肺炎链球菌检测-奥普托欣试验 Optochin Test
肺炎链球菌
肺炎链球菌肺炎链球菌在自然界中分布广泛，常生活在正常人的鼻腔中，多数不致病或致病力很弱，少数致病力较强。
其能否致病与荚膜有密切关系，因荚膜能抵抗人体内吞噬细胞的吞噬作用而大量繁殖，引起疾病。
肺炎链球菌主要引起大叶性肺炎以及气管炎、中耳炎、脑膜炎、胸膜炎、心内膜炎、败血症等疾病。
典型的大叶性肺炎起病急骤，病人有高烧、寒颤，开始时有阵发性干咳，不久有少量粘液痰，随后痰变黄色，呈粘脓性。
由肺炎链球菌引起的急性肺部感染叫肺炎链球菌肺炎。
若3岁以下的婴幼儿肺部受到感染，则引起支气管肺炎；3岁以上年长儿受到感染，由于此时机体抵抗力逐渐增强，能使病变局限于一个肺叶或一个节段，以右上叶或左下叶最为多见，故肺炎链球菌肺炎又叫大叶性肺炎，近年来发病率较低。
起病多急骤（少数患儿先有轻微的上呼吸道感染症状），中毒症状重。
突然高热、体温可达40℃～41℃，头痛、胸痛、呼吸急促，烦躁不安，早期往往不咳嗽或轻咳，病儿常不吐痰。
年长儿可有寒战、咯吐铁锈色痰，但有的患儿仍咳黄脓痰。
重症患儿可有惊厥、谵妄及昏迷等中毒性脑病表现。
1.形态染色5.致病性致病物质1．荚膜（capsule) 是肺炎链球菌主要的致病因素。
无荚膜的变异株无毒力，感染实验动物，如鼠、兔等，很快被吞噬细胞吞噬并杀灭。
有荚膜的肺炎球菌可抵抗吞噬细胞的吞噬，有利于细菌在宿主体内定居并繁殖。
2．肺炎链球菌溶血素（pneumolysin) 高浓度时对实验动物有致死性。
对人的致病机理尚待确定。
3．紫癜形成因子（purpura-producing principle) 注入家兔皮内，可产生紫癜及出血点并伴有内脏出血。
紫癜形成因子与人类肺炎球菌感染间的关系尚不明确。
所致疾病肺炎链球主要引起人类大叶性肺炎。
75%的成年人肺炎链球菌肺炎及50%以上严重的肺炎链球菌菌血症是由1～8型肺炎链球菌引起。
肺炎链球菌6、14、19及23型，常引起儿童肺炎链球菌性疾病。
40%～70%的正常人上呼吸道中携带有毒力的肺炎链球菌。
肺炎链球菌不同药物敏感性试验系统检测结果准确性比较
肺炎链球菌不同药物敏感性试验系统检测结果准确性比较苏敏;黄海林;袁梅;李小娟;王海平;杜廷义【摘要】目的用E-test法作为参比方法,比较肺炎链球菌在不同药敏系统检测结果的准确性,以期为临床治疗提供准确、可靠的科学依据.方法随机选取2016-2017年昆明医科大学附属儿童医院分离的35株肺炎链球菌为研究对象,分别用E-test、Vitek-2 compact GP68、珠海迪尔DL-96 Strep2药敏分析系统进行药敏试验.结果与E-test法比较,Vitek-2 compact GP68、珠海迪尔DL-96 Strep2对红霉素、左氧氟沙星、万古霉素的检测结果分类符合率为100％;对头孢曲松和美罗培南的分类符合率<90％;珠海迪尔DL-96 Strep2对青霉素的检测分类符合率为97.1％,而在Vitek-2 compact GP68对青霉素的检测中,有22株(62.9％)未能输出有效结果,系统提示无法判断其敏感性.结论肺炎链球菌3种药物敏感系统试验显示:与E-test方法比较,Vitek-2 compact GP68及珠海迪尔DL-96 Strep2的检测准确性存在一定缺陷,药敏报告需要对青霉素、头孢曲松、美罗培南等抗菌药物的准确性进行进一步测定.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2019(016)003【总页数】3页(P410-412)【关键词】肺炎链球菌;药物敏感性试验;准确性【作者】苏敏;黄海林;袁梅;李小娟;王海平;杜廷义【作者单位】昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228【正文语种】中文【中图分类】R453;R378.14肺炎链球菌(SP)是导致婴幼儿脑膜炎、菌血症、肺炎等严重细菌感染疾病的首位病原菌，也是引起鼻窦炎和急性中耳炎的最常见病原菌[1],全球每年约有70万～100万5岁以下儿童死于肺炎链球菌性疾病，2岁以下儿童的病死率尤其高[2]，而肺炎链球菌对抗菌药物的药物敏感试验(简称药敏试验)结果报道，不同试验方法之间存在很大差异[3-5]。
生化实验
奥普托欣试验1.奥普托欣（Optochin）试验原理：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。
2.培养基：血琼脂平板。
3.方法：将待检菌菌落或肉汤培养液均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴上含5μg/片的Optochin纸片，35℃培养18～24h观察结果。
4.结果：抑菌环直径：>14mm为敏感，若抑菌环直径≤14mm，对此菌株应再做胆汁溶菌试验，以证实是否为肺炎链球菌。
5.应用：主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。
胆汁溶菌试验（1）胆汁溶菌试验原理：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。
（2）试剂：10%去氧胆酸钠或纯牛胆汁。
