BCIP NBT碱性磷酸酶显色试剂盒
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 比色法)简介：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。
Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。
在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构，呈较深的黄色，通过分光光度比色法测定400～415nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 配制检测工作液：① 配制显色工作液： 取出1支pNPP ，恢复至室温后溶解于2ml ALP Assay buffer ，混匀，冰上预冷备用。
新配制的显色工作液应在6h 内用完。
② 配制标准品工作液。
2、 准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。
③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，也可以采用ALP Assay buffer 稀释。
编号 名称TE0003 100T Storage试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 试剂(D): Stopping Solution 12mlRT 使用说明书1份3、加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
预混型BCIP、NBT溶液
预混型BCIP/NBT溶液Premixed BCIP/NBT Solution华越洋----------------------------------------------介绍：华越洋预混型BCIP/NBT溶液是在BCIP/NBT底物显色试剂盒的基础改良而得的。
特点：含有BCIP和NBT两种成分的混合液，不需混合和稀释，直接使用，十分方便。
在碱性磷酸酶存在时形成暗紫色沉淀，具有和其他AP底物（包括分开提供的BCIP/NBT溶液）一样的灵敏度。
稳定，使用精心优化的溶剂，在低温条件下可以保存一年。
可用于Western Blot。
运输及保存常温运输和保存（避光），有效期一年。
自备试剂Western印迹膜洗膜液或TBST缓冲液。
使用方法按常规方法进行Western印迹膜杂交，直到跟二抗-AP复合物保温这步结束。
用Western印迹膜洗膜液洗印迹膜5次，每次至少1分钟。
注意：可以用TBST缓冲液代替Western印迹膜洗膜液。
用水迅速冲洗一次。
将印迹膜转移到本产品中（每cm2印迹膜需要0.1mL 本产品），室温平缓摇晃5-30分钟显色。
37℃可加速反应。
细心观察蛋白条带的颜色变化，显色到满意程度后（一般需要20分钟，具体跟蛋白浓度密切相关）迅速将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃，终止显色反应。
数分钟后需要换水，共三次。
用吸水纸吸干膜上的水分，照相或扫描处理后避光干燥保存印迹膜。
BCIP/NBT反应原理BCIPNBTBCIP被碱性磷酸酶水解后形成一个中间体。
这个中间体被异构化以后的产物与NBT 反应生成白色的中间体二聚体和NBT-蓝紫色结晶物。
BCIP、NBT底物显色试剂盒使用说明
BCIP、NBT底物显色试剂盒使用说明货号：PR1100规格：25ml/125ml保存：-20℃避光保存，复检期至少半年。
产品内容：25ml125ml25×BCIP1ml5ml25×NBT1ml5ml1×AP反应缓冲液30ml75ml×2产品简介：NBT即氯化硝基四氮唑兰(Nitroblue tetrazolium chloride)，为深蓝色无定形微溶物质。
BCIP即5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate),在碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,AP）的催化作用下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的沉淀。
使用说明：1.取40ul25×NBT加入到1ml1×AP反应缓冲液中，混匀后，再加入40ul25×BCIP混匀，即配成反应工作液，此反应液最好现配现用。
注意：根据膜的大小，1×AP反应缓冲液、25×BCIP、25×NBT的量可以等比例扩大。
2.把经洗涤的PVDF/NC膜浸入反应工作液中，于室温平缓摇动进行温育。
3.当蛋白带的颜色深度达到要求（一般约20-30分钟）时，把膜浸入去离子水中停止反应。
注意事项：BCIP、NBT为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。
操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗。
相关试剂：A1800抗体稀释液（普通型）A1830AP标记抗体稀释液SA0012SABC(小鼠IgG)-AP kit。
碱性磷酸酶显色剂使用方法
5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐), BCIP/NBT （四唑硝基蓝）是碱性磷酸酶底物, 产物为深蓝色, 在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP被水解, 水解产物与NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
使用方法1. 在膜或组织切片，最后一次洗涤完毕后，加入适量BCIP/NBT染色工作液2. 室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深度.3. 用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应4. 膜标本可干燥后避光保存；组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可以用中性红复染染色干细胞成骨诱导的常用染色方法有几种碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶，同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。
成骨细胞染色方法以ALP为目标物的检测方法：1 Gomori钙钴法【染色原理】ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。
