫缺陷病毒抗体、抗溶血素O、梅毒螺旋体抗 体等。 用于检测自身免疫性疾病的抗体：如类风湿因子、抗DNA 抗体和抗甲状腺蛋白抗体等。 用于超敏反应患者的抗体测定：如青霉素抗体、某些花粉 抗体等。
采用不同颗粒作为载体的间接免疫凝集试验。 胶乳颗粒凝集试验(LAT)：载体为聚苯乙烯胶乳颗粒 明胶颗粒凝集试验(GAT)：载体为明胶颗粒 炭颗粒凝集试验(CAT)：载体为炭粉微粒 甲苯胺红颗粒凝集试验：载体为甲苯胺红颗粒
第四节 抗球蛋白红细胞免疫凝集试验
重点提示
又称为Coombs试验： 直接Coombs试验 间接Coombs试验
第一节 免疫凝集试验的基本原理
是指颗粒性抗原，例如细菌、红细胞、螺旋体、细胞性抗 原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒 后，与相应的抗体（或抗原）在适量的电解质存在的条件 下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集现象。
排斥
抗原
抗原
抗体
抗原
抗原
抗原
抗原
凝集反应的分型
凝集反应
直接凝集反应 间接凝集反应 抗球蛋白试验
注：待检标本采用受检者的全血
自身红细胞免疫凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体。 将之与特异性抗原连接，可用于检测标本中的相应抗体 。
注：待检标本采用受检者的全血
第六节 免疫凝集试验的临床应用
重点提示
直接免疫凝集试验的临床应用 间接免疫凝集试验的临床应用
抗原的检测 抗体的检测
一、直接免疫凝集试验的临床应用
（一）玻片凝集试验
方法评价:
定性试验 简便和快速 敏感度低
应用:
菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定
（二）试管凝集试验
在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合 ，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝 集现象。
试管凝集试验
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
试管凝集试验原理
胶乳：聚苯乙烯胶乳颗粒或羧化聚苯乙烯胶乳颗粒 。性能稳定，保存期长。
炭粉粒子 甲苯胺红颗粒 ......
三、其他
质控物：标准血清、阳性对照血清、阴性对 照血清等
试剂盒应2℃～8℃保存，切勿冻存，使用前 使试剂接近室温(23℃～29℃)，摇匀后使用。
第八节 影响免疫凝集试验的 主要因素
重点提示
抗原因素 抗血清因素 致敏颗粒试剂 血清标本 试验条件
载体 可溶性抗原
致
敏
致敏
颗 粒
NS
凝 集 颗 粒
重点提示
间接免疫凝集试验的类型 正向间接免疫凝集试验 反向间接免疫凝集试验 间接免疫凝集抑制试验 协同免疫凝集试验
间接免疫血凝试验 颗粒免疫凝集试验
胶乳颗粒凝集试验 明胶颗粒凝集试验 炭颗粒凝集试验 甲苯胺红颗粒凝集试验
间接免疫凝集试验的概念
间接免疫凝集试验（indirect agglutination）：将 可溶性抗原（或抗体）预先吸附或偶联于与免疫无关、大 小适当的颗粒性载体表面，使之成为抗原（或抗体）致敏 颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存 在的条件下，可出现肉眼可见特异性凝集现象。
抗原、抗血清、致敏颗粒试剂和血清标本
抗原的种类、数量、共同抗原决定簇、浓度、稀释剂 、温育时间等。
抗体的浓度以及非特异性凝集抗体的干扰。 未致敏的颗粒不应与实验血清起反应，致敏所用的抗 原或抗体要求纯度高，并具有良好的免疫活性。 血清标本宜新鲜、无污染、无溶血。
试验条件
反应时间：不得少于10分钟 温度：室温(23℃～29℃) 酸碱度：一般为6～8 离子强度： 生理盐水 振荡：混匀后应静置 质量控制措施：必须严格按照相应的标准操作程序操作， 同时可利用阴阳对照血清、标准抗原和参考血清设立试验对照 进行室内质量控制。
临床免疫学与免疫学检验
第五章 免疫凝集试验
凝集反应的发现
