碱性磷酸酶染色(NAP)123
碱性磷酸酶染色(NAP)
临床义
临床上主要用于鉴别： 临床上主要用于鉴别： 1. 慢性粒细胞白血病与类白血病反应： 慢性粒细胞白血病与类白血病反应： 慢性粒细胞白血病(无继发性感染者 时，NAP积分一般明显下降， 慢性粒细胞白血病 无继发性感染者)时 积分一般明显下降， 无继发性感染者 积分一般明显下降 积分常＜ 分 甚至为零分；类白血病反应时则显著增高， 积分常＜13分，甚至为零分；类白血病反应时则显著增高，积 分常＞ 分常＞200分。 分 2. 阵发性睡眠性血红蛋白尿症与再生障碍性贫血： 阵发性睡眠性血红蛋白尿症与再生障碍性贫血： 阵发性睡眠性血红蛋白尿症常降低；再生障碍性贫血常增高， 阵发性睡眠性血红蛋白尿症常降低；再生障碍性贫血常增高，病 情好转时， 积分则可逐渐下降。 情好转时，NAP积分则可逐渐下降。 积分则可逐渐下降 3. 急性白血病的细胞类型：ALL增高，AML下降。 急性白血病的细胞类型： 增高， 下降。 增高 下降
方法步骤
新鲜干燥的涂片用冷10%甲醛甲醇固定液固定30s 流水轻轻冲洗30 10%甲醛甲醇固定液固定30s， 30～ 1. 新鲜干燥的涂片用冷10%甲醛甲醇固定液固定30s，流水轻轻冲洗30～ 60s，待干。 60s，待干。 把涂片浸入基质孵育液中，在室温(冬季放水浴箱)下温育10 15min。 10～ 2. 把涂片浸入基质孵育液中，在室温(冬季放水浴箱)下温育10～15min。 3. 流水冲洗1 ～ 2min，加苏木素染色液中复染5～8min，流水冲洗，待 流水冲洗1 2min，加苏木素染色液中复染5 8min，流水冲洗， 干，镜检。 镜检。 胞质中出现紫黑色或棕红色颗粒为阳性。判断标准如下： 4. 结果判断 胞质中出现紫黑色或棕红色颗粒为阳性。判断标准如下： 0分：胞质中无阳性染色颗粒。 胞质中无阳性染色颗粒。 1分：胞质中含少量颗粒或呈弥漫浅色。 胞质中含少量颗粒或呈弥漫浅色。 2分：胞质中含中等量的颗粒或呈弥漫着色。 胞质中含中等量的颗粒或呈弥漫着色。 3分：胞质中含较多颗粒或弥漫较深色。 胞质中含较多颗粒或弥漫较深色。 4分：胞质中充满粗大颗粒或弥漫深色。 胞质中充满粗大颗粒或弥漫深色。 5 计算阳性率和积分值。 计算阳性率和积分值。
碱性磷酸酶染色
碱性磷酸酶染色碱性磷酸酶染色介绍：碱性磷酸酶较多存在于成熟中性粒细胞中。
在碱性条件下，碱性磷酸酶经镁离子激活后能将磷酸酯水解为磷酸钠和甘油，磷酸钠再与氯化钙、硝酸钴、硫化铵发生一系列化学反应，生成棕色的硫化钴定位于胞质内。
碱性磷酸酶染色正常值：成熟中性粒细胞呈阳性，其他细胞均呈阴性。
阳性积分正常参考值：80分以下(以计算100个中性杆状核和分叶核粒细胞为准)。
碱性磷酸酶染色临床意义：异常结果：积分降低：见于病毒感染，恶性组织细胞增生症，阵发性睡眠性血红蛋白尿症，急、慢性粒细胞性自血病，红、白血病，骨髓增生异常综合征，继发性红细胞增多症，急性单核细胞性白血病，慢性淋巴细胞白血病。
当病情缓解时，积分又可上升到正常。
积分升高：见于化脓性细菌感染、急性大出血、原发性血小板增多症、再生障碍性贫血、红血病、骨髓增生性疾病、急性淋巴细胞白血病、类白血病反应、恶性淋巴瘤、恶性肿瘤、激素治疗等。
再生障碍性贫血治疗好转时，积分可降低。
需要检测的人群：蛋白尿者，细菌感染，急性大出血者，贫血碱性磷酸酶染色注意事项：检查前：1、抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。
血液中的酒精成分会直接影响检验结果。
2、抽血前禁食12小时，取新鲜血液送检。
检查时：应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩，增加采血的困难。
