花粉活力染色液(I2-KI法)
花粉活力测定
TTC法[2,4]又称氯化三苯基四氮唑染色法(2 3, 5一triphenyl tetrazoliun chloride)。
氯化三苯基四氮唑即红四氮唑,作为非萌发分析花粉生话力的方法,速度快也比较精确地反映花粉的活力红四氮唑是标准的氧化还原色素,水溶液无色,遇到活细胞里的脱氢酶接受氯离子,还原后变红生成不溶于水的三苯甲赝,呈红色。
I-IK染色测定法：此法常用于鉴定不含淀粉的不育花粉,凡染成蓝紫色的为发育好、活力强的花粉,呈黄褐色的为发育不良的花粉。
过氧化物酶测定法具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱。
过氧化物酶测定法
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶,此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色,依据颜色可知花粉的活性强弱［13］。
醋酸洋红法测定花粉活力[14]
取少量花粉置于载玻片上,然后滴加1滴1%的醋酸洋红溶液。
室温下静置5 min观察。
统计染成红色的花粉粒所占比率。
[13]赵鸿杰，乔龙巴图，殷爱华等．3种山茶属植物花粉活力测定方法的比较（Ｎ）．中南林业科技大学学报．2010，30（3）．
[14] 盖伟玲，盖树鹏，郑国生．牡丹新鲜花粉活力的快速测定(J)．育苗科技Seedling Cultivation．2011(5)。
实验四 花粉生活力的测定
• 一、目的 学会用染色法进行花粉生活力的 测定方法。 二、材料 金丝桃即将开放的花蕾。 三、药品 碘-碘化钾溶液 蒸馏水 四、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、 培养皿、镊子等。
• 五、原理：
• 多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累 较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。发 育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或 积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。因 此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
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• 花的解剖结构观察 • 1、依据花被的有无（双被花，单被花，无被花），对 称类型（辐射对称，左右对称，不对称），雄雌蕊有无 （两性花，单性花，无性花，杂性花）分析； • 2、雄蕊的类型（分离雄蕊，单体雄蕊，二体雄蕊，多 体雄蕊，聚药雄蕊）； • 3、雌蕊的类型（单雌蕊，离生雌蕊，合生雌蕊）； • 4、子房的位置 • 子房上位（花下位，花周围）；子房半下位（周位花）； 子房下位（上位花）； • 5、胎座的类型：边缘胎座、侧膜胎座、中轴胎座、特 立中央胎座、基生胎座、顶生胎座
• 【注意事项】 • 此法不能准确表示花粉的活力。因为核期 退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反 应。另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2KI也呈蓝色。
• 七、作业 在低倍镜下观察5个视野，计算染色与 未染色的花粉粒数，将计算结果填入表中， 并计算其有生活力的花粉百分数。
测定 花粉 总数 染色数 染色数 有生活力花粉百分 （蓝色） （黄褐色）数（%）
• 六、方法和步骤 • 1、溶液的配制： • I2-KI溶液：取2g KI溶于5～10ml蒸馏水中，加入1g I2，待 完全溶解后，再加蒸镏水300ml。贮于棕色瓶中备用。 • 2、采集花粉 • 采集即将开放的金丝桃的花蕾。 • 3、压片与镜检 • 将花蕾剥开，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊 子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖 上盖玻片，在显微镜下观察。凡是被染成蓝色的为含有淀 粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。 观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率， 以染色率表示花粉的育性。 •
花粉活力测定的3种办法
精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】-KI300ml。
???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
实验四、花粉生活力的测定
实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。
二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。
五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。
