兔骨髓源成骨细胞与多孔支架复合的实验研究
兔脊髓实验实验报告
一、实验背景脊髓损伤是一种严重的伤病，其致残率与致死率非常高。
脊髓损伤后，由于损伤部位神经纤维的断裂和神经细胞损伤，导致脊髓功能丧失，严重影响患者的日常生活。
近年来，神经组织细胞移植逐渐应用于脊髓损伤的治疗并取得了肯定的效果。
本研究旨在通过兔脊髓损伤修复实验，探讨骨髓基质细胞源性神经干细胞在脊髓损伤修复中的作用。
二、实验材料与方法1. 实验动物：选择健康成年兔30只，体重2.5-3.0kg，随机分为三组：对照组、损伤组、移植组。
2. 实验材料：骨髓基质细胞、神经干细胞、兔脊髓损伤修复试剂盒等。
3. 实验方法：（1）损伤组：采用手术方法制作兔脊髓损伤模型。
（2）移植组：在损伤组的基础上，将骨髓基质细胞源性神经干细胞移植到损伤部位。
（3）对照组：仅进行手术操作，不进行神经干细胞移植。
4. 实验观察指标：（1）脊髓损伤评分：观察兔脊髓损伤程度，评分标准如下：0分，无损伤；1分，脊髓部分损伤；2分，脊髓完全损伤。
（2）神经功能评分：观察兔脊髓损伤后的神经功能恢复情况，评分标准如下：0分，无神经功能；1分，部分神经功能；2分，完全神经功能。
（3）脊髓组织学观察：采用HE染色方法观察脊髓组织学变化。
三、实验结果1. 脊髓损伤评分：损伤组脊髓损伤评分为2分，移植组脊髓损伤评分为1分，对照组脊髓损伤评分为0分。
2. 神经功能评分：损伤组神经功能评分为0分，移植组神经功能评分为1分，对照组神经功能评分为2分。
3. 脊髓组织学观察：损伤组脊髓组织学观察可见大量神经元丢失、神经纤维断裂、神经胶质细胞增多等病理变化；移植组脊髓组织学观察可见神经元数量增加、神经纤维生长、神经胶质细胞减少等病理变化；对照组脊髓组织学观察无明显病理变化。
四、实验结论本研究结果表明，骨髓基质细胞源性神经干细胞移植可以显著改善兔脊髓损伤程度，促进神经功能恢复。
这为脊髓损伤的治疗提供了新的思路和方法。
五、实验讨论1. 骨髓基质细胞源性神经干细胞具有多向分化潜能，能够分化为神经元、神经胶质细胞等细胞类型，为脊髓损伤修复提供了细胞来源。
成骨细胞-钙磷陶瓷复合物体内成骨的力学研究
１ ３ ２ 动 物实 验 操 作 步 骤 人 工 制 造 兔 一 侧胫 骨 ．． 前侧缺 损 ， 大小约 １ ０ｍｍ×５ｍｍ×５ｍｍ， 构建 的 将 陶瓷载 体修 复兔胫 骨 缺损 。手 术后 动 物 分笼 单 独饲 养 。第 ４ ８周 两组 实 验 动 物分 批 处 死 取 材 ， 原 缺 、 取 损 处组 织 ， 修成 １ ０ｍｍ×５ｍｍ×５ｍｍ 大小 组织 块 ， 通 过大体 标 本观察 ， 观察 新 骨 的形 成 情况 。
后的颅 盖骨剪 成 １ ｍｍ×１ ｍｍ×１ｍｍ 大 小 的 骨粒 ，
再 用 Ｈａ ｋ 液 反复清 洗 直 至 肉 眼 见不 到 红 色 为 止 。 ｎｓ 在洗净 后 的骨粒 中加 人 少许 ０ ２ 胰蛋 白酶 ， ７ ．５ ３ ℃
消化 ２ ｎ 用 Ｈａ ｋ 液清洗 ３次 ， ０ｍｉ， ｎｓ 洗去 消化 的 细胞 和残 留的消 化液 。加 人少 许 ＤＭＥ 培 养 液 使 骨粒 Ｍ
瓷复 合 物 ， 照 组 为单 纯钙 磷 陶 瓷 复合 物 ， 内修 复 兔 骨 缺 损 ， 、 分 别 取 材 ， 学 测 量 仪 检 测 骨 愈 合 对 体 ４ ８周 力 组 织块 抗 压 强 值 进 行 统 计 学分 析 。结 果 成 骨 细 胞 一钙 磷 陶 瓷复 合 物 组 较 单 纯 钙 磷 陶 瓷 复合 物 组 骨 组 织块 抗 压 强 值 明显 增 高 。结 论
基磷 灰 石 ：磷 酸 三 钙 ６ ￡ ０：４ （ 南 大 学 材 料 系 提 ０东
２ ２ 组 织块 抗压 强值 ４周 时 ， 验 组 和 对 照组 抗 ． 实 压 强 度 分 别 为 （ ． ０＋０ １ ） ａ （ ． ７ ３ １ － ． ２ Ｍｐ 、 ２ ４ ±０ １ ） ． ８ Ｍｐ ， ａ 实验 组 与对 照组 抗 压 强 值 有显 著 性 差 异 （ ￡一 ４０ ， ． ５ Ｐ＜ ０ ０ ） ８周 时 ， 验 组 抗 压 强 度 为 （ ． ３ ．５ ； 实 ４ ６
3D打印Ti6Al4V钛合金支架的r力学性能及生物相容性
