总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP单试剂比色法)
血清总胆固醇TC测定操作规程
血清总胆固醇TC测定操作规程.docx血清总胆固醇（TC）测定操作规程1. 目的本操作规程旨在规范血清总胆固醇（TC）的测定过程，确保检测结果的准确性和重复性。
2. 原理血清总胆固醇（TC）测定通常采用酶法，通过胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶将游离胆固醇氧化为胆甾酮和H2O2，最后利用过氧化物酶将H2O2分解为2H2O和O2，同时产生颜色变化。
颜色的深浅与血清中胆固醇含量成正比，可通过比色法测定。
3. 试剂和材料酶试剂盒（含胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶等）校准品和质控品血清样本蒸馏水移液枪及吸头比色杯恒温水浴箱自动生化分析仪或分光光度计4. 操作步骤4.1 准备工作确保所有试剂和样本均已在室温下平衡至25°C。
校准生化分析仪或分光光度计至适当的波长（通常为500-550nm）。
4.2 试剂准备根据试剂盒说明书，将酶试剂混合均匀，并预热至25°C。
4.3 样本处理取适量的血清样本，避免溶血和脂血样本。
如有必要，对样本进行离心，去除沉淀物。
4.4 加样使用移液枪准确取样，将血清样本加入比色杯中。
按照试剂盒说明书，加入等量的酶试剂至每个比色杯中。
4.5 反应将比色杯放入恒温水浴箱中，保持37°C反应一定时间（通常为5-10分钟）。
4.6 比色测定将反应后的比色杯放入自动生化分析仪或分光光度计中。
读取吸光度值，并根据标准曲线计算血清总胆固醇浓度。
5. 质量控制每次测定前，使用校准品进行仪器校准。
定期使用质控品进行质量控制，确保结果的准确性和稳定性。
6. 结果记录与报告记录所有测定结果，包括吸光度值、胆固醇浓度等。
根据医院或实验室的标准操作程序，编写并发布检测报告。
7. 安全注意事项操作时应穿戴适当的个人防护装备，如手套和实验服。
避免接触试剂和样本，尤其是避免吸入和摄入。
按照当地法规处理废弃物。
8. 维护和校准定期对生化分析仪或分光光度计进行维护和校准，确保仪器的准确性。
总胆固醇测定试剂盒说明书
总胆固醇（total cholesterol，TC）含量测定试剂盒说明书分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：TC包括游离胆固醇和胆固醇酯。
TC是指组织中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。
测定原理：利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-胆甾烯酮和H2O2；最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物；在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。
自备仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、异丙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：异丙醇50mL（自备）。
试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；试剂四：液体100μL×1瓶，4℃保存TC标准品：液体1mL×1支，0.5μmol/mL，4℃保存。
TC的提取：1、组织中TC的提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清，即TC待测液。
2、细胞、细菌中TC的提取：先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加1mL试剂一，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），即TC待测液。
3、血清（浆）等样品：直接测定。
测定操作：1. 分光光度计预热30 min，调节波长到500 nm，蒸馏水调零。
2. TC工作液的配制：临用前，吸取约0.8mL试剂二分别加入试剂三和试剂四瓶中，充分溶解后再全部转移回试剂二瓶中，充分混匀，TC工作液置于37℃水浴10min。
用不完的工作液4℃保存一周。
3. 标准管：依次在1mL玻璃比色皿中加入100μL FC标准液和900μL TC工作液，混匀，37℃静置3h后于500nm测定A标准管。
血清总胆固醇测定标准操作规程
血清总胆固醇测定标准操作规程1.检验原理：（氧化酶法）血清中总胆固醇（TC ）包括游离胆固醇（FC ）和胆固醇酯（CE ）两部分。
血清中胆固醇可被脂蛋白酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA ），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和对羟基苯甲酸钠存在时，晶过氧化物酶（POD ）催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
胆固醇酯+22O H −−−→−胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸 胆固醇+2O −−−−→−胆固醇氧化酶胆甾烯酮+22O H 222O H +4-AA+对羟基苯甲酸钠−−→−POD红色醌类物质+422O H 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清。
在22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃可保存1年。
样本应避免反复冻融！4.检验方法；仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程） 5参考范围：6.检验结果的解释：6.1样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V）的氯化钠溶液稀释样本。
6.2.单位换算：mg/dl=mmol/L×38.77.检验方法的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊，或以水空白在500nm处吸光度大于0.080时不能使用。
