金银花多糖的制备工艺优化及免疫活性研究
210978221_金银花粗多糖提取工艺优化及其抗氧化活性评价
刘宇，戴沅霖，马越，等. 金银花粗多糖提取工艺优化及其抗氧化活性评价[J]. 食品工业科技，2023，44（7）：188−196. doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022060232LIU Yu, DAI Yuanlin, MA Yue, et al. Extraction Process Optimization and Antioxidant Activity Evaluation of Crude Polysaccharides from Lonicera japonica [J]. Science and Technology of Food Industry, 2023, 44(7): 188−196. (in Chinese with English abstract). doi:10.13386/j.issn1002-0306.2022060232· 工艺技术 ·金银花粗多糖提取工艺优化及其抗氧化活性评价刘 宇1，戴沅霖1，马 越2，董淑君1，张 斌1，郑振佳1,*（1.山东农业大学食品科学与工程学院，山东省食品高校加工技术与质量控制重点实验室，山东泰安 271018；2.北京市农林科学院农产品加工与食品营养研究所，果蔬农产品保鲜与加工北京市重点实验室，农业农村部蔬菜采后处理重点实验室，北京 100097）摘 要：采用热水提取法提取金银花多糖，通过单因素实验考察料液比、浸提时间、浸提温度和提取次数4个因素对多糖得率的影响，在此基础上利用响应面法对提取条件进行优化。
以DPPH 自由基、ABTS +自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除能力和总还原力为指标评价金银花粗多糖的抗氧化活性。
结果表明：金银花多糖的最佳提取工艺条件为料液比1:30（g/mL ）、浸提时间120 min 、浸提温度70 ℃，此条件下多糖的实际得率为6.45%±0.15%，与预测值的相对误差为1.2%。
金银花有效成分提取工艺的优化研究
金银花有效成分提取工艺的优化研究金银花是一种常见的中药材，具有抗菌、抗病毒、抗氧化等多种药理活性，被广泛应用于中药制剂和保健品中。
提取金银花的有效成分，对于充分发挥其药理作用具有重要意义。
本文将对金银花有效成分的提取工艺进行优化研究，以提高提取效率和产品质量。
一、溶剂的选择金银花中的有效成分主要为挥发油、黄酮类和多糖类物质。
因此，选择合适的溶剂对于有效成分的提取具有重要作用。
研究表明，乙酸乙酯、乙醇和水三种溶剂可以较好地提取金银花的有效成分。
乙酸乙酯适用于提取挥发油，乙醇适用于提取黄酮类物质，而水适用于提取多糖类物质。
因此，提取金银花时可以根据所需提取的成分选择相应的溶剂，或采用多溶剂提取的方式，以充分提取金银花的有效成分。
二、影响提取效果的因素1. 提取时间：提取时间的设置对于提取金银花的有效成分具有重要影响。
一般来说，提取时间过长可能导致挥发油和其他易挥发成分的损失，提取时间过短则可能导致有效成分的提取不充分。
因此，应根据不同溶剂和成分的特性来确定合理的提取时间。
2. 提取温度：提取温度是影响提取效果的关键因素之一。
提取温度过高可能导致有效成分的降解和损失，提取温度过低则可能导致有效成分的提取效率低下。
因此，应选择合适的提取温度以达到最佳提取效果。
3. 溶剂比例：溶剂比例的设置也是影响提取效果的重要因素之一。
不同成分对不同溶剂的亲和性不同，因此，合理的溶剂比例可以提高有效成分的提取效率。
一般来说，使用两种或多种溶剂混合提取可以提高提取效果。
4. 固液比：固液比是指金银花与溶剂的质量比。
固液比过高可能导致溶剂不足，影响成分的提取效果；固液比过低则可能导致溶剂过量，增加处理成本。
因此，应通过实验确定合适的固液比。
三、超声波辅助提取技术超声波辅助提取技术是一种常用的物理方法，可以加速提取过程，提高提取效果。
超声波振荡产生的微弱反应力可以破坏细胞壁，促进有效成分与溶剂的接触和渗透，从而提高提取效率。
金银花多糖的研究概况
金银花多糖的研究概况李玉平;张利;黎晓敏【摘要】金银花具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抗氧化等作用,且金银花多糖是其最主要的化学成分.文章对金银花多糖的提取、分离纯化、结构和生物活性等方面进行了综述.【期刊名称】《饲料博览》【年(卷),期】2011(000)002【总页数】4页(P21-24)【关键词】金银花多糖;提取方法;分离纯化;生物学活性【作者】李玉平;张利;黎晓敏【作者单位】西南大学,动物科技学院,重庆,400715;西南大学,动物科技学院,重庆,400715;西南大学,动物科技学院,重庆,400715【正文语种】中文【中图分类】R286金银花为忍冬科植物忍冬、红腺忍冬、山银花或毛花枝忍冬的干燥花蕾，在神农本草经中被列为上品，其性寒，味甘，有清热解毒、凉散风热之功效[1]。
用于治疗温病发热、风热感冒、痈肿疖毒、热毒血痢、痔漏便血等[2]。
金银花富含挥发油类、有机酸类化合物及黄酮类、三菇类、环烯醚菇类、醇类、微量元素等活性成分，且具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫及解热抗炎、利胆、保肝、降脂、抗生育、止血、抗溃疡等多种药理作用[3]。
植物多糖是一类重要的生物活性物质，具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、延缓衰老及抗感染等多种作用，且对机体的毒副作用小[4]。
近年来研究较多的活性多糖有银杏多糖、黄芪多糖、桑枝皮多糖、香菇多糖、雪茶多糖、枸杞多糖、灵芝多糖等[5－11]。
以往对金银花的研究主要集中在绿原酸、黄酮类等小分子物质上，对于金银花大分子物质多糖的研究较少。