3D打印Ti6Al4V钛合金支架的r力学性能及生物相容性刘畅;王辰宇;刘贺;王中汉;林高用【摘要】以3D打印技术制备的多孔Ti6Al4V钛合金支架为研究对象,研究其显微结构特征与力学性能的关系,利用骨髓间充质干细胞研究多孔钛合金支架的生物相容性,以及在家兔全层骨缺损模型中研究支架周围骨质的生长情况.结果表明:3D打印的多孔Ti6Al4V钛合金支架的力学性能受其多孔特性的影响,具有较适合人体需求的初始强度;同时材料具有良好的细胞生物相容性;且多孔支架中的立体网格结构为细胞提供了生长空间,增加了骨髓间充质干细胞的增殖能力,促进了钛合金支架微孔中骨组织长入的速度.%Taking titanium alloy Ti6Al4V porous scaffolds by 3D printing as research object, the relationship between the microstructure characteristics and the mechanical properties was preliminarily investigated. Moreover, the bone marrow mesenchymal stem cells were used to investigate the biological compatibility, and the in vivo bone ingrowth ability of the Ti6Al4V porous scaffolds in a rabbit full-thickness bone defect model was detected. The results show that the mechanical properties of Ti6Al4V porous scaffolds prepared by 3D printing are affected by the porous microstructures with the incipient intensity that is suitable for human body. The Ti6Al4V porous scaffolds also have good biocompatibility and absorbability. The detailed grid structure in Ti6Al4V porous scaffolds provides a unique space for cells to grow, which can increase the proliferative ability of the bone marrow mesenchymal stem cells, and promote the ingrowth speed of the surrounding bone tissue in prosthetic microporous.【期刊名称】《中国有色金属学报》【年(卷),期】2018(028)004【总页数】8页(P758-765)【关键词】Ti6Al4V多孔支架;3D打印;力学性能;骨髓间充质干细胞;骨长入;生物相容性【作者】刘畅;王辰宇;刘贺;王中汉;林高用【作者单位】中南大学材料科学与工程学院,有色金属材料科学与工程教育部重点实验室,长沙 410083;吉林大学第二医院骨科,长春 130041;吉林大学第二医院骨科,长春 130041;吉林大学第二医院骨科,长春 130041;中南大学材料科学与工程学院,有色金属材料科学与工程教育部重点实验室,长沙 410083【正文语种】中文【中图分类】TG146;TG174自20世纪中叶以来，钛及钛合金具有低密度、高强度、无磁性以及耐蚀性等优点被应用于医学领域，而其中应用最广的即为Ti6Al4V合金，它除了含有6%(质量分数)以上的Al元素之外，还因为添加了少量的V后引入了少量的β相，从而使其拉伸强度更高，热稳定性以及抗腐蚀性更好，特别是多孔Ti6Al4V钛合金的弹性模量还与人骨的相似，具有良好的生物相容性及合适的力学性能，目前被普遍认为是制造骨科植入物的优良材料之一[1−3]。
利用PLA、PGA、PLGA三种支架再生兔关节软骨
·论著·利用P L A、P G A、P L G A三种支架再生兔关节软骨陈哲峰范卫民刘峰【摘要】目的观察兔关节软骨细胞在聚乳酸(P L A),聚羟基乙酸(P G A),以及两者的共聚物P L-G A三种三维支架上的贴附和生长情况,利用组织工程技术培养工程化关节软骨。
