实验七 维生素B1、B 2的定性实验
维生素B_1_B_2含量测定方法比较
［１６］ Ｊｅａｎ－Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅ Ｌｅ Ｂａｉｌ， Ｙｖｅｓ Ｃｈａｍｐａｖｉｅｒ， Ａｌｂｅｒｔ－Ｊｏｓｅ Ｃｈｕｌｉａ， ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ ｏｎ ａｒｏｍａｔａｓｅ， ３β ａｎｄ １７β－ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｈｕ－ ｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２０００， ６６（１４）： １２８１－ １２９１．
※分析检验
食品科学
2004, Vol. 25, No. 6 153
［１３］ Ｐａｕｌ Ｊ． Ｎｅｓｔｅｌ， Ｓｙｌｖｉａ Ｐｏｍｅｒｏｙ， Ｓａｌｌｙ Ｋａｙ， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｆｒｏｍ ｒｅｄ ｃｌｏｖｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｒｔｅｒｉａｌ ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｐｌａｓｍａ ｌｉｐｉｄｓ ｉｎ ｍｅｎｏｐａｕｓａｌ ｗｏｍｅｎ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉ－ ｃａｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ＆ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ， １９９９， ８４： ８９５－８９８．
［１７］ Ｇ Ｓ Ｐｏｐｅ， Ｐ Ｖ Ｅｌｃｏａｔｅ， Ｓｙｌｖｉａ Ａ， ｅｔ ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｏｅｓｔｒｏ－ ｇｅｎｉｃ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅ （ｂｉｏｃｈａｎｉｎ Ａ） ｆｒｏｍ ｒｅｄ ｃｌｏｖｅｒ［Ｊ］． Ｃｈｅｍｉｓ－ ｔｒｙ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ， １９５３， １０９２．
维生素b1片含量测定的方法验证
维生素B1在体内参与糖代谢，对维持神经系统正常 功能和防止脚气病有重要作用。
维生素B1的测定方法
荧光分光光度法
01
利用维生素B1在特定波长下的荧光特性进行定量分析。
高效液相色谱法
02
通过色谱柱将维生素B1与其他杂质分离，再通过紫外检测器进
行定量。
微生物法
03
利用含有维生素B1的微生物培养基培养微生物，通过测定微生
维生素B1片含量测 定的方法验证
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
确定维生素B1片的含量
目的
通过实验测定，确定维生素B1片 中维生素B1的含量，为生产质量 控制和药品监管提供依据。
方法
采用高效液相色谱法（HPLC）进 行测定，通过色谱柱分离、检测 器检测，计算峰面积并外标法定 量。
采用合适的统计分析方法，如平 均值、标准差、变异系数等，对 数据进行分析和比较。
实验误差分析
误差来源
分析实验过程中可能产生的误差来源，如称量误差、滴定误差、 读数误差等。
误差传递
根据误差来源，计算误差对最终结果的影响，并评估误差传递的 规律和特点。
误差控制
针对误差来源，采取相应的措施，如使用高精度天平、规范操作 流程等，以减小误差对结果的影响。
05
CATALOGUE
结论
实验结论总结
实验结果表明，采用高效液相色谱法测定维生素B1片 的含量是可行的，该方法具有较高的准确度和精密度
