蛋白质连接技术资料讲解
蛋白质对接
蛋白质对接摘要：蛋白质对接是一种基因工程技术，它的目的是将两个不同的蛋白质合成一体，形成一个新的蛋白质结构。
此外，蛋白质对接在研究蛋白质结构和功能的认识方面也发挥了重要作用。
本文将从蛋白质对接的基本原理、实验设计、后处理等方面介绍蛋白质对接，以及目前存在的技术局限和发展前景。
关键词：蛋白质对接；成；验设计；处理蛋白质对接是一种基因工程技术，它的目的是将两个不同的蛋白质的结构和功能结合起来，形成一个新的蛋白质结构。
蛋白质对接具有优越的性能特点，可以有效改变蛋白质结构和功能，较大程度地改善蛋白质性能，提高蛋白质的应用价值。
蛋白质对接在研究蛋白质结构和功能的认识方面也发挥了重要作用。
蛋白质对接是一个复杂的过程，主要包括蛋白质合成、反应条件诱导、复性分离等步骤。
其中，蛋白质合成是蛋白质对接实验的重要环节，首先根据蛋白质结构的要求，合成蛋白质的原子模型，扩增时选择正确的氨基酸序列。
然后，通过反应条件的调节和控制，可以有效地刺激蛋白质对接反应，从而实现两个蛋白质结构的结合，实现蛋白质对接。
在蛋白质对接反应之后，需要进行一系列的后处理，以确保蛋白质对接反应的有效性和稳定性。
这些处理步骤包括洗涤、离心分离、热处理、病毒性检测和蛋白质纯化等。
其中，病毒性检测是必不可少的，可以有效检测蛋白质是否具有抗病毒活性，并且可以更深入地探究蛋白质的结构和功能。
目前，蛋白质对接技术在生物医药领域中得到了广泛应用，但是它也存在一定的技术局限性。
首先，在蛋白质对接过程中，蛋白质会产生一些非特定性活性，导致蛋白质表达不准确，从而影响蛋白质的结构和功能。
此外，由于蛋白质的特殊性质，目前设计的蛋白质对接体积也较小，无法突破大规模的蛋白质对接。
尽管存在这些问题，蛋白质对接的研究仍在继续发展，未来也将有更多的新技术出现，为蛋白质对接提供更高效、更准确的实验数据，以期实现蛋白质活性改变和蛋白质性能提高，从而获得更大的科学和应用价值。
综上所述，蛋白质对接是一个重要的基因工程技术，它可以实现蛋白质结构和功能的改变，提高蛋白质应用价值。
蛋白质连接技术
蛋白质连接技术蛋白质连接技术人工抗原的合成是化学免疫的重要问题，化学免疫研究的对象，除上面提及的药物、毒物、激素外，还有多糖类、神经递质、肽类、核酸及生物体内其它小分子活性物质，总起来说，它们大多都是无免疫原性的半抗原，在对其进行免疫学及其它相关研究时，一方面要通过化学合成的手段，即蛋白质连接技术，经与载体蛋白交联合成制备人工抗原，继而用其免疫动物制备相应的抗体或单克隆抗体，作为研究用的探针；另一方面还必须将此探针用各种标记物进行标记，如本文论及的酶标记，以便用作研究工具；在分子生物学研究中，包括核酸或基因探针的研究及应用，多种类型探针的标记也都将涉及蛋白质连接技术。
半抗原分子量一般较小，其结构及化学功能团的性质多种多样，数量各不相同，在与酶蛋白或载体蛋白进行交联时，必须考虑交联双方的性质、交联剂、交联方法和载体.2．混合酸酐法制备G6PDH(葡糖—6—磷酸脱氢酶)标记利多卡因(Lidocaine．Li)结合物[29](1)Li—混合酸酐的制备首先将Li经化学修饰(琥珀酸酐法，略)，在其分子中引入羟基(一COOH)，制成Li—COOH(Li一琥珀酸半酯)；然后，将此Li—COOHl0mg(0．0285mm0l)溶于375ul的DMF中，用电磁搅拌混溶。
在一10℃条件下，边搅动边滴入21ul的三乙胺，再缓慢滴入14ul的卡必醇氯甲酸酯，于一10。
C 继续搅拌反应1．5小时，此全部过程应保持无水，即获得Li—混合酸酐(Li—MA)。