方法多聚赖氨酸包埋P L A,P G A,P L G A三维细胞支架。
分离培养兔关节软骨细胞,体外扩增后种植到三种支架中。
在体外培养软骨细胞一支架复合物,4周终止培养,进行H E、M a s s o n组织学染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色。
结果(1)体外培养发现,软骨细胞在P L G A支架材料内贴附生长良好,长期培养仍保持软骨细胞特性,其贴附生长能力,分泌Ⅱ型胶原能力较P G A,P L A支架组强。
(2)支架经过多聚赖氨酸包埋后,软骨细胞的贴附生长及分泌Ⅱ型胶原能力均较对照组好。
结论多聚赖氨酸处理的P L G A三维支架适合软骨细胞贴附生长和分泌Ⅱ型胶原,可作为软骨组织工程的细胞载体。
【关键词】软骨细胞;细胞支架;多聚赖氨酸E x p e r i m e n t a l s t u d y o n r e g e n e r a t i o n o f a r t i c u l a r c a r t i l a g e o n P L A,P G A,P L G A s c a f f o l d b y t i s s u e e n g i n e e r i n g8/5).’2K2+,,A<);2%M%+,L I UA2+,N B2E-@3M2+3*K J@3’*E27%=Q,A%@Q3<K K%1%-327/*Q E%3-1,)-+G%+,C27%=-1U+%O2@Q%3D,)-+G%+,210029,8/I)<【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o s t u d y t h e a b i l i t y o f p o l y l a c t i c a c i d(P L A),p o l y g l y c o l i c a c i d(P G A),P L G A i ns u p p o r t i n g t h e g r o w t ho f r a b b i t c h o n d r o c y t e s,a n d t o r e c o n s t r u c t a r t i c u l a r c a r t i l a g eb y t i s s u e e n g i n e e r i n g.M e t h o d s C o a t e dP L A,P G A,P L G Aw i t h p o l y-l-l y s i n e,f r e e c h o n d r o c y t e s i s o l a t e d f r o m r a b b i t a r t i c u l a r c a r-t i l a g ew e r e s e e d e do n t o t h r e ek i n d s o f s c a f f o l d s a f t e r e x p a n s i o nb y i nv i t r o c u l t u r e.T h e c o m p l e xo f c e l l-s c a f f o l dw a s t h e n c u l t u r e d i n v i v o.A f t e r4w e e k s o f c u l t u r e,t h e c o m p l e xw a s a s s e s s e d b y h i s t o l o g i c a l s t a i-n i n g o fH-E a n dM a s s o n.I m m u n o h i s t o c h e m i c a l a n a l y s i sw a s p e r f o r m e d t o e v a l u a t e c o l l a g e n t y p eⅡs y n t h e-s i s.R e s u l t s(1)A r t i c u l a r c h o n d r o c y t e s w e r e w e l l d i s t r i b u t e d a n d a d h e r e d t o P G A,P L G A s c a f f o l d s a n dm a i n-t a i n e d t h e i r c h a r a c t e r i s t i c s o f a r t i c u l a r c a r t i l a g e t h r o u g h o u t t h e c u l t u r e p e r i o d.