，能够满足药品质量控制的测定要求。
输标02入题
在实验过程中，我们发现维生素B1片在波长为 246nm处有最大吸收，因此选择该波长作为检测波长 较为合适。
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量
紫外分光光度法测定维生素B1片的含量一、实验目的1、掌握紫外分光光度法的测定原理；2、了解维生素B1片的含量测定方法；3、掌握溶液制备、仪器操作及数据处理方法。
二、实验原理维生素B1 （Thiamine）是维生素B群中十分重要的一种，对人体神经系统、消化系统、心脏以及肝脏的功能有着重要的影响。
现代医学认为缺乏维生素B1易引起多种神经系统和消化系统疾病，如多发性神经炎、骨骼肌炎、胆汁淤积等。
因此，测定维生素B1 的含量对维生素B1 的药品质量控制及医学研究具有重要的意义。
紫外分光光度法是一种比较常用的药物质量控制方法。
维生素B1 的主要吸收峰位于紫外波长区域，适合进行紫外分光光度法测定。
维生素B1 的紫外吸收峰位于约265nm处（ε=7.5×10^3～7.9×10^3L·mol^-1·cm^-1），故以此为测定波长。
按维生素B1的相对分子质量和吸光系数计算，摩尔吸光系数ε较小，因此，采用长程比对测定法可以有效地提高测定的精度和准确性。
三、实验步骤(一) 试样的制备称取维生素B1片约0.15g（准确称量），将其放在25mL量瓶中，用0.1mol/L的盐酸溶液溶解，摇均并用0.1mol/L盐酸溶液定容至刻度。
(二) 光度计的操作开启UV-2550型紫外分光光度计的电源，按照使用说明将紫外探测器调至265nm，并进行光谱校验。
进入光度计工作界面，将石英比色皿放入样品室，调节光程，读取空白吸光度。
取紫外分光光度计检测轨道上的纯水作为空白，用0.1mol/L盐酸溶液调整到约pH1.5。
(三) 具体测定操作1、测定工作会进行自动计算，记录吸光度A1。
2、再取一组相同体积的样品溶液，重复第1步操作，记录吸光度A2。
3、若A1、A2之间差异大于0.1，则须重采样求数值，并重复第1、2步操作。
4、根据空白吸光度及上述测定步骤所得的吸光度，计算维生素B1 的含量。
四、实验结果及分析按照上述实验操作，测得A1=0.83，A2=0.85，需进行差异校正，先计算中和点pH：Kb=1.20×10^-6pKb=5.92pH=pKb-log([B]+[BH+])[OH-]=[B][OH-]^2/(C-B)=Kb代入数值得[B]=0.026 mol/LpOH=pKa+log([BH+]/[B])pH=14-pOH从而可得pH=1.5+4.72=6.22校正值：K=（εdA/dl）/X式中X系维生素B1 的摩尔质量，则需要通过水合物计算出来，其分子量为328.81。
维生素B1的测定
微生物测定法
总结词
微生物测定法是一种基于微生物生长代谢的维生素B1测定方法，通过观察特定 微生物在含有或不含有维生素B1的培养基中生长情况，来计算维生素B1的含 量。
详细描述
微生物测定法具有操作简便、准确度高和特异性好等优点，适用于食品、饲料 和生物样品中维生素B1的测定。该方法需要使用特定的微生物和培养基，并需 要严格控制实验条件。
红外光谱法测定维生素B
总结词
红外光谱法是一种非破坏性、无损、无污染的测定方法，能够提供样品的分子结构和组成信息，适用 于维生素B1的定性分析。
详细描述
维生素B1分子中的特定化学键在红外光区有特征吸收峰，通过测量样品的红外光谱图，可以确定维生 素B1的存在。该方法具有较高的专一性和准确性，但需要较复杂的仪器设备和操作技术。
微生物测定法测定维生素B
总结词
微生物测定法是一种基于微生物生长代谢与维生素B1关系的测定方法，适用于食品和 生物样品中维生素B1的测定。
详细描述
某些微生物的生长代谢需要维生素B1作为辅酶或生长因子，通过培养这些微生物并测 量其生长曲线或代谢产物，可以推算出样品中维生素B1的含量。该方法具有较高的灵
维生素B1的测定
目录
