组织及血液碱性磷酸酶试剂盒说明书
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)说明书
注意：由于检测仪器和操作手法等条件的不同，参考值范围会有波动，该值仅供参考，对于 要求精确计算 ALP 含量的，可以进行多点重复测定；根据测定经验显示，标准品浓度在 5U/L 以下，标准品浓度在 100U/L 以上，标准曲线会有偏差。
以系列 Phenol 标准(1～6 号)对应的金氏单位(10、20、30、40、50U/L)为横坐标，以相应的 A 标准(1～6 号)为纵坐标，绘制标准曲线。以 A 测定-A 对照的差值为实际的吸光度，用该差 值与标准曲线进行对比，求出酶活力单位。
参考区间(37℃)：
健康成年人 健康儿童
3～13 金氏单位 5～28 金氏单位
注意事项： 1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。 2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定，但应注意 96 孔板最大检测体积。 3、所测样品的值高于标准曲线的上限，应稀释样品后重新测定。 4、空白管如果显红色，说明 ALP 显色液不可用，应丢弃。 5、加入显色基液时应迅速，并且及时混匀，否则显色不充分。 6、如无法检测 510nm，亦可检测 500～530nm 范围内吸光度。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件 4℃ 避光 4℃ 避光 4℃ 避光 4℃ 避光 4℃ 避光
自备材料： 1、离心管或小试管、水浴锅或恒温箱 2、分光光度计、比色杯 3、ddH2O、PBS 或生理盐水
操作步骤(仅供参考)： 1、准备样品： ①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要可用 PBS 或生理盐水进行适当匀 浆，一般细胞数量在 106 以上，组织应在 100mg 以上，3000~4000rpm 离心取上清，-20℃ 冻存，用于碱性磷酸酶的检测。 ②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定， 尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了 血浆或血清但不加底物的对照。 ③高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 PBS 等进 行稀释，如鸡血清、血浆可稀释 5～10 倍后检测。
碱性磷酸酶测定试剂（ALPAKP）
北京华宇亿康生物工程技术有限公司Co-Health (Beijing )Laboratories Co., Ltd. 液体生化试剂使用说明书_碱性磷酸酶测定试剂（ALP/AKP ） （IFCC ，AMP 缓冲液）【注册产品标准】YZB/国 1959-2003 ◇ 【医疗器械注册证号】京药监械（准）字2005第2400405号本试剂适用于人血清或血浆中碱性磷酸酶活性的体外定量分析。
临床意义碱性磷酸酶存在于体内多种组织和器官，其病理性变化表现在：增加：（1） 肝脏疾病如胆汁淤积和肝硬化；（2） 骨骼疾病如软骨病、佝偻病、成骨肉瘤； （3） 恶性肿瘤。
减少：（1） 停止生长（克汀氏病、软骨发育不全）； （2） 先天性低磷酸酶血症。
方法学原理磷酸对硝基苯酚（4-NPP ）在碱性磷酸酶的作用下，将其磷酸基转移到2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP ）受体分子上，释放出的对硝基苯酚（4-NP ）在碱性溶液中分子重排形成黄色醌，可在405nm 下检测。
黄色醌形成速率与ALP 活力成正比。
ALP 4 -NPP + H 2O → 4 -NP + 磷酸 Mg 2+, 碱性 试剂组成试剂1（R 1） 试剂2（R 2）AMP 0.35mol/L 4 -NPP 80mmol/L MgCl 2 10.5mmol/L 稳定剂 适量 适用仪器ZYA-1003：适用于日立7060/7150、岛津7200/ 7300/8000全自动生化分析仪；ZYB-1003：适用于日立7170 A /7170、奥林巴斯AU400 /600/1000全自动生化分析；ZYC-1003：适用于日立7020全自动生化分析仪； ZYD-1003：适用于贝克曼CX 系列全自动生化分析仪；ZYE-1003：适用于东芝全自动生化分析仪；TYA-1003、TYB-1003、TYC-1003：适用于其它全自动生化分析仪及各类半自动生化分析仪。
试剂贮存及稳定性试剂自生产日期起2—8℃避光存放可稳定12个月；R 1、R 2按4:1比例混为工作液2—8℃避光可稳定4周。
BCIP NBT碱性磷酸酶显色试剂盒
仅供科研使用版本号：180718BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒【产品组成】【保存条件】4℃,避光,12个月。
【产品概述】BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。
BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物，在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit可用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定，也可用于Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测\细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。
【使用方法】1、对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
2、对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
3、按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液：4、洗涤完毕后，去除洗涤液。
5、加入适量BCIP/NBT染色工作液，确保能充分覆盖样品。
5、室温避光孵育5～30min或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
6、去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1～2次即可终止显色反应。
7、对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red stainingsolution)染色，以便于观察。
对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
【注意事项】1、BCIP对人体有刺激性，NBT对人体有害，请注意适当防护。
骨源性碱性磷酸酶检测试剂盒(凝集素亲和法)产品技术要求北京中生金域诊断
骨源性碱性磷酸酶检测试剂盒（凝集素亲和法）适用范围：用于体外半定量检测人体全血或血清中骨源性碱性磷酸酶催化活性。
1.1 产品型号：JY–Color–BAP NB；JY–Color–BAP AB。
1.2 产品规格1.2.1 包装规格：20人份/盒、50人份/盒、100人份/盒。
1.2.2产品组成：产品主要组成成分见表1、表2。
