药品的微生物学检查 SS
药品微生物检验及方法验证
药品微生物限度检查及方法验证从事药品微生物限度检查工作两年时间，从学做到承担工作到变得有点经验，经历了一个摸索、学习和积累的过程，回过头来做一个总结，把一些零散的经验和体会做一个梳理和归整，以供在此岗位工作的同仁参考。
第一部分：外围工作外围工作主要有器皿清洗、灭菌，培养基、试剂配制及灭菌，无菌室清洁消毒等。
器皿的清洗是每个实验室和每一个实验员必须要做的最起码的工作，工作要求简单，操作方便，把握一个原则：干净。
培养基、试剂配制后一般都要求调PH到7.20，因为高温灭菌之后PH值会下降0.2左右。
固体培养基在灭菌前要先加热煮沸，使琼脂均匀分散。
煮沸时要注意不要溢出容器，以免发生烫伤。
万一不小心溢出，可用一湿抹布盖住容器口，迅速将其从加热源上移开，不要在情急之下徒手去拿或者在容器侧面拿，那样容易被从容器口源源不断溢出的培养基烫伤。
液体物品灭菌后，不能立即打开放气阀放气，因为此时被灭菌物品的温度大于100℃，在压力等于常压时，液体会暴沸，造成液体喷出或容器炸裂，发生事故。
万级洁净度的无菌室应当每周进行一次消毒，消毒剂每月更换一次，防止长期使用同一种消毒剂而使微生物形成耐药性。
消毒范围包括墙壁，地面，天花板以及空气。
表面消毒可以用消毒剂擦拭，尤其注意门框边缘以及出风回风口，不能留有死角；空气消毒宜采用臭氧或者紫外灯。
可以使用专门的臭氧发生器产生臭氧进行消毒，也可以在每一个操作间包括净化台安装适宜功率的紫外灯，一方面紫外线可以对近距离的物体表面进行消毒，另一方面紫外线的作用也可以使空气中的氧气转换成臭氧，从而能够杀死空气中的微生物。
另外在每次做完实验之后，都应当对实验台面以及地面进行消毒处理。
第二部分：检验过程整个无菌室的检验操作过程应当有一个标准的操作规范，严格按照无菌操作的规定进行操作，包括进入无菌室的程序以及人员清洁消毒，都应当遵守标准来进行。
首先，进入无菌室应当严格按照洁净区（室）有关规定进行。
进入之前先进行洗手消毒，在一更换鞋，脱去外衣，进入二更，穿洁净工作服，注意穿戴洁净工作衣帽时必须做到衣服的任何部位不得拖地。
ss琼脂平板的应用原理
ss琼脂平板的应用原理1. 简介ss琼脂平板是一种常用的实验室工具，用于分离和培养不同菌株。
它由琼脂制成，形状为矩形或圆形平板。
ss琼脂平板应用广泛，包括微生物学、生物学、医学等领域。
本文将介绍ss琼脂平板的应用原理。
2. ss琼脂平板的组成ss琼脂平板主要由琼脂、培养基和加热杀菌的水组成。
•琼脂是一种由海藻提取的胶状物质，具有较好的凝胶性能。
它能够在一定温度条件下凝固，并且能够保持较好的透明度，使得观察和分析样品更加方便。
•培养基是一种提供营养物质和环境条件以供微生物生长的物质。
根据所需培养的微生物种类和特性不同，培养基的配方也会有所不同。
•加热杀菌的水是为了将培养基和琼脂平板本身消毒杀菌，以防止细菌等微生物的污染。
3. ss琼脂平板的应用原理ss琼脂平板的应用原理主要分为两个方面：分离和培养。
3.1 分离ss琼脂平板通过凝胶性质，可以将样品中的微生物分离开来。
当琼脂平板凝固后，微生物会被困在凝胶中，形成一个孤立的单个菌落。
这样，不同种类的微生物就可以被分离，便于观察和研究。
3.2 培养ss琼脂平板上的培养基提供了微生物所需的营养物质和适宜的环境条件，使得微生物可以在平板上生长和繁殖。
培养基中的成分和特性会根据不同的菌株和研究目的进行配制。
通过在琼脂平板上培养微生物，可以观察和研究微生物的生长情况、形态特征以及对不同因素的响应等。
3.3 应用场景ss琼脂平板的应用广泛，常见的应用场景包括：•微生物学研究：用于分离和鉴定不同微生物种类，研究其生长特性和代谢过程。
•临床医学：用于检测细菌的耐药性、病原微生物的分离和鉴定等。
•食品工业：用于检测食品中的微生物污染，评估食品质量和安全性。
•环境监测：用于监测环境中的微生物污染程度，如空气、水质等。
4. 使用方法ss琼脂平板的使用方法相对简单：1.准备平板：将琼脂平板取出，检查是否有损坏或污染。
确保平板表面干净。
2.加样品：将待分离的样品点于平板表面，可以选择用棉签或注射器将样品均匀涂抹于平板上。
ss培养基的制备_概述及解释说明
ss培养基的制备概述及解释说明1. 引言1.1 概述引言部分旨在介绍本文的研究背景和主题，即ss培养基的制备。
ss培养基作为一种常用的细菌培养基，在生物学研究和工业生产中都具有重要应用价值。
本节将对ss培养基进行概述，包括其定义、作用以及相关的基本组成成分和制备方法。
1.2 文章结构本文分为五个部分：引言、ss培养基的制备概述、ss培养基的解释说明、实验结果与应用前景讨论以及结论与展望。