1. 形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
2. 染色法(1) 碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。
据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。
通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。
②I-KI溶液：取2.0 g KI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。
③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。
凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。
为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉生活力。
实验一 花粉生活力的测定
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO掌握用形态法、染色法、发芽 法测定花粉生活力的具体技术和方法。 2 观察花粉在人工配制的培养基上的萌 发情况，认识花粉萌发形成花粉管的 外形和伸长过程，为理解植物的生殖 过程奠定基础。
【实验原理】 花粉的生活力因植物种类不同而差异很大。在自 然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能 存活几小时，几天或几个星期。一般木本植物花 粉的寿命比草本植物的长，如在干燥、凉爽的条 件下，柑桔花粉能存活40～50天，椴树45天，苹 果10～70天，樱桃30～100天，麻栎一年。而在 草本植物中，如棉属花粉采下后24小时存活只有 65％，超过24小时很少存活；多数禾本科植物的 存活时间不超过一天，如玉米1～2天，水稻花粉 在田间条件下经3分钟就有50％丧失生活力，5分 钟后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。花粉粒 的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉 的寿命较二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三 胞花粉，寿命都是比较短的。
花粉生活力萌发试验
实验二花粉生活力的测定―――悬滴培养法一、实验目的：掌握了解花粉生活力测定的意义和方法。
二、实验材料：二月兰花粉三、实验仪器及药品：凹玻片、盖玻片、解剖针、镊子、纱布、标签、铅笔、显微镜、恒温箱、蔗糖、蒸馏水、硼酸、凡士林。
四、实验原理：花粉是植物自然授粉和人工杂交的主要物质基础，花粉生活力的大小是保证杂交成功的关键。
在有性杂交育种中，常因父母本花期的不同，作为父本的花粉必须经过贮藏直到母本植株开花时再用于授粉（花粉在低温0－2℃、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低。
花粉贮藏的原理就是创造代谢强度低的环境，以延长花粉的寿命）；或者双亲不在同一个地方，必须由外地邮寄花粉供应。
经过贮藏或外地邮寄的花粉是否已经丧失生活力，必须经过测定才能确定。
鉴定花粉生活力的方法主要有四种：一是将待测花粉直接授粉，然后统计结实率和结子数。
此法的缺点是需要的时间较长，且实验的结果易受气候条件的影响。
二是将待测花粉授到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微镜下检查花粉的萌发情况。
根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
三是在培养基上进行花粉的人工萌发，检查待测花粉萌发率的高低。
后两种方法都是根据花粉的萌发率来反映生活力的高低，有一定的参考价值。
但是萌发的不一定都能受精，特别是人工萌发还受许多条件的限制，所以也只有相对的可靠性。
四是用染色方法来鉴定花粉的生活力。
其原理是在活的花粉内有过氧化氢酶的存在，它可以促进过氧化物（如H2O2）放氧分解。
这些刚被放出的活性氧很容易使还原剂氧化，常用无色联苯胺、α－萘酚等还原剂做指示剂，这些还原剂被氧化后表现红色或玫瑰红色。
如果花粉是活的，那么会很快被染成红色或玫瑰红色，如果花粉是死的，则这一反应迟迟不能进行，花粉保持原色。
此法优点是比较快捷，但是比较间接。
本试验采用悬滴培养法鉴定花粉生活力。
五、实验步骤：1.配培养液：用蒸馏水和蔗糖分别配成5％、10%、15％的蔗糖溶液，并在各培养液中加少量硼酸。
2实验二、花粉生活力测定
前 言
花粉生活力测定在育种 力 2．雄性不育系的鉴定
实验目的：
学习并初步掌握作物花粉生 活力测定的常用方法
测定方法:
（一）I-KI染色鉴定
（二）TTC染色鉴定
（三）花粉粒发芽鉴定
实验方法 I-KI染色鉴定：
正常的成熟花粉粒体积较大， 并含有大量的淀粉粒，遇I-KI 呈紫黑色，不正常的花粉粒体 系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。
实验方法 TTC染色鉴定：