表1 试剂盒配置表配 置 规 格 （装量）20人份/盒 50人份/盒 100人份/盒反应装置 1×20支 1×50支 5×20支显色液 JY–Color–BAP NB1ml ×1瓶3.5ml ×1瓶7ml ×1瓶 JY–Color–BAP AB洗涤液 JY–Color–BAP NB3ml ×1瓶 8ml ×1瓶 8ml ×2瓶 JY–Color–BAP AB终止液 JY–Color–BAP NB3ml ×1瓶4ml ×1瓶 8ml ×1瓶 JY–Color–BAP AB 7ml ×1瓶 7ml ×2瓶一次性定量取血管（含吸头）21支（含吸头1个）52支（含吸头1个）104支（含吸头1个）注：试剂盒中一次性定量取血管为外购有医疗器械证书的产品。
表2试剂配方和浓度配 置 组成 浓度显色液 氯化钠（NaCl） 700mmol/L氯化镁（MgCl2） 25mmol/L二甲基亚砜（DMSO）0.9%（体积比）洗涤液 氯化钠（NaCl） 13%氯化镁（MgCl2） 2.9% 聚乙二醇（PEG）13%氯化锌（ZnCl2） 7%氯化钙（CaCl2） 18%氯化锰（MnCl2） 32%迭氮钠（NaN3） 5%JY–Color–BAP NB终止液氯化钠（NaCl） 18%迭氮钠（NaN3） 25% JY–Color–BAP AB终止液 乙磺酸（MES） 9%氯化钠（NaCl） 13%迭氮钠（NaN3） 7%2.1 外观2.2.1 反应装置为白色塑料制品，结构应完整、表面光洁、无缺失、无折损、无脱落；2.2.2 测定用液体外观要求：a) 显色液为浅黄色液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物；b) 洗涤液为无色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物；c) 终止液为无色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒标准操作程序
碱性磷酸酶(ALP)测定标准操作程序1.摘要碱性磷酸酶（ALP）存在于成骨细胞、干细胞、白细胞、肾、脾、胎盘、前列腺和小肠内。
测定血清或肝素化血浆中的碱性磷酸酶活力，做临床辅助诊断用。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中碱性磷酸酶（ALP）的活力。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定碱性磷酸酶（ALP）活力的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的碱性磷酸酶（ALP）试剂盒采用的是AMP缓冲液法。
5.原理在AMP的缓冲环境下，磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，可以水解成磷酸盐和对硝基苯酚。
在一定底物浓度范围内,磷酸对硝基苯的水解产物对硝基苯酚会引起405nm处吸光度的上升，其上升速率与血清中碱性磷酸酶的活力成正比。
−→−+OH−−磷酸盐对硝基苯酚磷酸对硝基苯碱性磷酸酶+26.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：AMP缓冲液（PH10.50）、乙酸镁；R2：AMP缓冲液（PH8.85）、磷酸对硝基苯、乙酸镁。
AMP：2-氨基-2-甲基-1-丙醇7.3试剂稳定性：试剂在2-8℃避光保存，有效期1年。
试剂工作液在2-8℃避光保存，可稳定4周，15-25℃可保存稳定4天。
7.4试剂准备：试剂为即用式。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
Elabscience碱性磷酸酶(ALP)比色法测试盒使用说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®碱性磷酸酶(ALP)比色法测试盒Alkaline Phosphatase (ALP) Activity Assay Kit产品货号：E-BC-K091-M产品规格：48T(32 samples)/96T(80 samples)检测仪器：酶标仪（500-530 nm）使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测动物血清(浆)、体液、组织及细胞中碱性磷酸酶的活力。
检测原理在pH=10的反应液中，碱性磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，生成游离酚和磷酸。
酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉结合，并经铁氰化钾氧化生成红色的醌的衍生物，根据红色的深浅计算酶活的高低。
本试剂盒检测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用BCA法（货号：E-BC-K318-M）。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：酶标仪（500-530 nm，最佳检测波长520 nm）、涡旋混匀仪、37℃恒温箱。
耗材：枪头（1000 µL，200 µL，10 μL）、EP管（10 mL，2 mL）。
试剂：双蒸水、PBS（0.01 M，pH 7.4）或生理盐水（0.9% NaCl）试剂准备①试剂盒中的试剂平衡至室温。
②工作液的配制：按试剂一：试剂二为1:1的体积比混匀，现用现配，未用完的试剂2-8℃避光可保存1天。
③不同浓度标准品的稀释：样本准备①样本处理血清血浆等液体样本：直接测定。
碱性磷酸酶显色剂使用方法
5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐), BCIP/NBT (四唑硝基蓝)是碱性磷酸酶底物, 产物为深蓝色, 在碱性磷酸酯酶的催化下,BCIP被水解, 水解产物与NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
使用方法1. 在膜或组织切片,最后一次洗涤完毕后,加入适量BCIP/NBT染色工作液2. 室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深度.3. 用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应4. 膜标本可干燥后避光保存;组织切片或细胞样品,显色反应终止后,可以用中性红复染染色干细胞成骨诱导的常用染色方法有几种碱性磷酸酶(ALP)是成熟成骨细胞的标志性酶,同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。
成骨细胞染色方法以ALP为目标物的检测方法:1 Gomori钙钴法【染色原理】ALP在pH值9.4的环境下,以镁离子作为激活剂,能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸,磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙,再与硝酸钴作用形成磷酸钴,经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。
【孵育液配制】3%β-甘油磷酸钠5ml2%巴比妥钠5ml蒸馏水10ml2% CaCl2 10ml2% MgSO4 1ml【步骤】(1)将无菌的玻片放入培养皿中,传代时加入适量的细胞悬液,作细胞爬片,呆细胞长满玻片后取出。
(2)PBS冲洗后用冷丙醇固定10min,蒸馏水冲洗数次。
(3)入孵育液中,37℃孵育4-6h。
自来水冲洗数次。
(4)2%硝酸钴中浸3-5min,蒸馏水洗数次。
(5)1%的硫化铵中2min,自来水冲洗,自然干燥,封固。