在引言部分，我们将简要介绍整篇文章的内容和结构安排，以帮助读者更好地理解文章的框架和重点内容。
1.3 目的ss培养基是目前广泛使用的一种培养基，其制备过程涉及多个方面知识点。
本文旨在对ss培养基的制备进行概述和解释说明，并对其在实验结果与应用前景方面进行讨论。
同时，我们还将探讨目前存在的挑战，并展望未来改进方向。
通过本文的撰写，我们希望能够提供给读者一份全面了解ss培养基制备及其应用的资料，促进相关领域的研究和应用发展。
2. ss培养基的制备概述2.1 定义与作用ss培养基，全称为synthetic selective (SS) medium，是一种在细菌学研究中常用的人工培养基。
它具有选择性，可以通过添加特定成分使某些细菌生长受阻或者促进某些特定细菌的增殖。
ss培养基主要用于筛选、分离和鉴定不同种类的细菌。
2.2 基本组成成分ss培养基的基本组成包括以下几个方面：- 碳源：提供细菌所需能量的碳源物质。
- 氮源：提供细菌所需合成蛋白质和核酸的氮源物质。
- 硫源：提供硫元素，在某些情况下可能会被细菌利用。
- 磷源：提供磷元素，参与核酸合成等生化过程。
- 微量元素：如铁、锰、锌等，对于微生物生长和代谢至关重要。
- pH缓冲剂：稳定培养基pH值，确保细菌在适宜的pH条件下生长。
- 防护剂：添加适量的抗菌剂，以防止培养基被其他细菌污染。
2.3 制备方法与步骤制备ss培养基的一般步骤如下：1. 准备所需试剂和设备，如称量精确的化学品、琼脂糖、自动pH计等。
ss培养基原理
ss培养基原理
SS培养基原理:
SS培养基是一种常用于微生物培养的富含营养物质的培养基。
它由多种有机和无机物质组成，可以提供微生物所需的各种营养物。
SS培养基的主要原理是为微生物提供足够的营养物质
和适宜的环境条件，促进微生物的生长和繁殖。
SS培养基的组成通常包括碳源、氮源、矿物质和生长因子等。
碳源提供能量和碳源，常见的有葡萄糖、乳糖等。
氮源提供微生物合成蛋白质和核酸所需的氮元素，常见的有氨基酸、胺类物质等。
矿物质提供微生物所需的金属离子、盐和微量元素等，常见的有钠盐、钾盐、磷酸盐等。
生长因子则提供微生物生长和繁殖所需的特殊物质，如维生素、某些酶等。
在培养基制备过程中，需要将不同的组分按照一定比例混合，并加入适当的水溶液进行溶解。
然后，使用高温高压杀菌法杀死其中存在的其他微生物，并将培养基分装到培养皿或培养管中。
最后，将待检测的微生物菌株接种到培养基中，放入适宜的培养条件下培养。
通过提供丰富的营养物质和适宜的环境条件，SS培养基可以
满足微生物的生长和繁殖需求，促进微生物的快速增殖。
此外，SS培养基还可以用于筛选和分离特定类别的微生物，并进行
菌落计数、纯化等实验操作。
它的应用广泛，可以用于培养和研究各种微生物，包括细菌、真菌、酵母等。
总之，SS培养基原理是通过提供丰富的营养物质和适宜的环
境条件，促进微生物的生长和繁殖。
它是微生物学研究中常用的培养基之一，为微生物的培养、分离和研究提供了重要的实验工具。
药物制剂的微生物学检查
检查结果的异常分析
异常指标识别
根据检查结果，识别异常的微生 物学指标，如菌落总数超标、霉
菌和酵母菌数过多等。
原因分析
对异常指标进行深入分析，探究 可能的原因，如生产过程中灭菌 不彻底、存储条件不当、原材料
污染等。
风险评估
根据异常指标的严重程度，评估 其对药物制剂质量和安全性的影
响，以及可能产生的风险。
菌和酵母菌计数，以及控制菌检查等内容。
药品生产质量管理规范（GMP）
02
要求制药企业必须建立严格的微生物控制体系，确保药品生产
过程中的微生物污染得到有效控制。
药品注册管理办法
03
规定药品注册时必须提交微生物方面的相关资料，包括微生物
限度、无菌保证水平等。
国际标准与法规
1 2
国际药典（Ph. Int.） 由世界卫生组织（WHO）和国际制药联合会 （IFP）共同制定，为各国药典的制定提供了参 考。
05
药物制剂的微生物学检 查技术发展
新技术介绍与应用
01
02
03
自动化检测系统
通过集成样品处理、检测 和分析等步骤，提高检测 效率，减少人为误差。
基因检测技术
利用基因测序等方法，快 速、准确地检测微生物种 类和耐药性。
生物感器技术
通过生物传感器对微生物 代谢产物进行检测，实现 快速、灵敏的微生物检测。
预防疾病传播
微生物学检查可以检测出可能携带病 原体的微生物，从而预防疾病传播， 保护公众健康。
微生物学检查的方法与标准
方法
包括细菌计数、霉菌和酵母菌计数、 支原体检测、细菌内毒素检测等。
标准
根据不同药物制剂的国家标准和行业 标准，规定了各种微生物的限量要求 和检测方法。
药物制剂微生物学检查
药物制剂微生物学检查
药物制剂微生物学检查是通过对药物制剂中的微生物进行检测和分析，以确定其微生物污染的程度和类型。