检查后：1、抽血后，需在针孔处进行局部按压3-5分钟，进行止血。
注意：不要揉，以免造成皮下血肿。
2、按压时间应充分。
各人的凝血时间有差异，有的人需要稍长的时间方可凝血。
所以当皮肤表层看似未出血就马上停止压迫，可能会因未完全止血，而使血液渗至皮下造成青淤。
因此按压时间长些，才能完全止血。
如有出血倾向，更应延长按压时间。
3、抽血后出现晕针症状如：头晕、眼花、乏力等应立即平卧、饮少量糖水，待症状缓解后再进行体检。
4、若局部出现淤血，24小时后用温热毛巾湿敷，可促进吸收。
不适宜人群：没有碱性磷酸酶染色检查过程：(1)阳性积分计算方法：阳性反应主要见于粒细胞系成熟阶段的分叶核和杆状核细胞的胞质中出现灰色或棕黑色颗粒，其阳性程度分级及积分计算如下。
中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色偶氮偶联法
中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色偶氮偶联法[原理]中性粒细胞胞浆中的碱性磷酸酶在碱性环境中，能水解磷酸萘酚钠，释放的萘酚与重氮盐作用生成不溶性有色的偶氮染料，定位于胞浆中。
[试剂](1)固定剂，为40％甲醛25m1，加无水乙醇至100m1。
(2)丙二醇缓冲液。
①贮备液(0．2mol/L 2—氨基-2-甲基-1，3-丙二醇液)为2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇10．5g，蒸馏水加至500ml。
②应用液(0.05mol/L pH9.75)，为0．2mol/L贮备液25m1， o.1mol/L盐酸 5m1，蒸馏水加至100m1。
(3)基质孵育液pH9.5-9．6(用前临时配制)，α—磷酸萘酚钠20mg溶于0.05mol/L丙二醇缓冲液20m1，再加坚牢蓝RR(或坚牢紫酱)20mg，混合后用滤纸过滤，立即应用。
(4)10g/l亮绿。
[操作](1)新鲜血片或骨髓片用4-10℃的固定剂固定30秒。
(2)、在涂片上滴加新配过滤的孵育液，在室温下作用10-15分钟。
(3)水洗，10g/L亮绿复染2分钟。
(4)水洗，晾干镜检。
[结果观察](-)：阴性反应。
(+)：胞浆中含少量紫黑色，无紫黑色颗粒或红色物质。
(++)：胞浆中含有中等量紫黑色颗粒或呈弥漫红色。
(+++)：胞浆中有丰富的紫黑色颗粒或弥漫较深红色。
(++++)：有极丰富的大紫黑色颗粒或弥漫深红色。
[参考值]中性粒细胞碱性磷酸酶活性积分值为10—50分。
[临床意义]基本同改良Gomor；氏钙钻法。
编写：谢平制定日期：2011.12.1[附注](1)若涂片不能及时测定，可固定干燥后放冰箱4℃保存。
(2)在甘油磷酸钠和巴比妥钠应临用前称取，分别为0．38和0．28，再加蒸馏水20m1即配成。
配制后的β-甘油磷酸钠不宜久放。
(3)涂片从孵育液拿出可不用水洗，直接加硝酸钻，但与硝酸钴作用后，应反复水洗，以免残留的硝酸钻与硫化胺作用后使整个涂片变黑，造成假阳性。
中性粒细胞碱性磷酸酶积分参考值
中性粒细胞碱性磷酸酶积分参考值
中性粒细胞碱性磷酸酶积分是需要了解，因为偏高或者偏低，都可能是一些疾病的征兆表现，通常阳性率10-40%，积分值
40-80，了解NAP阳性率及积分，可以帮助有效地诊断和辨别一
些疾病。
1、中性粒细胞碱性磷酸酶积分正常值范围是5O~12O分，其临床化验意义1.有助于慢性粒细胞白血病与感染或类白血病反
应的诊断与鉴别诊断。
2.有助于骨髓增生性疾病的鉴别诊断。
2、碱性磷酸酶主要存在于成熟阶段的中性粒细胞，其他细
胞均呈阴性反应。
阳性反应为在胞质中出现灰色到棕黑色颗粒，反应强度分为5级，即-、+、2+、3+、4+。