（3）方法1）平板法：取10％去氧胆酸钠溶液一接种环，滴加于被测菌的菌落上，置35℃30min后观察结果。
2）试管法：被检菌培养物2支，各0.9ml，分别加入l0％去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml，摇匀后置35℃水浴10～30min，观察结果医学教|育网搜集整理。
（4）结果：平板法以“菌落消失”判为阳性；试管法以"加胆盐的培养物变透明，而对照管仍“混浊”判为阳性。
（5）应用：主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。
杆菌肽试验1.杆菌肽试验原理：A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其他群链球菌绝大多数对其耐药。
2.培养基：血琼脂平板。
3.方法：将待检菌纯培养物（肉汤）均匀涂布于医|学教育网搜集整理血液琼脂平板上，稍于后贴上0.04U/片的杆菌肽纸片，35℃培养18～24h观察结果。
4.结果：抑菌环直径>10mm为敏感，抑菌环直径5.应用：用于A群链球菌与非A群链球菌的鉴别。
Optochin敏感试验标准操作规程
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1.目的
规范Optochin敏感试验标准操作规程
2.原理
Optochin(ethylhydrocupreine,乙基氢化去甲奎宁的商品名)可干扰肺炎链球菌叶酸的生物合成，抑制该菌的生长，故肺炎链球菌对其敏感，而其他链球菌对其耐药。
3.试剂
血琼脂平板，Optochin纸片（含药5ug）
4.质控
肺炎链球菌ATCC49619阳性，粪链球菌ATCC9790阴性
5.操作步骤
将待检菌的α溶血的链球菌均匀地涂布在血琼脂上，贴放Optochin纸片（含药5 ug），35℃孵育18-24小时，观察抑菌圈的大小。
6.结果判断
抑菌圈>10mm为肺炎链球菌。
7.注意事项
7.1做Optochin敏感试验的平板不能在CO2环境下培养，因其可使抑菌圈缩小。
7.2同一血琼脂平板上，贴放Optochin纸片（含药5ug）,35℃孵育18-24小时，观察抑菌圈的大小。
7.3Optochin纸片可保存于冰箱中，一般可保存9个月。
但若用已知敏感的肺炎链球菌检测为耐药时，纸片应废弃。
8.临床意义
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用于肺炎链球菌于其他链球菌之区别，肺炎链球菌对Optochin敏感，而其他链球菌则耐药。
肺炎链球菌检测
SP的药物敏感性
除万古霉素外，对其他药物均有耐药性菌株出 现； 对青霉素的耐药不是β-内酰胺酶引起，不能用 β-内酰胺酶试验来预测青霉素的敏感性； 青霉素的敏感性可以用1μg的苯唑西林（OX） 纸片检测，抑菌环≥20mm，表示对青霉素敏 感，对头孢曲松和头孢噻肟也敏感；
肺炎链球菌的药物敏感性
本地区耐药情况
对红霉素、四环素、复方新诺明、 克林霉素和氯霉素的多重耐药情况较为 严重，多重耐药发生率为75%，高于北 京、上海、杭州地区。
OX抑菌环<20mm时应该检测青霉素的MIC； 筛选青霉素的耐药性只用1μ gOX，不能以甲氧 西林或青霉素纸片代替，防止假敏感性出现； 药敏试验的培养基：加5%脱纤维羊血的MH平板。
敏感性预测
青霉素MIC 能预报对其他β-内酰胺类敏感性： 青霉素MIC≤0.06μg/ml（或苯唑西林的抑菌环 ≥20mm）提示分离株对氨苄西林（口服或注 射）、氨苄西林/舒巴坦、头孢克罗、头孢地 尼、头孢托仑、头孢泊肟、头孢丙烯、头孢唑 肟、头孢呋辛、亚胺培南、氯碳头孢和美洛培 南等敏感。 青霉素MIC≤2μg/ml 提示对阿莫西林、阿莫西 林/克拉维酸、头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲 松和厄他培南等敏感。
上海
广州
深圳
痰或深部呼 吸道标本
5岁以下肺炎 住院儿童
23F、19F、15B、4、19A、 不定型
7价疫苗和13价疫苗比较
7价疫苗： 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F, 23F。 13价疫苗： 以上7价加上1, 3, 5, 6A, 7F, 19A。
疫苗涵盖（100％）
地区 北京 上海 广州 深圳 7价疫苗 35 78 77 87 13价疫苗 70 89 97 93
儿童支气管肺炎痰培养肺炎链球菌的检出率以及耐药性分析
儿童支气管肺炎痰培养肺炎链球菌的检出率以及耐药性分析【摘要】目的：针对儿童支气管肺炎痰培养，调查肺炎链球菌的检出情况以及对其耐药结果进行分析，用于帮助临床了解抗菌药物的耐药情况，对抗生素的合理使用提供参考依据。
方法：选取2020年（1-12）月贵阳市妇幼保健院微生物室3240例的痰液标本进行细菌学培养和药敏试验。
结果：通过对3240 例呼吸道感染儿童痰液进行细菌学检查，确诊为支气管肺炎患儿肺炎链球菌阳性为256例，计算得出检出率为7.9%。
肺炎链球菌对红霉素、四环素、厄他培南、氯霉素耐药率分别是100%、91.8%、98.4%、89.8%。
