杆状病毒表达EV71病毒样颗粒的装配_制备纯化与鉴定
病毒的分离鉴定讲课教案
病毒的分离鉴定
病毒的分离与鉴定 要证明某种疾病是由某一感染性病毒所引起，则必须满足以下原则： ①从患病者体内分离出病毒； ②在实验动物或寄主细胞中可以培养； ③证明这种培养物具有滤过性； ④在原始宿主或相关种属内能产生同样的病症； ⑤能重新分离出病毒。 1.病毒的分离 1.1标本的处理 1.1.1标本的收集 a)粪便标本：将5g粪便标本和50ml PBS放入盛有20-25颗玻璃小 珠的100ml无菌瓶中，搅拌成悬液，倒出上清，3000×g，4℃离心6min。 b)拭子和生物体液：拭子浸在2-3ml运载培养基中，将棉拭子中的 液体尽量挤出以获得标本，如果液体被污染，应3000×g 4℃离心30min。 c)组织标本：用无菌乳钵或匀浆器研磨组织标本，同时加入足量的 PBS制备成20%的悬液，3000×g 4℃离心30min。 1.1.2 除菌处理 a)粪便可加青链霉素使最终浓度为10000单位/毫升，置4℃过夜。 b)鼻咽拭子一般加抗生素最终浓度为2000单位/毫升，置4℃作用
4小时。 c)对乙醚有抵抗的病毒如鼻病毒、肠道病毒、呼肠孤病毒、腺病 毒、痘病毒等，则可加入等量的乙醚4℃过夜除菌。 1.2病毒的分离培养 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 1.2.1 鸡胚接种 a)鸡卵的选择：一般都选新鲜、10天以内的受精卵以保证规格质 量上的一致。 b)孵育：孵育时可将鸡卵放入卵箱内进行,气室向上，孵育的最适 温度为38--39℃，相对湿度为40—70％，孵育8日后，鸡卵应每天翻动1—2次，以帮助鸡胚发育匀称和防止鸡胚膜粘连。 c)检卵：鸡卵孵育4～5天后，即可用检卵器检查鸡胚发育情况 （二天一次）。①未受精鸡卵：在检卵器上仅见到模糊的阴影。 ②活鸡卵：鸡胚发育4天后，在检卵器上就可见到清晰的血管， 鸡卵内有一小黑点（鸡胚），有明显的自然转动。③死胎：如果发现鸡卵血管模糊、扩张、胚胎活动呆滞或不能自主地转动，则可判断胚胎频死或已经死亡，应将其挑捡出来。鸡胚孵育完毕后，用铅笔划出气室边缘和胚胎的位置待用。 d)接种：
大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗_李少伟
收稿日期：2013-12-24 基金项目：国家自然科学基金项目(30925030；81172885)*通信作者：E-mail ：nsxia@https://www.360docs.net/doc/3e10398203.html, 夏宁邵，男，1964年7月生，教授，厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心主任，公共卫生学院院长，全国体外诊断产业技术创新战略联盟理事长。 长期致力于病毒性疾病的应用基础及转化研究。主持研制出全球第一个商品化重组戊型肝炎疫苗及30余种传染病诊断试剂盒并均实现产业化，研制的重组人乳头瘤病毒16/18型二价疫苗正在进行三期临床试验。所主持项目获国家技术发明二等奖、国家科技进步二等奖、中国专利金奖各1项，获授权专利22项，在Lancet 、PNAS 等SCI 刊物发表论文90余篇。 大肠杆菌表达的病毒样颗粒疫苗 李少伟，夏宁邵 * (厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，厦门 361102) 摘要：重组病毒样颗粒是病毒衣壳蛋白外源表达的重要形式，形态结构与天然病毒高度相似，位于纳米尺度的大小易于被免疫系统识别，可激发机体产生保护性免疫反应，且不含有病毒基因，因此，是一种理想的疫苗形式，也是基于结构进行疫苗设计的重要结构载体。目前已上市的乙型肝炎疫苗、人乳头瘤病毒疫苗和戊型肝炎疫苗等基因工程疫苗均采用病毒样颗粒形式。大肠杆菌表达系统被广泛用于基因工程药物的生产，具有安全性好、生产周期短、易于放大生产等优点，在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。本文综述了利用大肠杆菌研制戊型肝炎疫苗和人乳头瘤病毒疫苗的进展，特别是这些病毒样颗粒疫苗的表达及组装、表位结构特征和临床试验结果。 关键词：疫苗；病毒样颗粒；大肠杆菌；戊型肝炎病毒；人乳头瘤病毒；重组蛋白 Virus-like particle-based vaccine development using Escherichia coli expression system LI Shaowei, XIA Ningshao * (National Institute of Diagnostics and Vaccine Development in infectious disease, Xiamen University, Xiamen 361102, China ) Abstract: Virus-like particles (VLPs) are generated by the self-assembly of viral structural protein using various expression systems. VLPs ensemble native virus particles in morphology and maintain key immune epitopes as authentic virus. In light of nanometer-sized particles with diameters of 20- 60 nm, VLPs were shown to be a passport to immune recognition, thus being capable of eliciting strong protective immune responses. Recombinant VLP-based vaccines have superior safety profiles due to lack of any viral genome. There are several licensed and highly successful VLP-based vaccines produced using recombinant DNA
