植物组织中还原糖含量的测定
生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定课件
D．由亮变暗，观察到的细胞多
8、将某种玉米子粒浸种发芽后研磨匀浆、过滤，得到提取液。取6支试管分别加入等量的淀 粉溶液后，分为3组并分别调整到不同温度，如图所示，然后在每支试管中加入等量的玉米 子粒提取液，保持各组温度30分钟后，继续进行实验（提取液中还原性物质忽略不）： （1）若向A、C、E三支试管中分别加入适量的班氏试剂或斐林试剂，沸水浴一段时间，观 察该三支试管，其中液体颜色呈砖红色的试管是___A__和_C_；砖红色较深的试管是____C__，颜 色较深的原因是___淀粉酶在40℃时活性相对较高，淀粉酶催化淀粉水解产生的还原_糖__多；不 变色的试管是___E_，不变色的原因是___酶__失__活__。 （2）若向B、D、F三支试管中分别加入等量的碘液，观察三支试管，发现液体的颜色是蓝 色，产生该颜色的原因是__剩__余__的__淀__粉_遇__碘_。变蓝 （3）以上实验的三种处理温度不一定是玉米子粒提取液促使淀粉分解的最适温度。你怎样 设计实验才能确定最适温度？（只要求写出设计思路）
A、产生气泡 B、溶液呈蓝色 C、溶液呈紫色 D、产生砖红色沉淀 2、用斐林试剂可以鉴定还原糖的存在，用双缩脲试剂可以鉴定蛋白质的 存在，在医学上，还常用上述两种试剂进行疾病的诊断。能够诊断的 疾病是（D ） A、糖尿病、肠炎 B、糖尿病、胃炎 C、肾炎、胃炎 D、糖尿病、肾炎 3、鉴定脱脂奶粉是否为伪劣产品,不需要用的化学试剂是( D )
A 斐林试剂 B苏丹IV染液 C 双缩脲试剂 D红墨水
4、在还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，最佳的一组实验材料是（ D）
①甘蔗的茎 ②油菜籽 ③花生种子 ④梨 ⑤甜菜的块根 ⑥豆浆 ⑦鸡蛋清
A、 ④ ② ⑥ B 、⑤ ③ ⑦
C、 ① ② ⑥ D、 ④ ③ ⑥
检测生物组织中还原糖脂肪和蛋白质
检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质一、实验原理（1）鉴定实验设计的理念：某些化学试剂+ 生物组织中有关有机化合物→产生特定的颜色反应。
（2）具体原理：①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。
②脂肪小颗粒+ 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。
③蛋白质+ 双缩脲试剂→紫色反应。
二、目标要求初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
三、实验材料1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。
2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好。
3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。
四、仪器、试剂1.仪器:双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。
2.试剂:①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液)；②苏丹Ⅲ染液；③双缩脲试剂；④体积分数为50%的酒精溶液；⑤蒸馏水。
五、方法步骤（一）、还原糖的鉴定1、实验流程：取材→加试剂→加热→观察2、鉴定步骤:①选材：梨：洗净、去皮、切小块，取5g放入试管中（图1）②加斐林试剂：2ml（由斐林试剂甲液和乙液充分混合而成，不能分别加入）③水浴加热：煮沸2min④观察溶液颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色。
结论：还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀（图2）图1 图23、改进后优点简化了用榨汁机榨汁这一步，节省了操作时间，以及对榨汁机的清洗等步骤；另外小梨块可以在实验过程中切取，不需提前切好，不易因时间太长而褐化，从而避免对反应现象的干扰，使实验现象更明显。
（二）、脂肪的鉴定1、实验流程：取材→挤压→加液→观察2、鉴定步骤:①取材：花生种子②挤压：在纸上用力按压，显出油斑（图3）③加液：在油斑上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液④观察：油斑出被染成橘黄色（图4）结论：细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色。
实验五 植物组织总糖和还原糖含量的测定
四、实验步骤
2、样品中还原糖的提取
（1）称取5g烟草叶片放入研钵中，加入5mL蒸馏水研 磨成匀浆液。将匀浆液全部转移至锥形瓶里。
（2）再用10mL蒸馏水冲洗研钵，并将冲洗液全部转 移至锥形瓶里。
（3）往锥形瓶里加入20mL蒸馏水，摇匀，于50℃保 温20min，不时搅拌。
（4）用漏斗过滤，将滤液全部收集到烧杯中，最终用 50mL容量瓶加蒸馏水定容至50mL，即为还原糖提取液。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖 和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用 酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法，其基本原理 是用比色法对还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中 还原糖和总糖的含量。
二、实验原理
在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸（DNS） 共 热 ， 3,5- 二 硝 基 水 杨 酸 被 还 原 为 3- 氨 基 -5- 硝 基 水 杨 酸 （棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。在 一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成 一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光 值，查对标准曲线并计算，就可以分别求出样品中还原糖 和总糖的含量。
NaOH
加热
黄色
棕红色
三、仪器和试剂
1、仪器： 电子天平、恒温水浴锅、分光光度计（722型）。
2、试剂： 2mg/mL葡萄糖标准液、蒸馏水、3,5-二硝基水杨
酸、6mol/L盐酸、碘-碘化钾、6mol/L氢氧化钠
5
四、实验步骤
1、葡萄糖标准曲线的绘制
取6支试管，按表加入试剂。