(2)酶——底物溶液的制备在冰浴中，将G6FDH(L．m)lmg用50mmol／LpH8．1Tris—HCl溶解，同时加入G6P—Na(葡糖—6一磷·酸钠盐)10mg及NADH 3mg(底物一辅酶系统，用于保护酶活性)，使其溶解，随后缓慢加入300ul卡必醇，用2m0l／LNaOH调pH至9．0。
(3)G6PDH—Li的交联将酶—底物溶液置于冰浴中，在搅拌条件下，每隔10~15分钟向此酶液中缓慢加入一定量(25ul，50ul，100ul……)的Li—MA溶液，反应10~15分钟后，分别取出反应液5u1测定酶活性及Li半抗原的抗体对标记酶活性的抑制率.直至加入Li—MA的量所引起酶活性的下降程度最低，而抗体对酶活性的抑制率又最高时，此标记过程即完成(表2—8)表2—8 G6PDH—Lidocaine交联反应中酶活性变化及抗体抑制率3.碳化二亚胺法(EDC)制备人工抗原最近几年，在对无免疫原性小分子物质的化学免疫研究中，采用碳化二亚胺作为交联剂制备合成人工抗原的工作愈来愈多，因为用这种试剂进行交联最为方便，除交联的一方作为载体的蛋白质，具有多个氨基或羧基外，不少小分于化合物也具有此反应基团，或通过化学修饰引入羧基。
蛋白质连接技术
蛋白质连接技术人工抗原的合成是化学免疫的重要问题，化学免疫研究的对象，除上面提及的药物、毒物、激素外，还有多糖类、神经递质、肽类、核酸及生物体内其它小分子活性物质，总起来说，它们大多都是无免疫原性的半抗原，在对其进行免疫学及其它相关研究时，一方面要通过化学合成的手段，即蛋白质连接技术，经与载体蛋白交联合成制备人工抗原，继而用其免疫动物制备相应的抗体或单克隆抗体，作为研究用的探针；另一方面还必须将此探针用各种标记物进行标记，如本文论及的酶标记，以便用作研究工具；在分子生物学研究中，包括核酸或基因探针的研究及应用，多种类型探针的标记也都将涉及蛋白质连接技术。
半抗原分子量一般较小，其结构及化学功能团的性质多种多样，数量各不相同，在与酶蛋白或载体蛋白进行交联时，必须考虑交联双方的性质、交联剂、交联方法和载体.2．混合酸酐法制备G6PDH(葡糖—6—磷酸脱氢酶)标记利多卡因(Lidocaine．Li)结合物[29](1)Li—混合酸酐的制备首先将Li经化学修饰(琥珀酸酐法，略)，在其分子中引入羟基(一COOH)，制成Li—COOH(Li一琥珀酸半酯)；然后，将此Li—COOHl0mg(0．0285mm0l)溶于375ul的DMF中，用电磁搅拌混溶。
在一10℃条件下，边搅动边滴入21ul的三乙胺，再缓慢滴入14ul的卡必醇氯甲酸酯，于一10。
C 继续搅拌反应1．5小时，此全部过程应保持无水，即获得Li—混合酸酐(Li—MA)。
(2)酶——底物溶液的制备在冰浴中，将G6FDH(L．m)lmg用50mmol／LpH8．1Tris—HCl溶解，同时加入G6P—Na(葡糖—6一磷·酸钠盐)10mg及NADH 3mg(底物一辅酶系统，用于保护酶活性)，使其溶解，随后缓慢加入300ul卡必醇，用2m0l／LNaOH调pH至9．0。
(3)G6PDH—Li的交联将酶—底物溶液置于冰浴中，在搅拌条件下，每隔10~15分钟向此酶液中缓慢加入一定量(25ul，50ul，100ul……)的Li—MA溶液，反应10~15分钟后，分别取出反应液5u1测定酶活性及Li半抗原的抗体对标记酶活性的抑制率.直至加入Li—MA的量所引起酶活性的下降程度最低，而抗体对酶活性的抑制率又最高时，此标记过程即完成(表2—8)表2—8 G6PDH—Lidocaine交联反应中酶活性变化及抗体抑制率3.碳化二亚胺法(EDC)制备人工抗原最近几年，在对无免疫原性小分子物质的化学免疫研究中，采用碳化二亚胺作为交联剂制备合成人工抗原的工作愈来愈多，因为用这种试剂进行交联最为方便，除交联的一方作为载体的蛋白质，具有多个氨基或羧基外，不少小分于化合物也具有此反应基团，或通过化学修饰引入羧基。