病毒分离方法
植物内生菌分离方法 植物内生菌分离方法 匿名提问 2009-02-18 20:04:53 发布 自然科学学术 6个回答 回答 曲恋| 2009-02-18 20:45:40 有0人认为这个回答不错| 有0人认为这个回答没有帮助 植物内生放线菌是一类大有开发潜力的微生物资源。目前使用的分离条件和技术尚不完善，容易被外源菌和内生真菌、细菌污染，因此内生放线菌尤其是稀有内生放线菌的选择性分离技术至少是今后一段时间研究的重点。介绍了植物内生放线菌选择性分离方法并提出值得研究的问题。( 添加评论(0) nk0226 | 2009-07-25 11:13:09 有0人认为这个回答不错| 有0人认为这个回答没有帮助 植物病毒与病毒防治 Plant Virology& Control of Plant Virology 32学时2学分 一、课程性质、地位和任务 植物病毒与病毒防治是研究病原病毒与植物病毒病害相互关系的生物学科。本课程重点讲授植物病毒相关生物学特性与研究进展：病毒侵染寄主植物生理效应与抗病免疫；植物亚病毒病原等基础理论知识。同时，根据植物病毒基础研究需要，课程理论讲授与实验技能训练并重。通过本课程的学习，使学生进一步熟悉病毒病原与其它相关病原的区别要点，病害宏观及微观鉴定基本技术、方法、手段，并能在实践中应用。为独立开展植物病毒及病毒病害研究奠定基础。 二、课程教学的基本要求 要求学生重点掌握以下内容： （1）植物病毒的传播途径及传毒机制；
（2）病毒侵染植物内部症状，侵染增殖过程； （3）植物受病毒侵染的生理效应与抗病免疫； （4）植物亚病毒病原的基本特性； （5）植物病毒与病毒病害诊断鉴定的程序与方法。 三、课程理论教学大纲及学时分配 1. 绪论（2学时） 1.1 病毒的发现与病毒学的发展 1.2 研究病毒的意义与任务 1.3 植物病毒与其他病毒的关系 1.4病毒与其他微生物的区别 2. 病毒的分类与命名（3学时） 主要介绍病毒分类和命名的基本原则相关指标。重点：植物病毒的命名和分类系统。 2.1 病毒命名和分类的发展 2.2 病毒命名的系列 2.3 病毒分类的系列 2.4 植物病毒的命名和分类系统 3. 病毒侵染植物与增殖与增殖过程及遗传与变异（5学时） 主要讲授植物病毒侵染方式，在寄主体内的增殖过程，病毒遗传变异的本质。难点:病毒进入寄主细胞的方式及粒体装配。 3.1病毒粒体的吸附与侵入 3.2病毒粒体的脱壳与生物合成 3.3病毒粒体的装配与释放 3.4病毒的遗传与变异 3.5病毒的体外重新组与生物活性 4. 植物病毒的传播途径及传毒机制（5学时） 主要讲授病毒的介体传播和非介体传播的两大途径，以及不同介体传播机制与病害发生流行关系，难点：介体持久性传毒（口针传毒）与非持久性传毒（巡回传毒）机理。 4.1介体传毒 4.2非介体传毒 4.3种子与花粉传毒 4.4传毒机制 5. 病毒侵染植物生理效应与抗病免疫（5学时） 主要介绍病原侵染植物的内部症状（内含体）、病毒在植物体内的运转及生理活性物质改变与寄主抗病机理。难点：病毒侵染植物的生理变化与寄主的免疫反应。 5.1病毒侵染植物内部症状（内含体及其类型） 5.2病毒在植物体内的运输
病毒的分离鉴定
病毒的分离鉴定 Prepared on 22 November 2020
病毒的分离与鉴定 要证明某种疾病是由某一感染性病毒所引起，则必须满足以下原则： ①从患病者体内分离出病毒； ②在实验动物或寄主细胞中可以培养； ③证明这种培养物具有滤过性； ④在原始宿主或相关种属内能产生同样的病症； ⑤能重新分离出病毒。 1.病毒的分离 1.1标本的处理 标本的收集 a)粪便标本：将5g粪便标本和50mlPBS放入盛有20-25颗玻璃小 珠的100ml无菌瓶中，搅拌成悬液，倒出上清，3000×g，4℃离心6min。 b)拭子和生物体液：拭子浸在2-3ml运载培养基中，将棉拭子中的 液体尽量挤出以获得标本，如果液体被污染，应3000×g4℃离心30min。 c)组织标本：用无菌乳钵或匀浆器研磨组织标本，同时加入足量的 PBS制备成20%的悬液，3000×g4℃离心30min。 除菌处理 a)粪便可加青链霉素使最终浓度为10000单位/毫升，置4℃过夜。
b)鼻咽拭子一般加抗生素最终浓度为2000单位/毫升，置4℃作用 4小时。 c)对乙醚有抵抗的病毒如鼻病毒、肠道病毒、呼肠孤病毒、腺病 毒、痘病毒等，则可加入等量的乙醚4℃过夜除菌。 1.2病毒的分离培养 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 鸡胚接种 a)鸡卵的选择：一般都选新鲜、10天以内的受精卵以保证规格质 量上的一致。 b)孵育：孵育时可将鸡卵放入卵箱内进行,气室向上，孵育的最适 温度为38--39℃，相对湿度为40—70％，孵育8日后，鸡卵应每天翻动1—2次，以帮助鸡胚发育匀称和防止鸡胚膜粘连。 c)检卵：鸡卵孵育4～5天后，即可用检卵器检查鸡胚发育情况 （二天一次）。①未受精鸡卵：在检卵器上仅见到模糊的阴影。 ②活鸡卵：鸡胚发育4天后，在检卵器上就可见到清晰的血管， 鸡卵内有一小黑点（鸡胚），有明显的自然转动。③死胎：如果发现鸡卵血管模糊、扩张、胚胎活动呆滞或不能自主地转动，则可判断胚胎频死或已经死亡，应将其挑捡出来。鸡胚孵育完毕后，用铅笔划出气室边缘和胚胎的位置待用。 d)接种：
