竹叶多糖提取、分离及检测技术研究
摘要竹子是禾本科，竹亚科多年生常绿植物，在我国具有悠久的食用和药用历史。
为了加强对竹叶的综合利用，本研究以毛竹为研究对象，对竹叶多糖的提取、纯化、检测及活性进行研究，通过单因素试验和正交试验考察了温度、时间、固液比、提取次数对多糖提取率的影响，同时对水提取、超声波提取和微波提取三种提取方法进行了比较，利用葡聚糖凝胶和纤维素柱层析分离技术对多糖进行纯化，并运用薄层色谱和气相色谱考察了其单糖组成，采用高通量药物筛选模型对多糖的抗肿瘤活性进行了探讨，试验结果如下：１建立了苯酚．硫酸法测定竹叶多糖含量的方法。
在波长为４９０ｎｍ，以无水葡萄糖为对照品，２０～１００ｕｇ／ｍｌ范围内，浓度和吸光度呈良好的线性关系，回归方程为Ｙ＝７．２７５ｘ＋Ｏ．０００４，相关系数Ｒ２为０．９９８９．２优化了竹叶多糖提取工艺参数，首次将超声波和微波技术应用到竹叶多糖的提取工艺，得到其最佳提取条件，水提最佳浸提参数为：温度８０℃，时间９０ｍ证，固液比１：２５，浸提３次，多糖得率为Ｏ．６６１％；超声波提取最佳浸提参数为：温度７０℃，时间２０ｍｉｎ，固液比１：２０，浸提３次，多糖得率为０．７０８％；微波提取最佳浸提参数为：微波功率５００ｗ，固液比ｌ：１５，时间２蚵ｎ，浸提３次，多糖得率为Ｏ．６５５％。
３竹叶粗多糖经ｓｅｖａｇ法脱蛋白，ＤＥＡＥ一纤维素柱层析，以浓度为０、Ｏ．０５Ｍ、０．１Ｍ、０．３Ｍ、Ｏ．５Ｍ的Ｎａｃｌ溶液梯度洗脱，得到四个竹叶多糖（Ｂ锄ｂ００ｐｏｌｙｓａｃｃｈ撕ｄｅ，ＢＰｓ）；ＢＰＳｌ、ＢＰｓ２、ＢＰｓ３、ＢＰｓ４，其得率分别为４６．４５％、４．３１％、１．６２％、Ｏ．５３％；ＢＰｓｌ再经ＤＥＡＥ一纤维素、ｓｅｐｈａｄｅｘＧ～７５凝胶柱层析得到ＢＰｓｌｌ：用ｓｅｐｈａｄｅｘＧ～１００柱层析鉴定了它们的纯度，用ＨＰＴＬｃ和Ｇｃ测定了它们的单糖组成为：鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖＿２，９１：９．２７：４．４２：６‘３８：２５．５９：９．４４。
４运用高通量药物筛选模型对竹叶多糖的抗肿瘤活性进行了考察，结果表明，在竹叶多糖剂量为１０ｕｇ，ｍｌ时，对ＴＨＰ．１（单核细胞白血病细胞株）肿瘤细胞有抑制作用。
关键词：竹叶多糖提取分离超声波微波柱层析抗肿瘤独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
研究生签名：亚彳时间：２扩口台年６月，￡）日关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。
同意湖南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。
（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）４研究生签名：、亚导师签名；７氮煅氓时间：２唧ｅ年６月，ｏ日时间：≯卯６年６月名日第一章前言多糖又称多聚糖（ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ），由单糖聚合而成，是聚合度大于１０的极性复杂大分子，分子量一般为数万，数十万到数百万，也有报道甚至达上千万，是生物体内普遍存在的一大类生物大分子。
多糖按其来源不同，可分为真菌多糖、植物多糖、动物多糖、藻类地衣多糖、细菌多糖等５大类。
现代研究表明多糖具有促进机体免疫力、抗菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老、抗炎、降低血脂以及改善动物生产性能等一系列作用，其中多糖的免疫调节作用是主要的，因此又叫免疫活性多糖。
２０世纪９０年代后，多糖及其复合物的分离纯化、组分测定和结构分析有了长足进步，同时由于细胞生物学和分子生物学的发展，研究发现了糖类化合物特别是糖复合物上的糖链参与了各种生命现象的调节，如细胞识别、粘连与融合、信号传达、免疫与应答、细胞转化和分化等都离不开糖链的参与。
