基因工程复习
2025年高考生物复习新题速递之基因工程(2024年9月)
2025年高考生物复习新题速递之基因工程（2024年9月）一．选择题（共18小题）1．关于“DNA的粗提取与鉴定”实验，下列说法错误的是（）A．过滤液沉淀过程在4℃冰箱中进行是为了防止DNA降解B．DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸馏水C．粗提取的DNA中含有核蛋白、多糖等杂质D．将粗提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂DNA被染成蓝色2．大肠杆菌经溶菌酶和洗涤剂处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒DNA。
用三种限制酶处理提取的产物，电泳结果如图所示。
下列关于质粒的粗提取和鉴定的叙述不正确的是（）A．提取DNA时可加入酒精，使溶于酒精的蛋白质等物质溶解B．将提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后；可用二苯胺试剂进行鉴定C．电泳鉴定DNA利用了DNA在电场中会向着它所带电荷相反的电极移动的原理D．根据电泳结果，质粒上一定没有限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位点，而有限制酶Ⅲ的切割位点3．某同学拟用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA连接酶为工具，将目的基因（两端含相应限制酶的识别序列和切割位点）和质粒进行切割、连接，以构建重组表达载体。
限制酶的切割位点如图所示，下列分析合理的是（）A．可选择酶3切割质粒和目的基因，再用E.coliDNA连接酶连接B．可选择酶2和酶4切割质粒和目的基因，再用E.coliDNA连接酶连接C．可选择酶2切割质粒、酶4切割目的基因，再用E.coliDNA连接酶连接，连接后的片段仍能被酶2和酶4切割D．为了让重组表达载体的构建合理且高效，可用酶1和酶2切割质粒和目的基因，再用T4DNA连接酶连接4．将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因PinⅡ导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。
如图表示含目的基因的DNA 分子和农杆菌质粒，图中Amp r表示氨苄青霉素抗性基因，Neo r表示新霉素抗性基因，箭头表示识别序列完全不同的几种限制酶的切割位点。
基因工程复习资料
一、名词解释1、Gene engineering：(基因工程)是指将一种生物（供体）的基因转移到另一种生物（受体）中去，创建具有某种新性状的生物新品系并能稳定遗传给后代的一种现代生物技术。
2、GMO(Genetically Modified Organism)：(基因工程体)通过基因工程技术创制出的具有某种新性状的生物新品系。
3、DNA denaturation（DNA变性）:DNA变性是指核酸双螺旋碱基对的氢键断裂，双链变成单链，从而使核酸的天然构象和性质发生改变。
4、exon：（外显子）是DNA 与成熟RNA间的对应区域，是氨基酸的编码区，故又称非隔区。
5、intron:（内含子）是 DNA 与成熟RNA间的非对应区域，是不编码氨基酸的区域，又称间隔区。
6、signal peptide：（信号肽）是指合成多肽链中用于指导蛋白质跨膜转移（定位）的N-末端氨基酸序列。
一般由15-30个氨基酸序列组成。
7、ORF（Open reading frame）：（开放阅读框）从mRNA的5’端起始密码子到3’端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链，称为（ORF）。
8、Restriction enzymes：（限制性内切酶）即指识别双链DNA分子中特异位点并水解磷酸二酯键的核酸内切酶。
核酸内切酶就像一把剪刀，可以对DNA分子进行剪切或切割。
9、Vector:（载体）是指在寄主细胞内能自我复制，并能够作为运输载体，将重组DNA分子转移到寄主细胞的DNA分子。
10、genomic library：（基因组文库）将某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体引入受体菌群体中，从而在寄主细胞中保存和扩增。
11、cDNA文库：指某生物某发育时期的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。
12、EST（Expressed sequence tag）:(表达序列标签)指基因序列中一段能特异地标记或表征基因的序列，通常它含有足够的结构信息以显示出该基因与其他基因的差异，长度一般为100~500 bp。
基因工程复习资料
基因工程复习指导第一章绪论1、基因：就是存在于DNA上承载遗传信息的核苷酸序列，是位于染色体上呈直线排列的遗传物质的最小单位，也是携带遗传信息的结构单位和控制遗传性状的功能单位。