• 早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆 菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。--肥 达试验 • 至1903年，Landsteiner在特异性血凝现象的基础上 发现了人类ABO血型，并于1930年获得了诺贝尔医学 奖。 --血型鉴定
1. 实验材料：
灭活的伤寒菌液 (7×108/ml), 待测血清
2. 方法：
② 待测血清
① 生理盐水 (ml)
③
灭活的伤 寒菌液
1
0.1 0.09.9ml
0.5ml
2
0.5 0.05.5ml
0.5ml
3
0.5 0.05.5ml
0.5ml
4
0.5 0.05.5ml
0.5ml
5
0.5 0.05.5ml
一、间接免疫凝集试验的类型
（一）正向间接免疫凝集试验：测抗体
间接免疫凝集试验的类型
（二）反向间接免疫凝集试验：测抗原
间接免疫凝集试验的类型
（三）间接免疫凝集抑制试验：可测抗原，也可测抗体
间接免疫凝集试验的类型
（四）协同免疫凝集试验：测抗原，原理与反向 间接免疫凝集试验相似。
所用载体是细胞壁含有A蛋白（SPA）的金黄色葡 萄球菌，SPA具有与IgG（IgG3除外）的Fc段结合的特 性。
0.5ml
弃掉 0.5 6
0.5
0.5ml
抗体稀释度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 对照管
彻底混匀
④
56℃, 1h
结果
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
凝集程度 ++++ +++ ++ + -
管底沉淀 凝集程度
பைடு நூலகம்
最高稀释比例
待测血清的滴度
方法评价：
半定量试验 简便、快速 敏感度低 可有假阳性
临床应用： 肥达试验
外斐试验 交叉配血试验
肥达试验
概念：肥达试验是一种试管凝集反应，最早由肥达（Widal）用于临床，故名。 用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与待测血清作试管或 微孔板凝集实验,以测定血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。 原理：伤寒杆菌有三种抗原：分别为菌体抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原） 、体表抗原（Vi抗原）。其中以O抗原及H抗原的抗原性较强，而Vi抗原的抗原 性不强，且相应抗体效价低且为时短暂，随细菌的消除而消失，故不列为肥达 试验的检测项目。（但其检查有助于发现伤寒带菌者。）当抗原遇到特异性抗 体（抗O及抗H）时，便会发生凝集反应，通过对凝集物量多少来推算病人体内 抗体的多少，以协助诊断、治疗及判断预后。 值得一提的是：由于检查抗体的肥达试验是一种间接诊断试验，故对结果的判 断要综合分析。肥达试验阴性，亦不能排除患伤寒的可能。如有些伤寒患者， 肥达试验始终阴性。
第七节 临床常用免疫凝集试验试 剂方法特点
重点提示
诊断菌液 载体颗粒 其他
一、诊断菌液
菌种应使用标准株，制备菌液时需经无菌试 验证实细菌确已被杀灭，并采用比浊管比浊调整 至所需浓度。
二、载体颗粒
红细胞：最常用绵羊、家兔、鸡的红细胞及O型人红 细胞。醛化红细胞具有较强的吸附蛋白质抗原或抗体的 能力，且可长期保存而不溶血。
一、直接Coombs试验
用于检测结合于红细胞表面的不完全抗体。
二、间接Coombs试验
用于检测游离在血清中的不完全抗体。
第五节 自身红细胞免疫凝集试验
重点提示
自身红细胞免疫凝集试验原理
自身红细胞免疫凝集试验原理
抗人O型红细胞的单克隆抗体。 将之与另一种特异性抗体连接成双功能抗体，可用于检测 标本中相应抗原。
Page 17
外斐试验
变形杆菌属的X19,X2.Xk菌株的菌体O抗原与斑疹伤寒立 克次体和恙虫病立克次体有共同抗原，故可用OX19， OX2，OXk代替立克次体作为抗原与相应患者血清进行交 叉凝集反应，此称外斐试验，辅助诊断立克次体病。 外斐试验采用试管凝集试验法。