由于糖复合物的种种功效，其研究也成为生命科学研究领域的新热点，具有重要的开发潜力和广阔的开发前景。
竹子是禾本科竹亚科多年生常绿植物。
全世界己记载的约有７０属ｌ２００多种竹子，广泛分布于东南亚、印度、中国南部、南美和日本等地“’“，我国是竹子中心产区之一，竹叶资源丰富，现有竹种３９属６００多种，全国竹林面积现已达４３９．４万ｈｍ２（不含台湾省，下同），占全国林地面积的２．７４％，其中毛竹林面积２９２．１７万ｈｍ２，竹林总蓄积达１１０８６．７万吨，其中毛竹蓄积量达８７６６万吨（５８．４４亿株），占７９．０７％。
１。
湖南省位于中国竹子分布的中心产区，境内地形地貌复杂多变、气候温和湿润、土壤类型多样的特点孕育了其丰富的竹类资源，全省共有竹类植物１９属１６０种，现有竹林面积７２．５万ｈｍ２，占全国竹林总面积的１６．５％。
楠竹（ｐｈｙｌｌｏｓｔａｃｈｙｅｄｕｌｉｓ）是湖南竹类资源的最主要成分，面积６９．５万ｈｍ２，占全国毛竹林总面积的２３．８％“。
“。
竹叶率随竹龄和叶龄的不同而变化，一般为３９％，可见我省乃至我国竹叶资源之丰富，开发前景之广阔。
竹叶性淡、微涩、寒、味甘、苦，具有清热利尿、明目解毒、止血、免疫调节、抗氧化、抗爱滋病和抗肿瘤等功效“’…，且无毒无害，可作为绿色食品进行开发，在我国具有悠久的食用和药用历史。
竹叶之所以对人体具有医疗和保健作用，是由于其中含有大量的黄酮类化合物和生物活性多糖及其它有效成分，如酚酸类化合扬、蒽醌类化合物、萜类内酯、特种氨基酸和活性肽、锰、锌、硒等微量元素“’”“。
其有效成分的含量和生物活性均与银杏叶具有可比性““。
日本从６０年代起就对竹叶多糖进行了深入研究，证实竹叶多糖具有明显的药用效果“３。
“３。
随后的研究表明，竹叶活性多糖有抗癌活性，抗氧化作用和免疫调节等作用“。
”１。
目前，竹子已广泛地应用于工业生产、工艺品的制作、食品加工、医药制造等行业，但与竹子的整株利用相比，竹叶的利用还有待进一步地开发。
竹叶是竹材加工过程中的一项副产品，早在１９９８年（淡）竹叶就被卫生部正式批准列入“药食两用的天然植物名单”。
但目前对竹叶的利用还很有限，竹叶大部分还是以一种加工废弃物处理，未能得到充分的利用。
对竹叶的研究也主要集中在竹叶黄酮及其生物活性和药理方面的研究，而对于竹叶多糖及其作用机理等方面的研究还不够深入…１。
１竹叶多糖的理化性质、含量及组成竹叶多糖（ＢＰｓ）是一种中等相对分子质量的杂多糖“…，其组成及含量因品种、产地、栽培管理水平、采收季节、原料老嫩、加工方式和分析研究方法等不同而有所差异。
日本ＫａｚｕｍｏｒｉＫ报道，日本箬竹叶多糖组成为：木糖４６％，阿拉伯糖２２％，葡萄糖１６％，半乳糖１６％。
丁玉强，陈舂英等“７１采用纸色谱和气相色谱法研究了从湖北恩施地区生长的箬竹叶中分离纯化的水溶性多糖的单糖组成为：鼠李糖１４％，岩藻糖５３％，甘露糖１２％，葡萄糖６％，半乳糖１３％，与ＫａｚｕｍｏｒｉＫ的报道有所不同。
唐莉莉，丁宵霖“”从毛竹叶中提取得一种中等相对分子质量的酸性杂多糖，根据标准品与样品的保留时间确定单糖种类，Ｇｃ分析表明：组成ＢＰｓ的糖基主要是鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖６种（Ｒａｈ：Ａｒａ：ｘｙｌ：Ｍａｎ：Ｇ１ｕ：Ｇ１ｃ＝０．１３：１．０８：０．２４：０．５２：２．８４：０．９５），其中以葡萄糖为最多。
唐莉莉，丁宵霖“”通过对１３个品种竹叶多糖含量的测定，发现毛竹、早园竹、四季竹的含量较高。
陆志科等“”通过把毛竹叶在酸性条件下水解，热水提取物通过处理后，分别用分光光度法测定不同年限下竹叶多糖的含量，结果表明，不同年限的毛竹叶中总糖含量在２２．３１％～２６．８５％之间，水溶性糖含量在９．１５％～１１．２８％之间，多糖含量在３．１６％～１５．５７％之间，总糖含量、水溶性糖、多糖含量最高为３～５年生毛竹叶。