近年来，许多学者从金银花中提取了多糖，并对金银花多糖的结构及其生物活性进行了一系列的研究。
本文针对近年来金银花多糖的提取方法、分离纯化、结构分析以及生物学活性的研究成果加以概述，为金银花资源的进一步开发及其药理作用提供理论依据。
1 金银花多糖的提取多糖提取采用的方法主要有热水提取法、酸提取法、碱提取法、超声波提取法、微波提取法和酶提取法等，近年来研究最多的提取方法是热水提取法和超声波提取法。
金银花抗炎免疫活性研究进展
金银花抗炎免疫活性研究进展严雪龙;孟爱平;濮社班【摘要】金银花为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的于躁花蕾及初开的花,具有清热解毒,疏散风热的功效,主治热性病,具有抗炎免疫的作用,为治一切内痈外痈之要药.金银花提取物具有免疫抑制作用,通过抑制TNF-α,IL-1β,和IL-6等促炎细胞因子来抑制或减轻炎症反应.研究认为金银花的免疫调节作用是通过调节THl/TH2的平衡实现的,机理主要是增加TH1细胞分泌的细胞因子或降低TH2细胞分泌的细胞因子,但物质基础及作用机制尚不明确.炎症与免疫密不可分,研发具有抗炎和免疫调节作用的药物意义重大.金银花的临床疗效与药理作用研究结果是相一致的,提示金银花可用于研发抗炎免疫药物,有待进一步研究.【期刊名称】《中国野生植物资源》【年(卷),期】2016(035)002【总页数】4页(P41-44)【关键词】金银花;抗炎;免疫【作者】严雪龙;孟爱平;濮社班【作者单位】中国药科大学天然药物活性组分与功效国家重点实验室,生药学研究室,江苏南京211198;中国药科大学天然药物活性组分与功效国家重点实验室,生药学研究室,江苏南京211198;中国药科大学天然药物活性组分与功效国家重点实验室,生药学研究室,江苏南京211198【正文语种】中文【中图分类】R285金银花(Lonicerae Japonicae Flos)为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的干躁花蕾及初开的花，又名忍冬花、银花、双花等。
药理学研究表明，金银花具有抗病毒、抗氧化、抗诱变、毒性[2]、抗炎止痛[3]、抗癌[4]、抗神经毒性[5-6]、降血糖[7]、抗菌[8]、免疫调节、抗生育[1]等作用。
目前从金银花中已经分离鉴定了140多种[1]化合物，含有有机酸类、黄酮类、三萜皂苷类和挥发油和环烯醚萜类等，绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分，包括绿原酸及异绿原酸，是金银花药材质量控制的指标性成分。
金银花多糖的组成成分与抗氧化活性
Abstract: To provide a basis for the comprehensive development and utilization of Lonicera japonica polysaccharides(LJP) 9 taking L. japonica from Suiyang County of Zunyi City as experimental materials, and LJP was separated and purified by combination of digestion? alcohol precipitation? DEAE-cellulose column and Sepharose CL-6B chromatography 9 and a single factor test was employed to determine the clearance rates of various components of LJP on DPPH, hydroxyl radicals and ABTS free radicals 9 and the inhibition rate of H2 O2-induced oxidative hemolysis of red blood cells. Results: The neutral polysaccharide component (LJP-N) of L. japonica consisted mainly of Glc (43. 7%), Gal (25. 1%) and Ara (31. 2%), with a molecular weight of about 6 kDa； acidic polysaccharide fraction (LJP-A) was mainly composed of GalA (82. 1%) , Gal (7. 1%) and Ara (10. 8%) , with a molecular weight of about 400 kDa. Both of LJPN and LJP-A had certain antioxidant activity in vitro, and LJP-A was more active. The EC50 of LJP-A and LJP-N for DPPH, hydroxyl radical and ABTS free radical scavenging rates were 0. 58 mg/mL and 2. 23 mg/mL, 3. 61 mg/mL and〉4 mg/mL, 1. 4 mg/mL and〉4 mg/mL, the EC50 of LJP-A and LJP-N inhibiting H2 O2-induced oxidative hemolysis of red blood cells were 0. 1 mg/mL and 0. 25 mg/mL, respectively? and they all showed a concentration-dependent manner.