蛋白交联(参考资料)
蛋白质交联方法及其应用蛋白质交联系指将小分子物质（如药物、半抗原等）或大分子物质(如酶、蛋白毒素等)以共价键的方式连接于蛋白质分子，以制备人工抗原、酶标抗体、载体释放药物、抗体导向药物和免疫毒素等。
随着放射免疫分析法、酶标免疫技术、载体药物学和导向物学的发展，蛋白质交联技术的方法和手段也不断改进和完善，并且在生物学和医学领域得到愈来愈广泛的应用。
蛋白质交联方法首先发展于人工抗原的制备研究。
自70年前Landsteiner第一次合成人工抗原以来，人们将许多没有抗原性的小分子物质(半抗原)如化学药物、神经递质和激素等与蛋白质或多糖等载体大分子共价结台；使其具备抗原性，以诱发动物产生特异性抗体，用于放射免疫分析等。
为了使放射免疫分析达到灵敏度高、特异性强的要求，前人对半抗原和蛋白质连接的方法进行了大量的研究，建立了重氮化法、戊二醛法、混合酸酐法、二异氰酸酯法及卤代硝基苯法等交联技术。
近10多年来发展起来的酶标免疫检测技术，要求制备保持酶的生物活性和抗体的免疫结合活性的酶—抗体偶合物。
常用的交联方法如戊二醛法、碳二亚胺法和混合酸酐法不可避免地要产生酶或抗体的自身交联产物或多聚物，致使交联效率降低、结合物活性减弱。
为了克服这一不足，人们发展了异型双功能交联试剂，如N—羟基琥珀酰亚胺—3—(2吡啶基二硫)—丙酸酯，以实现控制交联，提高交联反应的选择性和交联产物的均一性。
将药物与大分子载体连接，制备药物一载体结合物，以改善和控制药物在体内的转运和代谢，实现缓释给药和定向给药，提高生物利用度和治疗指数。
这是现代药物研究领域一个崭新的分支。
载体药物必须能够在体内定量、定位释放原型药物，因此要求设计pH敏感或特定酶敏感的偶联键。
导向药物的发展对蛋白质交联方法提出了更高的要求。
早在1906年，Ehrlich就提出了靶向给药的设想。
随着生物医学的发展，这一设想不断得到具体的实现。
单克隆抗体作为导向载体的出现，更使导向药物的研究成为当代药物研究中最活跃和最引人注目的领域之一，而其中研究得最广泛的是肿瘤治疗的抗体导向研究。
蛋白质对接
蛋白质对接蛋白质对接是一项重要的生物信息学方法，它可以用来实现蛋白质联合预测、蛋白质之间的相互作用预测和蛋白质构象的预测，它对于寻找有益的药物靶标，从而实现药物精准设计和发现具有重要的意义。
本文将介绍蛋白质对接的不同种类，进行生物信息学和计算机科学相结合的研究，介绍应用蛋白质对接的结果，探讨蛋白质对接可能提供的重大研究进展以及实现蛋白质对接的主要技术。
蛋白质对接的种类可以分为蛋白质结构对接和蛋白质-蛋白质对接。
蛋白质结构对接旨在预测两个蛋白质之间的相互作用，因此其中必须有一个源蛋白质和一个目标蛋白质。
许多蛋白质结构对接算法基于源蛋白质构象，这些算法具有较高的准确率，可以准确预测源蛋白质和目标蛋白质之间的结构关系。
蛋白质-蛋白质对接是采用序列信息预测蛋白质之间的相互作用，而不需要结构信息，其运算速度快，准确率也较高。
在科学研究中，应用蛋白质对接有很多成功的案例。
例如，已经证明癌基因可以通过蛋白质结构对接找到合适的药物，这些药物能够有效的治疗癌症。
另一方面，蛋白质-蛋白质对接也可以应用于潜在的药物靶点研究，可以帮助确定感兴趣蛋白质在药物作用机制中所扮演的角色。