• 引言 • 维生素B1的检测技术 • 维生素B1的测定方法 • 实验操作与注意事项
01
引言
维生素B1的简介
维生素B1，也被称为抗脚气病 维生素，是一种水溶性维生素， 在人体内起着至关重要的作用。
它是由一个嘧啶环和一个噻唑 环通过亚甲基桥连接而成的， 属于一种含氨基的醇类物质。
。
紫外可见光谱法测定维生素B
总结词
紫外可见光谱法是一种简单、快速、准 确的测定方法，适用于维生素B1的定量 分析。
维生素B1的测定
3.净化
a.脱脂棉铺于盐基交换管的交换 柱底部，再加约1g活性人造浮 石使之达到交换柱的1/3高度。
b.用移液管加入提取液20~60ml。
c.加入约10ml热蒸馏水冲洗交换 柱，弃去洗液，重复三次。
d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此 液于25ml刻度试管内。凉至室 温，用250g/L酸性Kcl定容至 25ml，即为净化液。
做空白试验
重复上述操作，将20ml维生素B1标准使用液加入盐 基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。
4.氧化
将5ml试样净 化液分别加入 A、B两个反 应瓶； 同时将5ml标 准净化液分别 加入A1、B1 两个反应瓶中。
Maizel-Gerson 反应瓶
氧化流程
A、A1瓶 15%NaO H (3 ml)溶液振摇
操作步骤
1.样品处理
样品采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻 保存，用时将其解冻后使用。
2.样品提取
样品（2.00 ~ 10.00g试样）0.1或0.3mol/L盐酸加热 样品水解2mol/ L乙酸钠 调节PH为4.（5 以溴甲酚绿为外指示剂） 按比例加入淀粉酶和 蛋白酶 定容至100ml 混匀过滤提取液
谢谢！
维生素B1是人体能量代谢，特别是糖代谢所必需的，故 人体对它的需要量通常与摄取的热量有关。当人体的能量主 要来源于糖类时，维生素B1的需要量最大。
成人的建议每日摄取量是1．0～1．5mg。妊娠、哺乳 期每天摄取1．5～1．6mg；在生病、生活紧张、接受手术 时，要增加必要用量。
来源简介
维生素B1广泛存在于天然食物中，含量较丰富的有：动物内 脏(肝、心及肾)、肉类、豆类、花生及精细加工的谷物类。 谷物类是我国人民的主食，也是维生素B1的主要来源。但过 分去除麸皮与糠，维生素B1损失很多，烹调加碱可使维生素 B1损失增高。
维生素B1、B2的定性实验
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与讨论 • 实验总结与建议
01 实验目的
了解维生素B1、B2的性质
1
了解维生素B1、B2的物理性质，如溶解性、颜色 等。
2
了解维生素B1、B2的化学性质，如酸碱性、氧化 还原性等。
3
了解维生素B1、B2的生物学活性及其在人体内的 生理功能。
学习定性实验的方法
学习如何设计实验方 案，选择合适的实验 材料和设备。
学习如何观察实验现 象，记录实验数据， 分析实验结果。
学习如何进行实验操 作，包括样品处理、 试剂配制、实验步骤 等。
掌握维生素B1、B2的检测技术
掌握维生素B1、B2的检测方法， 如荧光法、色谱法、生化法等。
掌握各种检测方法的原理、操作 步骤和注意事项。
黄色针状结晶
维生素B2在结晶状态下也呈黄色针状，同样具有 特定的光学性质。
旋光性
维生素B2同样具有旋光性，可被旋光仪检测。
氧化还原性质
维生素B2具有氧化还原性，易被氧化剂氧化，可 在还原环境中稳定存在。
定性实验的原理
利用维生素B1和维生素B2的化学性质进行检测
通过观察反应现象，如颜色变化、沉淀生成等，判断是否存在维生素B1或维生素B2。
通过观察颜色变化来判断是否存在维生素B1和B2。
02
实验步骤
按照实验指导书进行操作，包括样品的提取、试剂的配置、颜色变化的
观察等步骤。
03
实验结果
通过观察颜色变化，判断样品中是否存在维生素B1和B2。
