HER2免疫组化检测的质量控制
胃癌HER2 免疫组化判读及报告SOP
胃癌HER2免疫组化判读及报告1. 目的：保证胃癌HER2判读的准确。
2. 责任人：负责胃癌治疗相关指标专项报告的责任医生。
3. 步骤：3.1 拿到切片后，常规核对编号、标识等资料；3.2 低倍镜（2×或4×）扫描整个切片（包括阴性及阳性对照片），查看有无掉片、皱褶、缺损等影响判读的情况；3.3 低倍镜观察，评估组织的质量，对癌组织进行大致定位，评估染色效果；3.4 观察阳性及阴性对照片的染色效果，如果正常，进行下一步观察；3.5 在10×显微镜观察，判断癌组织着色细胞的比例；3.6 20×显微镜（必要时40×）观察膜染色的完整性，染色的深浅，再按标准进行评分；3.7评分标准（中国胃癌HER2检测指南2011版）：3.7.1：手术样本评分标准0: 无着色或<10%肿瘤细胞膜染色；1+：≥10% 肿瘤细胞微弱或隐约可见膜染色；仅有部分细胞膜染色。
2+：≥10%肿瘤细胞有弱到中度的基底侧膜、侧膜或完全性膜染色。
3+：≥10%肿瘤细胞基底侧膜、侧膜或完全性膜强染色。
3.7.2：活检样本评分标准0: 任何肿瘤细胞无膜染色。
1+：肿瘤细胞团微弱或隐约可见膜染色（不管着色的肿瘤细胞占整个组织的百分比）。
2+：肿瘤细胞团有弱到中度的基底侧膜、侧膜或完全性膜染色（不管着色的肿瘤细胞占整个组织的百分比，但至少有5个成簇的肿瘤细胞着色）。
3+：肿瘤细胞的基底侧膜、侧膜或完全性膜强染色（不管着色的肿瘤细胞占整个组织的百分比，但至少有5个成簇的肿瘤细胞着色）。
3.8 报告的内容：患者信息，标本信息（病理号和蜡块号），标本类型，标本固定液的种类，标本固定前时间，标本固定的时间，抗体信息（克隆号及生产商），使用方法（检测方法及生产商），对照片情况，样本量是否足够用于评估，判读标准（胃癌HER2检测指南2011版），判读结果及结论，注释。
4. 质量控制：4.1 两名判读医生交互阅片，计算两人的一致率，需达95％以上；4.2 每月统计分析HER2评分的分布情况，与文献报道及既往本科室的HER2评分的分布不能有太大的偏差；4.3 每月分析HER2免疫组化与FISH结果的一致性，达到ASCO/CAP的标准。
免疫组化病理技术质量控制问题分析与对策
免疫组化病理技术质量控制问题分析与对策发布时间：2021-10-18T07:05:06.158Z 来源：《世界复合医学》2021年9期作者：付鑫[导读] 分析免疫组化病理技术在质量控制中所存在的问题，并提出措施。
付鑫沈阳市第四人民医院110000摘要：目的：分析免疫组化病理技术在质量控制中所存在的问题，并提出措施。
方法:共随机选择130份样本进行研究分析，采取摇号方式进行分组，前者为质量控制前，后者为实施质量控制后，对比其制片有效率。
结果：通过收集数据来看，实施质量控制后的观察组制片有效率明显有所提升。
（P＜0.05）。
结论：在进行制片时，只有做好免疫组化病理技术控制工作，才能切实提高质量及检验结果的精确性。
关键词：免疫组化病理技术；问题；措施引言：对于病理技术来言，只有充分认识其不足之处，并采取对应的解决措施，才能从根本推动其发展建设，这也是提高临床病理学质量的主要手段。
本次研究分析了免疫组化病理技术存在的问题，并采取相应措施，具体如下：1 资料与方法1.1一般资料在院内收治的患者中选取130例需进行切片检查的患者作为研究对象，并随机分为对照与观察两组，每组为65份切片。
研究中所选择的器材与试剂基本较为均衡（P＞0.05）。
1.2方法在进行切片前，需对130份样本采取脱水、透明、浸蜡、包埋等方式展开常规处理，在做好充分准备工作后就可展开后续操作，切片的尺寸一般控制在1.5cm×2.0cm，同时将切片分为数量对等的两组，对照组实施传统病理切片技术手段，观察组为采取质量控制后的切片操作模式。
在组别分类且已完成后，医护人员就需要利用显微镜对其两组的切片进行详细观察，在此过程中还应当对其病理质量展开对比，找出实际问题所在，并针对此问题采取相应的防治措施，以此来最大程度的提升制片质量，保证医学检测结果的精确性。
1.3 观察指标对所有切片样本的实际制片质量进行评估，并分为优、良、差三个等级，有效制片率=（优质＋良质总数）÷单组实验样本数。
乳腺癌her2标准
乳腺癌her2标准乳腺癌HER2检测标准主要包括以下几个方面：1. HER2基因扩增：荧光原位杂交（FISH）法是检测HER2基因扩增的金标准。
根据《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南2014版》，FISH检测结果可分为以下三种：- 阳性：HER2基因拷贝数≥2.0；- 阴性：HER2基因拷贝数<2.0；- 模糊：HER2基因拷贝数在2.0~2.9之间。