在实现蛋白质对接的过程中，多种技术需要被用到。
主要有分子模拟技术、分子对接技术、生物信息学和计算机科学等。
分子模拟技术可以帮助分析蛋白质在空间结构上的结构变化，以及蛋白质之间的相互作用模式；分子对接技术可以帮助预测源蛋白质和目标蛋白质之间的结构关系；而生物信息学和计算机科学则可以帮助实现蛋白质-蛋白质对接，探索蛋白质之间的相互作用。
蛋白质对接是一种将生物学研究和计算机科学研究完美结合的技术。
蛋白质对接不仅可以提供研究蛋白质相互作用的关键技术，而且还为药物精准设计和发现带来重大研究进展。
在蛋白质对接的实现过程中，多种技术需要被用到，这些技术结合起来可以更好的探索蛋白质之间的相互作用。
蛋白质连接技术
蛋白质连接技术随着生物医学研究的迅速发展，在其相应的研究领域中也出现许多新颖的应用技术，蛋白质连接技术即是其一。
蛋白质连接技术的出现最早是在本世纪20年代，在化学免疫研究中，首次合成人工抗原时已开始使用。
此后，在免疫学研究中，特别是在免疫标记技术中广为应用并迅速发展。
从40、50年代的免疫荧光技术，60年代的放射免疫技术，到70年代的酶免疫技术，及在此前后出现的发光免疫技术、胶体金免疫技术和稀土元素免疫标记技术等都大大丰富和发展了蛋白质连接技术。
更为突出的是在1975年单克隆抗体的研制成功，以及化学家们新合成的多种异型双功能交联剂的出现，更将蛋白质连接技术的应用推向新天地。
近些年来，在国内外非常活跃的研究领域——导向药物、免疫毒素相载体释放药物的研究中，亦广泛采用此类蛋白质连接技术。
如将某种药物(例如抗肿瘤药物)或毒素与载体分子(如单克隆抗体或受体)进行交联组成导向药物，人们誉之为“生物导弹”。
应用这种技术，将抗肿瘤药物(如多诺霉素、丝裂霉素、氨甲蝶蛉等)或毒素(如白喉毒素、蓖麻毒素、红豆毒素等)作为弹头药物与肿瘤单克隆抗体作导向载体所制成的导向药物，对相应肿瘤细胞的杀伤力大大超过一般抗肿瘤药物。
毒素大多都是蛋白质，所以，上述蛋白质连接技术则可选用于导向药物的制备。
更为可喜的是，近些年来，在分子生物学研究中，特别是在核酸探针的研究与应用中，蛋白质连接技术也大显身手，有人称其为分子生物学的支撑技术。
随着这一技术的应用及其在相关研究领域的不断开拓，蛋白质交联方法也不断改进和渐趋完善，使其在生物医学领域中得到广泛的应用和重视。
目前，蛋白质连接技术不仅广泛应用于人工抗原的合成，而且在小分子物质(如毒物、药物、激素等)和生物大分子的标记免疫分析(放射免疫分析RIA、酶免疫分析EIA、荧光免疫分析FIA、发光免疫分析CIA、时间分辨免疫分析TrFIA)、标记受体分析(放射受体分析RRA、酶受体分析ERA)及竞争蛋白结合分析等配体结合分析方法中，普遍用作标记配体的制备方法。
蛋白质对接
蛋白质对接蛋白质对接是生命科学中一种重要的研究方法，它是一种结构生物学研究方法，用于理解蛋白质分子的三维结构，其功能以及它们与其他分子之间的相互作用。
蛋白质对接的过程通常包括受体蛋白质的表征（特定的抗原或药物），蛋白质构象的确定，以及潜在作用位点的确定和评估。
蛋白质对接方法是为了解决分子间相互作用的机理，并让科学家知道蛋白质分子之间是如何相互作用以及彼此如何影响的。
蛋白质对接在生物医学领域的应用非常广泛，它可以帮助科学家了解蛋白质分子之间的作用机理，更好地理解特定病毒和疾病的发生机制，以找到更有效的治疗方法。
蛋白质对接的原理是利用蛋白质的结构，将它们的可用性和活性聚集在一起，而这些聚集是两个分子之间相互作用的结果。
蛋白质之间的相互作用也会影响其本身结构和活性，从而改变物质的可用性。