8.试剂性能指标8.1试剂外观：无色透明或淡黄色液体，无悬浮物及沉淀。
8.2装量：不低于标识值。
8.3空白吸光度：在500nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.0808.4线性区间：试剂的线性区间为[0.5-20.0]mmol/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.9900；b)[2.0-20.0]mmol/L区间内，线性相对偏差不超过±10%。
8.5准确度：使用具有溯源性的标准品进行测定，实测值与标识值的相对偏差应在±10%内。
8.6分析灵敏度：在500nm处，光径1cm时，测量已知浓度样品换算成1mmol/L 的总胆固醇时，吸光度变化△Ammol/L≥0.0028.7批内精密度：CV≤4.0%8.8批间差：R≤6.0%8.9稳定性：（2-8）℃下，原包装存放的试剂有效期为12个月.取到期后1个月的试剂进行测试，应满足1-8.7的要求。
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇
胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇【原理】血清中总胆固醇(total cholesterol ，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol ，FC)和胆固醇酯(cholesterol ester ，CE)两部分。
血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢，H 2O 2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC 含量成正比。
【试剂】1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献)GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚5mmol/L2．胆固醇标准溶液5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇200 mg ，用异丙醇配成100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。
也可用定值的参考血清作标准。
【操作步骤】 终点法检测TC 按下表依次加样。
酶法测定TC 操作步骤项目 测定管 标准管 空白管 血清(μl) 50 － － 标准液/定值血清(μl)－ 50 － 蒸馏水(μl) － － 50 酶试剂(μl)1.501.501.50混匀后，37℃保温5 min ，用分光光度计比色，于500 nm 波长处以空白管调零，读出各管吸光度。
【计算】血清TC (mmol/L)＝标准管吸光度测定管吸光度×胆固醇标准液浓度【参考范围】血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20 mmol/L。
【临床意义】1．TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。
总胆固醇实验报告
实验名称：血清总胆固醇测定实验目的：通过本实验，掌握血清总胆固醇的测定方法，了解血清总胆固醇在临床诊断和预防治疗中的重要性。
实验原理：血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是血液中所有胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
血清总胆固醇的测定方法主要有酶法、比色法、沉淀法等。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇，其原理是利用胆固醇酯酶（Cholesterol Esterase）将胆固醇酯水解为游离胆固醇，然后利用胆固醇氧化酶（Cholesterol Oxidase）将游离胆固醇氧化为胆汁酸，最后在碱性条件下与磷钼酸反应生成磷钼蓝，通过比色法测定其吸光度，从而计算出血清总胆固醇的浓度。
实验材料：1. 血清样品：取自健康志愿者，经离心分离后获得。
2. 胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷酸盐缓冲液、磷钼酸、抗坏血酸、硫酸铜、邻苯二甲酸氢钾、氯仿、无水乙醇等试剂。
3. 仪器：酶标仪、移液器、恒温水浴锅、离心机等。
实验步骤：1. 样品处理：取血清样品1.0ml，加入氯仿和无水乙醇（1:2，V/V）混合液5.0ml，涡旋混合，离心10分钟，取上清液待测。
2. 标准曲线绘制：将胆固醇标准品配制成一系列浓度梯度的标准溶液，分别加入胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、磷酸盐缓冲液、磷钼酸等试剂，按照实验步骤进行操作，测定吸光度。
以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：取处理后的血清样品，按照标准曲线绘制步骤进行操作，测定吸光度。
根据标准曲线，计算样品中血清总胆固醇的浓度。
实验结果：1. 标准曲线绘制：以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
结果显示，胆固醇浓度在0.5-10.0mg/dl范围内，吸光度与胆固醇浓度呈线性关系。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算样品中血清总胆固醇的浓度为X mg/dl。
实验讨论：1. 血清总胆固醇是人体内重要的脂质成分，其浓度异常与心血管疾病、动脉粥样硬化等疾病密切相关。
临床医学检验总胆固醇(TC)
临床医学检验总胆固醇(TC)胆固醇是脂质成分之一，机体中胆固醇80％～90％由肝和肾上腺自身合成，而多种因素可影响体内TC的水平，包括：①年龄与性别，TC水平往往随年龄上升，但到70岁或80岁以后有所下降，中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性；②长期的高胆固醇，高密度饱和脂肪和高热量包含可使TC增高；③遗传因素；④其他，如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。