这个检查的目的是确保药物制剂的质量和安全性。
药物制剂微生物学检查通常包括以下内容：
1. 细菌检查：使用培养基和相关的培养技术，检测药物制剂中是否存在细菌污染。
常见的方法包括菌落计数、肉汤稀释法、滤膜法等。
2. 真菌检查：使用培养基和相关的培养技术，检测药物制剂中是否存在真菌污染。
常见的方法包括菌落计数、真菌培养、荧光显微镜检查等。
3. 真空法检查：使用真空吸引药物制剂样品到微孔滤膜上，然后将滤膜移植到培养基上进行菌落计数和分析。
4. 内毒素检查：使用内毒素试剂盒，检测药物制剂中是否
存在内毒素污染。
常见的方法包括内毒素抑制试验、内毒
素检测试纸法等。
5. 孢子检查：使用染色方法，检测药物制剂中是否存在孢
子污染。
常见的方法包括热耐受试验、营养条件筛选法等。
药物制剂微生物学检查是药品质量控制的重要环节，可以
有效预防和控制微生物污染对药物制剂的影响，确保药物
制剂的质量和安全性。
药物制剂的微生物学检查
❖ 方法是将所要检测菌的相应阳性对照菌株，稀释成每毫升含 活菌1000个的菌液，将其0.lml吸到待检药品的相应培养液 中，在同等条件下进行检测。如果阳性对照菌生长良好，说 明检测结果有效。
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活螨的检验
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沙门菌
❖ 寄生于人和动物的肠道内，能引起伤寒、 副伤寒、急性胃肠炎（食物中毒）和败血症。
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1、革兰阴性，杆菌
2、分离培养：
❖ EMB平板上菌落无色或粉红色。
3、生化反应： 4、血清学反应： ❖ 凝集反应： ❖ 抗原——可疑菌， ❖ 抗体——沙门菌A-F组的多价血清（抗O抗体）
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❖ O抗原： ❖ 细菌细胞壁脂多糖中的特异性多糖，100℃不被破
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❖ 检测时先把一定量药均经增菌后转种到选 择鉴别培养基——麦康凯平板或伊红美兰平 板（EMB平板）。
❖ 培养后挑取可疑菌落作革兰染色及生化反应。 生化反应包括 IMViC试验和乳糖发酵试验。 大肠杆菌IMViC试验结果为+、+、—、—
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❖ 大肠杆菌的鉴定主要靠形态和生化反应两方面 的特征。
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❖ 毒力试验和保护力试验
取破伤风杆菌液体培养物于小鼠后肢肌肉 注射，动物发病时，腿及尾巴强直，肢体痉 挛，最后死亡。
在对照组动物中，先注射破伤风抗毒素， 再注射液体培养物，则该动物得到特异性保 护。
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❖ 上述致病菌检测时，皆需同时作相应细菌的阳性对照试验， 即与药品检测同步用阳性对照菌作对照试验。
５天 ７天
药物的微生物检测
药物的微生物检测随着科技的进步和医学研究的深入，微生物检测成为了现代药物生产中不可或缺的一部分。
微生物检测旨在确保药物的质量和安全性，以预防潜在的细菌、真菌或其他微生物的污染。
本文将探讨药物的微生物检测的重要性、常用的微生物检测方法以及相关的法规和指南。
一、重要性药物的微生物检测对于确保患者的安全和药物的疗效至关重要。
微生物的污染可能导致严重的健康问题，甚至危及生命。
微生物的存在可能导致药物的降解、变质或失效，影响患者的治疗效果。
因此，对药物中微生物的准确检测和有效控制是必不可少的。
二、微生物检测方法1.生物指示剂方法生物指示剂是一种常用的微生物检测方法，通过将生物指示剂与药物一同暴露在一定条件下，观察并记录生物指示剂的生长情况和变化，来判断药物中是否存在微生物。
这种方法的优点是操作简单，结果准确可靠。
然而，生物指示剂方法存在时间周期长、结果需要较长时间才能得出等缺点。
2.光学显微镜方法光学显微镜方法是通过显微观察药物样品中的微生物来进行检测。
该方法对于观察微生物的特征和形态非常有帮助，在病原微生物的检测中具有独特的优势。
然而，光学显微镜方法的缺点是需要有经验的操作者进行观察和判断，结果可能受到主观因素的影响。
3.快速生物计数方法快速生物计数方法利用现代技术对药物样品中的微生物进行快速检测和计数。