(2)C h o n d r o c y t e sw e r ew e l ld i s t r i b u te d a n d a d h e r e d t o s c af f o l d s a f t e r c o a t e dw i t h p o l y-l-l y s i n e,a n d s e c r e t e dm o r e t y p eⅡc o l l ag e n i n c o n-t r a s t t o n o n-c o a t e d s c a f f o l d s.C o n c l u s i o n P L G A s c a f f o l d c o a t e dw i t h p o l y-l-l y s i n e c a n s u p p o r t t h e c h o n d r o-c y t e p r o l i f e r a t i o nw i t hm a i n t e n a n c e o f t h e i r p h e n o t y p e,a nd c a n be s u i t a b l e c a r r i e r sf o r t i s s u e e ng i n e e r i n g o fa r t i c u l a r c a r t i l a g e.【K e y w o r d s】C h o n d r o c y t e;S c a f f o l d;P o l y-l-l y s i n e[(%-+,Q9C27(,<9,9Q32005,31(8):599S601N]由于软骨自身修复能力有限,创伤等病因导致关节软骨缺损后,常继发成为骨关节炎。
纤维环修复组织工程支架材料的研究进展
纤维环修复组织工程支架材料的研究进展王宇鹏;银和平【摘要】腰椎间盘突出症是外科的常见病、多发病,摘除髓核后仍然会有一定的复发率,造成术后复发的主要原因之一是如何使得纤维环缺口修复及再生,以恢复原有纤维环的结构及功能.随着组织工程学的不断发展,纤维环修复组织工程支架材料的研究也不断得到学者们的重视.本文对近几年国内外关于纤维环组织工程学修复支架材料做一介绍,为今后的纤维环修复支架材料选择提供参考.【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2014(046)008【总页数】4页(P944-947)【关键词】纤维环;修复;支架材料;组织工程学【作者】王宇鹏;银和平【作者单位】内蒙古医科大学,内蒙古呼和浩特010059;内蒙古医科大学第二附属医院,内蒙古呼和浩特 010030【正文语种】中文【中图分类】R681.3生理状态下，椎间盘由髓核、纤维环及上下软骨终板组成［1］，纤维环由胶原纤维组成的片层结构并包绕髓核，每层之间以约60°角相互排列［2］。
纤维环的这种排列方式与髓核相连能够承受巨大压力，但纤维环本身承受压力则很弱［1］。
在外伤、手术及退行性变导致纤维环破裂，造成腰椎间盘突出症的复发率很高［3～5］，因此，纤维环的修复显得十分重要，组织工程学近年不断收到学者的关注［6］。
近年，组织工程学［7］的不断发展给学者们带来希望，学者们通过研究纤维环修复支架材料来修复纤维环的缺口，尽最大程度修复纤维环，以最大限度的恢复椎间盘的结构及功能［8］。
1 纤维环修复支架材料的组织工程学要求随着组织工程学的不断发展，用作纤维环修复的材料也不断被发现，纤维环修复主要是恢复自身力学结构及原有的功能。
因此，作为纤维环修复的支架材料具备一些基本要求：（1）具有免疫源性，材料应当无毒，对人体无刺激性，无遗传毒性，无致癌性，无致畸性，对人体组织、血液无不良反应。
（2）具有生物相容性及良好的生物安全性。
（3）具有生物降解性。
骨组织工程研究的新进展:修复骨缺损的完美技术