病毒的分离与鉴定
病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离病毒分离的一般程序是：检验标本→杀灭杂菌(青、链霉素)→接种易感的动物→出现病状鸡胚→病变或死亡细胞培养→细胞病变→鉴定病毒种型(血清学方法)无菌标本(脑脊液、血液、血浆、血清)可直接接种细胞、动物、鸡胚；无菌组织块经培养液洗液洗涤后制成10～20%悬液离… （一）病毒的分离 病毒分离的一般程序是： 检验标本→杀灭杂菌(青、链霉素)→接种易感的动物→出现病状 鸡胚→病变或死亡 细胞培养→细胞病变 →鉴定病毒种型(血清学方法) 无菌标本(脑脊液、血液、血浆、血清)可直接接种细胞、动物、鸡胚；无菌组织块经培养液洗液洗涤后制成10～20%悬液离心后，取上清接种；咽洗液、粪便、尿、感染组织或昆虫等污染标本在接种前先用抗生素处理，杀死杂菌。 1．细胞培养用分散的活细胞培养称细胞培养（Cell culture）。所用培养液是含血清（通常为胎牛血清）、葡萄糖、氨基酸、维生素的平衡溶液，pH7.2～7.4。细胞培养适于绝大多数病毒生长，是病毒实验室的常规技术。 原代细胞培养(Primary cell culture) 用胰蛋白酶将人胚（或动物）组织分散成单细胞，加一定培养液，37℃孵育1-2天后逐渐在培养瓶底部长成单层细胞，如人胚肾细胞、兔肾细胞。原代细胞均为二倍体细胞，可用于产生病毒疫苗，如兔肾细胞生产风疹疫苗，鸡成纤维细胞产生麻疹疫苗，猴肾细胞生产脊液灰质炎疫苗。因原代细胞不能持续传代培养，故不便用于诊断工作。 二倍体细胞培养(Diploid cell cultune) 原代细胞只能传2-3代细胞就退化，在多数细胞退化时，少数细胞能继续传下来，且保持染色体数为二倍体，称为二倍体细胞。二倍体细
犬细小病毒的分离与鉴定
犬细小病毒的分离与鉴定 摘要：采用细胞培养法对疑似犬细小病毒的粪便和内脏进行了分离和鉴定，并对分离到的病毒进行生物学特性鉴定和动物回归试验。结果共分离到3株CPV，分离株在猫肾细胞F81产生明显细胞病变，血凝效价达1∶27～1∶210，细胞病变能被犬细小病毒阳性血清所抑制，接种幼犬后，分离株3可以引起试验犬发病死亡。 关键词：犬细小病毒；分离；鉴定 犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV）属于细小病毒科细小病毒属，为单股、负义、线形无囊膜的DNA病毒[1]。CPV可引起犬的出血性肠胃炎和心肌炎，并使白细胞大量减少，在幼犬中的发病率和死亡率都很高[2]。CPV对多种理化因素和常用消毒剂具有较强的抵抗力，在4～10 ℃存活6个月，37 ℃存活2周，56 ℃存活24 h，80 ℃存活15 min，在粪便中可存活数月至数年[3]；该病毒对乙醚，氯仿和醇类有抵抗力[4]。CPV一年四季均可发病，以冬、春多发[5]，饲养管理条件骤变、长途运输、寒冷、拥挤均可促使该病发生[6]。病犬是主要传染源，其呕吐物、唾液、粪便中均有大量病毒[7]。根据临床症状和血清学反应，可做出准确诊断[8-13]。本研究通过对山东毒株分离，并对其部分生物学特性进行研究，为该病的防治和后续研究提供一定的理论基础。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 主要试剂DMEM培养基为Gibco产品；小牛血清、谷氨酸胺、双抗、胰蛋白酶等购自大连宝生物TaKaRa有限公司；其他化学试剂均为分析纯试剂。 1.1.2 病料病料为2009～2011年聊城大学兽医院收集或其他养犬场送检的可疑CPV病料，包括20份粪便样品和10份脏器。 1.1.3 试验动物和细胞8只40～50日龄的山东细犬幼犬（抗CPV HI抗体效价小于1∶4），健康状况良好；猫肾传代细胞系（F81）和犬肾传代细胞系（MDCK）等由聊城大学农学院实验室保存。 1.2 方法 1.2.1 试剂的配制 1）1%猪红细胞悬液的制备。用20 mL注射器内吸入阿氏液3～5 mL，于健康猪前腔静脉采血10～15 mL，立即混匀，4 ℃保存备用。使用时用PBS洗涤保存的猪红细胞，1 000 r/min离心5 min，洗涤3次，取红细胞泥1 mL加稀释液100 mL，再加入小牛血清白蛋白0.1 g，即为1%猪红细胞悬液。 2）HA抗原配制。用移液器向V型血凝板每孔加稀释液25 μL，然后吸取25 μL经福尔马林灭活的CPV细胞培养物，在血凝板上倍比稀释，最后1孔不稀释，作为阴性对照；接着每孔加稀释液25 μL和1%猪红细胞悬液50 μL，于振荡器上振荡1 min混匀，于4 ℃冰箱静置1～2 h，待红细胞完全沉淀后判定。判定的方法是以50%红细胞凝集为终点，在对照孔红细胞完全不凝集，呈圆形小点
病毒的分离鉴定