举个例子，研究表明，单细胞生物可以检测蛋白质之间的相互作用，从而检测特定病毒和疾病的发生机制。
蛋白质对接也可以用来优化药物开发和药物设计，为药物筛选提供可靠的信息。
蛋白质对接的方法可以帮助科学家更好地理解药物作用机理，发现新的抗疾病药物，以及给出有效的治疗策略。
蛋白质对接也在其他领域得到广泛的应用，如蛋白质结构预测、结构基因突变预测、材料设计和抗原-抗体结合等。
蛋白质对接是一种先进的研究方法，也是一种新兴的生物技术，可以为研究生命科学提供重要的实验研究数据。
该方法可以增强人们对生物分子相互作用的了解，从而为有效的药物开发和新的治疗策略的研究奠定基础。
总之，蛋白质对接是一种研究生物分子相互作用机理的重要方法，它可以帮助科学家了解药物作用机制，从而找到更有效的治疗方法。
它不仅可以帮助药物研发，还可以在蛋白质结构预测、突变预测、材料设计和抗原-抗体结合等领域得到广泛应用。
蛋白质杂交技术的原理和应用
蛋白质杂交技术的原理和应用1. 蛋白质杂交技术简介蛋白质杂交技术是一种常用的生物学实验方法，用于研究蛋白质的相互作用及其功能。
通过将两个不同的蛋白质片段或融合蛋白合并在一起，可以检测它们之间是否存在相互作用，并进一步研究这种相互作用的功能和机制。
2. 蛋白质杂交技术的原理蛋白质杂交技术基于DNA分子的互补性原理进行设计。
通过将目标蛋白质的DNA序列与另一个蛋白质的DNA序列连接在一起，形成一个新的杂交DNA，然后将这个杂交DNA转化到宿主细胞中，使宿主细胞表达出杂交蛋白。
通过检测该杂交蛋白的功能或相互作用，可以研究目标蛋白质的功能和相互作用机制。
2.1 DNA互补性原理DNA序列是由四种碱基（腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶）组成的，碱基之间存在对应关系，即腺嘌呤与胸腺嘧啶之间形成两个氢键，鸟嘌呤与胞嘧啶之间形成三个氢键。
根据这种互补原理，我们可以将两段DNA序列通过相互配对形成一个完整的DNA。
2.2 蛋白质片段连接将两个蛋白质的DNA片段连接在一起时，通常会使用DNA重组技术，通过PCR扩增目标DNA片段并使用限制性内切酶进行切割，之后通过连接酶将两个片段连接在一起，形成杂交DNA序列。
2.3 转染宿主细胞将合成的杂交DNA导入宿主细胞中，可通过多种方式实现，例如利用病毒载体将DNA导入细胞内，或通过电穿孔等物理方法使DNA直接进入细胞。
2.4 杂交蛋白表达和检测转染后，宿主细胞会开始表达杂交DNA中的融合蛋白。
通过特定的检测方法，如免疫印迹、荧光染色、酶活性测定等技术，可以确定杂交蛋白是否成功表达，并进一步研究其功能和相互作用。
3. 蛋白质杂交技术的应用蛋白质杂交技术被广泛应用于生物医学研究和药物开发领域，并取得了重要的成果。
3.1 蛋白质相互作用研究蛋白质杂交技术可用于研究蛋白质间的相互作用关系，从而揭示细胞内的信号传导途径、蛋白质结构和功能等方面的信息。
通过构建杂交蛋白库以及筛选和鉴定具有特定相互作用的蛋白质，可以进一步了解蛋白质的功能和作用机制。
蛋白质对接
蛋白质对接蛋白质对接是生物化学研究中一种很重要的实验方法，它提供了一种方法来研究蛋白质之间的相互作用，并用以解析蛋白质和其他大分子的结构及功能。
蛋白质对接实验可以在生物学研究中的许多领域发挥作用，如蛋白质组学，蛋白质以及药物对接分析，构象学研究，结构生物学，全基因组研究，以及其他许多研究领域。
蛋白质对接是一种生物实验方法，可以用来研究蛋白质之间的相互作用，以及探究蛋白质和其他大分子的结构和功能。