反应结果以阳性反应细胞的百分率和积分值来表示。
血涂片经染色反应后，在油镜下，
连续观察100个成熟中性粒细胞，记录其阳性反应细胞所占的百分率即为阳性率；并对所有阳性反应细胞逐个按其反应强度作出+~4+的分级，将各级所占的百分率乘以级数，然后相加，即为积分值。
3、参考值：阳性率10-40%，积分值40-80。
中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是中性粒细胞的标志酶，主要存在于成熟中性粒细胞内，是其胞质特殊颗粒释放的一种在碱性条件（pH9.3～9.6）能催化各种醇和酚的单磷酸酯水解的非特异性水解酶。
NAP 活力可反映成熟粒细胞的成熟程度和功能，随着细胞的成熟，酶的活性也逐渐增强。
4、当中性粒细胞活化后，NAP阳性率及积分升高在病理情况下，NAP活性的变化常有助于某些疾病的诊断和鉴别诊断。
碱性磷酸酶标准范围
碱性磷酸酶标准范围碱性磷酸酶（ALP）是一种酶类蛋白，在人体内起着重要的生物学作用。
它主要存在于肝脏、骨骼、胆囊和肠道等组织中，参与骨骼代谢、胆汁生成和肝脏功能等多种生理过程。
因此，对于碱性磷酸酶的标准范围的了解和掌握，对于临床医学和科研工作具有重要意义。
首先，我们来谈谈碱性磷酸酶的正常参考范围。
一般来说，成年人的碱性磷酸酶正常参考范围是30-120单位/升。
而对于儿童和青少年来说，由于其生长发育阶段的特殊性，其碱性磷酸酶的正常参考范围会略有不同。
在临床实践中，医生通常会根据患者的具体情况，结合临床症状和其他相关检查结果，来判断其碱性磷酸酶是否在正常范围内。
其次，我们需要了解一些影响碱性磷酸酶水平的因素。
首先，肝脏疾病是导致碱性磷酸酶水平升高的常见原因之一。
例如，肝炎、肝硬化、胆道梗阻等疾病都可能导致肝脏组织受损，从而释放大量的碱性磷酸酶进入血液循环。
其次，骨骼疾病也会对碱性磷酸酶水平产生影响。
例如，骨折、骨转移性瘤等疾病会导致骨骼组织受损，从而释放碱性磷酸酶。
此外，一些药物的使用、妊娠等情况也可能影响碱性磷酸酶的水平。
最后，我们需要强调的是，对于碱性磷酸酶的检测结果，不能片面地进行诊断和判断。
只有结合患者的临床症状、疾病史、影像学检查等多方面的信息，才能做出准确的诊断和判断。
因此，在临床实践中，医生需要综合分析患者的各项检查结果，慎重对待碱性磷酸酶的检测结果，以避免误诊和漏诊的发生。
总之，对于碱性磷酸酶标准范围的了解和掌握，对于临床医学和科研工作具有重要意义。
通过了解其正常参考范围、影响因素和临床意义，可以帮助医生更好地进行诊断和治疗工作，为患者的健康保驾护航。
希望本文能对读者有所帮助，谢谢阅读。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液（NAP）预期用途：供骨髓细胞图片及血液细胞图片染色检查检验原理：本染色方法为偶氮偶联法，在PH9.2-9.8的碱性环境下，细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸萘酚AS-BI水解，生成α-萘酚，再以稳定的重氮盐与萘酚偶联生成不溶性有色偶氮染料沉淀，定位于细胞浆中主要组成成分：储存条件：本试剂盒应储存于2℃-8℃低温环境。
样本要求：新鲜骨髓细胞涂片及血液细胞涂片（切勿使用抗凝血）检验方法：一、工作液配制（一）、浸染工作液配制（一份浸染工作量是43ml,至少可同时放置8-10张涂片）1、重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；2、染缸（自备染液缸）内加入蒸馏水40ml；3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀4、再加D液1ml入染缸内，轻轻混匀（二）滴染工作液配制（一份滴染工作液是2.15ml）使用器材：一次性塑料试管、微量移液器，一次性吸嘴，滴管。