青霉素和复方新诺明的耐药率分别为64.8%、76.5%。
对莫西沙星、左氧氟沙星、头孢曲松、头孢噻肟的敏感率分别是99.6%、98.8%、75.8%、73.1%。
肺炎链球菌对万古霉素和阿莫西林这两种抗菌药的敏感率最高，均为100%。
结论：分离的肺炎链球菌对青霉素的耐药率较高，红霉素已不是治疗肺炎链球菌的有效药物，阿莫西林、万古霉素可以作为治疗感染肺炎链球菌患者的最有效药物。
【关键词】支气管肺炎；肺炎链球菌；耐药性；儿童Detection rate and drug resistance of Streptococcus pneumoniae in sputum culture of children with bronchopneumoniaSUN WeiClinical Laboratory,Guiyang Maternal and Child Health Care Hospital · Guiyang Children's Hospital,Guiyang Guizhou 550000,China[Abstract]Objectives:In the light of sputum culture of children with bronchopneumonia,the detection of Streptococcus pneumoniae and its drug resistance were analyzed to help clinical understanding of antimicrobial resistance and to provide reference for the rational useof antibiotics.Methods:Sputum samples from 3240 cases of microbiology laboratory in Guiyang Maternal and Child Health-Care Hospital in 2017(1-12) were collected for bacteriological culture and drug sensitivity test.Results:By bacteriological examination of sputum from children with respiratory tract infection in 3240 cases,256 cases of Streptococcus pneumoniae were found in children with bronchopneumonia,and the rate of detection was 7.9%.The resistance rates of Streptococcus pneumoniae to erythromycin,tetracycline,cetonamin and chloramphenicol were 100%,91.8%,98.4%and 89.8%respectively.The resistance rates of penicillin and compound sulfamethoxazole were 64.8%and 76.5%respectively.The sensitivity rates of moxifloxacin,levofloxacin,ceftriaxone and cefotaxime were 99.6%,98.8%,75.8%and 73.1%respectively.Streptococcus pneumoniae had the highest susceptibility rate to vancomycin and amoxicillin,the two antibiotics were 100%.Conclusion:The isolated Streptococcus pneumoniae has a high resistance to penicillin,and erythromycin is not an effective drug for the treatment of Streptococcus pneumoniae.Amoxicillin and vancomycin can be used as the most effective drugs for the treatment of Streptococcus pneumoniae.[Keyword]Bronchial pneumonia;Streptococcus pneumoniae;Drug resistance;Children1前言支气管肺炎是是一种十分常见的的呼吸道疾病，其主要发病人群为婴幼儿，患病婴幼儿多以咳嗽、呼吸不畅、发热为主要临床症状，该病可由细菌、病毒、支原体等病原体感染引起，而肺炎链球菌(SP)为其中最常见的一种病原体[1]。
抑菌试验
1.O/129抑菌试验（1）原理：0／129（二氨基喋啶）对弧菌属细菌有抑制作用，而对气单胞菌属细菌无抑制作用。
（2）培养基：碱性琼脂平板。
（3）方法：将待检菌均匀涂布于碱性琼脂平板上，镊取0／129纸片（含药40μg）贴于平板上，35℃培养l8～24h 观察结果。
