DON亲和柱说明书
M1免疫亲和柱使用说明书
2013版苏微黄曲霉毒素M1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1, 从而对黄曲霉毒素M1样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素M1含量的检测。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
【产品性能】柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素M1（AFM1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFM1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFM1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFM1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用乙腈洗脱AFM1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；20支/盒，3mL柱管/支说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL 玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（whatman934-AH，直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：乙腈（色谱级）、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】----乳：将试样在水浴中加热至35℃~37℃。
用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。
至少收集20mL试样。
----乳粉：称取10g样品（精确至0.01g）,置于250mL 的烧杯中。
将50mL已预热到50℃的水加入乳粉中，搅拌溶解。
若乳粉不能完全溶解，将烧杯在50℃的水浴中放置至少30min，仔细混匀。
将溶解的乳粉冷却至20℃，移入100ml容量瓶中，用少量的水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶中，再用水定容至刻度。
用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。
亲和层析柱的使用方法
亲和层析柱的使用方法嘿，咱今儿就来讲讲这亲和层析柱的使用方法哟！这亲和层析柱啊，就好比是一个神奇的魔法盒子，能把咱想要的东西给精准地挑出来呢！首先呢，你得把这亲和层析柱给准备好呀，就像战士要准备好自己的武器一样。
检查检查它有没有啥问题，可别到时候关键时候掉链子哟！然后呢，把你要分离的东西放进去，就好像把各种宝贝放进一个大口袋里。
接下来，就是见证奇迹的时刻啦！这亲和层析柱会根据它独特的魔力，把你想要的那部分给紧紧抓住，其他的就被它给淘汰掉啦。
你说神奇不神奇？这就好比在一群人里，一下子就找到了那个最特别的人一样。
在操作过程中，可别马马虎虎的呀！你得小心翼翼地对待它，就像对待一件珍贵的宝贝一样。
要是不小心弄出啥岔子，那可就不好啦！比如说，加样的时候可别手抖呀，不然都不知道加到哪里去啦。
而且呀，这洗脱的过程也很关键呢！就像是给抓住的宝贝松绑一样，得掌握好力度和节奏。
洗脱液就像是解开魔法的钥匙，用对了就能让你想要的东西乖乖出来。
你想想看，要是咱能熟练掌握这亲和层析柱的使用方法，那得解决多少难题呀！能把那些复杂的混合物给分得清清楚楚，明明白白的。
这感觉，是不是特棒？咱再说说这亲和层析柱的维护吧，就跟咱人要保养自己一样。
用完了可得好好清理清理，别让它脏兮兮的。
这样下次用起来才能顺手呀，不然它要是不高兴了，给你闹点小脾气，那不就麻烦啦！总之呢，这亲和层析柱的使用方法说难也不难，说简单也不简单。
只要咱用心去学，用心去做，肯定能把它玩转得溜溜的！咱可不能小瞧了这小小的亲和层析柱哟，它可是有着大本事的呢！大家加油吧，让我们一起在科学的海洋里畅游，利用好这神奇的亲和层析柱！。
呕吐毒素标准检测规程完整
呕吐毒素标准操作规程1、目的为了规亲和柱净化样本中呕吐毒素的操作流程，特制订本操作规程。
2、围本标准适用于粮食、饲料、食品中呕吐毒素的检测。
3、检出限和定量限5.1 原理测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过呕吐毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱呕吐毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。
5.2 溶液配制5.2.1 PBS缓冲液：称取8.0g 氯化钠，1.2g磷酸氢二钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾，用990mL蒸馏水或去离子水溶解，用浓盐酸调节pH至7.0，再用蒸馏水或去离子水定容至1L。
上述PBS缓冲液用于样品的提取、稀释，以及亲和柱的清洗。
5.2.2 呕吐毒素标准工作液：先用色谱级甲醇将高标稀释到5ppm，再用水将其稀释到1ppm，此时标品的溶剂为20%甲醇，然后再用20%甲醇将标准品梯度稀释到500ppb、200ppb、100ppb、50ppb。
5.3 样品前处理5.3.1 玉米、小麦、面粉、配合饲料、浓缩料、精补料等吸水性较小的样本----将样品粉碎，称取25g样品，加入5g聚乙二醇，加入125mL蒸馏水；----高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液；----滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；----取2.5mL上样液过免疫亲和柱净化。