病毒的分离与鉴定 要证明某种疾病是由某一感染性病毒所引起，则必须满足以下原则： ①从患病者体分离出病毒； ②在实验动物或寄主细胞中可以培养； ③证明这种培养物具有滤过性； ④在原始宿主或相关种属能产生同样的病症； ⑤能重新分离出病毒。 1.病毒的分离 1.1标本的处理 1.1.1标本的收集 a)粪便标本：将5g粪便标本和50ml PBS放入盛有20-25颗玻璃小 珠的100ml无菌瓶中，搅拌成悬液，倒出上清，3000×g，4℃离心6min。 b)拭子和生物体液：拭子浸在2-3ml运载培养基中，将棉拭子中的 液体尽量挤出以获得标本，如果液体被污染，应3000×g 4℃离心30min。 c)组织标本：用无菌乳钵或匀浆器研磨组织标本，同时加入足量的 PBS制备成20%的悬液，3000×g 4℃离心30min。 1.1.2 除菌处理 a)粪便可加青链霉素使最终浓度为10000单位/毫升，置4℃过夜。 b)鼻咽拭子一般加抗生素最终浓度为2000单位/毫升，置4℃作用4 小时。
c) 对乙醚有抵抗的病毒如鼻病毒、肠道病毒、呼肠孤病毒、腺病毒、 痘病毒等，则可加入等量的乙醚4℃过夜除菌。 1.2 病毒的分离培养 病毒是严格的细胞寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 1.2.1 鸡胚接种 a) 鸡卵的选择：一般都选新鲜、10天以的受精卵以保证规格质量上 的一致 。 b) 孵育：孵育时可将鸡卵放入卵箱进行,气室向上，孵育的最适温度 为38--39℃，相对湿度为40—70％，孵育8日后，鸡卵应每天翻动1—2次，以帮助鸡胚发育匀称和防止鸡胚膜粘连。 c) 检卵：鸡卵孵育4～5天后，即可用检卵器检查鸡胚发育情况（二 天一次）。①未受精鸡卵：在检卵器上仅见到模糊的阴影。②活鸡卵：鸡胚发育4天后，在检卵器上就可见到清晰的血管，鸡卵有一小黑点（鸡胚），有明显的自然转动。③死胎：如果发现鸡卵血管模糊、扩、胚胎活动呆滞或不能自主地转动，则可判断胚胎频死或已经死亡，应将其挑捡出来。鸡胚孵育完毕后，用铅笔划出气室边缘和胚胎的位置待用。 d) 接种：
凡尔灵 流行性感冒病毒裂解疫苗说明书
［药品名称］ 通用名：流行性感冒病毒裂解疫苗 商品名：凡尔灵V AXIGRIP 英文名：Inactivated Split Influenza V accine 汉语拼音：Liuxingxing Ganmao Bingdu Liejie Yimiao ［成份和性状］ 本品为乳白色液体，主要成份： 每0.5g含： —流感病毒在鸡胚中培养，用三硝基甲苯-Ｘ-100裂解，福尔马林灭活，纯化，抗原等效于：A/布里斯班/59/2007(H1N1)-类似株15μg血凝素 A/布里斯班/10/2007 (H3N2)-类似株15μg血凝素 B/布里斯班/60/2008-类似株15μg血凝素 —赋形剂成份: 钠盐: (氯化钠、磷酸氢二钠二水化合物) 钾盐: (氯化钾、磷酸二氢钾) 本疫苗成份符合世界卫生组织推荐(北半球)和欧盟决议的2009/2010季节流感毒株。 ［接种对象］ 尤其推荐用于易发生相关流感并发症的人群，由于流感季节性发生，建议每年接种流感疫苗。温带地区秋季开始时接种，热带地区流行高峰到是前或开始时接种。 ［作用与用途］ 用于流行性感冒的预防。 ［规格］ 0.5ml/支（成人剂量） ［免疫程序和剂量］ 成人及36个月以上的儿童：接种一剂，每剂0.5ml。 用前应将该疫苗置于室温并充分摇匀，然后肌肉或深度皮下注射。 ［不良反应］ 同任何其它制剂一样，该疫苗可能在某些人中引起或轻或重的不良反应。 临床实验中发生如下不良反应： 常见： - 局部反应：红，肿，疼，瘀癍，硬结。 - 全身反应：发热，头晕，寒战，虚弱，头疼，出汗，肌痛，关节痛。 上述反应无需治疗，一般一至两天会自然消失。 上市后监测期，有下列不良反应报告： 少见：一般的皮肤反应，如瘙痒，风疹或皮疹。 罕见： - 神经痛（疼痛沿神经通络分布），感觉异常（对触，疼，热，冷或振动的感觉异常），惊厥，—过性血小板减少
病毒分离鉴定技术
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种繁殖障碍与呼吸困难的传染病。其特征为发病母猪厌食、发热，怀孕后期发生流产、死胎和木乃伊胎，幼龄仔猪发生呼吸道症状[1]。1987年在美国中西部首先发现该病，并分离到病毒，其后在北美、欧洲、亚洲等国家流行。目前该病已在全球范围内传播、蔓延。我国郭宝清等[4]于1996年首次从暴发流产的胎儿中分离到PRRSV。国内诸多血清学检测结果表明，该病在我国许多地方已有流行[5]。河南某猪场"猪场发生临床症状疑似PRRS的传染病，用间接ELISA法检测，呈PRRS 抗体阳性。从病猪肺、淋巴结病料中分离到1株疑似PRRSV，并对其进行了一系列的鉴定。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1病料采自河南某猪场疑似PRRS发病仔猪肺脏及淋巴结。 1.1.2细胞及血清细胞系Marc145、Vero、PK15均购自中国兽药监察所；阳性血清购自中国兽药监察所；阴性血清采自无PRRS病史猪场的新生仔猪血清，经中和试验证明为阴性。 1.1.3主要试剂及试剂盒RNasin、dNTP、反转录 Buffer、MMLV、rTaq酶均购自宝生物(大连)工程有限公司；琼脂糖为 Sigma公司产品；其他常规试剂均为分析纯；UNIQ10柱式Trizol 总RNA抽提纯化试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司。
