PCR室内质量控制标准操作程序
PCR正式标准操作文件(SOP)
浙江省X X 医院临床基因扩增检验实验室管理程序和标准操作程序(SOP)起草人：XXX批准人：XXX起草日期：2003年2月10号目录1.目录---------------------------------------------------12.C001 手套使用及左右手分开原则 ------------------------ 32. C002 实验耗材的质检方法--------------------------------53. C003 试剂的质检操作程序--------------------------------64. C004 实验室常用溶液的配制标准程序----------------------75. C005 标本的验收和保存标准程序--------------------------96. C006 样品编号操作程序---------------------------------127. C007 实验台摆放规范-----------------------------------158. C008 样品处理操作程序---------------------------------179. C009 核酸扩增荧光检测实验和结果分析标准操作程序-------1910. C010 实验有效性判断----------------------------------2311. C011 实验室室内质控标准操作程序----------------------2512. C012 实验室化学试剂及废弃物处理，生物防护措施--------3013. I001 LightCycler的使用、维护和校准操作程序-----------3314. I002 加样器使用、维护和校准的标准操作程序-------------3715. I003 离心机的使用、维护和校准操作程序----------------4216. I004 超净工作台使用和维护的标准操作程序--------------4517. I005恒温水浴箱使用和维护的标准操作程序---------------4618. I006 旋涡振荡器使用和维护的标准操作程序--------------4819. I007 冰箱使用和维护的标准操作程序--------------------4920. I008 仪器故障时的标记、放置的标准操作程序------------5021. I009 检验结果报告标准操作程序------------------------51１22. I010 实验室清洁标准操作程序--------------------------5323. M001核酸扩增荧光检测实验室规章制度-------------------5424. M002 内务制度----------------------------------------5725. M003 实验室人员的培训程序----------------------------6026. M004 实验人员行为规范--------------------------------6127. M005 抱怨处理----------------------------------------6328. M006 记录管理文件------------------------------------65２1 目的核酸扩增荧光检测实验室中，实验人员常要接触各种传染性标本（如乙肝病毒、结核杆菌等），作为一项最基本的防护措施，实验过程中必须戴手套操作，这是要遵守的原则。
PCR实验室标准操作规程SOP
一、基因扩增检验实验室基本情况 （一） 实验室所属法人单位名称：________________________________________________
地址：__________________________________________________________________ 邮编：_____________________________________ 法定代表人：_____________________实验室负责人：_________________________ 联系人：_________________________email：_________________________________ 电话：___________________________传真：__________________________________ （二） 实验室总人数：__________________名 （其中初级职称人数人员___名，占____；中级职称人数人员_____名，占______。）
质量手册
一、 管理性程序： 程序文件的管理和维护 ……………………………………………………………………… 1 PCR 实验室管理制度 …………………………………………………………………………… 2 生物安全准则 ………………………………………………………………………………… 4 实验室生物防护措施 …………………………………………………………………………… 7 实验室传染性废弃物管理制度 ………………………………………………………………… 9 PCR 实验室的人员配置及管理制度 …………………………………………………… 12 PCR 实验室的人员培训计划及措施 …………………………………………………………… 14 PCR 实验记录管理制度 ………………………………………………………………………… 15 惠安县医院 PCR 检验报告单保密制度 ……………………………………………………… 17 检验结果的传送管理制度 ……………………………………………………………………… 19 实验室的清洁制度 ……………………………………………………………………………… 20 化学试剂的管理程序 …………………………………………………………………………… 22 实验室消耗品购买、验收和贮存程序 ………………………………………………………… 23 新项目审批程序 …………………………………………………………………………………… 25 仪器设备的管理制度 …………………………………………………………………………… 26 仪器设备的使用制度 …………………………………………………………………………… 28 仪器设备的标准操作制度 ……………………………………………………………………… 29 仪器设备的维护保养程序和制度 ……………………………………………………………… 31 仪器设备的校准制度 …………………………………………………………………………… 34 仪器设备发生故障的应急处理制度 ………………………………………………………… 35 PCR 检测的标本管理制度 …………………………………………………………………… 36
PCR实验室试剂的质检标准操作程序
PCR实验室试剂的质检标准操作程序1.目的：保证每批用于临床实验的试剂的质量良好，符合要求。
2.适用范围：各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂（HBV、HCV、HPV、CT）。
3.负责人：操作人：4.程序：4. 1收到试剂后，目测试剂是否处在冻存状态。
4. 2核对试剂品种和数量并检查包装：外包装（厂名厂址、、批准文号、批号和有效期等）;内包装（试剂瓶完整性、试剂配备品种完整性、使用说明书有否等）。
4. 3及时将试剂转入-20.。
冰箱保存。
将上述检测核对情况在记录本上登记。
4. 4最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时，按如下要求对新批号试剂进行效验实验。
4. 5效验实验：4. 5. 1要求设置：空白对照、阴性对照、阳性对照、室内质控各一，阳性标准品梯度（104、105、106、108）。
4. 5. 2出现如下情况中任何一种的，判断为试剂不合格，不能用于临床检测：a）空白对照出现扩增。
如扩增曲线CT值大于25，需重复实验确证试剂污染。
b）阳性对照和阳性标准品均未检出，或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降，表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。
4. 5. 3阳性对照未检出，阳性标准品检测正常，提示样品提取液可能存在问题。
重复新旧提取液阳性对照实验，确定提取液失效问题。
更换提取液后该批试剂方可使用。
4. 5. 4空白对照无扩增，阴性对照有扩增，排除其他污染可能性后，提取液存在污染可能。
单独用提取液点样上机，出现扩增，需更换提取液后方可使用该批试剂。
4. 5. 5阳性对照检出，阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大5个循环以上。
提示阳性标准品存在问题。
更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。
4. 5. 6空白对照、阴性对照无扩增，阳性对照正常检出，阳性标准品导出的标准曲线之斜率（-2.9〜-3.9）、截距（26〜34）、相关性（-0.99）均在使用范围内，表明该批试剂良好，可以投入临床使用。
pcr实验室标准
pcr实验室标准PCR实验室标准。
PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，广泛应用于基因克隆、基因表达分析、疾病诊断等领域。
在PCR实验室中，严格遵循一系列标准操作程序对实验室环境、试剂、设备和操作人员进行管理，对PCR实验的准确性和可靠性至关重要。
本文将介绍PCR实验室的标准操作流程，帮助实验室工作人员规范实验操作，提高实验效率和结果可靠性。
实验室环境管理。
PCR实验室应具备良好的实验环境，包括洁净、无菌、无尘、无霉、无细菌等特点。
实验室内空气应保持流通，避免气味、异物等对实验产生干扰。
实验室内的工作台面、仪器设备、试剂瓶等应定期进行清洁消毒，保持干净整洁。
试剂管理。
PCR实验室应建立完善的试剂管理制度，对试剂的储存、使用、保管和报废进行严格管理。
试剂的储存温度和有效期应进行标注，避免使用过期试剂进行实验。
在使用试剂时，应按照操作规程准确称量、混合和稀释，避免试剂误用或交叉污染。
设备管理。
PCR实验室的设备应定期进行检测和维护，确保设备的正常运行和准确性。
在使用设备前，应进行预热、平衡和校准，避免设备误差对实验结果产生影响。
实验室应建立设备使用记录，及时发现设备故障并进行维修或更换。
操作人员管理。
PCR实验室的操作人员应接受相关的培训和考核，熟悉实验操作流程和安全注意事项。
在进行实验操作时，应严格按照操作规程进行，避免个人操作失误对实验结果产生影响。
操作人员应穿戴实验服、手套、口罩等个人防护用品，避免人为污染对实验产生影响。
实验操作流程。
PCR实验操作流程包括样品处理、反应体系配置、PCR扩增、扩增产物分析等步骤。
在进行实验操作时，应按照标准操作程序进行，避免操作失误对实验结果产生影响。
在每一步操作后，应及时记录实验数据和结果，以备后续分析和验证。
实验结果分析。
PCR实验结果的分析应准确、可靠、重复性好。
在进行实验结果分析时，应对实验数据进行统计和比对，排除实验误差和干扰因素，确保实验结果的准确性和可靠性。
pcr质量控制流程