骨组织工程研究的新进展：修复骨缺损的完美技术李凯【摘要】骨组织工程自20世纪80年代诞生以来,取得了飞速的发展,为临床上骨缺损的治疗带来新的希望.纵观骨组织工程研究的二十多年里,其构成的三大要素:种子细胞方面、支架材料方面和组织构建方面都取得了一定的进展.但是距离组织工程骨在临床中正式使用尚有一定距离,有待进一步的研究.本文就目前骨组织工程研究的现状及最新进展作一综述.%Bone tissue engineering has developed rapidly since the 1980s and brought new hope for the treatment of bone defects. Throughout twenty years, the three major elements of bone tissue engineering: seed cells, scaffolds and organizations to build have made great progress. However, there is still certain distance for tissue engineered bone to be used officially in clinic. In this paper, the current status of bone tissue engineering research and the latest developments are reviewed.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2012(009)018【总页数】3页(P15-17)【关键词】骨组织工程;骨缺损;研究进展【作者】李凯【作者单位】哈尔滨医科大学附属第三医院骨科,黑龙江哈尔滨150081【正文语种】中文【中图分类】R681.2临床上由于各种原因导致的骨缺损很常见，然而修复骨缺损的惟一方法是通过骨移植来实现。
新西兰大白兔骨膜下组织工程骨异位成骨的实验研究
８ ８・ ３
中国骨伤 ２ １ 年 ｌ ０１ Ｏ月第 ２ ４卷第 １ Ｏ期 Ｃ ｉａＪＯｔｏ ｒｕ ， ｃ． １ ， １ ４， ．０ ｈｎ ｒ ｐＴａｍａ Ｏ ｔ ０ １Ｖｏ． Ｎｏ１ ｈ ２ ２
・
基 础 研 究 ・
新西兰 大 白兔骨膜下组织工程骨异位成骨 的 实验研究
周强 ， 汪洋 ， 虞杰 ， 迎 浩 余
３ｍｏ ｔ ｓ Ｂｌｏ ｅ ｓ ｌ ａ ｄｏ ｔｏ ｌ ｓ ｒ ｘ ｍｉ ｅ ｒ ｕ ｈ ｏ ｔ ａ ｍｉｒ ｓ ｏ ｅ Ｒｅ ｕ ｔ ： ｗｅｖ ｍｐ ａ ｔ ｄ ｅ ｇ ｎ ｅ ｅ ｏ ｅ ｎ ｈ ． ｏ ｄ ｖ ｓ ｅｓ ｎ ｓｅ ｂ ａ ｔ ｗｅｅ ｅ ａ ｎ ｄ ｔ ｏ ｇ ｐ ｉ ｌ ｃ ｏ ｃ ｐ ． ｓ ｌ Ｔ ｌ ｅｉ ｌ ｎ ｅ ｎ ｉ ｅ ｒ ｄ ｂ ｎ ｈ ｃ ｓ
并 被 骨 膜 包 围 ， 织 工程 骨 中 有 大 量 血 管 和 新 生 骨 形 成 ， 组 织 结 构 相 对 紊 乱 ， 同于 正 常 骨 组 织 结 构排 列 规 则 ， 组 骨 不 血 管分 布 均 匀。 ４例 取 材 时发 现 植 入 物 游 离于 骨膜 外 ， 部 分 材 料被 吸收 ， 留植 入 物 体积 明显 小 于骨 膜 下 成 骨 ， 大 残 未见 明 显 的 骨 组 织 形 成 ， 供 情 况欠 佳 。股 骨 骨膜 下组 织 工程 骨 颗 粒 ８ ％ 贴 附 牢 固 ， 骨 良好 ， 骨 内有 大 量 血 管 长 入 。 结 血 ０ 成 新 论 ： 织 工 程 骨 可 以在 骨膜 下 获 得 良好 的 异 位 成 骨 。 组
ｒｂ ｉ Ｚ Ｕ Ｑｏｇ ＮＧ Ｙ ｎ ， ａ ｂｔ ＨＯ ｉ ， ｓ ｎ ａｇ ｌ ，
， Ｕ Ｙｎ ・ａ． Ｄ ｐ ｒ ｅ ｔｆＯ ｔｏａｄｃ ，ｆ ｌｔｄＰ ｔｏＨ ｓｉ Ｙ ｉ ｈｏ ｇ ｅ ａ ｍ ｎ ｒ ｐ ｅｉｓＡ ｉ ｅ ｕｕ ｏｐｔ ｏ ｔ ｏ ｈ ｉ ａ ｌ ａｆ
软骨PLGA-Ⅱ型胶原支架复合体修复兔膝关节骨软骨损伤
