猪伪狂犬疫苗研究进展

（一）基因工程缺失弱毒活疫苗
猪伪狂犬基因缺失主要包括对与毒力相 关的基因如 TK、RR、gE、gl等基因的缺 失以降低病毒毒力 ；对糖蛋白基因如 gG、gC、gD 等基因的缺失以引入选择 标记或阻止感染性病毒的产生，从而致 弱猪伪狂犬病毒，同时又保持其较强的 免疫原性。基因工程缺失疫苗的研制始 于20 世纪 80 年代初。
1. 第一代基因缺失疫苗。第一代基因缺失疫苗指缺失 PRV 一个主要的 毒力基因获得的疫苗。1984 年，Kit 等以 PRV BUK 为起始材料，并以 BUK 疫苗株为亲本，通过缺失TK（腺苷激酶）基因序列中的 148bp 片段， 构建出PRV 的 TK 缺 失 株 PRV BUK-d13 株。试验证明，该疫苗对猪是安全 的，并能提供有效的保护，5 ～ 6周龄猪在免疫接种后能产生中和抗 体，在攻毒后能表现出再次免疫应答。Quint 等 对 PRV NIA-3 株 的US 区进行部分缺失 (gE 基因缺失 )，构建的 PRV 突变株能明显降低 PRV 对小鼠和 10 周龄仔猪的毒力，可使免疫猪能抵抗强毒的致死攻击。但 该突变株对 3 日龄仔猪仍具有较强的毒力。TK 基因缺失疫苗不仅能较 好地免疫猪只，而且免疫猪后还可以通过 PCR 的方法将免疫接种猪与 自然感染猪区分开来。但是，由于 TK 基因属于酶蛋白基因，在体内不 能产生其相应的抗体，因此仅缺失 TK 基因不能用血清学方法区别开免 疫接种猪与自然感染猪，要将此区别开来必须缺失相应的糖蛋白基因。 鉴于此，许多学者在 TK基因缺失的基础上又缺失了相应的糖蛋白基因 而构建了含 TK 基因缺失的双缺失和多缺失疫苗株。
2. 第二代基因缺失疫苗。第二代基因缺失疫苗除了在 TK 基因引入了一个缺失外，在非编码必需糖蛋白的基 因内引入了一个新的缺失。或插入一个报告基因，这 样得到的突变株就不能产生被缺失的糖蛋白，因而免 疫动物就不能产生相应的抗体，因此可以通过血清学 方法将免疫接种猪与自然感染野毒的猪相区别。这也 是第二代基因缺失疫苗的最显著特点。还值得注意的 是有些糖蛋白的缺失，可以进一步降低毒力。第一个 申请专利并注册使用的PRV 基因工程疫苗 OM-NIVACPRV 就是 TK 基因缺失疫苗。
我国目前广泛使用的 PR 弱毒冻干 疫 苗 (Bartha-k61) 是 一 种 gI ／gE 双基因缺 失弱毒疫苗，由于该基因缺失而进一步 阻断弱毒株回复毒力的可能性，所以大 大提高了这种弱毒苗的安全性。
1. 自然缺失弱毒活疫苗的优点。弱毒苗 具有良好的免疫原性，而且价格低廉， 至今仍在伪狂犬病的防控中起着重要的 作用。
1. 灭活疫苗优点。安全性高，不会引起 散毒，也不会带来潜伏感染的问题。
2. 灭活疫苗缺点。灭活疫苗不能将内源 性蛋白抗原提呈给免疫系统，因而不能 诱导细胞毒 T 细胞反应 (CTL)。疱疹病 毒本身的免疫原性与毒力有一定的相关 性，因此灭活疫苗的免疫 效果一般较差， 并且灭活疫苗使用的免疫剂量较大，偶 尔会发生过敏反应，故在生产上已经较 少应用。
新生仔猪大量死亡、15日龄以内仔猪死亡率 为100% 。