２竹叶多糖的提取、分离和纯化植物多糖种类很多，其提取、分离纯化的方法也基本相似，均是利用多糖溶于水或酸、碱、盐溶液而不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂的特点，从不同原料中提取”…。
大分子植物多糖如淀粉、纤维素等多不溶于水，且在医药制剂中仅用作辅料成分，无特异的生物活性。
目前所研究的多糖，分子量较小，多可溶于水，难溶于有机溶剂，其提取方法通常有三种：（１）溶剂直接浸提法，也是最传统的方法，在我国已有几千年历史，中药的煎煮以及早期中草药有效成分的提取均采用此法，该方法具有设备简单、操作方便、适用面广等优点，但也存在操作时间长，对不同成分的浸提速率分辨率不高，能耗高等缺点；（２）索氏提取法，在有效成分提取方面有较为广泛的应用，但不太适合于高沸点溶剂提取；（３）新型提取方法，随着科学技２术的发展，近年出现了一些新的提取方法和新的设备，如超声波提取、微波提取、超临界ｃＯ。
提取以及膜分离提取技术。
等，极大丰富了中草药药用成分提取理论与工艺，为中药西药化提供了技术支持。
超声波是利用其产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，加速药物有效成分进入溶剂，从而提高浸提率，缩短提取时间，节约溶剂。
在国外，超声波提取法在中草药化学成分提取中应用比较早，Ｒｏｓｅ等利用超声波从萝芙木属植物的根中提取生物碱，Ｄｅｍａ９９１０等从曼佗罗叶中提取曼伦罗碱，Ｏｖａｄｉａ等从吐根中提取生物碱，在国内，目前超声波提取法在中草药化学成分提取中应用比较多，在黄芪、天麻、益母草、大黄等中草药有效成分的提取中均有报道””“。
微波提取是利用微波的穿透性能够透入基质内部形成内热源，利用其加热的选择性，能够使细胞内各细胞器升压，细胞壁破裂，使目标成分从细胞中释放出来并溶解于溶剂中，近年来微波技术开始应用于中药有效成分的提取，如Ｇａｎｚｌｅｒ从棉籽中提取棉子糖，从豆类中提取豆碱，国内也有人将微波技术应用于甘草、黄芪、红景天、麻黄、槐花、雪莲等有效成分的提取ｏ““，但至今尚未见将微波和超声波技术用于提取竹叶多糖的报道。
竹叶多糖的提取、分离以及含量测定等方面的相关报道还不多，主要是以热水回流的方法提取，得到租多糖，再用乙醇分级沉淀进行纯化，其提取分离的流程一般为：竹叶样品—一热水浸提—一有机溶剂沉淀得粗多糖—一分离除杂（蛋白质、色素、低聚糖等）—一精制多糖—哆Ｅ彳岳—，纯度鉴定—－相对分子质量测定——唁ｉ构分析．不同的条件提取毛竹叶、枝中的多糖其得率均有不同，浸提的料液比、浸提次数、浸提时间和分离纯化方法对竹叶多糖的提取效率都有很大影响，其中影响最大的是提取次数。
毛燕””研究了直接用水为溶剂提取苦竹叶多糖的工艺，用乙醇沉淀得到苦竹叶粗多糖。
其最佳提取工艺为：以水作溶剂，提取温度为９１～１００℃，料液比为１：１０，提取时间为５０～６０ｍｉｎ，可得到较为满意的提取结果。
苯酚-硫酸比色法测定毛竹叶多糖的研究
Ｈｕ ａ ｎ ｎＡｇ ｉｕｔｒ ｉｅｓ ｙ Ｃｈ ｎ ｓ ａ４１ １ ８ Ｃｈｎ ）（ ．ａ ｎ ｒ ｌ ｅＵｎｖ ｒｉ ， ａ ｇ ｈ ０ ２ ， ｉａ ３Ｓ ｎ ｙＩ ． Ｅｘ ． ｒ ． ｔ． Ｃｈ ｎ ｓ ａ ０ ０ ， ｉａ ４ ｃ ｕ ｔ ｍｐ＆ ｐ Ｃｏｐ Ｌ ｄ ， ａ ｇ ｈ ０ ０ Ｃｈｎ ）（ ． ４１ Ｈｕ ａ ｒ ｖｎ ｉｌ ａ ｎ ｎ ｎｐｏ ｉｃａ ｎ ｙＩ ． Ｅ ｐ Ｃｏｐ Ｌｔ． ａ ｇ ｈ ０ ０ Ｃｈｎ ） ｓ ｍｐ＆ ｘ ． ｒ ． ｄ Ｃｈ ｎ ｓ ａ４ ０ ． ｉａ １ ０
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竹叶黄酮的提取、检测、分离、抗氧化活性及构-效关系的研究
摘要
竹叶黄酮是我国新开发的一种植物类黄酮制剂，由于其具有优良的抗自由基、 抗氧化、抗衰老、及保护心血管等方面的生物学功效，目前已受到国内外市场的 广泛关注。为了全面考察竹叶黄酮的性质，本论文采用天然的刚竹属毛竹叶为原 料，对竹叶黄酮的提取、含量检测、分离纯化、抗氧化活性及构-效关系等方面作 了较系统的研究，主要研究内容和实验结果如下：