软骨PLGA-Ⅱ型胶原支架复合体修复兔膝关节骨软骨损伤黄彰;王双利;潘政军;江华;熊高鑫;李劼若;侯辉歌【摘要】目的探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导的软骨细胞与聚乙醇酸-乳酸共聚物(PLGA)-Ⅱ型胶原支架通过管帽结构复合构建组织工程软骨复合体修复兔膝关节骨软骨损伤的效果及各界面耦合情况.方法 BMSCs经软骨诱导液诱导成软骨细胞后接种于PLGA-Ⅱ型胶原支架的底层,支架表层戴管帽.将该细胞-支架复合物置入软骨条件培养液中培养2周,扫描电镜观察.将45只新西兰大白兔随机分为A、B、C3组,每组15只,并于股骨髁处造模.分别于缺损处植入戴管帽结构复合的软骨支架复合体(A组)、PLGA-Ⅱ型胶原支架(B组)、不植入任何材料(C组).于第4周和第12周取材行大体观察和组织学分析.结果 A组和B组缺损处均有软骨生成;C组缺损明显,只有纤维组织生长.A组软骨缺损部分软骨细胞修复,成骨区部分骨样细胞修复;两者耦合处犬牙交错,修复缺损程度及成骨区和成软骨区界面耦合情况明显优于B、C组.软骨组织学评分A组优于B、C组(P＜0.05).结论 BMSCs诱导分化成的软骨细胞与PLGA-Ⅱ型胶原支架经过管帽结构构建成的软骨PLGA-Ⅱ型胶原支架复合体可有效修复兔膝关节骨软骨损伤,新生软骨、骨与宿主软骨、骨及新生软骨与软骨下骨各界面耦合良好.【期刊名称】《临床骨科杂志》【年(卷),期】2016(019)001【总页数】6页(P101-106)【关键词】PLGA-Ⅱ型胶原支架;骨髓基质于细胞;骨软骨损伤【作者】黄彰;王双利;潘政军;江华;熊高鑫;李劼若;侯辉歌【作者单位】安徽医科大学第三附属医院关节外科,安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院关节外科,安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院关节外科,安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院关节外科,安徽合肥230061;安徽医科大学第三附属医院关节外科,安徽合肥230061;暨南大学骨科疾病研究所,广东广州510630;暨南大学骨科疾病研究所,广东广州510630【正文语种】中文【中图分类】R681.3;R318.17关节骨软骨损伤一直是临床治疗较棘手的问题，组织工程化软骨复合体的构建为软骨损伤的修复提供了新的方法[1]。
不同孔隙率锶磷灰石陶瓷体内异位成骨能力的比较
ＨＡ 多孔 陶瓷是 较 理 想 的 骨 组 织 工 程 支 架材 料 ， 骨 成
细 胞复合 Ｓ — ｒＨＡ 陶瓷 用 于骨缺 损 的修 复 ， 具有 广 阔的
临床 应 用前景 。
关键 词 ： 锶磷 灰石 ； 隙率 ； 骨细 胞 ； 环素 荧 光 标 孔 成 四 记； 异位成 骨
中 图分类号 ： Ｒ １ ． ８ ３ ８ ０ 文 献标 识码 ： Ａ
的 纯 羟磷 灰 石 陶 瓷 体 复 合 ， 自体 回 植 到 兔 背 脊 肌 内 。 同 时 以 未 复 合 细 胞 的 相 同 孔 隙 率 的 陶 瓷 材 料 作 为 对 照 ， 入 后 ４周 、 ２周 和 ２ 植 ｌ ４周 取 材 ， 四 环 素 荧 光 染 行 色观 察 ， 量 计 算 各 组 陶 瓷 材 料 新 骨 的 形 成 量 和 速 度 ， 定 比 较 不 同孔 隙 率 锶 磷 灰 石 陶 瓷 材 料 的 异 位 成 骨 能 力 。
化 为 成 骨 细 胞 ， 别 与 孔 径 约 为 ４ ０ ７ ０￣ 孔 隙 率 分 ５～ ０／ ｍ、 分 别 为 ５ 、 ０ 、 Ｏ 的 Ｓ ０ ６ ％ ７ 卜ＨＡ 以 及 孔 隙 率 为 ７ ０
本 实 验 通 过 将 不 同 孔 隙 率 的 含 ５ 克 分 子 数 的 Ｓ— ｒＨＡ 陶瓷 与兔 骨髓 来 源 的 成 骨 细 胞 复 合后 ， 自体 回 植 到兔 背脊 肌 内 ， 同时 以未 复 合细 胞 的 相 同 孔 隙率 的 陶 瓷材 料作 为 对 照 ， 入 后 ４周 、 ２周 和 ２ 植 ｌ ４周 取 材 ， 行 四环 素荧 光染 色 观察 ， 量 计 算 各 组 陶 瓷 材 料新 骨 定 的形 成 量和 速度 ， 比较 不 同孔 隙 率 Ｓ － ｒＨＡ 陶瓷 材 料 的 成 骨能力 ， 以便 为其 临 床应 用 提供 依 ７ Ｏ — ２０ １ ０ —７ １ ２ ０ ） ７１ ８ —５ １
组织工程骨和软骨的建造