稀释倍数：25.3.2 麸皮、豆皮、玉米胚芽粕、米糠等吸水性较强的样本----称取10g样品，加入100mL蒸馏水；----高速均质（≥10,000r/min）1min（或用摇床200r/min～300r/min剧烈振荡20min）；----用快速定性滤纸过滤，收集滤液；----滤液再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；----取5mL上样液过免疫亲和柱净化。
亲和层析柱使用说明
亲和层析柱使用说明货号名称规格说明DS0101亲和层析柱1ml 含1个空管柱，上下盖和2个筛板（亲水性，孔径50um）DS0103亲和层析柱3ml DS0106亲和层析柱6ml DS0110亲和层析柱10ml DS0130亲和层析柱30ml DS0150亲和层析柱50ml 一、产品说明亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而设计的层析技术。
它是利用生物分子间存在很多特异性的相互作用（如抗原和抗体、酶和底物或抑制剂、激素和受体等），通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。
提供的亲和层析柱工具可应用于如下方面：①纯化重组蛋白；②纯化抗原和抗体；③纯化多肽；④纯化DNA；⑤糖蛋白的纯化；⑥纯化磷酸化蛋白和肽；⑦DNA 结合蛋白的纯化；⑧去除内毒素，等。
亲和层析柱空柱管的材质为医疗级的聚丙烯，这种工程材料通过大量的应用证明具有清洁无毒，不与生物分子结合和低溶解度的优点。
亲和层析柱空柱所用的筛板是选用纯净的UHWM-PE（超高分子量聚乙烯）为原料，经独特的工艺加工而成，具有亲水性。
筛板在装填时安置在填料基质的上下端，以阻挡昂贵的基质渗出。
亲水性筛板采用了领先的亲水性UHWM-PE 生产技术，该筛板能保证使用重力法时的流速为1-2ml/分钟或1-2滴/秒。
同时，该筛板和其它同类产品相比，不会由于亲水性基团的引入而对蛋白质产生吸附。
另外，该亲水性筛板在使用过程中不易形成气泡，气泡会使流速降低，液体通过基质不均匀。
二、产品应用1，抗体纯化纯化抗体一般用Protein A作为纯化的配体，也可以用Protein G或Protein L或异源性抗体作为配体。
2，小分子物质提取（以提取黄曲霉毒素M1为例）试样通过免疫亲和柱时,黄曲霉毒素M1被提取。
亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上,当样品通过亲和柱时,抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体一抗原复合体。
亲和柱层析操作(可溶性蛋白)
亲和柱层析操作规程（可溶性蛋白）1.装柱：1.1 取出层析柱，用去离子水冲洗干净，连接好管子后固定柱子；1.2用水冲洗层析柱3-5次，每次10ml去离子水；1.3取出填料，静止至室温后，根据需要用移液器取出3-5ml的填料进行装柱，1.4用去离子水冲洗填料5个柱体积；2.柱的平衡与上样：2.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)平衡Ni柱，直至流出液的pH为8.0；2.2对处理的样品进行过滤后，缓慢上样让蛋白充分结合；3洗杂蛋白：3.1用0.02M PB bufferA 缓冲液(PH8.0)过柱，清洗没有结合到层析柱上的杂蛋白，至流出液与缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含5mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.3用含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含10mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.4用含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含20mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.5用含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含40mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.6用含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含50mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；3.2用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）4解离目的蛋白：4.1用含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含100mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.2 用含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含200mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.3 用含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含500mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul做SDS-PAGE检测；4.4用含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液（pH8.0）过柱，共洗约30ml，至流出液与含1000mM咪唑的PB bufferA 缓冲液的OD值接近为止，流出液取20ul 做SDS-PAGE检测；（具体的洗脱梯度需根据实验自行调整）5.柱的清洗与保存：5.1用含500mM咪唑的缓冲液A（pH8.0）以冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.2用浓度为1.5M的NaCl溶液冲洗层析柱，共冲洗30ml；5.3用过滤去离子水冲洗50ml；5.4用20%乙醇冲洗30ml后于4℃20%乙醇中保存。