金银花多酚和多糖同步提取工艺优化及其抗氧化活性研究
金银花多酚和多糖同步提取工艺优化及其抗氧化活性研究梁金月;周洪鑫;张雨晴;王玲娜;李佳;赵东升【期刊名称】《中国食品添加剂》【年(卷),期】2024(35)3【摘要】以金银花为原料,以硫酸铵浓度、乙醇含量、料液比、超声时间、提取温度、超声功率六个因素进行同步提取单因素实验。
在单因素实验基础上,以多酚和多糖提取量为双指标,利用响应面法优化超声辅助乙醇-硫酸铵双水相萃取法同步提取金银花中多酚和多糖的工艺。
并对提取的金银花多酚和多糖进行体外抗氧化研究。
提取最优工艺条件为硫酸铵浓度0.2 mg/mL,超声时间30 min,超声温度59℃,料液比1∶70(g/mL),以此条件下测得多酚提取量为25.6 mg/g,多糖提取量为152.11 mg/g。
体外抗氧化结果表明,金银花多酚和多糖对DPPH·、ABTS^(+)·具有显著清除能力,对Fe^(3+)有较强还原能力。
利用超声辅助双水相萃取法实现了金银花多糖和多酚同步提取。
多糖和多酚抗氧化活性均显著,其中金银花多酚抗氧化能力在一定范围内强于VC。
【总页数】10页(P1-10)【作者】梁金月;周洪鑫;张雨晴;王玲娜;李佳;赵东升【作者单位】山东中医药大学药学院;新疆医科大学药学院;新疆埃乐欣药业有限公司【正文语种】中文【中图分类】TS202.1;TS201.2【相关文献】1.响应曲面法优化金银花多糖提取条件及抗氧化活性研究2.豌豆蛋白和多糖同步提取工艺优化及其抗氧化活性研究3.响应面法优化同步提取黑蒜中多酚与黄酮的工艺及抗氧化活性的测定4.金银花粗多糖提取工艺优化及其抗氧化活性评价5.油橄榄果渣总多酚提取工艺优化及不同极性多酚的体外抗氧化活性研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
金银花提取物的物质基础和制备工艺研究
金银花提取物的物质基础和制备工艺研究一、本文概述金银花，作为一种具有悠久药用历史的植物，其在中医理论中具有清热解毒、凉血消肿等多种功效，被广泛应用于感冒、咳嗽、喉咙痛等常见疾病的治疗。
近年来，随着现代科学技术的进步，金银花的有效成分及其药理作用得到了更深入的研究，金银花提取物在医药、保健品、化妆品等领域的应用也日益广泛。
本文旨在深入研究金银花提取物的物质基础，明确其主要活性成分及其含量，同时探索和优化金银花的制备工艺，以提高提取物的质量和产量，为金银花提取物的工业化生产提供理论依据和技术支持。
通过本文的研究，我们期望能够更全面地了解金银花提取物的物质基础，揭示其药理作用的科学内涵，同时为金银花提取物的应用提供更为可靠的产品来源。
本文的研究内容主要包括金银花提取物的化学成分分析、提取工艺的优化以及提取物的生物活性评价等方面。
我们将采用先进的分析技术，如高效液相色谱、质谱联用等，对金银花提取物中的化学成分进行定性和定量分析，明确其主要活性成分。
我们将通过对比实验，优化金银花的提取工艺参数，以提高提取效率和产物纯度。
我们还将对金银花提取物的生物活性进行评价，为其在医药、保健品等领域的应用提供科学依据。
本文的研究不仅有助于深入了解金银花提取物的物质基础和制备工艺，也为金银花资源的合理开发利用提供了新的思路和方法。
我们相信，随着研究的深入和技术的进步，金银花提取物将在更多领域展现出其独特的价值和潜力。
二、金银花提取物的物质基础研究金银花，作为一种具有悠久药用历史的中药材，其独特的药用价值逐渐受到现代科学的关注。
金银花提取物作为一种重要的天然药物成分，其物质基础研究对于深入了解其药效机制和开发新型药物具有重要意义。
在金银花提取物的物质基础研究中，我们首先对其化学成分进行了系统的分析。
通过现代色谱技术和波谱技术的结合，我们成功分离并鉴定了金银花中的主要活性成分，包括黄酮类、有机酸类、挥发油类等多种化合物。
这些化合物在金银花提取物中发挥着重要的药理作用，如抗炎、抗氧化、抗病毒等。
金银花多糖提取工艺含量测定
金银花多糖的提取工艺及含量测定研究【摘要】目的：优化金银花多糖的提取工艺并对多糖的含量测定进行研究。
方法：采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，水提醇沉法制备粗多糖，sevag去蛋白法对多糖进行精制，以金银花总多糖提取率为指标，优选最佳提取工艺，并采用正交试验法对优选的最佳工艺参数进行优化。
结果：影响金银花多糖提取率的各因素关系为：提取温度>溶剂倍量>提取时间>提取次数；最佳提取工艺为：提取温度90℃，提取时间为1.5h，提取次数为2次，溶剂倍量为15倍量，多糖提取率为9.61%。
结论：优选的工艺操作简便，多糖提取率高。
【关键词】金银花多糖；提取工艺；含量测定【中图分类号】r282.4 【文献标识码】a 【文章编号】1004-7484（2012）12-0011-02金银花为忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾或带初开的花[1-2]。
已有报道称多糖是金银花中有效成分之一，并有抗癌、抗肿瘤、提高人体免疫力等多种作用[3]，目前国内对金银花多糖方面的研究仍较少。
金银花的多糖提取工艺及含量测定研究有利于新的药效部位的开发，为金银花多糖的开发应用提供理论依据。