组织工程骨和软骨的建造关键词：骨；软骨；细胞；组织工程0 引言人类因先本性和取得性疾病引发骨和软骨组织的缺损或畸形，需要选用理想的修复或替代材料完成骨和软骨组织的修复与重建.现今尚无一种修复材料在生物学特性方面能够达到自体组织移植的水平.因此采纳组织工程的方式，建造自身细胞来源的自体组织已成为生物医学研究的一项重要课题［1,2］.我科由国家自然科学基金和军队医药卫生科研基金资助进行组织工程骨、软骨的研究，现将部份研究功效做以介绍.1 材料和方式组织工程骨的研究实验采纳裸鼠和新西兰兔作为实验模型.支架材料的制备取新西兰兔的膝关节，冲洗、漂洗去除骨髓组织，采纳脱脂、脱矿、去酸性蛋白等化学处置方式，经冻干处置后，制备成骨松质基质.骨松质基质具有多孔网状结构.细胞分离培育取兔骨髓基质细胞，经体外分化诱导为成骨细胞，经体外培育扩增后与可降解水凝胶混合.细胞/支架复合物的形成将5×106*mL-1的成骨细胞接种于松质骨基质支架上，表面行钙离子固化，体外培育48h.然后将细胞/支架复合物植入裸鼠和新西兰兔皮下.以单纯松质骨基质移植作为对照.组织工程软骨的建造细胞载体材料的选择别离选用牛腱胶原、聚氧化乙烯温度固化聚合物、藻酸盐3种水凝胶作为软骨细胞载体材料.软骨细胞的分离材料取兔耳软骨，用Ⅱ型胶原酶消化分离，按4×107*mL-1将软骨细胞与载体材料混合.细胞/载体材料复合物的植入采纳注射方式将细胞/载体材料复合物植入裸鼠及新西兰兔皮下，在体内进行固化.以单纯载体材料植入为对照.2 结果组织工程骨的研究组织学研究显示，移植后2mo松质骨基质大部份吸收，由成熟的骨组织替代.但是单纯松质骨基质移植骨仅显现少量骨样组织.组织工程软骨的研究可注射软骨移植后3mo，3种水凝胶类载体材料均呈现不同程度的吸收，并有大量软骨组织的形成.免疫组织化学检查显示，在所形成软骨中有大量Ⅱ型胶原和硫酸软骨素的形成.对照组无软骨形成.3 讨论组织工程支架材料的研究和应用是组织工程组织建造的关键问题［1］，咱们第一次采纳松质骨基质作为支架建造组织工程骨，并证明了其可行性，为进一步深切研究该支架材料的应用及组织工程骨的血管化问题奠定了基础.可注射性软骨的成功建造具有普遍的临床应用前景［3］，同时咱们加倍关注骨/软骨复合组织的建造，因为该项工作将面临关节结构的形成，是组织工程更具挑战的课题.参考文献［1］LanzarP,LangerR,:Boneandcartikagereconstruilagereconstuction ［M］.AcadPress,1996:619-652.［2］WhangK,HealyKE,［J］.TissueEngineering,1999;5(1):35-51.［3］WakitaniS,GotoT,［J］.TissueEngineering,1998;4(4):429-434.。
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种 子 细 胞 及 其 载 体 材 料 是 近 年 来 骨 组 织 工 程 研 究 的 热
点、 难点 和重点 。 支架材料作为成骨细胞 的载体和骨组织再生
了复合型 的材料 ，此 时新 型复合型生物 多孔支架制 备完成 。经
ｏ 照射灭菌后无 菌保存备 用。 １ ． 兔骨髓基质 干细胞 的培养 及诱 导分化 ．２ ２ 取新 西兰大
将 剪 裁 好 的
分化 ． 并骨髓 源成骨细胞在 多孔支架表 面的黏 附及 生长情 况。方法
兔 骨 髓基 质 干 细 胞 经 诱 导 分 化 为 成 骨 细 胞 。将 成 骨 细 胞 与 处
５ｍｍ ｘ１ ５ｍｍ聚氨 酯泡沫 （ ５ ｐ、 径 １０ ｍ ５ ０ ｍ、 ４ ｐ ｉ孔 ５ ￣ ０ 孔 隙率 ８ ． ％） ４２ 圆柱体小块浸泡 于医用硫酸钙 （ Ｓ浆 料 中， 聚 ９ ＭＣ ） 待
复 合 型浆 料 ） 中进 一 步 地 挂 浆 后 ， 于 室 内环 境 下 自然 干燥 置 ２ ， ４ｈ 电热鼓 风干燥箱 中 ８ Ｏ℃下干燥 １ ； 步骤重 复进行 ３ ２ｈ 此 — ５ 后， 次 就使新型复合型生物 多孔 支架 的所有孔壁上均匀地黏附
【 关键词 】成骨细胞
复合
培养 多孔 支架
１ 孙燕， 石远 凯． 临床 肿瘤 学 内科手 册 ［ ］ 京 ： 民卫 生 出版 社． Ｍ． 北 人
２ ０８ １ ２ ０ ，４
２ 黄 俊辉 ， 廖遇平 ， 曹培 国． 临床肿 瘤学教程 ［ 】 南科学技 术 出版 Ｍ． 湖