2. HER2蛋白表达：免疫组化（IHC）法是检测HER2蛋白表达的主要方法。
根据《乳腺癌HER2检测指南2014版》，HER2蛋白表达可分为以下四种：- 阳性：细胞膜染色强度为3+，即大量细胞呈强阳性；- 阴性：细胞膜染色强度为0或1+，即少量或无细胞呈阳性；- 弱阳性：细胞膜染色强度为2+，即部分细胞呈阳性；- 不确定：细胞膜染色强度为1+或2+，但无法明确判断。
3. 检测策略：指南推荐采用IHC与FISH相结合的检测策略。
对于IHC检测结果为阳性的病例，需进一步进行FISH检测以确认HER2基因扩增状态。
对于IHC检测结果为阴性的病例，一般无需进行FISH检测。
4. 应用场景：所有乳腺原发性浸润性癌患者均应进行HER2检测。
复发灶和转移灶的HER2检测也有助于评估患者病情和选择合适的治疗方案。
5. 治疗指导：HER2阳性乳腺癌患者对某些靶向药物（如赫赛汀）敏感，治疗效果更佳。
HER2基因扩增状态和蛋白表达水平可作为预测药物治疗效果的重要依据。
在实际操作中，应遵循相关指南和规范进行HER2检测，以指导临床诊疗。
同时，加强临床病例沟通和实验室质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性。
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
说明
1×22 mL
过氧化物酶阻断剂。 3%的过氧化氢，含有15 mmol/L的叠氮钠（NaN3）。
1×12 mL
1×22 mL
兔抗人HER2多克隆抗体。 即用型亲和分离的抗体,保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 1%BSA, 酒 石黄(Tartrazin), 专利蓝V(Patentblue V), 15 mmol/L NaN3, pH 7.2溶液中。 免疫原：合成的HER2蛋白的C-末端（细胞质部分）片段部分，并偶联至血蓝蛋 白上。
2×22 mL
阴性质控试剂。
与HER2抗体等价蛋白浓度下的正常兔血清免疫球蛋白成分，保存在0.05 mol/L Tris/HCl, 0.1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3, pH 7.2，并含有1%BSA稳定剂的溶液 内。
1×1mL
DAB底物缓冲液。 50 mM咪唑, 1mM N, N'-乙基双 (2-[2-羟基苯基]甘氨酸) (EDHPA), 0.1%乙基苯基 聚乙二醇（Nonidet P-40）, 0.02% 过氧化氢, 0.01% 氯化苯二甲烃铵, pH 7.5。
【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
免疫组化病理技术质量控制问题及对策分析
免疫组化病理技术质量控制问题及对策分析摘要：目的：研究免疫组化病理技术质量控制问题及对策。
方法：选择2020年01月－2021年12月到本院接受免疫病理诊断的患者50例，对全部患者实施常规病理免疫组化制片、免疫组化病理技术质控管理后制片。
结果：实验组总有效制片率49（98.00%）高于对照组37（74.00%），P＜0.05。
结论：运用免疫组化病理技术对疾病诊断价值较高，更需探析质量控制存在的问题，分析相关对策。
关键词：免疫组化病理技术；质量控制；问题；对策免疫组化病理技术是目前临床比较普遍运用的一种病理检测技术，此技术的运用可提高病理诊断准确度。
但需意识到，此种技术的运用对技术和操作技能要求高。
若是检测中任意一环发生问题，都会严重地影响到制片的效果。
为了保障免疫组化病理诊断的准确度，操作流程要按照病理流程开展，使得免疫组化流程更为科学。
这就需重点对技术质量控制，探析质控存在的问题，依照问题分析解决对策，旨在提升制片质量和有效概率[1]。
基于此，本文将分析免疫组化病理技术质量控制问题及对策，报道如下：1.一般资料与方法1.1一般资料选择2020年01月－2021年12月到本院接受免疫病理诊断的患者50例，对全部患者实施常规病理免疫组化制片、免疫组化病理技术质控管理后制片，患者平均年龄（46.14±2.31）岁，一般资料（P＞0.05），探析质控问题和解决对策，评估诊断价值。
1.2方法两组内患者均选取相同的实验试剂，其中包含：甲醛、无水乙醇、二甲苯、伊红染液、苏木素染液、DAB液等。
运用莱卡RM2235组织切片设备、樱花Tissue_TekVIP5Jr智能环保生物组织脱水设备、恒温干燥箱设备以及生物组织摊烤片机设备。