2、基因工程：又称重组DNA技术，分子水平进行遗传操作，将任何生物体（供体）的基因或基因组提出来，或通过人工合成的目的基因，按照先设置好的蓝图，插入质粒或病毒复制子（载体），而形成一杂合分子（DNA重组体），然后将重组体转移到复制子所属的宿主生物体复制，或转移到另一生物体（受体）的细胞内（原核或真核），使之在受体细胞内遗传并使受体细胞获得新的性状。
3、基因工程的三要素：供体、载体、受体4、基因工程的基本流程：（1）DNA的制备包括从供体生物的基因组分离或人工合成，以获得带有目的基因的DNA片段。
（2）在体外通过限制性核酸内切酶分别分离得到的外源DNA和载体分子进行定点切割，使之片段化或线性化（3）在体外将含有外源基因的不同来源的DNA片段通过DNA连接酶到载体分子上，构建重组DNA分子。
（4）将重组DNA分子通过一定的方法引入到受体细胞进行扩增和表达，从培养细胞中获得大量细胞繁殖群体。
（5）筛选和鉴定转化细胞，剔除非必需重组体，获得引入的外源基因稳定高效表达的基因工程菌或细胞，即将所需要的阳性克隆挑选出来。
（6）将选出的细胞克隆的基因进一步分研究，并设法使之实现功能蛋白的表达。
第三章基因工程工具酶1、基因工程中常用的工具酶：限制酶、连接酶、聚合酶、修饰酶2、细菌的限制—修饰系统（简称R—M体系）：细菌中存在位点特异性限制酶和特异性甲基化酶，构成了寄主控制的限制—修饰系统R-M体系说明的问题和作用：R-M系统是细菌安内御外的积极措施。
细菌R-M系统的限制酶可以降解DNA，为避免自身DNA的降解，细菌可以修饰（甲基化酶）自身DNA，未被修饰的外来DNA则会被降解。
个别噬菌体在被降解之前已经发生了修饰，则可免予被降解。
3、限制性内切酶的切割方式（识别哪种末端）（1）平齐末端：（切割位点在识别序列中心轴处）（2）5’黏性末端：（DNA片段末端的5’端比3’端长）梅园复印店打印复印只要一毛打好后送货上门。
2025高考生物总复习基因工程的基本工具和基本操作程序
第54讲基因工程的基本工具和基本操作程序课标内容(1)阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。
(2)阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定等步骤。
(3)DNA的粗提取与鉴定实验。
(4)利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。
考点一重组DNA技术的基本工具1.基因工程概述基因工程的理论基础2.重组DNA技术的基本工具(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”)①将一个基因从DNA分子上切割下来需要切两处，同时产生四个黏性末端或平末端。
②限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。
(2)DNA连接酶①DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。
②DNA聚合酶起作用时需要以一条DNA链为模板，而DNA连接酶不需要模板。
(3)载体构建基因表达载体时，需要选择合适的限制酶切割含有目的基因的DNA片段和载体。
已知限制性内切核酸酶Ⅰ的识别序列和切点是，限制性内切核酸酶Ⅱ的识别序列和切点是，根据图示分析回答下列问题：(1)请用图示法写出限制性内切核酸酶Ⅰ和限制性内切核酸酶Ⅱ切割后形成黏性末端的过程。
提示限制性内切核酸酶Ⅰ：限制性内切核酸酶Ⅱ：(2)切割图示中的目的基因和质粒应选用哪类限制酶？请说明理由。
提示用限制酶Ⅱ切割目的基因，用限制酶Ⅰ切割质粒。
限制酶Ⅰ的识别序列包含限制酶Ⅱ的识别序列，因此限制酶Ⅱ也可切割限制酶Ⅰ的位点，故使用限制酶Ⅱ时，可在目的基因两端同时作切割，从而切出“目的基因”，但若使用限制酶Ⅱ切割质粒，会同时破坏质粒中的两个“标记基因”，故只能使用限制酶Ⅰ切割质粒。
1.限制酶的选择原则(1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。
基因工程复习题及答案
基因工程复习题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然进化答案：B2. 基因工程中常用的载体是：A. 噬菌体B. 质粒C. 病毒D. 所有以上选项答案：D3. 以下哪个不是基因工程中常用的受体细胞？A. 细菌B. 酵母C. 植物D. 动物答案：C4. 基因枪法属于哪种基因转移技术？A. 化学介导法B. 电穿孔法C. 微注射法D. 粒子轰击法答案：D5. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9蛋白的主要作用是：A. 识别目标DNA序列B. 切割目标DNA序列C. 连接DNA片段D. 转录mRNA答案：B二、填空题6. 基因工程的基本操作步骤包括：目的基因的________、________、检测与表达。
答案：提取、重组7. 基因工程在医学领域的应用包括________、________和基因治疗。
答案：基因诊断、基因疫苗8. 在基因工程中，________技术可以用于快速繁殖转基因植物。
答案：组织培养9. 基因工程中，________是将目的基因导入植物细胞的常用方法。