【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。
2偶氮偶联法:【孵育液配制】萘酚AS-BI磷酸盐20mgDMSO 0.5ml0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液(PH 9.2)50ml六偶氮副品红0.5ml1mol/L NaOH调PH 9-10,混合后过滤使用。
碱性磷酸酶测定试剂盒性能验证方案
碱性磷酸酶测定试剂盒性能验证评价方案某三甲医院一、评价目的和内容1.目的评价某公司的碱性磷酸酶测定试剂盒（以下简称ALP）的部分性能特点的验证。
2.评价内容★准确度★批内精密度★日间精密度★功能灵敏度★线性评价★参考范围验证★比对实验3.评价实验具体方法3.1 准确度根据试剂盒说明书，在仪器上编制参数。
测定科室内使用的质控高、低值，质控相对偏差应在10%内。
3.2 批内精密度选取1个样品，重复测定20次，计算20次的批内变异系数应在4.5%内。
3.3 日间精密度取科室内使用质控高、低两个浓度的质控品每天各测5次连续测4天记录数据，计算20次测定结果的CV应在6%内。
3.4 功能灵敏度3.4.1选取低浓度的样品，用生理盐水对样品分别进行不同倍数的稀释，使其最低浓度接近0浓度。
3.4.2 在仪器上分别对不同浓度的样品连续测定20次，计算其均数、标准差和变异系数，查看各样品的变异系数(CV%)，样品的变异系数≤10%时，最大稀释管平均浓度所对应的浓度及为功能灵敏度(检测低限)。
3.5线性评价3.5.1 用接近线性范围上限的高浓度样品和纯化水，按表示例混合成至少5个稀释梯度。
以此为样品，分别用对应试剂盒测定每个浓度样品，重复测定3次。
稀释比例1/16 1/8 1/4 1/2 1高浓度血清（μl）500(1/8) 500(1/4) 500(1/2) 500 1000纯化水（μl）500 500 500 500 03.5.2在说明书给定的范围内，对线性测定结果进行回归：线性相关系数（r）应≥0.990。
3.6 参考范围验证3.6.1 随机选取正常体检样品20例，分别测定ALP浓度。
3.6.2 分析20例测定结果是否在实验室采纳的正常参考范围区间内。
如果有不超过2个数据（测定结果的10%）落在采纳的参考范围界限以外，那么接受实验室采纳的参考范围。
3.7 比对实验3.7.1 本实验室做为参比实验室，三甲级医院做为对照实验室，两实验室同时测定20例在线性范围内的新鲜人血清样品中ALP的浓度。
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货号: QS2002 规格：50管/24样碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，AKP/ALP）
活性测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。
AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。
测定原理：
在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP 活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。
标准品：液体×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚标准液，4℃保存。
粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加
入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g离心10min，取上清液待测。
2.细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建
议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。
测定步骤：
1. 分光光度计预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。
3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。
4. 标准管：取EP管，加入20μL标准品，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A标准管。
5.对照管：取EP管，加入20μL上清液，200μL蒸馏水，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A测定管。
6. 测定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A测定管。
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注意：空白管和标准管只需测定一次。
每个测定管设一个对照管。
AKP/ALP活性计算：
1.血液中AKP/ALP活力计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为1个酶活单位。
AKP/ALP活力(μmol/min /mL)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V 反总] ÷V样÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
2.组织、细菌或细胞中AKP/ALP活性计算
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。
AKP/ALP(μmol/min/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。
AKP/ALP(μmol/min/g 鲜重)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(W×V样÷V样总)÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷W
（3）按照细菌或细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol酚定义为1个酶活单位。
AKP/ALP (μmol/min/104 cell)= [C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V 反总]÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T= 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量
C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02 mL； V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间（min），15 min。
注意事项：
1.试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。
2.试剂四变蓝绿色后不能再使用。
3.加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不完全。
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