胆固醇的增高与多种疾病有关，所以胆固醇的检验是临床检验的主要项目之一。
(一)酶法1.原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Cho1)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trind er反应)。
醌亚胺的最大吸收在500 nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：2.计算TC(mmol／L)=A测定／A标准×定标血清TC浓度(mmol／L)。
速率法测定根据仪器性能及所用试剂的反应速度设计操作程序，一般要求试剂中酶用量较高。
3.技术指标(1)精密度：终点法批内CV<1.5％，批间CV≤2.5％。
(2)准确性：以参考方法(ALBK法)定值的血清为标准液时，本法测定结果与ALBK法基本一致。
以Chol水溶液为标准时，结果往往比AL-BK法低，故不宜采用Chol水溶液。
(3)灵敏度：显色剂用酚时，TC 5.2 mmol／L(200 mg／d1)时的吸光度A500nm0.30-0.35，故A500nm=0.005时的TC浓度约0.08 mmol／L(3 mg／d1)。
(4)测定范围：血清与酶试剂用量之比为1：100时，测定上界为13 mmol／L(500 mg／d1)。
(5)特异性：血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。
正常人血清中非胆固醇甾醇约占TC的l％，故在常规测定时这种影响可以不计。
南京建成 产品目录及价格表 17-3-22
抗坏血酸过氧化物酶（APX）测试盒（紫外 比色法） 抗坏血酸氧化酶（AAO）活性测试盒（比色 抗坏血酸（AsA）含量测试盒（紫外比色 γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）测试盒 （比色法） 硫氧还蛋白氧化还原酶（TrxR）测试盒（比 色法） 硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX）测试盒（紫 外比色法） NAD激酶（NADK）测试盒（比色法） NADH氧化酶（NOX）测试盒（比色法） 辅酶ⅡNADP（H）含量测试盒（比色法） 辅酶ⅠNAD（H）含量测试盒（比色法） 腺苷脱氨酶（ADA）测试盒（酶比色法） （微板法） 游离脂肪酸（NEFA）测试盒（酶法，双试 剂）（微板法） 5’－核苷酸酶（5’-NT）测试盒（酶比色法） （微板法） 糖化血清蛋白（GSP）试剂盒（NBT法） （微板法） 胆碱酯酶（CHE）测试盒（速率法）(微板 白蛋白（ALB）测定试剂盒（带标准：溴甲 酚绿法） 柠檬酸合成酶（CS）测定试剂盒（微板法） 柠檬酸合成酶（CS）测定试剂盒（微板法） 植物提取液 蔗糖测定试剂盒（国标法） 蔗糖测定试剂盒（紫外比色法） γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）测定试剂 盒（速率法） 糜蛋白酶测定试剂盒 谷氨酸测定试剂盒（紫外比色法） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+、 T－ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+－ ATP酶） 超微量ATP酶测试盒（Na+K+、Ca2+Mg2+－ ATP酶）
超微量酶法检测血清总胆固醇的实验探讨
作者：吴斌张春妮王志军黄易张军韩建鹏【关键词】超微量血清【摘要】目的用超微量血清在微孔板内进行酶法检测总胆固醇（TC），分析其线性范围、准确度、精密度、回收率，并与日立7600型全自动生化分析仪进行测定比较，以探讨超微量酶法检测总胆固醇结果的可靠性。
方法采用超微量酶法，酶标生化多功能分析仪比色测定。
结果本法的线性范围达15.1mmol/L，批内变异系数（CV）为1.29%～2.45%，日间变异系数（CV）为1.95%～2.67%，回收率为99%～105%，平均102.8%，与全自动生化分析仪比较具有良好的相关性，y=1.112x-0.339，r=0.9839。
结论本法操作简单，血清、试剂用量少，检测快速，准确性及重复性好，结果可靠，利于微量检测血清总胆固醇的推广应用。
关键词超微量血清酶法总胆固醇【Abstract】 Objective To evaluate the reliability of super-micro-quantityzymed method for determining the levels of serum total cholesterol.Methods Super-micro-zymed method was adopted，zyme-labelled biochemiˉcal multifunctional analyzer was used for colorimetric analysis.Results The linear scope was15.1mmol/L，inside CV1.29%～2.45%，daytime CV1.95%～2.67%，recovery rate99%～105%，mean102.8%.Itwas well correlations with the results from antomatic biochemistry analyzer，y=1.112x-0.339，r=0.9839.Conclusion The methods would be useful to determine the levels of serum total cholesterol.Key words super-microserum zymed method total cholesterol酶法检测血清总胆固醇是目前公认为最适于作血清总胆固醇测定的常规方法［1］，在各大中小医院实验室测定TC大多采用酶法，既可于作终点法手工操作，分光光度计比色测定，也可于半自动、全自动生化分析仪检测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)
简介：
胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，分子式C 27H 46O ，分子量为3860.65。
胆固醇广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高。
Leagene 总胆固醇(TC)检测试剂盒(COD-PAP 单试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被CEH 水解为游离胆固醇，使4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder 反应)。
分光光度计在500~520nm 处进行比色测定。
本试剂盒用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的总胆固醇含量定量测定。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 样本处理：
①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。
②细胞样本：
a 、取适量的细胞(一般推荐>106以上)，离心，弃上清，留取沉淀。
b 、用PBS 或生理盐水清洗1~2次，离心，弃上清，留取沉淀。
c 、加入200~300μl 的PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率300W ，每次3~5s ，间隔30s ，重复3~5次。
亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心，待用。
③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或PBS ，冰浴条件下手动或机械匀浆。
离心，取上清待用。
2、 分光光度计(1ml 比色杯)、半自动生化分析仪TC 测定操作:
编号 名称
TC1213100T
Storage
试剂(A): COD-PAP 工作液
Good's buffer 2×50ml
-20℃ 避光
胆固醇氧化酶 胆固醇激酶 稳定剂
试剂(B): TC 标准(5mmol/L) 1ml -20℃ 避光
试剂(C): ddH 2O 1ml
RT 使用说明书
1份
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 10
TC标准(5mmol/L)(μl) 10
待测样本(μl) 10
COD-PAP工作液(ml) 1.0 1.0 1.0
②充分混匀,水浴中孵育。
③分光光度计测定500~520nm吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
3、普通分光光度计(2ml比色杯)TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 20
TC标准(5mmol/L)(μl) 20
待测样本(μl) 20
COD-PAP工作液(ml) 2.0 2.0 2.0
②充分混匀,水浴中孵育。
③分光光度计测定500~520nm吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
4、酶标仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白孔标准孔待测孔ddH2O(μl) 3
TC标准(5mmol/L)(μl) 3
待测样本(μl) 3
COD-PAP工作液(μl) 300 300 300
②充分混匀,水浴中孵育。
③酶标仪测定500~520nm吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
5、全自动生化分析仪TC测定操作:
①按下表依次加入试剂：
空白管标准管待测管ddH2O(μl) 3
TC标准(5mmol/L)(μl) 3
待测样本(μl) 3
COD-PAP工作液(μl) 300 300 300
②充分混匀,水浴中孵育。
③全自动生化分析仪测定500~520nm波长处吸光度。
以空白管调零，读取标准管和各待测管的吸光度。
机器参数：
主波长/次波长500/600nm
反应类型终点法
反应方向升反应(+)
计算公式：
血清、血浆等液体样本(空白调零)：
TC(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×5mmol/L 血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)：
TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L
细胞、组织等样本(空白调零)：
TC(mmol/L)=｛(待测管吸光度-空白吸光度)/(标准管吸光度-空白吸光度)｝×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)
细胞、组织等样本(全自动生化分析仪)：
TC(mmol/L)=(待测管吸光度/(标准管吸光度)×5mmol/L÷待测样本浓度(mg/ml)
参考区间：
健康成年人理想范围：<5.2mmol/L(<200mg/dl)
边缘升高：<5.23~5.69mmol/L(201~219mg/dl)
升高：≥5.72mmol/L(≥220mg/dl)
备注：TC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl
性能指标：
外观无色至淡黄色澄清液体
线性范围0.1~13mmol/L(3.6~500mg/dl)，R2>0.95
灵敏度检测下限0.1mmol/L(3.6mg/dl)
变异系数批内<3%，批间<5%
空白吸光值<0.1(1cm光径)
干扰因素胆红素<410μmol/L；血红蛋白<7g/L；甘油
三脂<28.5mmol/L时，对结果无明细影响。
稳定性密闭，12个月
注意事项：
1、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。
2、本法可直接用于检测脑脊液中的TC含量，但不能直接检测尿液中的TC含量，因为未
经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应。
3、待测样本如不能及时测定，应置于2~8℃保存，3天内稳定。