答案：农杆菌介导法10. 基因工程在农业上的应用包括提高作物的________、________和改良品质。
答案：抗病性、抗虫性三、简答题11. 简述基因工程在环境保护方面的应用。
答案：基因工程在环境保护方面的应用主要包括：- 利用基因工程改造微生物，以降解环境中的有毒物质，如石油污染物。
- 通过基因工程改良植物，使其能够耐受重金属污染，从而净化土壤。
- 利用基因工程改造的微生物处理工业废水，减少水体污染。
12. 阐述基因工程在生物制药领域的主要应用。
答案：基因工程在生物制药领域的主要应用包括：- 生产重组蛋白质药物，如胰岛素、干扰素等。
- 利用转基因动物生产药物，如转基因羊产生的抗凝血酶。
- 利用基因工程改造的微生物生产抗生素等药物。
- 开发基因治疗药物，用于治疗遗传性疾病。
基因工程理论课复习整理
基因工程理论复习整理1、基因工程（gene engineering）的定义：在分子水平上进行遗传操作，即将任何生物体（供体）的基因或基因组提取出来，或通过人工合成的目的基因，按照人们预先设计的蓝图，插入质粒或病毒复制子（载体），而形成一杂合分子（DNA重组体），然后将重组体转移到复制子所属的宿主生物体中复制，或转移到另一种生物体（受体）的细胞内（可以是原核细胞也可以是真核细胞），使之能在受体细胞内遗传并使受体细胞获得新的性状。
2、基因工程四大要素：目的基因、载体、工具酶、受体细胞。
3、基因工程特点：分子水平操作，细胞水平表达。
4、基因组DNA提取条件（1）提取DNA总的原则：a保证核酸一级结构的完整性；b其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；c核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；d其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
（2）影响因素①减少化学因素对DNA的降解：避免过碱、过酸对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH 4-10条件下进行；②减少物理因素对DNA的降解：避免强烈振荡、搅拌，细胞突置于低渗液中等操作，以避免破坏大分子量的线性DNA分子；③防止核酸的生物降解：避免细胞内、外各种核酸酶对核酸磷酸二酯键的水解作用，DNA酶需要Mg2+、Ca2+的激活，因此实验中常利用金属二价离子螯合剂EDTA，柠檬酸盐，可基本抑制DNA 酶的活性。
5、细胞的破碎:一般采用温和处理法裂解细胞。
6、沉淀基因组DNA：加入一定量的预冷的异丙醇或乙醇。
7、质粒可分为紧密控制型和松弛控制型，基因工程中一般用到的是松弛控制型。
8、利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在，当两种质粒同时导入同一细胞时，它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争，这种现象称为质粒的不相容性。
9、碱裂解法原理：当用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易发生变性，共价闭环的质粒DNA 在回到中性pH时即恢复其天然构象；变性染色体DNA片段与变性蛋白质和细胞碎片结合形成沉淀，而复性的超螺旋质粒DNA分子则以溶解状态存在液相中，从而可通过离心将两者分开。
基因工程复习(含答案)
基因工程复习题一、名词解释：（10～20%）基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶得Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交：将细胞或组织得核酸固定保持在原来得位置上，然后用探针与之杂交得一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目得基因在细胞或组织中得分布与表达变化。
粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成得两条链错开几个碱基，而不就是平齐得末端。
Northern印迹杂交：将RNA进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交得一种核酸分子杂交技术，可用于检测目得基因得转录水平。
转位：一个或一组基因片段从基因组得一个位置转移到另一个位置得现象。
基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源得DNA与载体DNA连接成为重组DNA，继而通过转化与筛选得到含有目得基因得宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子得过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆与重组DNA等。
目得基因：基因工程中，那些被感兴趣得、被选作研究对象得基因就叫作目得基因。
连接器：人工合成得一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目得基因得两端，便于基因重组中得切割与连接。