蛋白质对接技术在蛋白质组学，蛋白质对接分析，构象学研究，结构生物学，全基因组研究，以及其他许多研究领域中都发挥着重要作用。
蛋白质对接实验以少量蛋白质为基础，以确定其活性，结构和特异性的位置，以及实验结果的有效性。
蛋白质对接的过程中，利用受体分子对特定的活性位点进行小分子结合。
每一对蛋白质对接受体分子和小分子可以被理解为一个独立的单元，目前，世界上大多数实验室都使用以上方法来研究蛋白质对接。
蛋白质对接分析的基本思想是，通过测定蛋白质与小分子之间的作用力，来解析蛋白质的结构及功能。
为了实现蛋白质对接，可以采用抑制剂或活性剂，它们可以抑制蛋白质的活性，并在蛋白质中抑制活性的激活。
一般情况下，蛋白质对接分析分为两个阶段：蛋白质鉴定和小分子筛选。
在蛋白质鉴定阶段，通过检测细胞中特定蛋白质的表达；在小分子筛选阶段，则可以使用不同的小分子对受体分子进行筛选，以确定活性的位点等信息。
蛋白质对接的实验步骤如下：第一步是采用穿膜大分子(如噻唑)，选择一些特定的蛋白质，确定其基因序列；第二步是构建细胞模型，以测试某个蛋白质的表达水平；第三步是分析蛋白质的结构及功能，使用检测抗原受体分子和小分子的结合能力；最后，确定活性位点并进行复合物的结构分析。
蛋白质对接实验是一种重要的生物实验方法，能够为解析蛋白质及其他大分子的结构和功能提供有力的技术支持，在生物学领域的研究有着重要的应用，对深入研究蛋白质功能，以及对蛋白质相互作用机理的了解也具有重要意义。
蛋白蛋白分子对接
蛋白蛋白分子对接蛋白质是生命体系中最基本的结构和功能单元之一，其具有广泛的生物学功能，包括代谢、信号传递、免疫、结构支持等等。
然而，蛋白质的功能不仅仅取决于其本身的结构，还取决于其他生物分子（如小分子或其他蛋白质）与之相互作用和配对的方式。
因此，蛋白质对接是生命科学领域中的一个基本问题，其目的是描述蛋白质和其他分子之间的配对方式。
蛋白质对接可以理解为两个分子之间的相互作用，其中一个分子通常称为配体，另一个分子称为受体。
配体和受体通过非共价或共价作用结合在一起，形成一个稳定的配合物。
这个过程涉及到配体和受体之间的空间构形匹配、电荷、氢键和范德华力的相互作用。
蛋白质对接旨在预测配体和受体之间的相互作用模式，并提供基于此的药物设计和分子模拟等领域的研究基础。
蛋白质对接是一个具有挑战性的问题，因为蛋白质本身就是非常复杂的分子结构之一。
另外，配体和受体之间的交互也非常复杂，需要考虑多种相互作用类型和空间限制的影响。
尽管如此，蛋白质对接研究发展迅速，现在已经拥有许多对接方法，其中主要包括基于结构的对接、基于能量的对接、基于机器学习的对接和基于数据驱动的对接等等。
基于结构的对接是蛋白质对接中最常见的方法之一，它通过预测配体和受体之间的结合位点和空间构形匹配程度，来预测蛋白质和其他分子之间的互作方式。
该方法通常利用蛋白质和配体/受体的三维结构信息来预测它们之间的相互作用，并在此过程中考虑蛋白质和其他小分子之间的相互作用。
这种方法的主要优点是它可以给出在生物系统中可能存在的配对模式，并对药物设计等领域的研究提供了实用的基础。
该方法的缺点在于，由于依赖已经解析的蛋白质结构，因此不能处理未知的蛋白质结构。
基于机器学习的对接方法是近年来发展迅速的一种方法。
该方法利用大量的已知配对信息和蛋白质结构来训练一个分类器或回归器，以预测未知配对的可能性。
机器学习算法的优点在于可以利用大量的数据来预测未知的蛋白质结构，具有较高的预测精度。
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马来酰亚胺基类活泼酯法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 巯基