1.1.4RTPCR引物设计根据GenBank公布的PRRSV美洲株ORF5核苷酸序列，参照文献[6]自行设计并由宝生物(大连)工程有限公司合成下述一对引物，引物扩增片段长度为720bp；上游引物P1 5′CTG GAG CCG TGC TAT CAT3′；下游引物P2 5′TCC ATT TCA TGA CAC CTG3′。 1.2方法 1.2.1细胞培养生长液为含100 mL/L新生牛血清(NCS)的RPMIl640培养液；维持液为含20 mL/L NCS的RPMIl640培养液。Marc145、Vero和PK15细胞均在体积分数为5%的CO2培养箱中于37 ℃培养至单层后传代培养。 1.2.2病料的处理无菌采集发病仔猪的淋巴结、肺脏、脾脏等组织并剪碎，用Hanks液研磨并制成5倍～10倍的乳悬液，反复冻融3次后，经5 000 r/min离心30 min，上清悬液用0.22μm微孔滤膜过滤后，－20 ℃保存备用。 1.2.3病毒的分离将上述处理的病料悬液1 mL分别接种于长成单层的 Marc145细胞、Vero细胞和PK15细胞，37 ℃吸附1 h，补加维持液至8 mL，继续培养3 d～5 d，反复冻融3次，收获培养上清液，同时设参考毒株、正常细胞作为对照。出现典型PRRSV细胞病变时按上述方法继续传代，供进一步检测备用，连传5代未出现CPE者判为阴性。
病毒活疫苗与灭活苗的优缺点
病毒活疫苗与灭活苗的优缺点病毒疫苗的主要效果是预防或降低病毒病的严重程度。目前使用的抗感染疫苗可以分为三类：减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗。其它类型疫苗还有：核酸疫苗、合成肽疫苗和抗独特型疫苗。 减毒活疫苗 通过不同的手段，使病毒的毒力减弱或丧失，机体在接受该疫苗后不发生或出现很轻的临床症状，刺激机体的免疫系统产生针对该病毒的免疫反应，使之在以后接触该病毒时，保护机体不患病或患病的临床过程较轻。 突出的特点表现在以下几个方面： 1)诱导包括体液免疫、细胞免疫的免疫方式，具有较强保护作用。 2)由于是活病毒，病毒可以在体内增殖，长时间和机体细胞发生作用，诱导较强的免疫力。 3)只需接种一次，即可以达到满意的效果。 4)可以通过自然感染途径接种（点眼、滴鼻、口服等），这样不仅可以产生全身免疫反应，而且可以诱导产生局部免疫反应。 5)可以通过病毒所有抗原（病毒包括多种抗原，其中一种或两种就能引起反应）刺激机体产生反应。 6)一般采用真空冻干工艺，需冷冻保存（-15℃～-20℃）。 其主要缺点： 1)既然是活病毒制剂，有可能污染其它活的病原体； 2)一些减毒活疫苗仍保留有一定的毒力；
3)传统的减毒活疫苗可能出现病毒毒力回复； 4)在一些免疫缺陷的个体中可能诱发严重疾病； 5)在某些时候，野毒株感染可以导致活疫苗效果降低； 6)缺损颗粒可以干扰疫苗的免疫效果； 7)对保存和运输的要求较高。 灭活疫苗 由完整的病毒组成，使其致病性丧失或减弱，但是仍然保持病毒的全部或部分免疫原性，接种后病毒抗原可以刺激机体产生免疫应答，达到保护作用。灭活疫苗和减毒疫苗的差别在于疫苗中的病毒不具有感染性，在体内不能增殖。 其主要优点： 1)由于不存在有感染性病毒存在，比较安全； 2)保存方便，无须冻干保存； 3)其它活病原体污染问题较少； 4)生产相对简单。 主要缺点： 1)免疫效果一般低于减毒活疫苗，虽然能够诱导产生包括中和抗体在内的免疫反应，但不能诱导细胞毒T淋巴细胞反应。 2)诱导产生的免疫反应持续时间较短，需要多次接种。 3)灭活剂对病毒抗原有影响，而且对不同的抗原成分影响不同。 4)由于诱导的免疫反应水平较低，以及各个抗原成分之间的疫苗应答不平衡，可能诱发疾病。
疫苗学知识要点
疫苗绪论 疫苗(Vaccine) ：疫苗是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。 疫苗学(Vaccinology) ：一门关于疫苗理论、疫苗技术、疫苗研制流程、疫苗应用、疫苗市场及疫苗管理与法规的学科。理论与实践高度结合。 疫苗与药物的区别 使用的人群不同：一般药物主要用于患病人群，疫苗用于健康人 药物的性质：一般药物主要为中药、化学合成药物和生物药物，而疫苗均为生物药物。药物作用：一般药物主要减轻病痛，只有疫苗才能彻底控制和消灭疾病。 疫苗的成份和特点 疫苗的基本成分包括抗原、佐剂、防腐剂、稳定剂、灭活剂及其他成分 疫苗的成份和特点 抗原：抗原是疫苗最主要的有效活性组分，是决定疫苗的特异免疫原性物质。（疫苗效果）佐剂：又称非特异性免疫增生剂。本身不具抗原性，但同抗原一起或预先注射到机体内能增强免疫原性或改变免疫反应类型。 杀菌剂/防腐剂：用于防止外来微生物的污染。一般液体疫苗为避免在保存期间微量污染的细菌繁殖，均加入适宜的防腐剂。大多数的灭活疫苗都使用防腐剂，如硫柳汞、2—苯氧乙醇、氯仿等。 保护剂或稳定剂： 为保证作为抗原的病毒或其他微生物存活并保持免疫原性，疫苗中常加入适宜的稳定剂或保护剂，如冻干疫苗中常用的乳糖、明胶、山梨醇等。 灭活剂： 灭活病毒或细菌抗原的方法除了可用物理方法如加热、紫外线照射等之外，也常采用化学方法灭活。常用的化学灭活试剂有丙酮、酚、甲醛等，这些物质对人体有一定毒害作用，因此在灭活抗原后必须及时从疫苗中除去，并经严格检测，以保证疫苗的安全性。 疫苗在制备时还需使用缓冲液、盐类等非活性成分。缓冲液的种类、盐类的含量都可影响疫苗的效力、纯度和安全性，因此都有严格的质量标准。 疫苗的基本特点： ■免疫原性 免疫原性由疫苗的抗原所决定，指疫苗接种进入机体后引起抗体产生免疫应答的强度和持续时间。影响免疫原性强弱的因素包括机体的因素和疫苗的因素。 ■安全性 安全性包括疫苗本身的安全和接种的安全。大多数疫苗主要用于儿童和健康人群，因此其安全性要求极高。绝大多数国家以不允许因接种疫苗而发生的死亡率超过百万分之一作为安全标准之一。 稳定性 疫苗必须保持稳定，以保证经过一定时间的疫苗贮存和冷藏运输过程■后疫苗仍能保
病毒的分离与测定