转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变得过程。
停滞效应：PCR中后期，随着目得DNA扩展产物逐渐积累，酶得催化反应趋于饱与，DNA 扩增产物得增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。
逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行得PCR反应。
PCR: 即聚合酶链式反应。
在模板，引物，4种dNTP与耐热DNA聚合酶存在得条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间得DNA区段地酶促合成反应。
α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸得核苷酸序列（又称α-肽），该序列不能产生有活性得β-半乳糖苷酶。
基因工程复习资料
第一章一．名词解释1、基因工程:按工程学原理,将外源基因切割,与载体结合，导入受体细胞,使其稳定表达的过程.2、目的基因：开发人们特殊需要的基因产物或与优良性状相关的基因。
3、工具酶：体外进行DNA合成、切割、连接、修饰等过程需要的酶。
4、DNA药物：在受体细胞内表达产物有药理作用或通过定位整合直接抑制致病基因的DNA。
二．基因工程理论依据（1)基因具有相同的物质基础(2)基因可以切割（3）基因可以转移（4）基因与多肽有对应关系(5）基因的密码是通用的（6）基因可以通过复制遗传给下一代三．基因工程研究内容（1）克隆载体的研究（2)受体的研究（3）工具酶的研究（4）目的基因的研究（5）新技术的研究第二章一．名词解释1、DNA变性：DNA在较高温下，双链间氢键断开，形成单链DNA的过程。
2、DNA复性：变性的DNA，降温时恢复为双链DNA的过程。
3、解链温度:让DNA达到50%变性的温度.4、复制子:从复制起点开始复制出一个DNA分子或片段的核苷酸序列。
5、启动子：不转录RNA，是RNA聚合酶的识别结合位点.6、转录区:能转录相应RNA,包括编码区和终止子。
7、操纵子：原核生物中两个以上基共用一个启动子。
8、内含子:真核生物转录区中的非编码间隔序列.9、限制性核酸内切酶:使一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸酶。
10、稀切酶：有较长的识别序列和富含GC或AT的识别序列的限制性核酸内切酶。
11、同裂酶:不同的酶有相同的识别序列。
12、同尾酶：切割不同识别序列产生相同末端的不同酶。
13、黏性末端：两条链断开位置是交错的，叫黏性末端。
14、平末端：两条链断开位置是平齐的,叫平末端。
15、位点偏爱:某些限制酶对同一介质中的有些位点表现出偏爱性切割，即对不同位置的同一个识别序列表现出不同的切割效率的现象称作位点偏爱。
16、酶活单位：限制酶最适条件下60分钟切割1ugDNA所需的酶活性.17、容积活性：1ul酶活单位所具有的酶活性。
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1、用酚—氯仿抽提DNA 时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇，这是因为异戊醇可以防止气泡；分离DNA 时要使用金属离子螯合剂，如EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是抑制了DNase 。
2、按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为严谨型质粒。
和松弛型质粒。
3、λ 噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入Lytic growth 也可以进入Lysogenic state 。
如果其基因组DNA 通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入融源状态。
；它也可以选择进入融菌状态，大量复制并组装子代噬菌体颗粒。
4、ddNTP 与普通的dNTP 的不同之处在于ddNTP 2’和3’双脱氧，它们可以在DNA 聚合酶的作用下，通过其5’掺入到正在增长的DNA 链中，导致链延伸反应终止。
5、Klenow DNA 聚合酶是DNA聚合酶Ⅰ经蛋白酶裂解而从全酶中除去5’—3’外切酶活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。
1、酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞DNA 时，具有两方面的作用，分别为变性剂和抑制了DNase 。
2、Plasmid 能进行自我复制，大多数为双链闭合环状DNA 分子。
3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的，一种叫内切酶，另一种叫修饰酶。
4、反转录酶来自AMV 或Mu－MLV ，即依赖于RNA 的DNA 聚合酶，它有聚合酶活性，但无外切酶活性。
