hi 血凝抑制试验原理
血凝抑制试验
血凝抑制（HI）试验简介（以禽流感病毒为例）一、原理流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。
HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA 蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。
可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。
四、试验步骤1 阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。
（3.8%枸橼酸钠（3.8g 枸橼酸钠，100ml超纯水），101kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。
血凝和血凝抑制实验
3、每孔加入1％鸡红细胞悬液25ul
4、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分 钟
5、结果判定
医学课件ppt
7
血凝效价测定
医学课件ppt
8
结果判定标准
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 ％凝集；
以出现＋＋（50％凝集）的抗原最高稀释 倍数为该抗原的血凝价（1:128）？？？ 。
25ul 1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一 个血凝单位。
医学课件ppt
10
血凝抑制试验
1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/128×4=1:32）
2、在血凝板上1－12孔内各加入25ul生理盐水；
3、在第1孔内加入被检血清25ul，然后倍比稀释至第 10孔，最后弃25ul；
医学课件ppt
16
注意事项
• 1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢， 以免损坏红细胞（表现为分离是上清液为淡 红色，正常情况第一次分离后上清液为淡黄 色，之后直至清亮为清洗干净）。
• • 2、在吸取过程中一定要将中间的白细胞层吸
取干净。
医学课件ppt
17
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 ％凝集；
2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而 稍向孔底集中，即75％凝集；
3、 ＋＋：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块， 即50％凝集；
4、 ＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四 周稍有凝集块，即25％凝集；
5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即 无凝集。
医学课件ppt
13
血凝HA和血凝抑制试验HI
HA值可用于评估血液凝固功能和血栓形成风险
试验方法
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
试验材料：抗凝剂、试管、离心机、凝血因子活性检测试剂等。
试验原理：通过观察血液凝固过程，检测血浆中凝血因子的活性。
试验步骤：采集血液样本，加入抗凝剂，离心分离血浆，加入凝血因子活性检测试剂，观察血液凝固时间并记录结果。
不同点：血凝HA试验只能判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，而血凝抑制试验HI不仅可以判断是否存在凝血功能障碍或血栓前状态，还可以检测抗凝物质的具体类型和浓度。
试验方法的比较
血凝HA试验：通过观察血凝块的形成和溶解过程，检测抗凝物质的存在和含量
操作简便性：血凝HA试验操作相对简单，而血凝抑制试验HI需要更多的样本和操作步骤
参考值：血凝HA试验结果的参考值一般为阴性或阳性，具体参考值因不同病毒而异。
临床意义
用于诊断血栓栓塞性疾病
评估血液高凝状态的风险
辅助诊断易栓症等血栓前状态
监测抗凝治疗的效果
02
血凝抑制试验HI
试验原理
血凝抑制试验HI是一种检测病毒抗体的方法，通过与特异性抗体结合，抑制病毒的凝集活性，从而检测出病毒抗体。
临床意义
用于诊断疾病：血凝抑制试验HI可以用于诊断多种疾病，如流感、麻疹等病毒感染性疾病，以及疟疾、血友病等出血性疾病。
监测治疗效果：通过血凝抑制试验HI，可以监测治疗效果，评估病情进展和预后。
指导治疗：血凝抑制试验HI的结果可以指导治疗，例如在输血时，通过血凝抑制试验HI可以确定最佳的输血量。
流行病学调查：血凝抑制试验HI还可以用于流行病学调查，了解疾病的流行趋势和分布情况。
试验意义：用于检测凝血因子活性，评估血液凝固功能，协助诊断凝血障碍相关疾病。
血凝及血凝抑制实验
1、在稀释移取混匀的操作过程中动作要慢，以免损坏红细胞（表现为分离是上清液为淡红色，正常情况第一次分离后上清液为淡黄色，之后直至清亮为清洗干净）。 2、在吸取过程中一定要将中间的白细胞层吸取干净。