第二十九讲病毒的分离与测定 教学目的：掌握病毒效价的测定方法 教学重点：噬斑法、终点法 教学难点：病毒的分离与鉴定 课时分布：1学时 教学过程： 一、病毒的分离与纯化 1、病毒的分离 病毒的分离是将疑有病毒的样品经处理后，接种于敏感的宿主，经培育后，通过检查其特异性病理表现或其它方法以肯定病毒的存在。 （1）标本的采集与处理标本应含有足够量的活病毒；加入抗菌素除细菌；研磨或超声波处理破碎细胞，让病毒充分释放出来；标本处理后立即接种，否则冷冻保藏。 （2）标本接种与感染表现接种实验宿主（动植物、细菌）、鸡胚或细胞（要求：操作简单、易于培养、产生的感染结果易判定）。噬菌体以噬菌斑为标记；动物病毒产生致细胞病变效应；植物病毒致敏感质感植物出现坏死斑或枯斑。 2、病毒纯化 通过分离得到的是病毒感染的宿主机体、组织或破细胞后的抽提物，或感染的宿主的体液、血液和分泌物，或培养液，须将杂质成分除去。 （1）病毒纯化的标准：纯化的病毒制备物应保持其感染性；纯化的病毒毒粒应具有均一性。 （2）病毒纯化的方法毒粒的主要成分是蛋白质，故可利用蛋白质提纯方法纯化；毒粒具一定的大小、形状和密度，可离心提取。 二、病毒的测定 在谷氨酸、抗菌素、酶制剂等生产中，经常出现不正常的发酵现象。发酵缓慢、发酵液含菌数下降、菌体畸形、耗糖缓慢或停止，镜检时发现有云雾状碎片，严重时以致倒罐。
1、病毒的物理颗粒计数 （1）电镜下直接计数 （2）血细胞凝集试验许多有包膜的动物病毒能在一定条件下凝集一定种类的脊椎动物红血球，凝集量与病毒浓度成正比。 此外，可根据病毒的抗原性质，与抗体发生特异性结合，利用分光光度计对病毒进行定量。但灵敏度较低，多在特殊情况下使用。总之，该方法测得的是有活力与无活力病毒数量的总和。 2、病毒的感染性测定 测定的是因感染所引起宿主或细胞发生某一特异性病理反应的病毒数量。 病毒感染单位：能引起宿主或宿主细胞一定特异性反应的病毒最小剂量。 病毒效价：指单位体积病毒悬液的感染单位数目。 （1）噬菌斑的测定 噬菌斑：噬菌体感染敏感细胞后，通过复制使宿主细胞裂解，释放大量噬菌体，扩散到周围的细胞中，继续侵染，从而在有噬菌体的地方形成一个透亮无菌近似圆形的空斑。它是phage存在的一种指示性指标。 在液体培养基中培养物变清。一个phage产生一个噬菌斑，故可根据在固培上形成的噬菌斑数测得phage的效价。通常是将噬菌体悬液分别与高浓度的敏感细菌以及半固体琼脂均匀混合后涂布在较高浓度的营养琼脂上，培养后计算噬菌斑数便可算出噬菌体效价。 ①双层平板法 底层培养基10ml 上层培养基4ml、凝固 指示菌0.2 ml、检样0.1 ml →32℃16-24h 测定前，事先配制含2%和1%的琼脂底层培养基和上层培养基，将铺成平板，用无菌吸管吸取一定量的指示菌和被测样品与上层培养基混合，冷到45℃迅速倒在底层平板上铺平，凝固后恒温培养16—20小时，如有phage存在，则在双层琼
疫苗和病毒的区别,什么是病毒
疫苗和病毒的区别,什么是病毒 2016-06-17来源：网友分享作者：赵南松 一、什么是疫苗 疫苗是将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用转基因等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等;当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。 疫苗一般分为两类：预防性疫苗和治疗性疫苗。预防性疫苗主要用于疾病的预防，接受者为健康个体或新生儿；治疗性疫苗主要用于患病的个体，接受者为患者。
根据传统和习惯又可分为减毒活疫苗、灭活疫苗、抗毒素、亚单位疫苗(含多肽疫苗)、载体疫苗、核酸疫苗等。 减毒活疫苗(live‐attenuated vaccine) 这一类的病毒疫苗多具有超过90%的效力，其保护作用通常延续多年。它的突出优势是病原体在宿主复制产生一个抗原刺激，抗原数量、性质和位置均与天然感染相似，所以免疫原性一般很强，甚至不需要加强免疫。这种突出的优势同时也存在潜在的危险性：在免疫力差的部分个体可引发感染;突变可能恢复毒力。后者随着病原毒力的分子基础的认识可更合理地进行减毒，可能使其减毒更为确实并不能恢复毒力。 灭活疫苗(inactivated vaccine) 与减毒活疫苗相比灭活疫苗采用的是非复制性抗原(死疫苗)，因此，其安全性好，但免疫原性也变弱，往往必须加强免疫。需要注意的是，并不是所有病原体经灭活后均可以成为高效疫苗：其中一些疫苗是高效的，如索尔克注射用脊髓灰质炎疫苗(IPV)或甲肝疫苗;其它则是一些低效、短持续期的疫苗，如灭活后可注射的霍乱疫苗，几乎已被放弃;还有一些部分灭活疫苗的效力低，需要提高其保护率和免疫的持续期，如传统的灭活流感和伤寒疫苗。这些低效疫苗大多数将被新型疫苗代替。 类毒素疫苗 当疾病的病理变化主要是由于强力外毒素或肠毒素引起时，类毒素疫苗具有很大的意义，如破伤风和白喉的疫苗。一般来说，肠毒素的类毒素很少成功。然而肠毒素型大肠杆菌的热稳定性肠毒素(LT)经遗传改造的去毒变构体，有希望成
病毒活疫苗与灭活苗的优缺点
病毒活疫苗与灭活苗的优缺点病毒疫苗的主要效果就是预防或降低病毒病的严重程度。目前使用的抗感染疫苗可以分为三类:减毒活疫苗、灭活疫苗、亚单位疫苗。其它类型疫苗还有:核酸疫苗、合成肽疫苗与抗独特型疫苗。 减毒活疫苗 通过不同的手段,使病毒的毒力减弱或丧失,机体在接受该疫苗后不发生或出现很轻的临床症状,刺激机体的免疫系统产生针对该病毒的免疫反应,使之在以后接触该病毒时,保护机体不患病或患病的临床过程较轻。 突出的特点表现在以下几个方面: 1)诱导包括体液免疫、细胞免疫的免疫方式,具有较强保护作用。 2)由于就是活病毒,病毒可以在体内增殖,长时间与机体细胞发生作用,诱导较强的免疫力。 3)只需接种一次,即可以达到满意的效果。 4)可以通过自然感染途径接种(点眼、滴鼻、口服等),这样不仅可以产生全身免疫反应,而且可以诱导产生局部免疫反应。 5)可以通过病毒所有抗原(病毒包括多种抗原,其中一种或两种就能引起反应)刺激机体产生反应。 6)一般采用真空冻干工艺,需冷冻保存(-15℃～-20℃)。 其主要缺点: 1)既然就是活病毒制剂,有可能污染其它活的病原体; 2)一些减毒活疫苗仍保留有一定的毒力;