全部标本都接受常规的脱水处理、浸蜡处理以及包埋后切片处理等等，标本面积需控在1.5×2cm，切片厚度4—6um。
对照组操作是传统的切片操作，而实验组操作是质量控制之后的切片操作。
研究免疫组化病理技术质量控制措施
研究免疫组化病理技术质量控制措施发布时间：2021-05-26T08:51:58.095Z 来源：《健康世界》2021年3期作者：鞠学萍[导读] 目的研究在免疫组化病理技术质量控制时所使用的措施。
方法将本院自2019年5月~2020年5月收治的62例在我院住院的患者当作研究对象，根据是否进行质量控制进行分组，每组31例。
所有患者需要取胃肠组织样本进行病理化分析，参照组没有进行质量控制，使用常规方法切片；实验组实施质量控制管理，然后进行切片制作，对比两组有效制片情况。
结果对比有效制片情况，实验组有效制片率为96.77%，明显高于参照组（P＜0.05）。
鞠学萍大庆市第四医院 163712摘要：目的研究在免疫组化病理技术质量控制时所使用的措施。
方法将本院自2019年5月~2020年5月收治的62例在我院住院的患者当作研究对象，根据是否进行质量控制进行分组，每组31例。
所有患者需要取胃肠组织样本进行病理化分析，参照组没有进行质量控制，使用常规方法切片；实验组实施质量控制管理，然后进行切片制作，对比两组有效制片情况。
结果对比有效制片情况，实验组有效制片率为96.77%，明显高于参照组（P＜0.05）。
结论在进行免疫组化病理技术质量控制的时候，有效地进行质量控制管理，能够将免疫组化病理检验技术的质量提升，并提高有效制片率，为临床提供更加准确的参考数据，也便于检验。
关键词：免疫组化病理技术；质量控制；措施[Abstract] Objective To study the measures used in the quality control of immunohistochemical technique.Methods 62 cases of hospitalized patients in our hospital from May 2019 to may 2020 were selected as the research objects and divided into groups according to whether quality control was carried out，with 31 cases in each group.All patients need to take gastrointestinal tissue samples for pathological analysis，the reference group did not carry out quality control，using conventional methods of slicing；the experimental group implemented quality control management，and then slicing，compared with the two groups of effective slicing.Results compared with the effective production，the effective production rate of the experimental group was 96.77%，which was significantly higher than that of the reference group（P < 0.05）.Conclusion in the quality control of immunohistochemical pathology technology，effective quality control management can improve the quality of immunohistochemical pathology test technology，and improve the effective production rate，provide more accurate reference data for clinical，and also facilitate the test.[Key words] immunohistochemical technique；quality control；measures对于医院检验科来说，常见技术中就包含免疫组化病理技术，能够对病理组织进行有效的检验，从而为临床诊断和治疗疾病提供参考，有着非常重要的意义。