5、末端转移酶来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA 聚合酶，在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP 加于DNA 分子的3' 羟基端。
三、选择题(每小题1.5分，共15分)1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C ）。
A、既可以作用于双链DNA，又可以作用于单链DNA；B、只能作用于单链DNA；C、只能作用于双链DNA；D、只能作用于RNA。
2、下列哪一种酶作用时需要引物( B )。
A、末端转移酶；B、反转录酶；C、DNA 连接酶；D、限制酶。
3、DNA 被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能( D )。
A、蛋白质（如BSA）同DNA 结合；B、有外切核酸酶污染；C、酶失活；D、酶切条件不适合。
4、以下各项中不是PCR 反应所必须的是（D ）。
A、模板和引物；B、dNTP；C、Taq 酶和buffer；D、甘油。
5、关于PCR 技术的叙述，下列哪项是错误的？（B ）A、以DNA 复制为基础而建立起来的技术；B、利用PCR 技术可完全无误地扩增基因；C、反应体系需模板、一对引物、4 种dNTP 、耐热DNA 聚合酶和缓冲溶液；D、以变性-退火-延伸为一周期。
6、以下不是表达载体所必须的条件是（C ）。
A、必须具备很强的启动子；B、必须具备很强的终止子；C、启动子需要受控制；D、所产生的mRNA 必须具有翻译的起始信号。
7、以下不属于核酸探针的是（D ）。
A、RNA 探针；B、基因组探针；C、cDNA 探针；D、抗体。
8、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（B ）。
A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点；B、在不同的宿主中具有不同的复制机制；C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶；D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。
9、从细胞或组织中分离DNA 时常用蔗糖的作用是( C )。
A、抑制核酸酶的活性；B、加速蛋白质的变性；C、保护DNA，防止断裂；D、有利于细胞破碎。
10、氯霉素的工作原理为（D ）。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；B、可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；C、可以抑制核糖体的转位；D、可以与核糖50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。
三、选择题(每小题1.5分，共15分)1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别（C ）。
A、特定的三联密码；B、双链DNA 的特定碱基对；C、双链DNA 的特定碱基序列；D、单链DNA 的特定碱基序列。
2、在切口平移方法标记DNA 探针时只能使用（B ）。
A、Klenow 酶；B、DNA 聚合酶Ⅰ；C、DNA聚合酶Ⅱ；D、DNA聚合酶Ⅲ。
3、在下列进行DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（C ）。
A、反应体积；B、酶反应温度；C、反应时间；D、酶量。
4、PCR 扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（B ）。
A、退火温度过低；B、退火温度过高；C、dNTP 浓度过高；D、循环次数过多。
5、以下不属于PCR 的应用的为（D ）。
A、随机扩增多态性DNA（RAPD）；B、扩增片段长度多态性（AFLP）；C、RACE；D、S1 酶作图。
6、pUC18 与pUC19 的区别在于（B ）。
A、二者的选择标记不同；B、二者的多克隆位点方向相反；C、pUC18 无lacZ 基因；D、pUC19 无lacZ 基因。
7、有关DNA 序列自动化测定的不正确叙述是（D ）。
A、用荧光代替了同位素标记；B、激光扫描分析代替人工读序基；C、本原理与手工测序相同；D、不再需要引物。
8、下列哪一项不是质粒载体必备的基本特征( D )。
A、可以独立复制；B、有选择标记；C、有多克隆位点；D、含lacZ。
9、在分离DNA 过程造成DNA 分子断裂的因素很多，下列说法中哪一项是不正确的（C ）。
A、核酸酶的降解；B、化学降解；C、保存液中未加一滴氯仿；D、物理剪切。
10、氨苄青霉素的工作原理为（A ）。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；B、可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；C、可以抑制核糖体的转位；D、可以与核糖50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。