这种方法不仅具有高效、准确的优点，而且时间短、操作简便，可以大大提高药物生产过程中的生产效率和产品质量。
然而，快速生物计数方法的设备和技术要求较高，需要相应的专业设备和人员培训。
三、法规和指南为了保护患者的安全和维护药品的质量，各国都制定了相关的法规和指南来规范药物的微生物检测。
例如，美国食品药品监督管理局（FDA）颁布的《药典》包含了详细的微生物检测方法和要求。
此外，国际药典委员会（USP）、欧洲药典委员会（EP）等国际组织也发布了相应的规范和指南，以促进全球药品质量的统一。
结论药物的微生物检测对于保障患者的安全和药品的质量至关重要。
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9ml生理盐水
从剩余10ml悬液中取1ml 1ml 加入上述四个稀释管中
1ml
10-1 10-2 10-3 10-4
从上述四个稀释管中各取1ml混入溶化的琼脂培养基中， 混匀，冷却后置37℃恒温培养箱培养24小时 。
实验二 药品的微生物限度检查（二） 细菌的形态学检查及培养接种技术
一、目的要求: 1、了解细菌培养接种技术 2、掌握细菌基本形态 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法
药物的微生物限度检查（三）
1）从伊红美兰琼脂平板培养基上----挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜
面培养基上面，进行细菌的纯培养。 2）观察外用药物在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生 长状况。
记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠 度等。
革兰氏染色镜下观察其菌落形态。 根据上述被检菌落的生物性质和状况及细菌形态，确定该 被检菌的名称。 3）从卵黄高盐琼脂平板培养基上生长，挑取黄色的湿润菌 落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。
分区划线法
菌落
斜面移种技术
菌苔
液体移种技术
穿刺技术
药物的微生物限度检查方法（二）
取出前次实验培养物观察： 1.口服药物 1)细菌鉴定：
在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长： 增菌液变混浊―――――有 -----接种在伊红美兰琼脂平板培养基
上面。 方法：分区划线接种。 2)细菌总数测定：
选择30-300个菌落平板， 细菌总数＝菌落数×稀释倍数
• 因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比 所需的pH高。
• 鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养24小时，然 后观察。
二、细菌的接种技术
材料
• 普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体斜面培养基 大肠埃希菌培养物（１套／台）
※方 法
1.平板划线接种法
（1）平行划线法 （2）种法 4.半固体接种法
二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（二） 2.空气、皮肤细菌检查结果测定。 3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。 4.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能)
液体培养基 平板培养基 斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基 5.显微镜下观察 细菌的基本形态: 球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。
药品的微生物限度检查实验目的
通过实验了解药品微生物限定检查法的 意义、设计方法、细菌检查常用的基本技术 和程序，结果分析方法。
药品的微生物限度检查实验程序
一、药品的预处理 二、药品的增菌培养、结果分析 三、细菌分离鉴定、结果分析
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药 外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