her2肺癌免疫组化判读标准
her2肺癌免疫组化判读标准
一、染色强度
染色强度是评估Her2蛋白表达水平的重要指标。
根据染色深浅程度，可以将染色强度分为0、1、2、3四个等级。
其中，0级表示无染色，3级表示染色最深且最明显。
在判读时，需要注意染色是否均匀，以及细胞核和细胞质的染色情况。
二、染色细胞比例
染色细胞比例是指染色阳性的肿瘤细胞所占的比例。
根据不同指南的规定，阳性细胞比例的阈值可能有所不同，一般在10%-30%之间。
因此，在判读染色细胞比例时，需要参考各指南的具体要求，同时注意观察阳性细胞分布的均匀性。
三、Her2蛋白定位
Her2蛋白主要定位在细胞膜上。
在判读时，需要注意Her2蛋白的定位情况，判断其是否主要集中在细胞膜上表达。
如果细胞膜上Her2蛋白表达明显，则有助于判断为Her2阳性；如果细胞质内Her2蛋白表达较多，则可能影响对Her2蛋白的正确判断。
四、Her2基因扩增
Her2基因扩增状态是判断Her2状态的重要指标之一。
通过荧光原位杂交技术（FISH）或比较基因组杂交技术（CGH）等分子生物学技术，可以检测Her2
基因的扩增状态。
根据基因拷贝数的不同，可以将Her2基因扩增状态分为阴性、低表达、中表达、高表达四个等级。
在判读时，需要注意基因拷贝数的准确性以及与染色强度和染色细胞比例的对应关系。
综上所述，Her2肺癌免疫组化判读标准需要综合考虑染色强度、染色细胞比例、Her2蛋白定位和Her2基因扩增等多个方面。
在判读时，需要注意各项指标的准确性以及相互之间的对应关系，以确保最终结果的可靠性。
免疫组化的标准化和质量控制
免疫组化的标准化和质量控制免疫组化是一项综合性的操作技术,是病理诊断的主要辅助手段之一，其影响因素复杂,包括技术人员是否熟练掌握整个实验的操作程序,抗体的特异性,检测方法的敏感性,组织的固定,抗原的修复及修复液的ＰH值等众多因素。
步骤较多,且环环相扣,加强质量管理和可信性尤为重要。
现就我科近年来免疫组化染色和具体操作过程中进行精细而有效的全程质控,具体操作规程和质控事项综述如下:一、标本的固定:标本的及时固定是最重要的环节,也是不可逆的，我科要求手术室设立专人专管制度,普通标本离体后要求手术室及时固定,特殊标本离体后及时送我科当天由取材医师及时剖开固定,淋巴结切开固定，乳腺标本每隔一厘米切开固定,胃肠标本剖开固定,首选１0%的中性缓冲福尔马林固定液固定，由于中性缓冲福尔马林液渗透力强,组织收缩小，能够使大多数抗原物质保存较好,提高免疫组织化学检测的阳性率.固定液的量一般为组织块体积的５-10倍,小标本固定时间为4—6小时，大标本固定时间为1８-２4小时，固定后水洗１0-20分,利用蜡块内抗原的长期保存。
二、脱水：我科在脱水程序中设置一个后固定步骤，弥补病理标本取材时固定不良造成的组织形态缺陷和抗原定位不良现象．同时建立以处理组织标本块数2０00块为标准的组织脱水试剂规范化更换制度，保证脱水质量是保证组织切片质量的前题,这一点对免疫组化染色尤为重要。
三、切片、烤片、脱蜡:切片厚度3—4个微米之间，淋巴结更薄些，切片完整，厚薄均匀,无皱褶和刀痕,烤片温度60摄氏度温箱烤片1-2小时,暂不染色的切片放置４摄氏度的冰箱,短时间保存，脱蜡必须干净。
四、选择优质的抗体及检测系统是优秀染片质量的保证，我科每月的组化切片为5０0左右，一直是手工操作，严格的操作规程非常重要，每一步细化到人，我科一直沿用中杉金桥的工作液试剂盒，效果稳定,参加多次省质控及全国质控都获得合格证书．五、抗原修复:我科一直采用高压修复,用大功率加热至沸腾后,将功率调至中档，再放入切片,加盖,加减压阀继续加热至冒气并维持2分钟后,撤火缓慢冷却。
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苏州大学附属第一医院 郭凌川
1
内容提要
• HER2检测的质量控制和质量保证
– HER2检测质量的影响因素
• 检测前 • 检测中 • 检测后
– HER2检测的质量保证
• 内部质保 • 外部质保 • Ring研究
HER2检测的质量控制和质量保证
3
质量体系－定义
• 质量控制 （QC）
持续质量评价
• 严格遵守免疫组化或原位杂交操作步骤 • 设立对照组:
– 细胞系和组织标本免疫组化评分0/1+, 2+, 3+ ，2+需经原位杂交确定 • 若对照组检测未能达标，需重新进行实验
• 评价: – 若正常组织检测为阴性而肿瘤组织检测细胞膜膜染色阳性，则免疫组化检测 即以足够 – 胃癌或胃食管交界癌：选择代表性区域 – 不均匀: 选择代表性区域 – 异质性特异区域: 按最高分评分