1 材料与仪器ab135-s型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；uv-1100型双光束紫外-可见分光光度仪（上海天美科学仪器有限公司）；r1002型旋转蒸发仪（上海申顺生物科技有限公司）；tdl-5-a型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；金银花药材购自济南建联中药有限公司，经鉴定为忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾；d-无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所，批号110833-200503）；苯酚、硫酸等试剂均为分析纯，水为去离子水。
2 方法与结果2.1 金银花多糖含量测定2.1.1 含量测定方法d-无水葡糖糖作为标准品配制标准品溶液，采用苯酚-硫酸法[4]测定金银花提取物中总多糖的含量。
【word】金银花提取物的抗炎免疫作用研究
金银花提取物的抗炎免疫作用研究药物研究金银花提取物的抗炎免疫作用研究2011年第20卷第23期崔晓燕(河北省药品检验所,河北石家庄050011)摘要:目的采用不同动物模型研究金银花提取物的抗炎,免疫作用.方法测定大鼠角叉菜胶性足肿胀抑制率,小鼠羧甲基纤维素囊中的白细胞数目,大鼠巴豆油性气囊肿抑制率,小鼠单核一巨噬细胞吞噬指数.结果连续灌胃给药金银花提取物(4,8g/kg)5d可显着抑制角叉菜胶所致大鼠足肿胀,减少小鼠羧甲基纤维素囊中白细胞游出数和大鼠巴豆油性气囊肿的形成;金银花提取物(0.2,0.5,1.0,2.0,4.0g/kg)L#z续灌胃15d能显着抑制正常小鼠单核一巨噬细胞的吞噬功能.结论金银花提取物是一种具有免疫抑制活性的抗炎药物,关键词:金银花提取物;抗炎;免疫调节中图分类号:R285.5;R282.71文献标识码:A文章编号:1006—4931(2011)23—0008—02 TheAntiinflammatoryandImmunomodulationEffectsoftheExtractofLoui ceraJaponicaThunb.CuiXiaoyanfHebeiInstituteforDrugControl,Shijiazhuaug,Hebei,China050011JAbstract:ObjectiveToassesstheantiinflammatoryandimmunomodulative activitiesoftheextractofLouicerajaponicaThunb.invarious experimentalanimalmodels.MethodsCarrageenan—inducededemainrats, thechemotaxisofleucocyteinducedbyCMCinnlice,croton0il—gascystinratsandtheclearancerateof..charcoalparticlesinnormalmice .ResultsThedatashowedthatLouicerajaponicaThunb.(4,8g/kg,P.o.,for5d)markedlyinhibitedhindpawedemainducedbyc arrageenininrats;thechemotaxisofWBCinducedby CMCandtheweightofcrotonoil—gascystinratsaresuppressedmarkedly.M oreover,thedateshowedthatLoaicerajaponicaThunb.(0.2,0.5,1.0,2.0,4.0g/kg,P.o.,for15d)markedlyinhibitedthephagocytosiso fmonocyteofnormalmice.ConclusionThepresent studyprovidedevidencethatLouicerajaponicaThunb.hassignificantantiinf lammtoryactivitiesandthemodulatoryeffectsontheimmunefunctions.Keywords:theextractofLouicerajaponicaThunb.:antiinnamma}i0n:immu nomodulation金银花为忍冬科多年生半常绿缠绕性木质藤本植物忍冬LouicerajaponicaThunb.的花蕾和初开的花,又名银花,双花,忍冬花,鹭鸶花,二宝花,除西北,东北外,在我国其他各地均有分布.金银花昧甘,性寒,能清热解毒,疏散风热,是一种具有保健价值的药用植物.为进一步证实其抗炎免疫作用,笔者进行了相关药理学试验,报道如下.1材料与方法1.1仪器与材料大鼠足肿胀测定仪为本科室自组装;722型光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂);倒置显微镜(南京光学仪器厂);电子分析天平(上海天平仪器厂).昆明种小鼠,Wistar大鼠均由河北省实验动物中心提供(合格证号码为1006160,在自由摄食,饮水环境中适应3～4d后用于试验).金银花提取物(LouicerajaponicaThunb.,L TE),巴豆油,角叉菜胶均由河北省药品检验所中药室提供;吲哚美辛(华北制药厂,批号为060815);冰醋酸(沈阳化学试剂厂,批号为980618);伊文思兰(上海化学试剂采购供应站,批号为82—11—02);印度墨汁(上海长江日用粘合材料厂,批号为020416).1.2试验方法金银花的提取:取金银花,用10倍量的水加热回流提取3次,每次4h,合并3次提取液,用盐酸调节pH至1.0—2.0,80℃保温,静置,用纱布过滤,冷冻干燥即得.临用前用蒸馏水配制成金银话)023—68754438(电子信箱)PY—*************.an.参考文献:[1】杨生,张宏文,王蔚青,等.