具有生活力的花粉中含有 脱氢酶，它能催化引物使脱下 的氢与TTC结合，生成红色化 合物甲替。凡有生活力的花粉 呈红色，生活力弱的呈浅红色， 无生活力的不显色或成黄色。
实验方法
花粉粒发芽鉴定：
在人工培养基上进 行发芽试验，可以比较 准确地判断花粉的生活 力。
实验步骤
I-KI染色鉴定：
2 ．准备 TTC 染色和发芽试验的材料， 置培养箱保温； 3．调试显微镜，I-KI染色鉴定； 4．TTC染色鉴定、发芽率调查。
作业
实验三、作物花粉生活力测定 1．测定方法和原理： （一）I-KI染色鉴定：正常的成熟花粉粒体积较大，并含有大量的淀粉 粒，遇I-KI呈紫黑色，不正常的花粉粒体系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。 （二）TTC染色鉴定：具有生活力的花粉中含有脱氢酶，它能催化底物 使脱下的氢与TTC（氯化三苯基四氮唑）结合，生成红色化合物甲替。 凡有生活力的花粉呈红色，生活力弱的呈浅红色，无生活力的不显色或 成黄色。 （三）花粉粒发芽鉴定：在人工培养基上进行发芽试验，可以比较准确 地判断花粉的生活力。 2．实验结果： 材料 I-IK染色率% TTC染色率% 发芽率%
用镊子夹一个花药于载玻片 上滴上一滴1%I-KI溶液 用镊子将花药夹碎并把碎片 去干净盖上盖玻片置显微 镜下观察。
实验八 花粉活力及花粉管伸长的测定
实验八花粉活力及花粉管伸长的测定[实验目的]通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态、生理特征。
熟悉测定花粉活力的几种方法。
Ⅰ碘-碘化钾（I-KI）染色测定法[实验原理]禾谷类植物花粉成熟时积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。
[器材与试剂]1.实验仪器显微镜，镊子，恒温箱，载玻片，盖玻片待全2.实验试剂 I-KI溶液（取KI 2g溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1 g I2部溶解后，再加蒸馏水至200mL。
（贮于棕色瓶中备用）凡被染成蓝色的为发育好、活力强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。
Ⅱ过氧化物酶测定法[实验原理]具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。
此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉的活性强弱。
[器材与试剂]1．实验仪器显微镜，载玻片，盖玻片，镊子2．实验试剂 0.5%联苯胺[将0.5g联苯胺溶于100mL50%乙醇中（有毒，注意安全）]，0.5%ɑ-萘酚（将0.5g ɑ -萘酚溶于100mL50%乙醇中）， 0.25%碳酸钠（将0.25g碳酸钠溶于100mL蒸馏水中），实验前将上述三种溶液各取10mL混合均匀成试剂Ⅰ，0.3%过氧化氢。
3、实验材料花粉［实验步骤］1．干洁载玻片上放少量花粉，然后加试剂Ⅰ和0.3%过氧化氢各1滴，搅匀后盖上玻片。
30℃下经10min后在低倍显微镜下观察。
如花粉粒为红色，则表示有过氧化物酶存在，花粉有活力，能发芽；如无色或黄色，则表示已失去活力，不能发芽。
2.观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率。
Ⅲ氯化三苯基四氮唑法（TTC）实验原理见实验7种子活力的快速测定中的TTC法。
[器材与试剂]1.实验仪器显微镜，镊子，载玻片，盖玻片，2.实验试剂 0.5%TTC溶液（参阅实验7-1）[实验步骤]1.取少数花粉于载玻片上，加1～2滴TTC溶液，盖上盖玻片。
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染色结果：
活力强 活力弱 无活力或不育
蓝色 不被染色或被染成黄褐色 无色
计算：
观察统计 100 粒花粉，计算有活力花粉的百分数。其公式为： 花粉活力百分数(%)=有活力花粉数/100×100%
注意事项：
1、 染完色后，应立即显微镜下观察。 2、 染色时需要将花粉完全浸没于染色液中。
北京雷根生物技术有限公司
遇见 I2-KI 溶液可被染成蓝色；发育不良的花粉常呈畸形，通常不含淀粉或含淀粉少，遇见 I2-KI 溶液不会被染色或被染成黄褐色，根据花粉染色情况，可鉴别花粉的活力。
组成：
名称 I2-KI Stain 使用说明书
编号 DP0105 DP0105 Storage
10ml
50ml 1份
RT 避光
操作步骤(仅供参考)：
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 个月有效。
相关：
编号 DC0032 DF0135 TC1243
名称 Masson 三色染色液 多聚甲醛溶液(4% PFA) 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP 单试剂比色法)
北京雷根生物技术有限公司
简介：
花粉活力染色液(I2-KI 法)
花粉活力的大小直接影响授粉、受精过程，与植物的产量密切相关，通过花粉活力
Байду номын сангаас
的测定，可了解花粉的发育，并掌握不育花粉的形态、生理特征。花粉中所含淀粉的有无
和多少可以作为判断花粉发育程度的指标，大多数正常成熟的花粉呈球形，含有较多淀粉，