标本固定较差1 染色不均
标本点状假阳性染色2 棕色点状染色为胞质染色而非胞膜染色
细胞质染色, IHC 02 弥散性非均一性细胞质染色
标本边缘假阳性染色1 肿瘤标本边缘染色而中心无染色
1. W Hanna供图; 2. Dako供图.
影响FISH检测结果之常见问题
标本制备
固定不完全1
片状染色;信号较弱或缺失
• 设立适当对照组
• 难以确定的检测病例 1) 重新检测2) 将免疫组化检测结果与原位杂交检测结果对比3) 咨询外部实验室
• 使用标准化检测报告表 • 记录任何:
– 与标准化标本处理步骤相违背的不当操作 – 难以确定病理诊断的病例
a) 对相关从业人员进行教育培训 b) 每年重新检测约5%的阳性和阴性病例 c) 参与Ring研究
《胃癌HER2检测指南》编写组 胃癌HER2检测指南 中华病理学杂志 2011;40(8):553-557.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
过分固定1
持续性自发性荧光; 信号较弱或缺失
染色步骤
消化封闭不完全2
较强自发性荧光；背景亦呈现 较强非特异性染色
1. Abbott供图; 2. Ventana供图.
影响HER2检测结果之因素
报告内容
评分系统
取样
判读标准
检测后
使用图像 分析
HER2检测偏倚
组织处理固定时间源自检测前固定方式检测方 法验证
取样
HER2检测偏倚
检测前
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118–145.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
组织处理方式
•提供新鲜及已定位之标本或切除后迅速经甲醛固定之标本
– 立即转送至备检实验室:
• 尽量缩短从标本切除至浸入10%NBF固定之间的时间，通常控制在20–30分钟以内
– 乳腺癌： 最多1小时
组织处理
– 胃癌： 20–30分钟之内
检测前
HER2检测偏倚
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118–145; ; 《乳腺癌HER2检测指南（2009版）》编写组 乳腺癌HER2检测指南（2009版）中华病理学杂志 2009,38(12):836–840.
– 细胞系和组织标本免疫组化评分0/1+, 2+, 3+ 需经原位杂交确定 • 若对照组检测未能达标，需重新进行实验
• 评价: – 若正常组织检测为阴性而肿瘤组织检测细胞膜膜染色阳性，则免疫组化检测 即以足够 – 乳腺癌：仅浸润性肿瘤 – 不均匀: 选择代表性区域 – 异质性特异区域: 按最高分评分
查，从而决定是否进行相关改进 • 操作步骤的内部验证 • 每批实验都应进行 • 确保每个检测结果均准确
质保
• 旨在改善总体检测操作 • 与其他检测中心相比较
质控/质保原则（推荐）
内部质量控制 a) 染色
b) 评分
c) 实验室 d) 检测步骤 e) 记录
持续质量评价
• 严格遵守免疫组化或原位杂交操作步骤 • 设立对照组:
• 设立适当对照组
• 难以确定的检测病例 1) 重新检测2) 将免疫组化检测结果与原位杂交检测结果对比3) 咨询外部实验室
• 使用标准化检测报告表 • 记录任何:
– 与标准化标本处理步骤相违背的不当操作 – 难以确定病理诊断的病例
a) 对相关从业人员进行教育培训 b) 每年重新检测约5%的阳性和阴性病例 c) 参与Ring研究
实验条件 对照
实验试剂
检测中
抗原修复类型
检测仪器精准度 实验室步骤 检测人员
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118─145.
HER2检测的影响因素：检测前
12
影响HER2检测结果之因素: 检测前
取样
组织处理 固定时间
Pr检e-测an前alytic 固定方式
Adapted by permission from Macmillan Publishers Ltd; Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173─182. © 2003.
HER2检测质量的影响因素
8
影响IHC检测结果之常见问题
• 诸多因素会影响IHC结果的评估
Adapted by permission from Macmillan Publishers Ltd; Bilous M et al. Mod Pathol 2003;16:173─182. © 2003.
质控/质保原则（推荐）
内部质量控制 a) 染色
b) 评分
c) 实验室 d) 检测步骤 e) 记录
HER2检测偏倚
Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007; 25:118–145.
影响HER2检测结果之因素: 检测前
取样
– 原发性乳腺癌
• 最好为手术切除而非活检 标本，包含癌旁乳腺组织
• 避免细针穿刺活检取样
– 转移性乳腺癌
• 穿刺活检取样
– 胃癌
• 经内镜活检取样或经手术 切除之标本
– 用以确保HER2检测结果正确性的内部验证步骤
• 质量保证 （QA）
– 通过与其他实验室检测结果相比较而得到的检测技术评价的方式 （例如，外部控制）
Bilous M, et al. Mod Path 2003;16:173–182.
质量控制与质量保证有何区别？
质控
• 达到和/或维持目标质量 • 在检测中每个步骤均进行样品检