II
英文摘要
the antioxidant activity-structure relationship of flavonoids. From the above series experiments, it was proved that the bamboo leaves
flavonoids was a excellent flavonoids prepration. The research provided important theoretical and pratical guidances for exploiting and using of bamboo resource. Key words: bamboo leaves flavonoids, extraction, enrichment, antioxidant,
近年来，自由基生命科学的进展，使具有强抗氧化和清除自由基作用的类黄 酮受到空前的重视。二十世纪 80 年代以来，有研究报导[4-5]从竹叶中提取食品防腐 剂、杀菌剂和叶绿素等；90 年代以来，人们开始关注竹叶中黄酮类化合物的存在 及其生物学活性[6-9]。1998 年，我国研究人员在借鉴国内外植物黄酮提取方面的各 种专利技术的基础上，结合竹叶中黄酮类化合物存在的特点，创造了经济、适用、 独特的提取工艺，获得了国家发明专利，并率先在浙江实现了产业化生产，至此， 竹叶黄酮提取物正式面世。同年，(淡)竹叶被卫生部正式批准列入了“药食两用的 天然植物名单”[10]。1999 年竹叶黄酮获国家级新产品证书，其衍生产品---竹康宁 胶囊获卫生部保健食品批文，竹叶啤酒和竹叶饮料等也纷纷上市[11]。
不同地区竹叶中多糖的提取测定
不同地区竹叶中多糖的提取测定喻谨;岳永德;汤锋;姚曦;王坤【摘要】采用苯酚-硫酸法测定了10种竹叶多糖的含量，分析比较了不同竹种竹叶多糖含量的差异；利用离子色谱仪测定了竹叶多糖的组成。
结果表明：10种竹叶含多糖0.18%~0.93%，最高为福建青秆竹，最低是长宁佛肚竹；同一地区不同竹种的竹叶多糖含量存在极显著差异。
竹叶多糖由5种单糖组成，分别是阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖和甘露糖，其中阿拉伯糖占18.32%~36.63%，半乳糖占19.16%~38.19%，葡萄糖占16.90%~54.45%，木糖占5.88%~16.32%，甘露糖占1.53%~10.89%。
%The content of polysaccharides from ten species of bamboo leaves was determined by phenol-sulfuric acid method. The content difference among the different bamboo leaves was analyzed. The monosaccharide composition of polysaccharides from ten species of bamboo leaves was studied using high performance anion exchange chromatography ( HPAEC) respectively. The results indicated that the content range of polysaccharides was 0. 18% to 0. 