血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验
一、实验目的 二、实验内容 三、实验原理 四、实验材料 五、实验方法与结果判定 六、注意事项 七、红细胞制备
一、实验目的
1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法 2、了解新城疫有关背景知识
二、实验内容
1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原的效价 2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体（疫苗注射后的抗体检测）
三、实验原理
1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。
病毒颗粒
红细胞
2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。
结果判定标准
1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集；
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
25
阐述ha,hi原理和实验流程
阐述ha,hi原理和实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!一、ha（血凝试验）原理和实验流程1. 原理：血凝试验是一种基于红细胞凝集反应的检测方法。
血凝抑制试验
影响禽流感血凝抑制试验因素的分析及解决方法摘要：在试验过程中，存在很多的因素会直接影响禽流感血凝抑制试验，从而导致试验结果不正确等现象出现，禽流感病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，这种红细胞凝集现象可被特异性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制实验（HI）。
基层工作中常用于新城疫、禽流感等免疫抗体的检测，辅助诊断病毒性疾病等，此方法操作简便、快速、准确、实用，但在实践中也常常由于某些因素的影响，从而使试验结果不精确，有时甚至无法判定结果。
1血凝试验原理和方法血凝(直接血凝)反应(HA)：利用病毒或病毒的血凝素，能选择性凝集动物红细胞及病毒浓度与红细胞凝集程度呈正相关的特性，采集敏感的动物红细胞配制成1%红细胞悬液与待测定的病毒液在微量血凝板上进行红细胞凝集实验，根据红细胞的凝集程度间接测定病毒中的病毒浓度。
方法是用鸡红细胞与标准抗原作用，检测出标准抗原血凝单位,为血凝抑制试验作准备。
2影响血凝试验的主要因素2.1被检血清腐败变性被检血清腐败变性严重影响免疫抗体检测。
因此，血样采集后要及时分离血清，分离后及时测定或放臵在4℃冰箱内保存，要力求新鲜，如暂时不测定可冷冻保存。
血清使用前要充分摇匀。
2.2不同来源、不同浓度的红细胞不同来源、不同浓度的红细胞会使结果差异很大，所以红细胞来源一定要相同。
一般需要3只或3只以上公鸡来提供红细胞，将3只以上公鸡红细胞混合在一起。
也可由1只公鸡来提供红细胞，但必须经多次试验证明是可行的。
有抗体鸡提供的红细胞需要更多次数洗涤。
但要注意有时不同的公鸡提供的红细胞对禽流感H5亚型抗体测定，效价差异很大。
不同浓度的红细胞对抗体测定也有影响。
2.3病毒悬液和红细胞悬液在使用前没有摇匀病毒悬液和红细胞悬液如没有摇匀，加入时浓度高低不一，会人为造成误差。
因此抗原和红细胞使用前一定要摇匀，保证每一孔中加入的浓度准确一致。
2.4 4个血凝单位(HAU)抗原配制不准确4个HAU抗原要现用现配，混悬液要混匀，配好的抗原室温下放臵不得超过4个小时，不可反复冻融。
血凝血抑试验
血凝试验(HA)定义：某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验(HA)血凝抑制试验(HI)定义：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。
这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验(HI) 。
原理：特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。
用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理，给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清，相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。
因此，可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。
病毒悬液能凝集红细胞，并且能被已知的抗血清（阳性血清）所抑制，那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。