对实验的建议和改进
试剂纯度
操作规范
建议使用高纯度的试剂， 以降低实验误差。
维生素B1、B2的测定方法比较
维生素B1、B2的测定方法比较比较维生素B1、B2含量测定方法。
方法：采用紫外分光光度法中三种不同方法测定维生素B1、B2含量。
结果：1、按 E 值测标示量维生素B1：98.3 ± 2.51，维生素B2：94.8 ±0.308，复合维生素B片中维生素B1:102.1± 1.70，维生素B1平均回收率为100.4%，RSD为2.13%(n=6)，维生素B2平均回收率为94.9%，RSD为6.5%(n=6)。
2、标准曲线法维生素B1、B2浓度分别在3～18、1～8μg/ml范围内，均呈良好线性关系，标示量分别为：102.9±0.661，98.4±0.152。
3、双波长法测维生素B1标示量：94.2±1.97。
结论：三种方法用于维生素B1、B2含量测定，操作简便、快速、准确，精密度好。
近年来对维生素B1、B2测定方法报道较多，如高效液相色谱法[1,2]、流动注射化学发光法[3]、多元线性分光光度法[4]、荧光分光光度法[5]、毛细管电泳电化学法[6]、氧瓶燃烧电位滴定法[7]等。
这些方法操作麻烦、时间较长。
本文采用紫外分光光度法中按 E 值测定法、标准曲线法和双波长分光光度法，测定维生素B1、B2含量，并将三种方法进行比较。
三种方法均操作简便、快速、准确。
1 仪器和材料仪器：722型分光光度计DU-7紫外—可见分光光度计材料：维生素B1、B2对照品(购自Sigma 公司) ；维生素B1片(批号：20021202) 维生素B2片(批号：20021288-02)；复合维生素B片(批号：20021283-02)三种片剂均为昆明制药股份有限公司产品；冰醋酸、盐酸、氢氧化钠均为分析纯。
2 试验及结果2.1 维生素B1含量测定2.1.1 按E 值测定维生素B1标示量取本品 1 0 片，精密称取、研细，精密称取适量(约相当于维生素B125mg)，加盐酸(9 →1000)约70ml，振摇15min使之溶解，再加盐酸(9→1000)定容至100ml，摇匀，用干燥滤纸过滤，精密量取滤液5 m l，用盐西装盐酸(9 →1000)稀释至100ml，摇匀，扫描得最大吸收波长为246nm(图1)，在该波长处测定吸光度，按其吸收系数( )为421计算：A 为供试品在246nm 波长处测得的吸光度；D 为稀释倍数；W 为维生素B1片的平均片重；W样为称取的维生素B1片粉重；S标为标示量，测定结果(X ±SD)：98.3±2.51(n=7)。
实验_维生素B1片含量测定的方法验证
维生素B1片含量测定的方法验证实验原理●维生素B1又称盐酸硫胺（thiamine hydrochloride），化学名称为氯化4-甲基-3[(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)-甲基]-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐●性质●溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶●硫色素反应：●紫外吸收特性：Amax=246nm●与生物碱沉淀试剂反应●氯化物特性：特征性鉴别精密度试验●目的●检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可信程度1.要求●用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要在线性范围内●RSD < 2.0% ……仪器分析精密度试验（示例）信号值平均值RSD实验序号1 0.512 0.510 0.2%(<2.0%)2 0.5083 0.5114 0.5095 0.5106 0.509y = 8x + 0.136R 2 = 100.10.20.30.40.50.60.700.010.020.030.040.050.060.07C(mg/ml)A246重现性试验 ● 目的● 考察样品溶液制备方法的可靠程度 ● 要求● 同批样品按相同方法制备样品溶液，至少6份,浓度与信号值均要在线性范围内 ● RSD < 2.0% ……仪器分析重现性试验(示例)试验 序号 称样量 （g ） 测定值 （mg ） 含量 （mg/g ） 平均含量（ mg/g ）RSD （%） 1 0.5000 30.0 60.0 60.00.3% <2.0%2 ... ... ... 