社 ．０ ６ ３ ２ ０ 。５
（ 收稿 日期 ：０ ８ ０ — １ ２０—４ １ ）
肝 脏 杂 志 ，０ １ （ ） ６ ２ ２０ ， １： －９ ６ ２
６ 王卫卫 ， 海波 ， 聂 赵亚刚 ， 大剂量易善 复治疗重 型肝炎伴 中重度黄 等．
疸疗效观察【． Ｊ实用医学杂志 ，０ ７ ２ （ ）７ ９ ７ ０ ］ ２ ０ ，３ ５ ：２ － ３
疗后 １ ４ｄ比较差异均有高度显著性（ ＜ ．５ ｏ Ｐ Ｏ０ 本研 究显示 易善 复治疗化 疗引起 的肝 功能异 常效 果确 切， 临床推广应用 。 值得
用金 属骨穿 针开窗 ， 用 １ 再 ２号穿刺针 插入股 骨髓腔 中 ， 快速 负 压抽取骨髓 ２ｍ ， ｌ迅速打入抗凝管 中并混匀 。将抽取 的骨髓液中 加 入 ２倍 体积 的 Ｐ Ｓ液 ， Ｂ 打匀后 ， １ ０ 以 ０转 ／ ｎ的转速 离 心 ０ ｍｉ
氨酯泡沫上所有孔茎均匀黏附 ＭＣ Ｓ浆料后取 出， 制得 坯体 ， 然后 将 坯 体 置 于 室 内 环 境 下 自然 干燥 ２ ， 热 鼓 风 干 燥 箱 中 ４ｈ 电 １０ｏ 下干燥 ２ ； １ Ｃ ４ｈ 最后将坯体浸泡于复合型浆料 （ Ｃ Ｍ Ｓ粉体 、 冻 干骨粉体 、 妥布霉素粉剂 以 ２： １ 比例与 １ １： 的 ％羧 甲基纤维 素
理过 的多孔 支架复合 ，在 扫描 电镜 下观 察细胞在 支架表 面的 贴附情况。结果 细胞接 种后 ， 在材料表面生长形 态正常 ， 属 性与特征 明显 。结论 新型复合型生物多孔 支架与兔骨髓 源 成骨 细胞具有 良好的结合 能力， 以进一步进 行体 内试验。 可
流变剂 和 ３ ％去离子水放入球 磨罐 中球磨 １ ５ ｈ后得 到分 散均匀
４ 例 患者 总有 效率为 ８ ． ２ ８１ ％，对照组 ４ ２例 患者 总有 效率为
５ ．６ ２组 总有效 率通过 统计学 比较 （ ＜ ．５ ， ４７ ％． ＰＯ ） ０ 观察组 疗效 优于对照组。 治疗前后 ２组相关生化指标通过统计学 比较 ， 治
５ 范竹萍， 曾民德， 巫善明， 易善复注射液治疗慢性 肝病的临床疗效【． 等． Ｊ ］
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● 艟 园
易善复治疗 肝功能异 常均取得 了良好 的效果 。 本研 究使 用 易善 复治 疗化 疗 患者肝 功 能异 常 ， 治疗 组
３ 陈灏珠． 实用内科学［］ Ｍ． 北京： 民卫生 出版社 ． ０ ，０ １ 人 ２ ５２０ ０
４ 刘 梅， 陆伦根 ， 民德． 曾 多烯磷 脂酰 胆碱对 肝细 胞保 护机 制 的研 究进 展 【． Ｊ 肝脏杂志，０ ６１ （ ）４ － ５ 】 ２ ０ ，１ １ ：３ ４
兔 骨 髓 源成 骨 细胞 与 多孔 支 架 复合 的 实验研 究
任 军 王 东 江 朵
（ 山西医科 大学第 二医院 ， 山西 太原 ０ ０ ０ ） ３ ０ １
【 摘要 】目的
通过对兔 骨髓基质千 细胞 的培养及诱 导
１ ． 新 型复 合 型 生 物 多 孔 支 架 的 制 备 ．１ ２
的构架 ， 其开发与研制显得尤为重要 。 课题组 自行制作 的新型 复合型生物 多孔 支架 内部微孔丰富 、 分布均匀 ， 呈现疏松珊瑚
状结构 ， 具有与骨组织 相近 的立体空 间结构 、 良好的生物相容 性。 本实验 以兔骨髓基质干细胞作 为种子 细胞 ， 导分化后 经诱 得到成骨细胞 ，将成骨细胞接种于新型复合型生物 多孔支架 上 ，通过扫描电子显微镜 来研 究细胞在材料表 面的黏 附及其
参考文献
７ 姜 宁华 ． 易善复 治疗 病毒性 肝炎合 并脂肪肝 临床疗 效评估 【． Ｊ 中国现 １ 代 应用药 学杂志，０ ４ １ ３ ： ５ ２ ７ ２ ０ ， （ ） ３ － ３ ２ ２
作者简 介 ： 张纪 良， ３ 男，６岁， 本科 学历， 毕业于 泸州 医学院 ， 主治医
师 。Ｅ— ｉ ａａ ｇ ３ ｉａｃ ｍ ｍａｌ ｌ ｎ １ ＠ｓｎ ．ｏ ：ｉ ２
生殖 特 性 。
１ 材料 和方 法
白兔 ２只 ， 前备皮 （ 除双侧后 肢大粗 隆处毛发 ， 用肥皂 水 提 剪 并
清洗 ３遍 ， 用碘 伏消毒 ３遍后 包扎 ） 再 。将 新西兰 大白兔 固定在
超净 台中 ， 注速 眠新 Ｉ０１ ｌ待麻 妥后 侧位暴露 股骨大转子 ， 肌 １ ．ｍ，