3)传统的减毒活疫苗可能出现病毒毒力回复; 4)在一些免疫缺陷的个体中可能诱发严重疾病; 5)在某些时候,野毒株感染可以导致活疫苗效果降低; 6)缺损颗粒可以干扰疫苗的免疫效果; 7)对保存与运输的要求较高。 灭活疫苗 由完整的病毒组成,使其致病性丧失或减弱,但就是仍然保持病毒的全部或部分免疫原性,接种后病毒抗原可以刺激机体产生免疫应答,达到保护作用。灭活疫苗与减毒疫苗的差别在于疫苗中的病毒不具有感染性,在体内不能增殖。 其主要优点: 1)由于不存在有感染性病毒存在,比较安全; 2)保存方便,无须冻干保存; 3)其它活病原体污染问题较少; 4)生产相对简单。 主要缺点: 1)免疫效果一般低于减毒活疫苗,虽然能够诱导产生包括中与抗体在内的免疫反应,但不能诱导细胞毒T淋巴细胞反应。 2)诱导产生的免疫反应持续时间较短,需要多次接种。 3)灭活剂对病毒抗原有影响,而且对不同的抗原成分影响不同。 4)由于诱导的免疫反应水平较低,以及各个抗原成分之间的疫苗应答不平衡,可能诱发疾病。
病毒样颗粒疫苗的研究进展及其在传染病防控中的应用前景
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－９１５８．２０１４．１０．００６ 作者单位：１００７００北京军区总医院检验科（刘杰）；解放军总医院微生物科（杨继勇）通信作者：刘杰，电子信箱：ｆｈａａｌｊ＠１６３．ｃｏｍ?专家论坛? 病毒样颗粒疫苗的研究进展及其在 传染病防控中的应用前景 刘杰 杨继勇 【摘要】 病毒样颗粒（ＶＬＰｓ）是由一种或多种病毒结构蛋白组装成的颗粒，具有与病毒颗粒相 似的外部结构和抗原性，但不含病毒基因。可采用酵母、哺乳动物细胞、植物细胞、昆虫细胞和细菌系 统表达ＶＬＰｓ抗原。ＶＬＰｓ作为疫苗，可有效诱导机体产生免疫反应。可以作为其他佐剂、多肽疫苗的 整合平台设计嵌合体疫苗。本文就病毒样颗粒国内外研究进展及其在传染病防控中的应用前景进行 综述。（中华检验医学杂志，２０１４，３７：７３９－７４２） 【关键词】 病毒样颗粒； 疫苗； 免疫学检测 Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ ＬｉｕＪｉｅ*，ＹａｎｇＪｉｙｏｎｇ．*ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅＭｉｌｉｔａｒｙＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＢｅｉｊｉｎｇ Ｐｅｏｐｌｅ′ｓＬｉｂｅｒａｔｉｏｎＡｒｍｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＬｉｕＪｉｅ，Ｅｍａｉｌ：ｆｈａａｌｊ＠１６３．ｃｏｍ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ（ＶＬＰｓ）ａｒｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｒｍｅｄｂｙｏｎｅｏｒｓｅｖｅｒａｌｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍｖｉｒｕｓｅｓｗｉｔｈｓｉｍｉｌａｒｏｕｔｓｉｄｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄａｎｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙｏｆｔｈｅｎａｔｉｖｅｖｉｒｕｓｅｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｎｏｖｉｒｕｓ ｇｅｎｏｍｅ．ＶＬＰｓａｎｔｉｇｅｎｃａｎｂｅｐｒｏｄｕｃｅｄｉｎｙｅａｓｔｓ，ｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｓ，ｐｌａｎｔｃｅｌｌｓ，ｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓａｎｄ ｂａｃｔｅｒｉａ．ＶＬＰｓｖａｃｃｉｎｅｃａｎｉｎｄｕｃｅｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｏｔｈｅｒａｄｊｕｖａｎｔｏｒｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｃａｎｂｅ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｉｎｔｏＶＬＰｓｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｃｈｉｍｅｒｉｃｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｆｏｃｕｓｅｓｏｎｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ ｐａｒｔｉｃｌｅｓａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｓ．（ＣｈｉｎＪＬａｂＭｅｄ，２０１４，３７： ７３９－７４２） 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 Ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ； Ｖａｃｃｉｎｅ； Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙａｓｓａｙ 病毒样颗粒（ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ，ＶＬＰｓ）是不含病毒核酸的空壳结构，形态和结构与天然病毒粒子相似，免疫原性较好，但不能自主复制，没有感染性，因而安全性好。目前国内外学者针对３０多种感染人和动物的不同病毒已经研制出相应的ＶＬＰｓ，其中一部分ＶＬＰｓ已成为预防病毒病的潜在候选疫苗。 一、病毒样颗粒 在１９７８年，发现多瘤病毒的主要荚膜蛋白在无病毒核酸的情况下可自组装成ＶＬＰｓ［１］。１９８４年，自然杂志报道了ＨＢＶ表面抗原ＶＬＰｓ疫苗的试验结果［２］。在铝佐剂中，采用酵母表达的重组ＨＢｓＡｇ刺激小鼠、猴和猩猩产生高滴度ＨＢＶ特异性抗体。免疫的猩猩可完全抵御静脉给予的人血清来源的ＨＢＶ的攻击。１９８６年，该ＶＬＰｓ疫苗被批准用于预防人ＨＢＶ感染［３］。 研究表明，ＶＬＰｓ是含有某种病毒的一个或多个结构蛋白的空心颗粒。其制备原理是在体外高效表达的一种（或几种）结构蛋白，在合适的ＶＬＰｓ装配和释放的条件下，成功装配释放出在形态上类似于天然病毒的空心颗粒，没有病毒的核酸（ＤＮＡ／ＲＮＡ），不能自主复制，其在形态上与真正病毒粒子相同或相似，可通过和病毒感染一样的途径呈递给免疫细胞，有效地诱导机体的免疫系统产生免疫保护反应。病毒的衣壳蛋白一般具有天然的自我装配能力。根据病毒包膜的有无，ＶＬＰｓ分为无胞膜ＶＬＰｓ和有胞膜ＶＬＰｓ两种类型。乳头瘤病毒等可形成无包膜ＶＬＰｓ，ＨＢＶ等可形成有包膜ＶＬＰｓ。 二、ＶＬＰｓ与疫苗
病毒分离前样品的实验室处理方法
病毒含量较高的样品浸出液或体液，可不经过病毒分离直接用于诊断鉴定。病毒含量较少的样品，则需通过病毒的分离增殖来提高诊断的准确性和鉴定的可靠性。病毒分离首先要对样品进行适当的处理，然后接种实验动物或培养的组织细胞。 (一) 组织器官样品的处理 1.用无菌操作取一小块样品，充分剪碎，置乳钵中加玻璃砂研磨或用组织捣碎机 制成匀浆，随后加1-2 ml Hank’s平衡盐溶液制成组织悬液，再加1-2 ml继续研磨，逐渐制成10%-20%的悬液； 2.加入复合抗生素； 3.以800×g离心15min； 4.取上清液用于病毒分离。必要时可用有机溶剂去除杂蛋白和进行浓缩（见下文）。 (二) 粪便样品的处理 1.加4g的粪便于16ml Hank’s平衡盐容液中制成20%的悬液； 2.于密闭的容器中强烈振荡30min，如果可能则加入玻璃球； 3.以6000×g低温离心30min，取上清液再次重复离心； 4.用450nm的微孔滤膜过滤； 5.加二倍浓度的复合抗生素。然后直接用于病毒分离或进行必要的浓缩后再行病毒分离。 (三) 无菌的体液（腹水、脊髓液、脱纤血液、水泡液等）和鸡胚液样品可不做处理，直接用于病毒分离。 注：Hank’s平衡盐溶液和复合抗生素的配制见细胞培养溶液的配制。 (四) 样品的特殊除菌处理样品经过上述一般处理即可用于病毒分离，但对某些样品用一般方法难以去除的污染，则应考虑配合如下方法进行处理。 1.乙醚除菌对有些病毒（如肠道病毒、鼻病毒、呼肠孤病毒、腺病毒、小RNA
病毒等对乙醚有抵抗力）可用冷乙醚对半加入样品悬液中充分振荡，置4℃过液。取用下层水相分离病毒。 2.染料普鲁黄（Proflavin）除菌由于其对肠道病毒和鼻病毒很少或没有影响， 常用作粪或喉头样品中细菌的光动力灭活剂。将样品用0.0001mol/L pH9.0的普鲁黄于37℃作用60min，随后用离子交换树脂除去染料，将样品暴露于白光下，即可使其中已经被光致敏的细菌或霉菌灭活。 3. 过滤除菌可用陶土滤器、瓷滤器、石棉滤器或者200nm孔径的混合纤维素 酯微孔滤膜等除菌，但对病毒有损失。 4. 离心除菌用低温高速离心机以1800r/min（1 5.24cm）离心20min，可沉淀除 去细菌，而病毒（小于100nm）保持在清液中。必要时转移离心管重复离心一次。 (五) 待检样品中病毒的浓缩对病毒含量很少的病毒样品一般普通方法不易检测或分离出 病毒，必须经过浓缩。常用浓缩方法如下： 1.聚乙二醇（PEG）浓缩法将分子量6 000的PEG逐步加入经一般处理的样品 溶液中，使终浓度为8%，置4℃过夜。以3000×g离心15min，用少量含复合抗生素的Hank’s 平衡盐溶液重悬，心要时用450nm微孔滤器除去真菌孢子。 2.硫酸铵浓缩法将等量饱和硫酸铵溶液缓慢加入经过上述一般处理的样品溶液 中边加边搅拌，置4C过夜。离心同上。 3.超滤器浓缩法是一种高效率的浓缩法，特别适合大体积的样品浓缩。 4.超速离心浓缩法以40 000r/min（1 5.24cm）离心60-120min ,绝大多数病毒将沉 于管底。用少量Hank’s平衡盐溶液悬浮病毒。这种方法回收效率很高，但仅适用于小体积的样品。 (六) 病毒分离样品脂类物质的去除有些病毒样品（如组织样品）脂类和非病毒蛋白含量很 高，必要时在浓缩病毒样品之前可用有机溶剂抽提。常用的有机溶剂有正丁醇、三氯乙烯、氟里昂等。方法是将预冷的等量有机溶剂对半加入样品中，强烈振荡后，1000×g离心5 min，脂类和大量非病毒蛋白将保留在有机相中，病毒保留在水相中。应当注意的是，病毒必须对这些有机溶剂有抗性。