河豚毒素免疫亲和柱的说明书
河豚毒素（TTX）免疫亲和柱说明书产品编号：MC01B1、用途：免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的河豚毒素，从而对样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC分析。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，提高检测方法的准确度。
2、概述：河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是豚鱼类（俗称河豚鱼）及其它生物体内含有的一种生物碱（氨基全氢喹唑啉型化合物），是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一；其毒性比剧毒的氰化钠还要高1250多倍，0.5mg 即可致人于死命。
3、原理：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、稀释，缓慢的通过河豚毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内河豚毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用洗脱液洗脱河豚毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。
4、包装组成：盒中包括各种规格的河豚毒素免疫亲和柱及1份说明书。
5、需要的材料但盒中不提供：5.1设备----HPLC----气控操作架----空气泵----天平----涡旋仪----离心机----25mL/50mL量筒----离心管----1mL移液器----刻度试管----针头滤器----注射器----样品瓶----转接头（配3mL免疫亲和柱使用）5.2 试剂----甲醇(样品处理用分析纯，分析用色谱纯)----乙酸（分析纯）----NaCl（分析纯）----十二水合磷酸氢二钠（分析纯）----二水合磷酸二氢钠（分析纯）----蒸馏水或去离子水。
6、注意事项：----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）；----亲和柱2～8℃储存，不得冻存；----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱；----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变；----柱容量：柱容量是1000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液体积，重新检测。
真菌毒素免疫亲和柱的制备与评价
1.1 原理及优势 IAC 是利用抗原抗体特异性可逆结合特性的亲
和层析技术，将抗体与惰性载体共价结合物填入柱 中制成的净化色谱小柱。IAC 系统存在三个要素：目 标物、抗体和惰性载体。当含目标物的样本提取液 通过 IAC 柱时，固定于惰性载体上的抗体选择性地 结合目标物，杂质流出，进一步洗涤除杂后将复合物
通常在骨架上引入强亲电基团，然后与抗体上的亲
核基团如 -NH2、-OH、-SH 等发生取代反应，使抗
体连接于载体上。如果需要使抗体通过间隔臂与基
质连接，除可以选择适宜的活化试剂外，也可以首先 将间隔臂（如 SMCC）[11] 与基质连接，再将抗体与间隔
臂的活性基团偶联。常用的载体活化方式包括溴化 氰活化（CNBr）[12]、碳酰二咪唑法（CDI）[13] 等。
收稿日期：2019-12-24 作者简介：金晓林，男，高级工程师，研究方向为食品安全与品控。 通信作者：张东升，男，副研究员，研究方向为食品安全与营养。
解离，目标物被洗脱，样本得到净化。因抗体是其核 心试剂，样品的免疫净化又称抗体介导的净化。其 工作原理如图 1 所示 。
提取液过柱 洗涤去杂质 收集洗脱液
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VOL.45,No.02 February.2020
Grain science and technology and economy 粮食科技与经济
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多糖基质的活化在 IAC 制备中占有重要位置。
IAC 柱的绝大部分空间为载体基质所占据，其 影响不可忽视。理想的基质必须既有优良的色谱性 能，又能满足 IAC 的特殊要求 [7]，如高度的亲水性但 不溶于水，适度的刚性、惰性、无非特异性吸附或者 非常低，理化性质稳定，具有大量可供偶联的活性基 团，疏松多孔结构，耐受酸、醇等洗脱作用。实际应用 中的载体基质通常分为耐受低压的多糖类物质及耐 受高压的聚合材料。多糖类物质除琼脂糖还有纤维 素 [8] 等。代表性聚合材料有聚丙烯酰胺 [9]、硅胶 [10] 等。 纤维素及玻璃珠因非特异性吸附高使用受到一定的 限制。
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱操作手册-1
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱工作手册一、溶剂的配置和准备：1．蒸馏水/去离子水（配合液相使用）；2．色谱级甲醇、乙腈；3．磷酸盐缓冲液1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，氯化钠(NaCl)8g，氯化钾(KCl)0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L。
4．黄曲霉毒素M1标准品（货号：TSL-143，浓度为0.5 μg/ml）5．氢氧化钠、浓盐酸（用于调节pH）二、其他耗材及设备的准备1.滤纸；2.免疫亲和柱架或固定支座；3.注射器（建议玻璃材质，易于清洗，10 ml）或5 ml或10 ml枪头；4.1升容积的搅拌器；5.离心机；6.量筒，漏斗，移液管，烧杯，带螺盖的瓶子等玻璃器具；三、标准曲线的配制：黄曲霉毒素M1总量液态标准品：500 ng/ml 100%乙腈溶液。