如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性，那么，这个未知病毒培养物就是新城疫病毒；如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞，但不能被鸡新城疫血清所抑制，说明不是鸡新城疫病毒，可能是其他有血凝性的病毒。
阿氏（Alsevers）液配制称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH 值至6.1，69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用1%鸡红细胞液的制备2.1采血用注射器吸取阿氏液约1mL，取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合，放入装10mL阿氏液的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液，轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL，轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。
HI-HA试验原理
反应温度不能太高，若在37℃ （如温箱） 下进行，会影响检测结果。 标准抗原稀释液浓度必须为4个HA单位 /25μl，必须每天制备并在试验前滴定。 孵育时间要严格控制。红细胞对照完全 沉淀时要迅速判读。在一些病毒株中可 见红细胞从病毒中解脱，如果有这种情 况的发生，要提前判定或4℃下孵育。
HI试验注意事项
NDHI 的判读
注意事项 不同实验室结果可以不同 要有阳阴性对照 了解现场生产背景 临床解剖资料 免疫情况、采血周龄
应用
检测血清中的抗体水平。 鉴定病毒。 辅助诊断病毒性疾病。 作为适时免疫的辅助手段，能避免免疫失 败、免疫空挡及重复免疫造成的损失。
禽流感免疫效果监测
发 病
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0
前 发 17d 病 前 1d 5d 8d 9d 11 d 15 d 15 d 15 d 19 d 21 d 24 d 26 d 26 d
发病前后ND抗体的变化
NDHI与临床症状的关系
NDHI NDHI NDHI NDHI <4 4-7 6-8 8-10 感染100％死亡 感染发病90％不死 感染发病100%不死 感染产蛋下降、 NDHI上升 感染只见NDHI上升 病毒无法侵入
微量血凝板的清洗，对试验结果有很大的 影响。 使用过的凝集板，要按程序清洗干净。 清洗程序：试验完毕即将凝集板用自来水 反复冲洗，再用洗涤剂的温水溶液浸泡30 分钟，并在洗涤剂溶液中以棉拭子刷洗凹 孔及板面，待反应板干燥后，放到2—3% 浓度的盐酸中浸泡24小时以上，捞出用自 来水冲洗多次，最后以蒸馏水冲洗2—3次， 在37度温箱中烘干备用。
血凝试验（血凝效价的滴定)
血凝试验结果判定
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
hi 血凝抑制试验原理
血凝抑制试验是一种用于检测血浆中抗凝物质浓度的实验方法，也被称为“HI”试验。
它是通过观察血浆对于血小板聚集的抑制作用来评估抗凝物质的功能。
本文将详细介绍hi血凝抑制试验的原理和应用。
一、原理概述
血液在正常情况下应保持一定的流动性，而不应过于凝结。
凝血是一种正常的生理反应，可以防止出血，但如果血液凝结过于剧烈，就会导致血栓形成，从而引发心脑血管疾病等严重后果。
为了维持血液的正常流动性，人体内存在一系列的抗凝机制，例如血小板抗凝剂、凝血酶抑制剂等。
而hi血凝抑制试验就是用于检测这些抗凝物质的浓度和功能。
二、试验步骤
hi血凝抑制试验主要包括以下步骤：
1. 准备血浆样本：收集新鲜的抗凝血浆样本，避免凝固和溶解物的存在，以确保准确的试验结果。
2. 预处理血浆：将血浆样本进行离心分离，得到上清液，去除红细胞和凝固因子。
3. 加入抗凝剂：将已经预处理好的血浆样本分成若干组，每组加入
不同浓度的抗凝剂。
4. 加入血小板悬液：在每组样本中加入一定浓度的血小板悬液，使其与抗凝剂充分混合。
5. 观察血小板聚集情况：将各组样本置于显微镜下观察，记录血小板聚集的程度。
聚集程度越低，说明抗凝物质的浓度越高，功能越好。
三、结果解读
hi血凝抑制试验的结果通过观察血小板的聚集程度来进行解读。
一般情况下，正常血浆中的抗凝物质浓度较高，能够有效地抑制血小板的聚集，因此血小板聚集程度较低。
而当抗凝物质的浓度降低或功能异常时，血小板的聚集程度将增加。
通过对不同浓度抗凝剂处理后的血浆样本进行观察，可以得到抗凝物质的浓度和功能信息。
四、应用价值
hi血凝抑制试验在临床上有着广泛的应用价值。
首先，它可以用于评估血液的凝血功能，了解抗凝物质的浓度和功能是否正常。
其次，对于一些凝血相关疾病的诊断和治疗也具有重要意义。
例如，在肝功能不全的患者中，抗凝物质的合成和功能可能受到影响，通过hi 血凝抑制试验可以及时发现异常情况并做出相应处理。
此外，一些药物的研发和临床使用也需要进行hi血凝抑制试验来评估其对凝血功能的影响。
hi血凝抑制试验是一种评估抗凝物质功能的实验方法，通过观察其对血小板聚集的抑制作用来判断抗凝物质的浓度和功能是否正常。
该试验在临床上具有重要的应用价值，可以用于评估凝血功能、诊断疾病和指导药物治疗。
希望本文的介绍能够对大家对hi血凝抑制试验有更深入的了解。