头孢克洛血药浓度测定及其药代动力学研究【J].中国生化药物杂志,2008,29(5):329—331.[2]周燕文,刘倩,兰聪贤.头孢克洛胶囊健康人体药动学及生物等效性研究[J】.广西医科大学,2006,23(2):272—274.[3]刘亚妮,吕永宁,舒舟,等.头孢克洛分散片健康人体药动学与生物8?花生药量为0.2,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0g/kg6个剂量组对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响…:Wistar大鼠40只,雄性,体重180～220g,随机分成5组,每组8只.设为空白对照组(A 组),金银花提取物组(2,4,8g/kg,B,B,B.组)和阳性药吲哚美辛组(c组),灌胃给药,每天1次,连续5d(阳性药只给药1次).末次给药1h后,依文献方法于大鼠右侧足掌心皮下注射1%角叉菜胶0.1mL/只致炎,以自组装的大鼠足肿胀测定仪测定致炎前及致炎后1,2,3,4,5h时的肿胀足体积(mL),并计算肿胀度及肿胀抑制率.对小鼠羧甲基纤维素囊中自细胞游出数目的影响J:昆明种小鼠50只,雄性,体重20～22g,随机分成5组,除吲哚美辛组给药3d 外,其余同前.于末次给药后在无菌操作下向小鼠背部皮下注入空气1mL,形成一个近圆形气囊,次日向囊内注入1.5%的羧甲基纤维素钠溶液1mL致炎.于致炎后8h从囊内吸取液体2OL加入到生理盐水0.4mL中,混匀,用微量移液器取10IxL作白细胞计数,以10/mL表示.对大鼠巴豆油性肉芽囊肿形成的影响】:Wistar大鼠40只,体重180—200g,参照文献于大鼠背部皮下注射20mL空气,立即向气囊内注入1%巴豆油1mL,24h后抽出空气.致炎后随机分成5组,每组8只,灌胃给药,每天1次连续5d,末次给药8h后处死大鼠,剥离囊壁肉芽肿,并用生理盐水反复漂洗干净,在60℃烘箱等效性评价[J].医药导报,2010,29(5):597—600.[4]王晓波,刘丹,姚文,高效液相色谱法测定人血浆中的头孢克洛及在制剂生物等效性研究中的应用[J].中国医院药学杂志,2009,29 (2O):1727—1730.【5]汤净,田洁,黄民.人血浆中头孢克洛的含量测定方法的研究【J1. 中国医院药学杂志,2006,26(11):1353一】355.(收稿日期:2011—04—01;修回日期:2011—07—18)中国药业ChinaPharmaceuticals2011年第20卷第23期中干燥8h,用分析天平精密称重,并按下式计算肿胀抑制率.抑制率=(对照组平均肉芽肿重一给药组平均肉芽肿重)/对照组平均肉芽肿重X100%.对正常小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能的影响】:昆明种小鼠70只,雄性,随机分成7组,每组l0只,空白对照组给相应容量的蒸馏水.给药组按生药量0.2,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0g/kg灌胃给药每天1次,连续15d,于末次给药后1h开始,给每只小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释5倍的印度墨汁(每10g体重0.1mL),注射后立即计时,每只小鼠分别于给予印度墨汁后的第2,12min时眼眶取血20L并加入到2mL的碳酸钠(0.1%)溶液中,摇匀.用分光光度计在680nm波长处比色测光密度值(OD),以碳酸钠作空白对照,按如下公式计算吞噬指数K值.将小鼠处死,取其肝和脾并称重,计算吞噬系数值.==K~/3xt2￡1一『肝,2结果2.1对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响结果见表1.可见,角叉菜胶可时间依赖性地增加大鼠足体积,在致炎4h后足肿胀达到高峰.金银花提取物2g/kg在各个时间点都有抑制趋势,但无显着性差异.金银花提取物4,8g/kg可显着降低角叉菜胶致大鼠足肿胀,但在致炎后的各时间点作用强度不同, 其中金银花提取物4g/kg在致炎后除1h外都可显着性抑制大鼠角叉菜胶性足肿胀,4h达最大抑制率;金银花提取物8g/kg在各时间点都可显着性抑制大鼠角叉菜胶性足肿胀,在4h出现最大抑制率;阳性药10mg/kg在各个时间点都可显着性抑制大鼠角叉菜胶性足肿胀.表1金银花提取物对角又菜胶致大鼠足肿胀的影响(±s,n=8) s)——A组一O.39±0.0170.65±0.0190.754-0.0240.854-0.0230.664-0.024Bt组20.37±0.0110.644-0.0680.744-0.0110.834-0.0170.564-0.095B2组40.33±0.0150.60±0.0150.66±0.011’0.75±0.016’0.53±0.030’组80.25±0.0120.57±0.013’0.57±0.013’0.71±0.015’0.44±0.017’C组0.010.19±0.008’0.45±0.014’0.51±0.0130.54±0.029’0.47±0.014注:与对照组比较,P<0.05.P<0.01(下表同).2.2对小鼠羧甲基纤维素囊中白细胞游出数目的影响结果见表2.可见,金银花提取物4,8g/kg连续灌胃5d能抑制小鼠羧甲基纤维素囊中自细胞的游出,降低囊中白细胞的数目, 与空白对照组比较有显着性差异.表2金银化提取物抗炎作用试验结果组别剂~(g/kg)白细胞游出数目(1/mL)/抑制率(%)干燥的肉芽囊肿质量(mg)/抑制率(%)23对大鼠巴豆油性肉芽囊肿形成的影响结果见表2.