断奶仔猪发病死亡，发病率20-40%，死亡率 10-20%，主要表现为神经症状、拉稀、呕吐 等。
母猪不发情、返情、屡配不孕等。
公猪不育、发生睾丸肿胀、萎缩，失去种 用能力。
育肥猪表现为慢性呼吸道症状、增重迟缓、 饲料报酬降低、推迟上市的时间
二、自然缺失弱毒活疫苗
弱毒活疫苗是将分离到的野毒株经非猪源细胞 反复传代，或适应鸡胚，或加入致突变剂在高 于一般的培养温度条件下，在细胞上反复传代 而获得的疫苗，如匈牙利的Bartha 株、罗马尼 亚的 Bucharest株、BUK 株、TK200 株、 北 爱 尔兰的 NIA4 株、法国 Alfort-26 株、前苏 联的 VGNK-I 株、保加利亚MK25 株、南斯拉 夫的 Bkal68 株和Govacc 株等弱毒株。目前使 用较多的是 Bartha、Buk 毒株。
猪伪狂犬疫苗的研究进展
目前，疫苗接种是预防、控制甚至消灭 猪伪狂犬病主要的措施之一。国内外已 研制出猪伪狂犬病的灭活疫苗、弱毒疫 苗、基因缺失弱毒疫苗已经相对成熟， 而病毒载体重组疫苗、核酸疫苗、亚单 位疫苗尚处于实验室研究阶段。
一、灭活疫苗
灭活疫苗是将猪伪狂犬病毒接种于鸡 胚或细胞，当病毒滴度达到要求时收获 病毒，灭活后加入免疫佐剂，从而制成 灭活疫苗。
猪伪狂犬病毒 (Pseudorabies virus)
一、病毒特性
伪狂犬病毒又名猪疱疹病毒1型，属疱疹病毒甲 亚科的成员。
猪为病毒的原始宿主，并作为贮主，可感染其 他动物如马、牛、绵羊、山羊、犬、猫及多种 野生动物，不感染人。
二、疾病的临床症状
妊娠母猪流产，死胎和木乃伊胎，以产死胎 为主。
2. 自然缺失弱毒活疫苗的缺点。未经充 分致弱的弱毒苗的毒力可能会返强而导 致疾病的流行 ；弱毒疫苗可建立潜伏感 染，并有可能散毒。
三、基因工程疫苗
随着分子生物学的发展，猪伪狂犬病病 毒的基因组结构、基因缺失对病毒生物 学性质和免疫原性的影响得到了广泛研 究，猪伪狂犬基因工程疫苗的研究得到 更深入的发展。猪伪狂犬基因工程疫苗 包括 ：基因工程缺失弱毒活疫苗、亚单 位疫苗、核酸疫苗、重组病毒疫苗。
在我国， PRV Ea TK- 株基础上构建了 PRV Ea TK/gG-、TK-/gE- 疫苗株
上述基因缺失疫苗的构建成功，为伪狂 犬病的根除计划打下了物质基础。除此 之外，人们还将注意力集中在核苷酸还 原酶 (RR)、蛋白激酶 (PK)、碱性酸外切 酶、脱氧尿苷三磷酸激酶等与 PRV 毒力 相关的基因上，试图通过缺失这些基因， 更进一步地降低疫苗毒株的残余毒力， 从而使突变株更为安全。
（1）基因工程缺失弱毒活疫苗优点 ：都缺失了目的 基因的几百甚至几千个碱基，缺失区域明确，所以它 们返祖的可能性极小。PRV 缺失株一般都缺失了一个 或几个毒力基因，所以大多数 PRV 缺失株对鼠、猪无 毒力或仅有较低的毒力，但是，仅缺失 TK 基因的弱 毒株对犊牛还有较低的毒力，而对猫、狗毒力较强， 若同时再缺失 gC 或 gE 基因，则几乎不表现出毒力。 大多数的 PRV 缺失疫苗株都有较强的免疫原性，免疫 动物都获得了较强的保护力。强毒攻击免疫猪只出现