SPDP试剂法：异型双功能交联剂N-羟基琥珀亚胺基-3—(2吡啶基二硫)—丙酸酯(SPDP)
蛋白质
连接分子
伯氨基
巯基、氨基
苯丁酸氮芥衍生物法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 氨基
卤代乙酰衍生物法：
连接基团：氨基、巯基
双马来酰亚胺试剂法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 羟基
亚胺酸酯法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 氨基
卤代硝基苯法：
蛋白质 氨基、羟基、巯基
连接分子 氨基、羟基、巯基
Mannich反应法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 酮、酚类苯Βιβλιοθήκη 法：蛋白质 氨基、羟基、巯基
连接分子 氨基、羟基、巯基
E11man试剂法：
E11man试剂即5．5’—二硫—2，2’—双硝基苯甲酸(DTNB)，该试剂可以与巯基作用
蛋白质连接技术
蛋白质交联系指将小分子物质（如 药物、半抗原等）或大分子物质 (如酶、蛋白毒素等)以共价键的方 式连接于蛋白质分子，以制备人工 抗原、酶标抗体、载体释放药物、 抗体导向药物和免疫毒素等。
交联方法
游离氨基 游离羧基 苯基 酚基 巯基 羟基 咪唑基 吲哚基 胍基
重氮化法：
蛋白质 酚羟基的邻位、咪唑环、吲哚环
连接两个巯基
三氯三嗪试剂法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 羟基
必须注意，第一个分子中不能含有氨基及巯基等亲核性较 强的基团，否则，易形成自身聚合
连接分子 含芳香胺的化合物
副反应多，故一般限于人工抗原的制备
戊二醛法：连接两个伯胺
最温和的交联反应之一，可在4~40℃温度范围，pH6.0~8.0 的缓冲水溶液中进行，但是缓冲组份中不得含有氨基化合 物，本交联方法易形成相同蛋白间的连接；产物的均二性 较差。因此，多用于酶标抗体的制备。
过碘酸盐氧化法：
活泼酯法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 羧基
多元酸酐法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 氨基、羟基
二异氰酸酯法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 氨基
偶氮苯甲酸法：
蛋白质
伯氨基
连接分子 苯基
O—羧甲基羟胺法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 酮基
对-肼基苯甲酸法：
叠氮化法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 羧酸甲酯衍生物
氯乙酸钠法：
蛋白质 氨基
连接分子 邻二醇
比较温和，可在常温和中性pH的条件下进行
混合酸酐法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 羧基
碳二亚胺法：
蛋白质 伯氨基
连接分子 羧基
由于碳二亚胺的缩合反应没有选择性；易形成蛋白分子间的自
身聚合，产生非均一性产物；先将含羧基的药物或半抗原分子 与EDC反应，活化羧基后，再加入蛋白反应物，可以减少蛋白分 子交联