金银花提取物4,8g/kg连续灌胃5d能抑制大鼠巴豆油性气囊肿形成,说明金银花提取物对炎症晚期的结缔组织增生有抑制作用;金银花提取物8g/kg对炎症晚期组织增生的抑制作用,与阳性药吲哚美辛10mg/kg效果相当.中国药业ChinaPharmaceuticals表3金银花提取物对正常小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能的影响(±S,n=10)药物研究2.4对正常小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能的影响结果见表3.金银花提取物0.2,0.5,1.0,2.0,4.0g/kg连续灌胃15d均能抑制正常小鼠单核一巨噬细胞的吞噬功能.3讨论炎症一般经历早,中,晚3个时期.早期以毛细血管扩张和通透性亢进,渗出,水肿为主要特征,故也称之为血管反应期;中期以白细胞游走,浸润,趋化为特点,故也称之为细胞反应期;晚期以纤维组织增生,肉芽屏障形成为主要特征,故也称之为组织反应期1. 因此,阻断炎症反应过程的任何一个阶段,都可发挥抗炎作用.一般药理学研究中所采用的炎症模型就是根据炎症发生,发展过程中这3个不同时相的性质而设计的,可归纳为3种类型:渗出和肿胀模型,白细胞游走模型,肉芽肿增生模型_6】.本研究发现,金银花提取物对炎症早期的肿胀有显着抑制作用,对炎症中期白细胞的趋化,游出有显着的抑制作用,对炎症晚期的纤维结缔组织增生有较强的抑制作用.巨噬细胞是来自血液的单核细胞,是一种免疫细胞,分布很广,但主要集中于免疫器官中,它是参与免疫反应的重要细胞,介导机体的非特异性免疫.炭粒廓清试验就是通过测定单核一巨噬细胞的吞噬功能来反映机体对外界物质刺激的非特异性免疫功能的强弱.本研究证实,金银花提取物0.2,0.5,1.0,2.0,4.0g/kg(其中2.0,4.0g/kg为金银花提取物的抗炎剂量)能显着抑制小鼠单核一巨噬细胞的吞噬功能,说明金银花提取物能抑制机体的非特异性免疫功能,是一种具有免疫抑制作用的药物.综上所述,金银花提取物是通过抑制机体的免疫功能来发挥抗炎作用的,其作用机理还有待于进一步研究.作者简介:崔晓燕(1979一),女,硕士研究生,主管药师,研究方向为抗炎免疫药物对中枢神经细胞的药理作用,(电子信箱) cui—**************参考文献:[1]WinterCA.Anti—inflammatorytestingmethods:internationalsymposi umonnon—steroidalanti—inflammatorydrugs[J].ExcerptaMedFound, Amsterdaml964:190.[2]何俏军,王立明,楼宜梅.虎梅含片对急性炎症的抗炎作用[J].中成药,1998,20(6):34—35.[3]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993:305. [4】ZhaoHW,LiYH,ZhuYN,WengSA,eta1.Effectofbrucineonmouse nonspecificimmuneresponses[J].ActaPharmacolSinica,1997,18: 468—470.[5]洪美玲.病理学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,1994:50—59.[6]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993:272, 356.(收稿日期:2010—08—24)9?。
山银花多糖提取工艺参数优化
山银花多糖提取工艺参数优化山银花（Lonicera japonica Thunb.）是一种常见的中药材，其具有清热解毒、消炎退热等功效，被广泛应用于食品、保健品、药品等领域。
其中，山银花多糖是一种重要的活性成分，具有较为广泛的生物学效应，如抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等。
因此，山银花多糖的提取工艺及优化一直是研究的热点之一。
一、山银花多糖的化学成分山银花多糖属于天然高分子化合物，是一种复杂的多糖物质，由葡萄糖、半乳糖、岩藻糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、半乳醛酸等单糖组成，其分子量较大，一般在10万-20万之间。
二、山银花多糖的提取工艺山银花多糖的提取工艺有很多种，其中最常见的方法是水提法、酸提法、超声波提法、酶法提法等。
1.水提法水提法是最常用的提取方法之一，其操作简单、成本低、适应范围广，一般采用水浸法、水煮法、水提醇沉法等方法，但提取效率较低。
2. 酸提法酸提法是另一种常用的提取方法，其利用酸对多糖的水解性来加快糖链的断裂，提高提取效率，提取相对含量较高的酸性多糖。
但酸提法有可能会导致多糖分子断裂，使多糖的活性丧失。
3. 超声波提法超声波提法是用超声波震荡作用使植物细胞壁破裂，使得多糖较容易地从细胞中释放出来，具有提取效率高和提取物质高纯度等特点。
4. 酶法提法酶法提法则是将山银花制成泥浆，然后使用酶类将泥浆中山银花多糖水解成较小的分子量，然后膜过滤和浓缩，提高了提取效率和多糖纯度。
三、多糖提取工艺参数优化为了提高山银花多糖的提取效率和质量，需要对提取工艺进行优化。
下面分别介绍以下几个方面的优化方法：1. 溶剂类型和浓度的优化溶剂类型和浓度是影响多糖提取效率和多糖含量的重要因素，因此需要根据不同的多糖水解酶在不同的PH值下和不同的溶液中加入不同的缓冲液和辅助酶来增加多糖水解率，并考虑溶剂类型和浓度、时间等因素，使多糖的提取率最大化。