操作：取B液50μl,C液50μL混匀，静置2分钟，再加蒸馏水2ml，D液50μl,混匀，二、染色步骤1、干燥涂片，滴加A液固定剂（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，甩干；2、滴加或浸入工作液15分钟，蒸馏水冲洗2-3分钟，甩干3、E液(使用前务必摇匀！)复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检4、计算积分：反应结果以积分值报告，油镜下计数100个中性杆状核、分叶核粒细胞，分别记录其分级情况，所有阳性细胞积分相加即为积分。
如：参考范围：阳性反应主要见于成熟中性粒细胞（杆状及分叶核粒细胞）中，健康成人一般的中性粒细胞碱性磷酸酶积分值为13-130，但各个实验室条件各异，实验室应有自己的参考值。
检验结果的解释NAP阳性颗粒为蓝色检验方法的局限性仅限于形态学染色观察使用注意事项1、5Tests只限滴染使用2、使用前应恢复室温，用前请摇匀试剂；B,C液请充分混匀，所用容器必须洁净，工作液颜色为金黄色3、应采用新鲜涂片作NAP染色,放置过久则酶的活性会降低；使用抗凝血涂片染色阳性结果不稳定4、工作液配制以后应在十分钟以内使用5、需用感染发热病人或正常人外周血涂片作为阳性对照6、每次试剂使用后，请迅速盖好密封保存，以免挥发及影响效果7、本品应由专业人士使用及进行结果的判读7、使用前应详细阅读使用说明书及产品包装标识，在有效期内使用，并做好个人卫生防护8、生产批号、效期见外包装9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。
碱性磷酸酶染色
临床意义
1. 鉴别细菌性感染(增高)与病毒性感染(减低) ； 2. 鉴别慢粒(减低)和类白血病反应(显著增高)； 3.慢粒经治疗病情缓解时活性恢复正常，急变
时活性增强，有助于对病情判断； 4. 急粒时活性减低，急淋时活性增高； 5. 再障时活性增强，PNH时活性减低。
其他细胞基本呈阴性反应。
结果判断
阴性：胞浆内无沉淀物（无色） 阳性：胞浆内出现红色沉淀物
阳性率： 积分计算：观察100个成熟中性粒细胞，将每
个细胞的记分相加，即得积分。
正常人的NAP活性正常值：
中性粒细胞阳性率：68~99.5%（ 84.1% ） 阳性积分为： 30~130分
注意事项
1. 涂片应新鲜，染好片即看； 2. 低温固定，细胞不易破坏； 3. 基质液须新鲜配制； 4. 应作阴、阳性对照。
步 骤(固定、显示、复染)
1. 新鲜涂片滴加固定液（4℃）30秒，待干； 2. 将Ⅰ液置入Ⅱ液混合成为基质液。将涂片
置入，37℃温育45分钟，连缸流水冲洗 数分钟，取出待干； 3. 苏木素复AP主要存在于中性成熟粒细胞（中性 杆状核和分叶核细胞），呈阳性反应， 严重的化脓性感染时，晚幼阶段也可见 有阳性反应。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色
实验要求：
掌握中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原 理、操作、注意事项、结果判断、正常血 细胞染色反应及临床意义。
原 理：
中性粒细胞内的碱性磷酸酶在碱性环 境下，水解α－磷酸萘酚钠，产生α－萘 酚。后者与重氮剂偶联形成有色沉淀物，沉 淀物的显色深浅与碱性磷酸酶活性成正比。
试剂：
1. NAP 固定液：含甲醇、甲醛等 2. NAP Ⅰ液：含固紫B等 3. NAP Ⅱ液：含丙二醇、磷酸萘酚钠盐等 4. 苏木素复染液：