【孵育液配制】3%β-甘油磷酸钠5ml2%巴比妥钠5ml蒸馏水10ml2% CaCl2 10ml2% MgSO4 1ml【步骤】（1）将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，呆细胞长满玻片后取出。
（2）PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。
（3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。
自来水冲洗数次。
（4）2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。
（5）1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。
【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。
2偶氮偶联法：【孵育液配制】萘酚AS-BI磷酸盐20mgDMSO 0.5ml0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液（PH 9.2）50ml六偶氮副品红0.5ml1mol/L NaOH调PH 9-10，混合后过滤使用。
新疆塔里木马鹿茸多肽对小鼠前成骨细胞的影响
新疆塔里木马鹿茸多肽对小鼠前成骨细胞的影响吕秀华;陈伟;周凡;刘斐;武嘉林【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】目的：探讨新疆塔里木马鹿茸多肽对小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)的作用机制。
方法以BCA蛋白质定量试剂盒测定马鹿茸多肽样品的浓度；体外培养MC3T3-E1细胞，采用BCIP/NBT碱性磷酸酶(ALP)显色试剂盒染色；诱导分化形成矿化结节，进行茜素红染色；将MC3T3-E1细胞置于马鹿茸多肽高、中、低(10、1.0、0.1µg/mL)3个浓度的培养基中培养，采用MTT法和微量酶标法检测马鹿茸多肽不同浓度对MC3T3-E1细胞增殖和ALP合成的影响。
结果 BCA 蛋白质定量检测结果显示，马鹿茸多肽蛋白浓度为0.07 mg/mL。
体外培养 MC3T3-E1细胞ALP染色呈淡蓝色，阳性率为90%；矿化结染色呈红色。
与对照组比较，第3、7日马鹿茸多肽高、中、低剂量组可促进MC3T3-E1细胞增殖，且呈现剂量依赖效应；第3日马鹿茸多肽高、中、低剂量组均可促进MC3T3-E1细胞分泌ALP(P＜0.01)，且呈现一定的剂量效应。
结论塔里木马鹿茸多肽通过促进MC3T3-E1细胞增殖和ALP合成的分泌，达到治疗骨质疏松症的作用。
【总页数】4页(P47-50)【作者】吕秀华;陈伟;周凡;刘斐;武嘉林【作者单位】新疆医科大学中医学院，新疆乌鲁木齐 830054;新疆华世丹药物研究有限责任公司，新疆乌鲁木齐 830011;新疆华世丹药物研究有限责任公司，新疆乌鲁木齐 830011;新疆华世丹药物研究有限责任公司，新疆乌鲁木齐 830011;新疆华世丹药物研究有限责任公司，新疆乌鲁木齐 830011【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.矮壮素对小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1骨骼发育相关基因及蛋白的影响及其机制 [J], 贾丽霞;张琪;侯晓红;孟庆贺;黄尧;周文娟;郝卫东2.小鼠前成骨细胞MC3T3-E1在自组装多肽水凝胶支架中的成骨分化 [J], 林娟;周庆翰;赵晓军3.梅花鹿茸多肽对小鼠成骨细胞MC3T3-E1生物学活性的影响 [J], 吕东辉;韩笑;苑广信;刘玲;安丽萍;杜培革4.HU-308与nHA/PCL电纺丝膜对小鼠前成骨细胞生物学性能的影响 [J], 乔鲁卉;张云涛;杨忠学;马子雨;侯玉东5.复合成骨蛋白-1多肽水凝胶缓释系统对小鼠成骨细胞碱性磷酸酶、骨钙素和核心结合因子α1表达的影响 [J], 胡飞琴;谢志坚;张锋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
“敏筛”说明书
Instruction manual (说明书)：AllergyScreen过敏原检测试剂盒1.用途AllergyScreen过敏原定量检测系统采用免疫印迹方法，定量检测人血清中过敏原特异性IgE抗体。
2.概述IgE免疫球蛋白发现始于1964年，它在I型变态反应发生机制中起重要作用。
免疫应答时B淋巴细胞分化成熟为浆细胞，并合成和分泌不同类型的抗体。
该过程由Th和Ts细胞调节，如果调节失控，通常不会造成损害的抗原也能激发免疫应答，刺激抗原特异性B细胞分化成熟为浆细胞，并产生IgE抗体, IgE抗体通过Fc段同嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面Fc受体结合。
当同一变应原再次进入机体，直接作用于IgE，并通过它的决定簇与IgE分子Fab段间的结合，形成IgE 受体聚集成片,这些变化最终导致嗜碱性粒细胞和肥大细胞脱颗粒释放组胺等生物活性物质，从而产生如麻疹`荨麻疹、皮炎、关节炎，枯草热（过敏性鼻炎）`哮喘及过敏性休克等典型的I型变态反应症状。
3.检测原理特异性过敏原被吸附于硝酸纤维素膜表面，置于反应槽中。
用移液器加入病人血清，室温下孵育，标本中过敏原特异性的IgE抗体与过敏原发生反应，并连接在硝酸纤维素膜上。
将多余的抗体冲洗脱掉，再加入标记了生物素的抗人IgE 抗体，室温下孵育，冲脱未结合上的抗抗体。
然后加入结合有碱性磷酸酶标记的链霉亲和素，室温下孵育，链霉亲和素和生物素结合。
将未结合上的酶标链霉亲和素冲洗干净。
当再加入BCIP/NBT酶作用底物并孵育后，碱性磷酸酶发生特定的酶显色反应，试剂条上出现沉淀。
颜色深浅与血清中sIgE抗体含量成正比。
待试剂条干燥后，CCD相机照相，读取检测结果。
4.检测系统组成每套检测系统包括：1×12 检测条：标记有20种过敏原的硝酸纤维素膜，置于塑料反应槽中（混合过敏原组，吸入组，食物组）1×洗脱液：（TRIS/NaCl，包含0.1%NaN3）可稀释成1x500ml 的清洗液，pH=7.5 （20ml）1×标记有生物素的抗人IgE抗体（白盖，多抗），含 0.1%NaN3 1×酶标链霉亲和素（红盖），连接有碱性磷酸酶的链霉亲和素1×底物（蓝盖），BCIP/NBT12×加样吸管（300微升）1×使用说明书5.未提供的实验所需的其他工具5.1稀释液蒸馏水或去离子水5.2 其他搅拌器；量筒（500毫升），500毫升洗瓶，具10个不同板型的洗板机（也可无），避光的孵育箱（具体要求见MEDIWISS说明书）；水平混匀器；电吹风（也可无）；专用阅读仪（RAPID READER）和电脑（Windows98，Windows2000 ME或Windows2000 PROF 带USB接口）及打印机。
碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液)产品技术要求dd
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液）
组成：
适用范围：用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。
2.1外观
试剂盒外观应整洁，液体无渗漏，文字符号标识清晰；试剂1：无色澄清液体；试剂2：淡黄绿色澄清液体。
2.2装量
每瓶不少于标示值。
2.3试剂空白吸光度
用指定的空白样品测试试剂（盒），在光径1cm下，在A405nm处测定试剂空白吸光度A≤0.8，空白变化率△A/min≤0.005。
2.4分析灵敏度
试剂测定（120±12）U/L被测物，吸光度变化△A/min≥0.01。
2.5线性范围
2.5.1在[25，750]U/L内，相关系数R≥0.990。
2.5.2在 [25，100]U/L时绝对偏差不超过±10U/L，测定（100，750]U/L相对偏差不超过±10%。
2.6精密度
2.6.1 重复性
重复测试（120±12）U/L的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于5%。
2.6.2批间差
测定（120±12）U/L样本，所得结果的批间相对极差（R）应不大于10%。
2.7准确度
比对试验相关系数r2≥0.95， [25，100]U/L区间内，绝对偏差不超过±10U/L，（100，750]U/L区间内，相对偏差不超过±10%。
2.8 效期稳定性
试剂有效期为12个月，取到效期后一个月内进行检测，测定结果应符合2.3-2.6.1、2.7项要求。
发光底物
辣根过氧化物酶底物化学发光底物（Western Blotting）用于辣根过氧化物酶在Western Blotting 过程SI-CPS160 KIT 2846 中的化学发光检测。
SI-CPS1120 KIT 5340SI-CPS1300 KIT 11874化学发光底物（ELISA）用于辣根过氧化物酶在ELISA 过程中的化学SI-CPS260 KIT 2760 发光检测。
SI-CPS2120 KIT 5139SI-CPS2300 KIT 11428AEC 底物试剂盒（免疫组化）该产品利用3-氨基-9-乙基-咔唑（AEC ）作为辣根过氧化物酶在免疫组化过程中的底物，在反应位SI-AEC101 KIT 895 点产生红色沉淀。
该试剂盒含缓冲液、色原质和双氧水。
AEC 可用于手动或自动免疫组化系统，可以用苏木精复染。
该产品染色后不能使用有机封片剂，需要水相的封片剂如Crystal/MountTM（B-M02，B-M03 ）。
每个试剂盒可使用至少1000 次。
AEC 片每片含20mg 底物。
5 片195 SI-A6926 50 片1090 100 片1696加强型DAB 试剂盒每片DAB 可以配制5ml 的工作液。
浓缩缓冲液中含有镍离子，强化了DAB 的显色。
DAB 沉淀是黑BI-S14 20 片1495 褐色的，可以用苏木精、甲基绿等复染。
DAB 试剂盒（膜）该试剂盒可以配制500ml 的工作液，用于膜的免SI-D6815 1KIT 2394 疫染色。
DAB 试剂盒（免疫组化）该试剂盒可以配制100ml 的工作液，用于免疫组化。
SI-D3939 1KIT 1208该产品用于辣根过氧化物酶在免疫组化、免疫细产品号规格胞化学和原位杂交过程中的显色。
每片可以配制BI-S16 100 片5-10ml 的工作液。
可以用有机或者水相的封片剂封片。
DAB 底物液（ELISA ，低动力学形式）该产品是一种即用型的溶液，用于ELISA 显色。
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仅供科研使用版本号：180718
BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒
【产品组成】
【保存条件】
4℃,避光,12个月。
【产品概述】
BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。
BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物，在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。
BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit可用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定，也可用于Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测\细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。
【使用方法】
1、对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗
涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
2、对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3～5次，每
次3～5min。
3、按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液：
4、洗涤完毕后，去除洗涤液。
5、加入适量BCIP/NBT染色工作液，确保能充分覆盖样品。
5、室温避光孵育5～30min或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。
6、去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1～2次即可终止显色反应。
7、对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining
solution)染色，以便于观察。
对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
【注意事项】
1、BCIP对人体有刺激性，NBT对人体有害，请注意适当防护。
2、操作过程中，尽量避免强光照射。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。