3 ... ... ... 4 ... ... ... 5 ... ... (6)………稳定性试验● 目的：● 考察样品溶液制备后多少时间内稳定 ● 要求● 要有一定的时间间隔，如：在0、15、30、45、60m i n 时间点分别测定样品的A 246；在0、1、2、4、8、12h 分别测定样品的峰面积。
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实验七维生素B
1、B
2
的定性实验
一、目的要求
进一步了解维生素B
1、B
2
的性质，掌握其定性检验方法。
二、实验原理
1．维生素B
1
属水溶性维生素，因含有硫及氨基，又名硫胺素，在植物性食物中分布极广，谷类种子表皮中含量更为丰富，麦麸、米糠和酵母均是维生素
B 1的良好来源。
维生素B
1
的定性鉴定反应主要有2个：
重氮苯磺酸反应在碳酸氢钠存在的碱性条件下，硫胺素可与重氮苯磺酸作
用产生红色，加入少量的甲醛，可使红色稳定。
本反应不灵敏，特异性低，但操作简单迅速。
反应可表示如下：
荧光反应硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化生成有蓝色荧光的物质—硫色素，溶于异丁醇中的硫色素显示深蓝色的荧光，在紫外光下更为显著。
此反应灵敏，特异性高，也可用于定量测定。
反应如下：
2．维生素B
2
也属水溶性维生素，又名核黄素，其乙醇中性溶液和水溶液呈黄色，在中性或酸性溶液中经光照射自身可产生黄绿色荧光，在稀溶液中荧光的强度与核黄素的浓度成正比。
核黄素能被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，失去荧光。
但此氢化物在空气中易被重新氧化，恢复荧光。
反应如下：
三、实验器材
试管和试管架、吸量管（1mL、2 mL）、漏斗、滤纸。
米糠
四、实验试剂
1．0.2%硫胺素溶液
2．30 μg / mL核黄素溶液
3．1% 铁氰化钾溶液
4．30%氢氧化钠溶液
5．2.5%亚硫酸氢钠溶液（用2%碳酸钠作溶剂）
6．异丁醇
7．0.2 mol/L硫酸溶液
8．碳酸氢钠碱性溶液：取氢氧化钠20 g溶于600 mL蒸馏水中，加碳酸氢钠28.8 g，混匀后，用水稀释至1 000 mL。
9．重氮试剂：
溶液A：将对－氨基苯磺酸1 g溶解于15 mL浓盐酸中，然后加水稀释至100 mL。
溶液B：将亚硝酸钠0.5 g溶解于水中，稀释到100 mL。
现用现配。
需用时，将3 mL溶液B加到100 mL溶液A中，混匀即得重氮试剂，在冰浴中保存，至少15 min后方可使用。
此溶液配好后，存放时间不能超过24 h。
五、操作步骤
的定性
(一)维生素B
1
1．重氮化反应取米糠1 g置试管中，加0.2 mol/L硫酸溶液5 mL，用力振荡，提取硫胺素。
放置10 min后，用滤纸过滤。
取滤液1 mL，加入碳酸氢钠碱性溶液1.5 mL，摇匀后，在10 min内观察深红色的出现。
2．荧光反应取1支试管加入硫胺素溶液2 mL、铁氰化钾溶液2 mL、30%氢氧化钠溶液1 mL充分混匀后，再加入2 mL异丁醇，充分振荡，待两相分开后，仔细观察上层异丁醇溶液中的蓝色荧光。
(二)维生素B
的定性
2
取2支试管，各加入核黄素溶液1 mL，观察其黄绿色荧光。
在一管中加入5～10滴亚硫酸氢钠溶液，比较两管的荧光。
充分摇动后，再观察两管的荧光变化。
紫外灯下观察，现象更加明显。
六、问题与思考
1．硫胺素的荧光反应为什么要在碱性条件下进行？
2．在实验中将核黄素还原成无色的二氢化物，还可以使用什么试剂？。