93%, the highest was Bambusa tuloides Munro in Fujian, and the lowest was Bambusa ventricosa McClure in Changning. Significant differences were found among the content of polysaccharides from different species of bamboo leaves in the same area. Bamboo polysaccharides in different species were composed of arabinose 18. 32%-36. 63%, galactose 19. 16%-38. 19%, glucose 16. 90%-54. 45%, xylose 5. 88%-16. 32%, and mannose 1. 53%-10. 89%, respectively.【期刊名称】《生物质化学工程》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】4页(P40-43)【关键词】竹叶;多糖;含量;单糖组成【作者】喻谨;岳永德;汤锋;姚曦;王坤【作者单位】国际竹藤中心，北京 100102;国际竹藤中心，北京 100102;国际竹藤中心，北京 100102;国际竹藤中心，北京 100102;国际竹藤中心，北京 100102【正文语种】中文【中图分类】TQ35多糖是一类重要的生物活性物质，广泛存在于动物、植物、微生物等有机体中。
植物多糖提取、分离纯化及鉴定方法的研究进展
植物多糖提取、分离纯化及鉴定方法的研究进展陈红1杨许花1查勇2宋礼3高丹丹1*（1西北民族大学生命科学与工程学院，甘肃兰州730124；2日照市产品质量监督检验所，山东日照276800；3甘南牦牛乳研究院，甘肃合作747000）摘要：植物多糖又称植物多聚糖，是广泛存在于生物体中的一种物质，具有抗肿瘤、提高免疫、抗病毒等生物活性，现已广泛运用于食品、保健品和医药等行业。
多糖的生物活性与其组成、结构有关，植物多糖分离纯化和结构鉴定是多糖生物活性研究和应用前提。
该文主要综述了近年来植物多糖的提取、分离纯化及鉴定的方法，以期为植物多糖的研究提供参考。
关键词：植物多糖；提取；分离纯化；结构中图分类号TS255.1文献标识码A文章编号1007-7731（2021）22-0032-04 Research Progress in Extraction,Purification and Identification of Plant PolysaccharidesCHEN Hong1et al.（1College of Life Science and Engineering,Northwest Minzu University,Lanzhou730124,China）Abstract：Plant polysaccharide,also known as plant polysaccharide,is a kind of substance widely existing in biolog⁃ical organism，it have a variety of biological activities,anti-tumor,immune,antiviral,and other functions,are widely used in food,health products and pharmaceutical industries.The bioactivity of polysaccharides is related to the com⁃position and structure of polysaccharides.Therefore,the isolation,purification and structure identification of plant polysaccharides are the premise of their bioactivity research and application.This paper reviews the methods of