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)
北京雷根生物技术有限公司
中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)
简介：
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称 ALP 或 AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于 哺乳动物组织内，其活性所需最适 pH 9.2~9.8。中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)是采 用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，细胞内碱性磷酸酶可使 AB-BI 磷酸盐水解，释放出磷酸与 萘酚，后者与偶联重氮 盐生成有色产物， 定位于细胞质中 。该染液丏门用 于血液或骨髓细 胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色, 碱性磷酸酶活性部位呈红色。
1ml
5ml RT
临用前，按 B1:B2:B3=1:1:2 比例混合，即为 NAP 孵育液，即配即用。
试剂(C): Lea 苏木素染色液
1ml
5ml 4℃ 避光
试剂(D): 甲基绿染色液
1ml
5ml RT 避光
使用说明书
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、制备新鲜血液或骨髓细胞涂片，NAP 固定液固定，充分水洗。 2、滴加配制好的 NAP 孵育液，孵育，水洗。 3、Lea 苏木素染色液复染或甲基绿染色液复染。 4、水洗、晾干、镜检。
组成：
名称
编号 DE0003 DE000A): NAP 固定液
2ml
10ml RT 避光
试剂(B):
B1: AS-BI 染色液 0.5ml 2.5ml -20℃ 避光
NAP 孵育液 B2: FBB 染色液
0.5ml 2.5ml 4℃ 避光
B3: NAP buffer
名称 Masson 三色染色液 多聚甲醛溶液(4% PFA) RIPA 裂解液(强) 葡萄糖检测试剂盒(GOD-PO D 比色法)
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铁染色（Iron stain）
目的 掌握骨髓铁染色的原理、方法、注意事项及临床意义。
原理
骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，其所含的三价铁 经稀盐酸处理后而游离，并能与酸性亚铁氰化钾溶液发
生普鲁士蓝反应，生成蓝色亚铁氰化铁沉淀，定位于含
铁的部位。细胞内铁也可用此法显示，根据反应的强弱 可了解骨髓中铁的含量。
3分：胞质中含较多颗粒或弥漫较深色。
4分：胞质中充满粗大颗粒或弥漫深色。 5 计算阳性率和积分值。
注意事项
1. 磷酸萘酚盐和重氮试剂品种繁多，应根据基质选择相适 应的重氮盐，坚牢蓝等重氮盐的质量好坏是本ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ成败的
关键。
2. 基质孵育液必须临用前新鲜配制，先应将血膜固定干燥 后，才开始配制基质液。
3. 若无2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇，可用巴比妥缓冲液
Ⅰ型：幼红细胞内含1～2个小铁颗粒。
Ⅱ型：幼红细胞内含3～5个小铁颗粒。 Ⅲ型：幼红细胞内含6～10个小铁颗粒，或1-4个大铁颗粒。 Ⅳ型：幼红细胞内含10个以上小铁颗粒，或5个以上大铁颗粒。 环形铁粒幼细胞：是指幼红细胞含铁粒＞6个，绕核2/3以上者。