（4）结果：出现抑菌环为敏感，无抑菌环为耐药。
（5）应用：用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属对0／129敏感，而气单胞菌属耐药。
2.杆菌肽试验（1）原理：A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其他群链球菌绝大多数对其耐药。
（2）培养基：血琼脂平板。
（3）方法：将待检菌纯培养物（肉汤）均匀涂布于血液琼脂平板上，稍于后贴上0.04U／片的杆菌肽纸片，35℃培养l8～24h观察结果。
（4）结果：抑菌环直径>lOmm为敏感，抑菌环直径<lOmm为耐药。
（5）应用：用于A群链球菌与非A群链球菌的鉴别。
3.奥普托欣（Optochin）试验（1）原理：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。
（2）培养基：血琼脂平板。
（3）方法：将待检菌菌落或肉汤培养液均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴上含5μg/片的Optochin纸片，35℃培养l8～24h观察结果。
（4）结果：抑菌环直径：>14mm为敏感，若抑菌环直径≤14mm，对此菌株应再做胆汁溶菌试验，以证实是否为肺炎链球菌。
（5）应用：主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。
临床医学检验技术(士)：革兰阳性球菌必看考点试题二
临床医学检验技术(士)：革兰阳性球菌必看考点试题二1、单选肺炎链球菌的主要鉴定试验是（）A.杆菌肽敏感试验B.CAMP试验C.马尿酸钠水解试验D.Optochin试验E.胆汁七叶苷水解试验正确答案：D参考解析：1.（江南博哥）A群链球菌可引起急性化脓性感染，化脓型链球菌杆菌肽敏感试验为阳性。
2.CAMP试验时羊血平板上B群链球菌与金黄色葡萄球菌协同形成箭头状溶血。
3.几乎所有的肺炎链球菌菌株都对Optochin敏感，而其他链球菌通常不被其所抑制。
2、单选B群链球菌的主要鉴定试验是（）A.杆菌肽敏感试验B.CAMP试验C.马尿酸钠水解试验D.Optochin试验E.胆汁七叶苷水解试验正确答案：B参考解析：1.A群链球菌可引起急性化脓性感染，化脓型链球菌杆菌肽敏感试验为阳性。
2.CAMP试验时羊血平板上B群链球菌与金黄色葡萄球菌协同形成箭头状溶血。
3.几乎所有的肺炎链球菌菌株都对Optochin敏感，而其他链球菌通常不被其所抑制。
3、单选触酶阳性，对新生霉素耐药的是（）A.金黄色葡萄球菌B.淋病奈瑟菌C.腐生葡萄球菌D.肺炎链球菌E.肠球菌属正确答案：C参考解析：此题考查的常见病原球菌的主要鉴定试验。
4、单选葡萄球菌引起的疾病不包括（）A.痈B.败血症C.猩红热D.食物中毒E.脓毒败血症正确答案：C参考解析：葡萄球菌作为正常菌群而金黄色葡萄球菌则为主要致病菌，在创伤、医源性感染以及免疫功能低下时引起疾病，所致疾病有慢袭性和毒素性两种类型。
侵袭性疾病局部感染有疖、痈、毛囊炎、蜂窝织炎和伤口化脓等，还可引起气管炎、肺炎、脓胸和中耳炎等；全身感染如败血症和脓毒血症等。
毒素性疾病有食物中毒、烫伤样皮肤综合征、假膜性肠炎、毒性休克综合征等。
5、单选患者，男，有糖尿病史7年。
因伤口感染、发热收入院，经细菌直接镜检、血培养及鉴定试验，判断为金黄色葡萄球菌感染引起，下列关于金黄色葡萄球菌所产生的凝固酶说法不正确的是（）A.与其致病力有关的侵袭性酶B.抗吞噬作用C.保护细菌D.杀灭细菌E.使病灶局限正确答案：D参考解析：血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的一种与其致病力有关的侵袭性酶，分游离型和结合型2种。
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中国疾病预防控制中心 传染病预防控制所呼吸道传染病室
肺炎链球菌相关实验技术操作手册
奥普托欣敏感性检测
（Optochin Test）
试验开始前，请准备：
MH血琼脂平板于室温下平衡至少20min。
试验步骤：
1.取新鲜培养的肺炎链球菌，以0.85%NaCl溶液配制0.5 麦氏单位菌悬液。
2.用无菌棉签蘸取菌悬液均匀涂抹于MH血琼脂平板培养基上；涂抹方向每次
旋转60°，均匀涂抹3次。
3.涂抹后的平板室温下放置10min；用镊子夹取，在培养基中央贴放奥普托欣
（Optochin）纸片一片。
在平板背侧标记菌株编号、试验时间“年年年年-月月-日日”
4.将培养基放置于5% CO2，35℃条件下培养18h-20h。
5.用游标卡尺测量抑菌环直径，抑菌环直径≥14mm为敏感。
将试验结果及时
添加至Streptococcus pneumoniae isolates data bank。
图片左侧为奥普托欣检测阳性，右侧为阴性。
Reference
*Laboratory Menthods for the Diagnosis of Meningitis. WHO/CDS/CSR/EDC/99.7.
本手册仅供实验室内部使用 2011年第1
版。