ex⁃traction,purification and identification of plant polysaccharides in recent years,in order to provide theoretical basis for the study of plant polysaccharides.Key words：Plant polysaccharidde;Extraction;Separation and purification;Construction植物多糖又称植物多聚糖，是广泛存在于生物体中的一种物质，它是一类由醛糖或酮糖经糖苷键连接而成的天然高分子聚合物，是生物体内重要的大分子物质，是维持正常生命活动的基本物质之一。
联合法提取雷竹叶多糖及其红外光谱的研究
学性质 ，提出联合 开发 的思 路 ，探索 了联合 提取 有效成 分
的方法和条件 ，设计 了其 工 艺¨ 。按 照其工 艺设 计及 多糖 ］
的性质 ，如多糖溶 于热水 ，不 溶于氯 仿 、正 丁醇及 一定 浓 度的乙醇等 ，故 本实验 以热 水提取 法 ，乙醇醇 沉 除去部 分 醇溶性杂质及 蛋 白，从 而分离 多糖 。 由于 热水 可同 时将
ｔｃ ｎｑ ｅ ｅｈ ｉｕ ． Ｋｅ ｒ ｓ ｂ ｍｂ ｏ ｌ ａ ｅ ； ｄ ｖ ｌ ｐ ｎ ； ｐ ｌ ｓｅ ｈ ｒ ｅ Ｆ —Ｉ ｙ ｗｏ ｄ ： ａ ｏ ｅ ｖ ｓ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔ ｏｙ ａ ｃ ａｉ ； Ｔ ｄ Ｒ
雷竹叶为禾本科 （ ｒｍｉ ａ ）竹亚科 （ ａ ｕｏ ｅｅ Ｇａ ｎ ｅ ｅ Ｂ ｍｂｓｉ ａ ） ｄ 多年生常绿草本植 物雷竹 的 叶。因竹 叶提 取精细 产品原料 价格低廉 ，生产 工艺简单 ，设 备投 资少 ，产 品种类 多且具
ｔ ｎ ． ｈ Ｔ—Ｉ ｐ ｅ ｒ ｍ ｅｅｍｉ ｅ ｈ ｘｒ ｃｉｎ ， ａ ｄ ｂ ｕ ｔａ ｔ ｅ ｓ ｅ ｔｏ ｃ ｐ ｎ ｐ ｃｒ ｍ ｉ ｉ ｇ ｔｅ ｅ ｔａ ｔ ｎ ｕ ｌ ｙ ｉ ｓ Ｔ ｅＦ ｏ Ｒｓ ｔ ｏ ｕ ｄ ｔｒ ｎ ｄ ｔ ｅ ｅ ｔａ ｔ ｓ ｎ ｙ ｓ ｂ ｒｃ ｉ ｐ ｃｒ ｓ ｏ ｙ ａ ｄ ｓ ｅ ｔ ｏ ｖ ｕ ｆ ｔ ， ｈ ｘｒ ｃｉ ｓ ｑ ａ ｉ ｔｎ ｏ ｔ
（ 夷学 院 福 建省 高校 绿 色化 工技 术重 点 实验 室 ，福 建 武
武 夷 山 ３：设 计 了联 合提 取 雷 竹 叶 多糖 的新 工 艺 ，得 到 了对应 的提 取 物 多糖 。经 红 外 光谱 的 测 定后 ，进 行 拟 合
和差谱分析 ，确认 并鉴定 了提取 物的品质 ，反映 了工艺设计和 实验方 法的合理性。
植物多糖提取、分离纯化及鉴定方法的研究进展
然而，本研究仍存在一定的不足之处，例如实验范围较窄，未能全面考虑各 种因素对多糖提取、分离纯化及分析鉴定的影响。未来可以进一步拓展研究范围， 探讨更加高效、环保的多糖提取方法和纯化技术，同时深入研究多糖的结构与功 能关系，为多糖的应用提供更多理论依据和技术支持。
一、植物多糖概述
植物多糖是由植物细胞壁和细胞间层组成的复杂碳水化合物，具有调节植物 生理功能、增强免疫力等多种生物活性。近年来，随着生物技术的不断发展，植 物多糖在医药、保健、农业等领域的应用价值逐渐被挖掘出来，引起了广泛。
在分析鉴定方面，采用光谱分析法可以获得多糖的结构信息，而电化学分析 法则可以快速、准确地测定多糖的含量。
结论
本次演示对多糖的提取、分离纯化及分析鉴定方法进行了详细的研究，得出 了各种方法的相关优缺点。实验结果表明，乙醇提取法是一种高效、环保的多糖 提取方法；沉淀法和吸附法相结合可以获得高纯度的多糖；光谱分析法可以提供 多糖的结构信息，而电化学分析法则可以快速、准确地测定多糖的含量。
在分离纯化方面，除了传统的沉淀法、色谱法和膜分离等方法外，一些新的 分离技术如分子印迹技术、电泳技术等也被应用于多糖的分离纯化。此外，一些 新型材料如聚合物材料、无机材料等也被用于制备分离纯化多糖的新型膜和填料， 取得了很好的效果。