注意事项
1. 玻片需经去铁处理 将新玻片用清洁液浸泡24h，取出 后反复水洗浸入95%酒精中24h，晾干，再浸泡在5%盐酸 中24h，用双蒸水反复浸洗玻片，取出烤干后备用。
(pH9.2)或0.2mol/L Tris缓冲液(pH9.2)代替。
临床意义
临床上主要用于鉴别： 1. 慢性粒细胞白血病与类白血病反应： 慢性粒细胞白血病(无继发性感染者)时，NAP积分一般明显下降， 积分常＜13分，甚至为零分；类白血病反应时则显著增高，积 分常＞200分。 2. 阵发性睡眠性血红蛋白尿症与再生障碍性贫血： 阵发性睡眠性血红蛋白尿症常降低；再生障碍性贫血常增高，病 情好转时，NAP积分则可逐渐下降。 3. 急性白血病的细胞类型：ALL增高，AML下降。
碱性磷酸酶染色（NAP）
目的 掌握卡氏偶氮偶联法测定中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理、 方法、注意事项和临床意义。 原理 中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在pH9.6的碱性条件下能水解 磷酸萘酚，生成萘酚，后者与重氮盐偶联形成不溶性的有色 沉淀定位于胞质中的酶活性处。重氮盐有多种，常用的有坚 牢蓝RR、坚牢蓝BB、坚牢紫酱等。
2. 骨髓取材要满意，外铁一定要有骨髓碎块或颗粒，取材
不佳时，往往影响结果。 3. 酸性亚铁氰化钾溶液须新鲜配制。
临床意义
1. 鉴别缺铁性贫血和非缺铁性贫血：IDA时骨髓细胞外铁显著减少或消失， 铁粒幼红细胞明显减少，所见铁粒细小色浅，且以Ⅰ型为主，Ⅱ型极少见， Ⅲ型以上不见。经铁剂治疗后细胞外铁及内铁可迅速增多，此检查是诊断 IDA及指导铁剂治疗的一种辅助方法；非IDA，如HA、MA、AA等病人的 细胞外铁通常增高，内铁亦增高，以Ⅰ型、Ⅱ型为主，可以见到Ⅲ型，罕 见Ⅳ型。因此，有助于鉴别IDA与非IDA。 2. 用于诊断铁粒幼细胞性贫血：能找到数量不等的环形铁粒幼细胞，多见粗 颗粒的Ⅲ型与Ⅳ型铁粒幼细胞。 3. 用于诊断伴环形铁粒幼细胞增多的MDS：骨髓中环形铁粒幼细胞＞15%。
方法步骤
1. 干燥涂片用甲醇固定10min，待干。 2. 玻片上滴满酸性亚铁氰化钾，37℃染色30min。 3. 用蒸馏水冲洗后用核固红染液复染10～15min。 4. 流水冲洗，待干，镜检。
5. 结果判断
(1) 幼红细胞核呈鲜红色，胞质呈淡黄红色，铁粒呈蓝绿色。 (2) 细胞外铁 用低倍镜观察涂片，特别是涂片尾部和髓粒附近，注
意翠蓝色颗粒的存在，可分五级标准。
(3) 细胞内铁 用油镜计数100个中、晚幼红细胞，记录胞质中含有蓝
色铁颗粒的细胞(铁粒幼细胞)的百分率。根据细胞内铁颗粒的数目、 大小、染色深浅和颗粒分布的情况，将铁粒幼细胞分为四型。
细胞外铁的划分标准:
(-)：无颗粒。 (+)：有少数铁颗粒或偶见铁小珠(颗粒体积大于嗜酸性粒细胞的颗粒者 称为铁小珠)。 (++)：有较多的铁颗粒或小珠。 (+++)：有很多的铁颗粒、小珠和少数小块状。 (++++)：有极多铁颗粒、小珠，并有很多的小块，密集成堆。 铁粒幼细胞划分：
方法步骤
1. 新鲜干燥的涂片用冷10%甲醛甲醇固定液固定30s，流水轻轻冲洗30～ 60s，待干。 2. 把涂片浸入基质孵育液中，在室温(冬季放水浴箱)下温育10～15min。 3. 流水冲洗1 ～ 2min，加苏木素染色液中复染5～8min，流水冲洗，待 干，镜检。 4. 结果判断 胞质中出现紫黑色或棕红色颗粒为阳性。判断标准如下： 0分：胞质中无阳性染色颗粒。 1分：胞质中含少量颗粒或呈弥漫浅色。 2分：胞质中含中等量的颗粒或呈弥漫着色。