2. 提取温度和时间的优化提取温度和时间也是影响多糖提取的重要因素之一，提取温度过低影响提取速度，过高则易破坏多糖分子结构，同时时间过长也会影响多糖的质量，因此需要在一定范围内选择合适的提取时间和提取温度以得到最佳提取效果。
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金银花多糖的制备工艺优化及免疫活性研究殷洪梅1,吕新勇2,萧伟2*(1.南京中医药大学,江苏南京210000;21江苏康缘药业股份有限公司,江苏连云港222001)[摘要] 目的:优选金银花多糖提取的最佳工艺,并探讨最佳试验条件下提取的金银花多糖的免疫活性。
方法:采用正交试验设计方法优选最佳工艺;Sevag 2酶法除蛋白;将得到的多糖通过迟发型超敏反应,血清溶血素试验和脏器指数试验研究多糖对小鼠免疫调节的影响。
结果:金银花多糖提取最佳工艺为:温度90e 时加入15倍量的水,提取2次,每次提取60m i n ;金银花多糖具有明显的免疫增强作用,且药效和剂量相关。
结论:影响金银花多糖提取率的主要因素为温度,其次为提取时间;并通过动物试验证明金银花多糖具有增强免疫的活性。
[关键词] 金银花;多糖;制备工艺;免疫活性[收稿日期] 2009211223[基金项目] 科技部/重大新药创制0科技重大专项(2009Z X093132032)[通信作者]*萧伟,博士,研究员,级高级工程师,研究方向为中药新剂型的研究与开发,E 2m ai:l wz h z h 2n@j to m 1co m[作者简介] 殷洪梅,硕士研究生,研究方向为中药制剂的研发,T e:l 150********金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonic a Thumb 1的干燥花蕾或初开的花。
经近代药理实验和临床应用证明,金银花对于多种病菌有较强的抗菌作用和较好的治疗效果[1]。
但目前国内对金银花多糖方面的研究报道较少,因此对金银花多糖的制备工艺及其免疫活性进行研究,有利于对其药理作用的深入认识和新的药效部位的开发,为金银花中多糖类成分的开发与应用提供理依据。
1 材料电子天平(BS224S 型,北京赛多利斯仪器系统有限公司);电子天平(BP211D 型,梅特勒2托利多仪器(上海)有限公司);旋转蒸发仪(RE 26000型,上海亚荣生化仪器厂);离心机(TDL 252A 型,上海安亭科学仪器厂制造);真空干燥箱(DEF 26050型,上海新苗医疗器械制造有限公司);p H 计(振源厦门工业有限公司);紫外分光光度计(UV 22550型,日本岛津);数显恒温水浴锅(HH 26型,国华电器有限公司)。
2142二硝基氯苯(上海试剂一厂,批号08109116,);用丙酮和橄榄油(1B 1)溶液配置成1%的DNCB 溶液,置于棕色瓶中避光保存备用;香菇多糖(江苏康缘药业股份有限公司,批号0704101);环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司,批号07122821);无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇、苯酚、浓硫酸、乙醇、磷酸(均为分析纯);木瓜蛋白酶(300万U #g -1,广西杰沃利生物公司);D 2无水葡萄糖(中国药品生物制品检验所,批号1108332200503)。
金银花购自山东平邑流峪镇,经南京中医药大学生药教研室陈建伟教授鉴定(批号Y081202);I CR 小鼠,雌雄各半,均为清洁级[购自扬州大学比较医学中心,合格证书SC XK (苏)200720001,使用许可证S YX K (苏)200520011]。
2 方法与结果211 金银花提取物中总糖含量测定以葡萄糖为标样,采用改良的苯酚2硫酸法[223]测定金银花提取物中总糖含量。
总糖提取率=多糖粗品中总糖含量/样品用量@100%212 金银花多糖的制备参照文献[425]和本试验最佳工艺条件制备金银花多糖,即金银花药材加入15倍量的水提取2次,每次60m in ,滤过,滤液浓缩至适当体积,加入95%乙醇使含醇量达到80%,静置过夜,离心,沉淀用有机溶剂洗涤、干燥得粗多糖。
将得到的金银花粗多糖溶液中加入一定量的木瓜蛋白酶充分搅拌后置于60e 恒温水浴锅内酶解4h,高温灭活木瓜蛋白酶,加入Sevag 试剂(氯仿2正丁醇,25B 5)萃取,重复操作至两相界面无变性蛋白产生为止。
将萃取后的多糖溶液浓缩至适当体积,醇沉、洗涤、干燥得多糖。
213 金银花多糖正交设计试验在单因素考察的基础上,以提取物中总糖提取率为考察指标,确定提取温度、提取时间、提取次数、#453#溶剂量为考察因素,每个因素拟定3个水平,选用的因素和水平见表1。
表1金银花多糖制备工艺正交试验设计水平A提取时间/m i nB提取温度/eC提取次数/次D溶剂/倍145401102606021539090320214正交试验结果按照L9(34)正交设计表条件进行试验,直观分析表明,B>A>D>C,即影响金银花多糖提取率的各因素的排列顺序为温度>时间>溶剂>次数。
方差分析表明,A,B为主要影响因素,具有显著性(P<0101),C,D对试验结果无显著性影响。
最终确定最佳提取工艺为A2B3C2D2,即15倍量的水在温度为90e时回流提取2次,每次60m i n。