以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值（OD540） 为纵坐标，绘制标准曲线。
实验一 生物组织中还原糖
实验一生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定一、实验原理：该实验中，对三类化合物的鉴定都是根据它们的特定颜色反应进行的。
当质量浓度为0.1 g／ml的氢氧化钠溶液(氢氧化钾溶液亦可)与质量浓度为0.05g／m1的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。
Cu(OH)2与葡萄糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。
因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。
苏丹Ⅲ是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹Ⅲ染色后，在显微镜下可看到细胞内橘黄色的颗粒。
蛋白质分子中含有很多肽键，因而能与双缩脲试剂发生反应生成紫色的络合物。
若在组织样液中加入双缩脲试剂后，有紫色反应，则证明其中含有蛋白质。
二、实验目的：初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。
三、实验材料：1、做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织中有色素会影响实验结果及其观察的最重要因素。
因此要选用可溶性还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织，其中以苹果、梨最好。
也可用白色的甘蓝叶、白萝卜替代(不能选西瓜)。
2、做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。
将花生种子经过3～4小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。
3、做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆（豆浆）或鸡蛋清。
四、试剂配制：1、斐林试剂：甲液——质量浓度为0.1 g／ml的氢氧化钠溶液(10克的氢氧化钠加水至100ml即成)；乙液——质量浓度为0.05g／ml的CuSO4溶液(5g硫酸铜加水至100m1充分溶解即成)。
甲、乙试剂千万要分开放，不可混合。
在实验过程中，将4～5滴乙液滴入2ml甲液中现混现用。
2、苏丹Ⅲ溶液：将0.1g苏丹Ⅲ干粉溶于100ml体积分数为95％的酒精溶液中，待全部溶解后即成。
3、双缩脲试剂：A液——质量浓度为0.1 g／ml的氢氧化钠溶液(可使用斐林试剂甲液)。
重点实验课检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
二、高考命题角度预测 (1)若以血液为材料检测血浆中是否含有还原糖和蛋 白质，对实验材料应如何处理？请分析原因。 提示：对血液进行离心后取上清液(血清)进行检测。 因血液为红色，会干扰实验结果。离心后去除血细胞，可 排除干扰。
(2)种子萌发过程中，蛋白质含量会发生变化。现有萌 发两天和四天的大豆种子，请设计实验，探究大豆种子萌 发时蛋白质含量是增加还是减少。(简要说明原理即可)
为什么？_________________________________________。 (3)已知生长素含量增加能提高细胞内乙烯的含量。如果对青柿 子喷洒一定浓度的生长素，则青柿子继续成熟时曲线②将呈现出 ________趋势，曲线①将呈现出________趋势。
[解析] (1)柿子在成熟过程中由苦涩变甘甜与淀粉的转化 有关，淀粉逐渐转化为具有甜味的还原糖，因此，青柿子中淀 粉含量高、还原糖含量少，黄柿子中淀粉含量少、还原糖含量 高；曲线②所示物质随时间变化含量逐渐减少，因此表示淀粉 含量的变化，曲线①表示还原糖含量的变化。(2)检测还原糖时， 斐林试剂的甲液、乙液要等量混合均匀后，再加入待测溶液中， 并要水浴加热。(3)根据题意可知，对青柿子喷洒一定浓度的生 长素后，青柿子细胞内乙烯的含量将增加。乙烯促进果实成熟， 因此淀粉的分解速度将加快，即曲线②加速下降，相应地，还 原糖的生成也将加快，即曲线①加速上升。
比较 项目
斐林试剂
双缩脲试剂
甲液 成分 0.1 g/mL
NaOH溶液
乙液
0. 05 g/mL CuSO4溶液
A液
B液
0.1 g/mL 0.01 g/mL NaOH溶液 CuSO4溶液
比较项目
斐林试剂
双缩脲试剂
反应原理 添加顺序
植物组织中还原糖含量的测定
植物组织中还原糖含量的测定应用化学1101 A20110001程志永植物组织中还原糖含量的测定程志永（东北农业大学理学院应用化学系，哈尔滨，150000）摘要：本实验以葡萄糖为标准，以3,5- 二硝基水杨酸(DNS)作显色剂，用分光光度法测定黄瓜中还原糖的含量。
在碱性条件下，3，5–二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的3–氨基–5–硝基水杨酸，该物质在540nm波长处有最大吸收。
在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。
关键词：还原糖；分光光度法；3,5-二硝基水杨酸中图分类号：Q5-33文献标志码：A引言DNS 比色法的原理是：3,5-二硝基水杨酸在碱性溶液中被还原糖还原成氨基化合物，在沸水浴中显色时间5min，波长在540nm下有最大吸收峰。
试验过程中的诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果的准确性有直接影响。
因此，我们对用3,5-二硝基水杨酸比色法测定马铃薯块茎还原糖含量的反应条件进行了一系列的试验，试图摸索最佳的试验条件以保证试验的精确度，以期获得可靠的数据为黄瓜品质育种的实践提供参考。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 供试药剂3,5-二硝基水杨酸；蒸馏水；葡萄糖溶液。
1.1.2 供试植物材料黄瓜0.96g1.2 实验方法1.2.1 葡萄糖标准曲线的制作称取0.0502g葡萄糖，定容至500ml；吸取葡萄糖标准液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL试管中，编号1、2、3、4、5、6，各加蒸馏水使体积为1.0mL，再加苯酚试液0.51mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸2.5 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热约15min，取出后冷却至室温。
以一号试管为对照组。
用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm 处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。