取100μl 500 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至500μl，得到100ng/ml 的溶液。
绘制一条3点的校准曲线：取50 μl 100 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2.5 ml（=2 ng / ml）。
取1 ml 2 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=1 ng / ml）。
取1 ml 1 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=0.5 ng / ml）。
每种取100 μl注射进HPLC系统。
四、样品回收率的测定--针对奶粉添加浓度为0.5 ppb的样品：取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到10 g阴性奶粉样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于1 ng/ml）--针对奶添加浓度为0.1ppb的样品：取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到50ml阴性奶样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于2 ng/ml）五、样品处理A）牛奶-- 加热牛奶至35 - 37 ℃，用Waterman 4号滤纸或者Waterman 113号滤纸过滤或者在4000 rpm下离心15分钟。
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苏微呕吐毒素免疫亲和柱
使用说明书
【产品用途】
呕吐毒素（DON）免疫亲和柱适合于和DON酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测DON。
适用于谷物、饲料等样本中的DON净化处理，提高了样品的纯度，纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。
【产品性能】
柱吸附能力：≥1000ng/支；
回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶
特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】
本产品测定的基础是抗原抗体反应，呕吐毒素（DON）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的DON经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过DON免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，DON与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱DON，然后进行相关分析。
【产品组成】
标准品（选配）；
25支/盒；125μL凝胶/每支柱管
说明书1份。
【所需材料】（不提供）
（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、聚乙二醇8000（PEG）、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】
----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5g聚乙二醇8000，并与125mL水混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，
----用快速定性滤纸过滤，并用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
【亲和柱净化】
注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！
----将柱子上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上；----将20mL注射器连接于免疫亲和柱上部，用5~10mL pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）或者去离子水平衡柱子，以1滴/秒的速度缓慢通过免疫亲和柱，（用注射器加以正压或用真空泵施加负压，也可以使用泵流操作架配合免疫亲和柱）；
----准确移取2mL上述滤液（相当于0.4g样品）注入注射器中，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过免疫亲和柱；
----用20mL 水冲洗柱子，弃去流出液，流速1滴/秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体；
----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。
收集全部洗脱液，可根据实际测定条件进行稀释或氮气吹干后流动相定容，再进行相关测定。
【注意事项】
（1）呕吐毒素对人体有害，应戴手套操作。
凡接触到标样的玻璃器皿都要用5%次氯酸钠浸泡过夜。
（2）不要使用过有效期的免疫亲和柱。
（3）免疫亲和柱应在2~8℃保存。
不要冷冻。
（4）使用前，免疫亲和柱需至少提前半小时回温至室温（25℃左右）。
（5）按以上的提取过程，样品通过柱子的实际体积等于0.4g 原物质，分析方法的检测限可以通过改变进柱的样品体积而改变。
（6）样本中DON含量高于柱容量时，需适当降低上样体积。
（7）必须保证过柱的样品提取液pH在6~8之间，可用盐酸或氢氧化钠调整。
（8）称取的样品量以及提取液的体积可根据实际情况按比例调整，建议最低不少于5g样。
【保存期】
有效期为12个月。
生产日期见包装盒。