表2金银花多糖制备工艺正交试验结果No1总糖提取率/%No1总糖提取率/%111126915024132731303618085157441189811056120表3方差分析方差来源离均差平方和均方P A919123301400<0101B41164413881133<0101C010*******D01499161633误差0103注:f=2。
215工艺验证试验为进一步考察优选工艺的可靠性及稳定性,取3份药材按上述最佳提取工艺进行验证试验,操作方法同前述,3次实验测得的总糖提取率分别为9161%,9158%,9176%,结合表2可看出,验证试验结果与正交表中最优试验结果相当,说明该优选工艺稳定可靠。
216金银花多糖的免疫调节试验[6]21611金银花多糖对2142D NCB致迟发型超敏反应的影响2161111诱发模型制作将体重18~22g的40只小鼠随机分为4组,即模型组、香菇多糖对照组、金银花多糖高、低剂量组。
均为正常饮食及给水。
试验前1日在小鼠腹部去毛,面积约为2c m@2c m,试验第2日于去毛部位涂1%DNCB溶液50L L致敏1次,第6日于各组小鼠右耳两面涂1%DNCB溶液10L L激发。
2161112给药分别按照800,200mg#kg-1剂量换算每只小鼠所需的给药体积,第1~2日于致敏前2h给药,第3~5日均为间隔24h给药,给药方式香菇多糖为腹腔注射,其他组为灌胃。
激发24h后以颈椎脱臼法处死各组小鼠,用8mm金属打孔器分别在耳中部打孔,取下相同大小的耳部组织块,用电子天平称得每个组织块的质量,通过公式肿胀度(mg)=右耳质量-左耳质量,计算激发后左右耳组织块的肿胀度。
2161113结果统计计算各组小鼠耳组织块的肿胀度。
以肿胀度值作为分析数据,采用t检验比较的各组是否有统计学意义,结果见表4。
表4迟发型超敏反应结果(x?s,n=10)组别剂量/m g#kg-1肿胀度/mg 模型组去离子水3103?1104香茹多糖组11189?11231)金银花多糖高8001112?11013)金银花多糖低2001141?01982)注:与模型组比较1)P<0105,2)P<0101,3)P<01001。
从试验数据可以看出:香菇多糖组与模型组比较有一定抑制作用且存在显著性差异。
金银花多糖对DNCB致迟发型超敏反应有一定抑制作用。
21612金银花多糖对环磷酰胺致小鼠免疫低下的影响2161211分组与给药将体重17~19g的50只小鼠随机分为5组,即模型组、香菇多糖对照组、金银花多糖高、低剂量组和正常组。
均为正常饮食及给水,剂量及给药方式同21611,连续给药7d。
在无菌条件下,于第2日每鼠ip5%鸡红细胞悬液0125mL致敏。
于给药第2,4,6日腹腔注射环磷酰胺每只012mL致免疫低下。
末次给药1h后,眼眶取血,2500r#m i n-1分离血清。
2161212溶血素及脏器指数测定取小鼠全血离心分离血清,生理盐水稀释100倍,按下表进行试验。
见表5。
#454#表5血清溶血素试验设计试剂样品管/mL对照管/mL 100倍稀释血清1-生理盐水-15%鸡红细胞稀释液01501510%豚鼠血清稀释液015015按照上表,样品于37e水浴中保温30m in,孵毕,置4e冰箱终止反应。
用2000r#m i n-1离心10 m in,取上清液1mL,放置10m in后,于540n m比色,以对照管作空白调零,分别测定各管吸光度(A)。
给药结束后次日,脱颈椎处死小鼠,称体重,取出小鼠脾脏和胸腺,称重。
计算脏器指数=脏器质量(mg)/小鼠体重(10g)。
2161213结果统计各组的吸光度值和脏器指数。
以吸光度值和脏器指数作为分析数据,采用t检验比较的各组是否有统计学意义,结果见表6,7。
表6血清溶血素结果(x?s,n=10)组别剂量/m g#kg-1A模型去离子水0124?01183)香茹多糖10157?01521)金银花多糖8000156?01232)2000150?01201)正常-1106?0172注:与模型组比较:1)P<0105,2)P<0101;与正常组比较3)P< 01001(表7同)。
表7脏器指数结果(x?s,n=10)组别剂量/mg#kg-1胸腺指数/m g/10g脾脏指数/m g/10g正常-35175?1419754153?7195模型去离子水10144?31073)16167?21703)香茹多糖114176?418826188?31302)80010156?219020100?21791)20011182?313417117?3143血清溶血素值是体液免疫指标,表6中的数据可以看出:香菇多糖组与模型组有显著性差异且吸光度值有一定的回升,金银花多糖组各剂量组的吸光度值和香菇多糖组相当且与模型组有极显著性差异,表明金银花多糖具有提高体液免疫的活性。
脏器指数是非特异性免疫指标,表7显示,香菇多糖组和金银花多糖高剂量组对胸腺指标较模型组存在显著性差异。
说明金银花多糖高剂量对环磷酰胺致免疫低下的脏器有一定的修复作用。
3讨论本研究在单因素试验的基础上,以总糖的提取率为指标,通过正交试验优化了金银花多糖制备工艺。
方差分析表明,提取时间,提取温度为主要影响因素,具有显著性(P<0101),提取次数,溶剂对试验结果无显著性影响。
但金银花药材加水后体积膨胀,溶剂量减小,料液比不宜过小;同时从节约成本与操作的可行性角度综合考虑,最终确定最佳提取工艺为A2B3C2D2,即15倍量的水在温度为90e时回流提取2次,每次60m in。
文献报道多糖脱蛋白的常用方法为Sevag法、TCA法、酶法、酶法2Sevag法。
其中Sevag法较温和,是多糖脱蛋白的传统方法;TCA法适用于蛋白质含量较高的多糖,但对多糖的结构破坏较大;酶法专属性强,是目前普遍认为较好的脱蛋白方法;酶法2Sevag法由于具有试剂用量小、样品损耗少、快速等特点,应用也较为普遍。