2.外用药 1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培
养物有无细菌生长： 增菌液变混浊―――有 2)细菌鉴定： （1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在16烷三甲 基溴化胺琼脂斜面培养基上面。 方法：斜面化线接种； （2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高 盐琼脂平板培养基上面。 方法：分区划线接种。 37℃恒温孵育箱24小时培养后，观察结果。
2.细菌的生长现象及代谢产物的观察
菌膜 菌沉淀
对照 混浊生长
均匀浑浊
菌膜生长
3.中草药、抗生素抑菌试验
药品的微生物学检查 ppt 课件
实验一 药品的微生物限度检查（一） 实验室常用消毒灭菌设备 空气和皮肤细菌检查方法（综合实验+基础实验）
一、目的要求 1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备 2、了解空气、皮肤细菌检查方法 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法
二、实验内容 1.药品的微生物限度检查（一）
1）液体培养基---沉淀、浑浊、表面生长现象。 2）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。 3）双糖含铁培养基--- 动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。 4）结核杆菌菌落的观察。 3.中草药、抗生素抑菌试验 1）中草药---大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。 2）抗生素---青霉素、庆大、氨苄、新诺明、生理盐水。
2.细菌培养
外用药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中
37℃,24小时
口服药
药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中 37℃,24小时
3.细菌总数测定
将剩余口服药以10-1 10-2 10-3 10-4 进行稀释 (以生理盐水稀释)
取四个中试管 各加9ml生理盐水
1）口服药物的检查: ①药品的预处理： ②大肠杆菌的检查： ③细菌总数的检查：
2）外用药物的检查: ①药品的预处理： ②绿脓杆菌的检查： ③金黄色葡萄球菌的检查：
2.空气、皮肤细菌检查方法(验证) 3.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：
高压蒸汽灭菌锅、消毒煮沸器、G6玻璃滤菌器装置、洁净工作台、 移动式 紫外光灯、鼓风式干烤箱、紫外线杀菌标本。
特殊结构： 肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。 6.培养基的种类和用途
普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基
※一、空气、皮肤细菌培养现象观察
（一）记录空气微生物培养结果 • 菌落数目、大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）
（二）记录皮肤微生物培养结果 比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。
※培养基的制备
细菌基本形态 球菌
螺形菌
杆菌
葡萄球菌
链球菌
大肠埃希菌
枯草杆菌
霍乱弧菌
细菌特殊结构 鞭毛
荚膜
芽孢
spore 破伤风梭菌
实验三 药品的微生物限度检查（三） 微生物的形态学检查及药物的敏感性试验
一、目的要求: 1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察 2、掌握药品的微生物学检验程序和方法
二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（三） 2.细菌的生长现象及代谢产物的观察
培养基分类
根据物理性状分类： 液体培养基
半固体培养基
固体培养基
根据用途分类：
基础培养基
营养培养基
选择培养基
鉴别培养基
厌氧培养基
主要用于增菌 用于检测动力及保存菌种 用于分离鉴定细菌 普通琼脂培养基 血液琼脂培养基 SS培养基 双糖铁培养基 庖肉培养基
※培养基的制备程序
※ 调配→矫正pH（7.0-7.6）→分装→ 灭菌（121.3℃， 20-30分钟）→放入冰箱冷藏备用。