在鉴定方面，除了传统的化学法和光谱法外，一些新的鉴定技术如质谱技术、 基因工程技术等也被应用于多糖的鉴定。此外，一些新的生物活性方法也被用于 测定多糖的生物活性，如细胞试验、动物试验等。
四、研究进展概述
随着植物多糖在各个领域的应用价值逐渐被挖掘出来，植物多糖提取分离纯 化的研究也取得了长足的进展。从早期的水提取法、酸碱提取法等传统方法，到 后来的离子交换法、色谱法等较为先进的方法，植物多糖的提取分离纯化技术不 断发展。同时，各种新技术的应用也使得植物多糖的得率、纯度和结构分析更加 准确可靠。
苦竹属竹叶多糖_蛋白质及叶绿素比较研究
基金项目：国家科技支撑计划项目(2012BAD23B03)。 作者简介：魏琦（1983—），助理研究员，博士，现在国家林业局盐碱地研究中心从事博士后研究工作；通信作者为岳永德，教 授，博士生导师，研究领域为植物化学、环境化学，E-mail：yueyd@。
[2] [3]
[4]
[5]
2.2 蛋白质含量测定结果1. Nhomakorabea.1 多糖测定方法
多糖含量的测定方法采用参考文献 [11] 的方 法。称取0.60 g竹叶粉末，置于微波提取罐中，加 入 25 mL 蒸馏水，微波提取 1 次，微波功率为 600 W，提取温度为124 ℃，提取时间为44 min。提取 后过滤，定容至50 mL。取10 mL溶液于50 mL离 心管中，加入30 mL无水乙醇，摇匀，过夜。然后
2014年
第12卷
第1期
17
世界竹藤通讯
WORLD BAMBOO AND RATTAN
物活性和生理功能的营养物质，在竹叶中含量丰 富，一般在干青叶中含量为0.1%~0.7%
[1-2]
离心，将沉淀用蒸馏水溶解后定溶至10 mL，采用 苯酚-硫酸法测定。用PerkinElmer Lambda 35型紫 外可见分光光度计（美国PerkinElmer公司）测定 吸光度，以葡萄糖系列标准溶液制作标准曲线， 根据标准曲线计算竹叶多糖含量。
。竹叶 ，具
活性多糖具有抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、降血糖 及免疫促进作用等，可以用作免疫调节剂
[3-4]
有很大的开发利用价值。竹叶含有多种氨基酸， 竹叶氨基酸是竹叶中具有生理功能的重要成分， 部分氨基酸在医药等领域已有所应用[5-7]。竹叶中 含有丰富的叶绿素，竹叶绿素是一种无毒害、安 全稳定的天然色素，在食品、化妆品、医药等工 业中的应用越来越广泛，具有很大的开发利用价 值[8-9]。 研究发现，苦竹叶粗蛋白含量较高，其氨基 酸等含量高于毛竹 [10]。目前对于苦竹属竹种竹叶 化学成分的系统研究较少，尚无对苦竹属的竹类 植物间化学成分进行分析比较。本文选择10种苦 竹属竹种，对其竹叶中多糖、蛋白质及叶绿素等 化学成分进行分析比较，探讨同属竹种竹叶中各 化学成分的异同，以期为开发利用苦竹属竹叶资 源提供科学依据。
竹叶黄酮的分离提取
竹叶黄酮的分离提取、检测与成分分析姓名：周胤潇班级:微生物121学号：201201220414摘要：竹叶黄酮(Bamboo- leaf-flavonoid, BLF)是我们于上世纪90年代末创制的一种新型植物黄酮制剂,具有优良的抗自由基、抗氧化、抗疲劳、耐缺氧、抗病毒、抗菌、抗炎、降脂、扩冠和免疫增强活性等（1-2）。
竹叶总黄酮以其巨大的资源优势和良好的药理活性将成为一种非常有前途的天然药物,具有广阔的开发前景.本实验主要对竹叶中黄酮类物质的含量用紫外分光法进行测定以及高效液相色谱法对竹叶提取物的成分分析。
关键词：竹叶黄酮类物质紫外分光法高效液相色谱法前言竹子为禾本科Poaceae竹亚科Bambusoideae多年生常绿植物，在我国分布很广，资源十分丰富。
竹子在建筑、水利、农业等领域都有广泛的应用，然而，竹子加工利用后，竹叶却总是被弃置，造成了极大浪费。