1、酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞DNA 时，具有两方面的作用，分别为变性剂和抑制了DNase 。
2、Plasmid 能进行自我复制，大多数为双链闭合环状DNA 分子。
3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的，一种叫内切酶，另一种叫修饰酶。
4、反转录酶来自AMV 或Mu－MLV ，即依赖于RNA 的DNA 聚合酶，它有聚合酶活性，但无外切酶活性。
5、末端转移酶来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的DNA 聚合酶，在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP 加于DNA 分子的3' 羟基端。
三、选择题(每小题1.5分，共15分)1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C ）。
A、既可以作用于双链DNA，又可以作用于单链DNA；B、只能作用于单链DNA；C、只能作用于双链DNA；D、只能作用于RNA。
2、下列哪一种酶作用时需要引物( B )。
A、末端转移酶；B、反转录酶；C、DNA 连接酶；D、限制酶。
3、DNA 被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能( D )。
A、蛋白质（如BSA）同DNA 结合；B、有外切核酸酶污染；C、酶失活；D、酶切条件不适合。
4、以下各项中不是PCR 反应所必须的是（D ）。
A、模板和引物；B、dNTP；C、Taq 酶和buffer；D、甘油。
5、关于PCR 技术的叙述，下列哪项是错误的？（B ）A、以DNA 复制为基础而建立起来的技术；B、利用PCR 技术可完全无误地扩增基因；C、反应体系需模板、一对引物、4 种dNTP 、耐热DNA 聚合酶和缓冲溶液；D、以变性-退火-延伸为一周期。
6、以下不是表达载体所必须的条件是（C ）。
A、必须具备很强的启动子；B、必须具备很强的终止子；C、启动子需要受控制；D、所产生的mRNA 必须具有翻译的起始信号。
7、以下不属于核酸探针的是（D ）。
A、RNA 探针；B、基因组探针；C、cDNA 探针；D、抗体。
8、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（B ）。
A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点；B、在不同的宿主中具有不同的复制机制；C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶；D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。
9、从细胞或组织中分离DNA 时常用蔗糖的作用是( C )。
A、抑制核酸酶的活性；B、加速蛋白质的变性；C、保护DNA，防止断裂；D、有利于细胞破碎。
10、氯霉素的工作原理为（D ）。
A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；B、可以与核糖体30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；C、可以抑制核糖体的转位；D、可以与核糖50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。
1、星活性：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性，即Star activity现象。
2、插入型载体：只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点。
3、反转录PCR：在逆转录酶的作用下、以mRNA为模板合成互补的cDNA，再以cDNA为模板进行PCR反应。
4、感受态：受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞。
5、考斯质粒：考斯质粒是一类人工构建的含有l-DNA cos序列和质粒复制子的特殊类型的载体6、Klenow片段：用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶I可以切掉N端的5’3’外切酶活性部分，就成为Klenow fragment。
7、置换型载体：两个多克隆位点区以反向重复形式分别位于 DNA的非必须区两端，用酶切后，可以将中间的区段切下来，与用同样酶切成的外源DNA片断置换。
8、引物：人工合成的单链DNA小片断，碱基顺序分别与所要扩增的模板DNA双链的5‘端相同。
9、转化：大肠杆菌捕获质粒DNA的过程。
10、噬菌粒：噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。