1.2.2 样品中还原糖含量的测定1.2.2.1还原糖的提取准确称取样品0.5g，用少量蒸馏水研磨成匀浆，然后加入蒸馏水定容至50mL，摇匀，置于50℃恒温水浴中保温10min，使还原糖浸出，移入离心管，4000r/min下离心10min，取上清液。
还原糖的测定分析
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③ 在各种食品中存在形式和含量不一。
糖分为单糖、双糖、多糖。
有效碳水化合物——人体能消化利用的单糖、双 糖、多糖中的淀粉。 无效碳水化合物——多糖中的纤维素、半纤维素、 果胶等不能被人体消化利用的。
这些无效碳水化合物能促进肠道蠕动。
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葡萄糖 单糖 果糖 半乳糖 碳水化合物 双糖 蔗糖 有效碳水化合物
⑤滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从 热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。 ⑥样品溶液预测的目的；一是本法对样品溶液中还原 糖浓度有一定要求(0.1%左右)，测定时样品溶液的消 耗体积应与标定葡萄糖标准溶液时消耗的体积相近， 通过预测可了解样品溶液浓度是否合适，浓度过大或 过小应加以调整，使预测时消耗样液量在 10 ml 左右；
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样品溶液预测 吸取碱性洒石酸铜甲液及乙液各5.00ml，置 于250m1锥形瓶中，加水10 ml．加玻璃珠3粒， 加热使其在2分钟内至沸，准确沸腾30秒钟，趁 热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液， 滴定时要始终保持溶液呈沸腾状态。待溶液蓝色 变浅时．以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色 刚好褪去为终点。记录样品溶液消耗的体积。
乳糖 麦芽糖
淀粉
多糖
纤维素 果胶 无效碳水化合物
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1.2 测定方法
相对密度法
物理法
折光法
旋光法
单糖和低聚糖
化学法
还原糖法（斐林氏法、高锰酸钾法、 铁氰化钾法） 碘量法 缩合反应法
色谱法：纸色谱法、薄层色谱法、
酶法
淀粉：水解为单糖，再用单糖测定方法测定 多
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糖
果胶和纤维素：多采用重量法
食品中糖类物质的测定方法
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸法目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色试剂和器材一、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
二、材料藕粉，小麦淀粉或玉米淀粉。
三、器材723PC、S22型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
一、葡萄糖标准曲线制作取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg0 1 00.210.80.42 0.4 0.6 0.83 0.6 0.4 1.24 0.8 0.2 1.65 1 0 2操作方法在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。
以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。
以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
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植物组织中还原糖含量的测定
(3，5–二硝基水杨酸法)
一、实验目的
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，学习比色定糖法的基本操作。
二、实验原理
3，5–二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色物质（即3–氨基–5–硝基水杨酸)，
该物质在540nm波长处有最大吸收。
在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质
的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。
三、实验仪器、试剂和材料
1.仪器：25ml刻度试管、离心管或漏斗、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、离心机、分光光度计等。
2.试剂：1mg/ml葡萄糖标准液、3，5–二硝基水杨酸
3.材料：食用面粉
四、实验操作步骤
1、葡萄糖标准曲线的制作
取7支干燥洁净的25ml刻度试管或大试管，编号，按下表准确加样：
将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，
再以蒸馏水定容至25ml，加塞后颠倒混匀。
在540nm波长下，用0号管为参比管调零
，分别读取各管的吸光度(A540nm)。
以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标绘制标准曲线。
2、样品中还原糖的提取
准确称取1.5g食用面粉，放在小锥形瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，
然后加25ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，然后将锥形瓶中内容物转入一个50mL
容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
充分混合，过滤，滤液即为还原糖待测液。
3、样品含糖量的测定
分别取2ml还原糖待测液于两支刻度试管或大试管中，
然后各加3，5–二硝基水杨酸1.5ml。
其余操作与制作葡萄糖标准曲线时相同。
测定各管吸光度。
五、实验结果处理
以上述还原糖待测液的吸光度平均值，在标准曲线上
查出相应的还原糖毫克数。
按下式计算样品中还原糖的百分含量。
提取液总体积
还原糖%= (测定时取用体积/样品质量
(mg))×100
六、实验注意事项：
标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。