近年来的研究发现竹叶中含有多种活性物质，其主要活性物质是黄酮类物质,含量平均在2%,竹叶提取物中的有效成分主要是以荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷为代表的碳苷黄酮和以对香豆酸、绿原酸、咖啡酸和阿魏酸为代表的植物酚酸为主，竹叶黄酮中的功能因子主要是黄酮糖苷和香豆素内酯,黄酮类物质是一类天然植物成分，具有显著的生理及药理活性，黄酮类成分有明显的抗溃疡、解痉、抗菌、抗炎、降血脂、镇痛和雌性激素等生物活性和生理活性作用⑶。
实验目的：（1）掌握样品的前处理的方法（2）掌握竹叶黄酮的提取、分离与纯化（3）用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定竹叶子中总黄酮（4）采用超高效液相色谱（UPLC）定量分析竹叶中荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、对香豆酸、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸8 个特征性成分的量。
1 实验材料和仪器1.1实验材料：竹叶（摘自浙江农林大学校园内）标准样品：甲醇（分析纯）、乙醇（分析纯）、亚硝酸钠、硝酸铝、石油醚（分析纯）、氢氧化钠、芦丁标准品（购自中国药品生物制品检定所，纯度均大于98%）、去离子水。
苦竹叶多糖提取工艺的探讨
Ｓｖｇ 法 除 蛋 白 质 ，加 入体 积分 数 为 ７ ％的 乙 醇 ，静 置 １ ，得 到较 多 的 多 糖 沉 淀 。 ｅａｅ ５ ２ｈ
关键词 ：苦竹叶多糖 ；提取 工艺 ；多糖提取率 中图 分 类 号 ：Ｑ ４ — ３ ９ ６ ３ 文 献标 志 码 ：Ａ
Ｅｘｒ ｃｉｎ Ｐ ｏ ｅ ｓｏ ｏｙ ａ ｃ ａ ｉ ｅ ｎ Ｐ ｅｏ ｌ ｓｕ ｔａ ｔ ｒ ｃ ｓ ｆＰ ｌｓ ｃ ｈ ｒｄ ｓｉ ｌｉｂ ａ ｔ ｓＡｍａ ｕ ｅ ｖ ｓ ｏ ｒ ｓＬ ａ ｅ
ｔｍ ｅ ｔ ４ ｔ ｅ ｒｆ ｃ ｎｄｉ ｏ ｂ ｓｕｄ ｉ ｇ ｔ ｅ ｅ ｔａ ｔｏ ｆｐｏｙｓ ｃ ｈａ ｉ ｆｏ ｉ ｓ ｗｉｈ ０ ｉ ｓ ｃ ａｔ ｏ ｔ ｎ ｙ ｔ ｙ ｎ ｈ ｘｒ ｃｉ ｎ ｏ ｌ ａ ｃ ｒｄｅ ｒ ｍ ｂ ｍｂｏ ｔ ｔｒ ｍ ｉ ａ ｏ ｗｉ ｗａ ｅ ．Ｔｈ ｏｅｎｓ ｗｅ ｅ ｈ ｅ ｐｒｔ ｉ ｒ
联合法提取多糖和黄酮及其紫外光谱的研究
了尝试 ， 到 了结果 ， 于篇 幅 ， 仅 就其 中提 取 多糖 得 限 现
及 其紫 外光谱 的研究 探讨 如下 。
精制 多糖
Ｆｇ１ 联 合 提 取 多糖 及 黄 酮的 工 艺设 计示 意 图 ｉ ．
关 键 词 ： 叶； ； ；Ｖ 竹 开发 多糖 ｕ
中图分类 号 ：７ ５０ 文献 标识码 ： ｓ９ ． ８ Ａ
文章编 号 ：６ ４ ２ ０ （ １）２ ０ １ — ４ １ ７ － １９２ ００ — ０ ４ ０ ０
竹— —禾 本 科 （ ｒ ｎ ａ） 亚 科 （ａ ｕｏｄ ａ） Ｇ ａ ｅｅ竹 ｍｉ Ｂ ｍｂ ｓｉｅｅ 的多年 生常绿 草本植 物 。因竹 叶提取 精细产 品原 料价
氯 化 钙 干 燥 ， 滤 ， 冻 、 燥 ， 得 粗 多 糖 ， 重 抽 冷 干 即 称 １ ６ ８ 。重复 以上 过程 ， 取 约 １ ｇ 右 的粗 多糖 以 ． ２ｇ ５ 制 ０左
于溶剂 浸提 。棕色 磨 口瓶 保存 备用 。
２２ 试 剂 ．
备 后续 精制 。
精 确 称 取粗 多糖 ５０ ０ ｇ ． １ ，用 少量 重蒸 水 充 分溶 ０ 解 ， 粗 多糖 液 与胰 蛋 白酶 液按 １ ： 合 ，７【 将 Ｏ ４混 ３ ０水浴 ＝ ５ ， 入 ０２倍 体积 ｐ ＝ ． ｈ加 ． Ｈ ７０的 １ ％Ｈ ｏ 反 应 除杂 ， ０ ２２ 静
提取有 效成分 的方 法和 条件 。 工艺 设计 的流程 示意 其
见 Ｆ ｇ １ ｉ 。
的特性 分析 。水相 经有机 溶剂分 离后 ， 制备 多糖 ， 可 其