pcr质量控制流程PCR (Polymerase Chain Reaction) is a powerful technique used in molecular biology to amplify a single or a few copies of a piece of DNA across several orders of magnitude, generating thousands to millions of copies of a particular DNA sequence. This process involves a series of temperature changes and enzymatic reactions to replicate DNA segments in vitro. PCR is widely used in various applications, including disease diagnosis, genetic testing, forensic analysis, and research. As the quality of PCR results heavily depends on various factors, it is crucial to have a robust quality control process in place to ensure accurate and reliable outcomes.PCR质控流程是确保PCR实验结果准确可靠的关键步骤。
PCR技术的广泛应用使其在医学、科研和法医领域中发挥着重要作用。
然而，PCR的质量受到多种因素的影响，如引物设计、反应条件、反应体系、环境因素等。
因此，建立完善的PCR质控流程至关重要，以确保实验结果的准确性和可靠性。
One of the essential steps in PCR quality control is the use of positive and negative controls. Positive controls contain known quantities of target DNA to confirm the presence of amplifiable DNA in thesamples. On the other hand, negative controls are used to detect contamination or false-positive results. By including these controls in each PCR run, researchers can monitor the efficiency and specificity of the amplification process, thus ensuring the reliability of the results.在PCR质控过程中，使用阳性和阴性对照是至关重要的步骤。
PCR实验室新冠室内质控操作程序
1.目的指导室内质控工作，监测测定过程的变异，使精密度控制在一定范围内，并了解准确度的变化趋势。
2.范围适用于新冠核酸检测实验。
3.职责实验室负责人负责负责质量控制程序制定，专业组长负责具体实施。
4.内容室内质量控制是由实验室技术人员采用一系列统计学的方法，连续评价本实验室测定工作的可靠程度，判断检验报告是否可发出的整个过程。
本科室以室间质评评价界线（靶值±0.4对数值）作为允许总误差TEa，重复性精密度<3/5TEa，中间精密度<4/5Tea。
4.1 开展室内质量控制前的准备工作4.1.1 培训工作人员：在开展质控前，每个实验室工作人员都应对质控的重要性，基础知识，一般方法有较充分的了解，并在操作过程中不断进行培训和提高。
4.1.2 建立标准操作规程：做好质控需要有一套完整的标准操作规程做保障。
如仪器的使用、维护操作规程，试剂、质控品、校准品等的使用操作规程等。
4.1.3 仪器的检定与校准：对测定临床样本的各类仪器要按一定要求进行校准，校准时要选择合适的标准品，如有可能，校准品应能溯源到参考方法或参考物质。
4.1.4 质控品：每批检测至少有1份弱阳性质控品，购买第三方质控品，通常为检出限的1.5-3倍。
3份阴性质控品，可用生理盐水。
4.1.5 质控品的保存：按说明书规定保存在合适的条件。
4.2 室内质量控制的方法4.2.1 每批检测设置1份弱阳性质控品，为检出限的1.5-3倍。
3份阴性质控品，用生理盐水。
质控品随机放在临床标本中，参与从提取到扩增的全过程，记录阳性质控品的CT值。
4.2.2 设定靶值、标准差:开始室内质量控制时，首先设定质控品的靶值，根据20批或更多独立批获得的至少20次质控测定结果（剔除超过3S的数据），计算出平均数、标准差，作为暂定靶值和标准差。
使用新批号的质控品应与当前使用的质控品一起进行平行测定，根据20批或更多独立批累积的靶值。
4.2.3质控规则：4.2.3.1阳性质控样本：4.2.3.1.1 12S警告规则:一个质控测定值超出均值±2s控制限。
PCR实验室室间质评管理程序
1.目的室间质量评价（EQA）也被称作能力验证（PT），它既能考察本实验室结果的准确性，检查实验室室内质控的质量，同时还能了解自己实验室与其他实验室之间的差异。
通过实验室之间的比对来判定实验室的检测能力。
2.范围卫健委临检中心室间质评、四川省临检中心室间质评。
3.职责实验室负责人指定人员负责与卫健委、省临检中心联系，申请参加项目，要求及时发放质控物，专业组组长负责安排室间质评活动，及时将卫健委、省临检中心的质控物进行测定、上报；结果回来后及时总结室间质评结果。
4.室间质评程序4.1 PT计划与组织：专业组组长计划第二年参加室间质评的项目，以及未参加室间质评项目的替代方案，填写《室间质评计划表》里，交由实验室主任审核，由实验室主任指定人员在上报截止日期之前统一上报相应组织。
4.2 质控品的接收和验收：收到质控品后由专业组组长或指定相关人员根据其相关说明对质控品的数量、批号、包装进行验收并登记《室间质评样本处理记录表》，如有不符样本（遗漏、重号或破损的情况）及时与卫健委、省临检中心联系。
4.3 质控品保存:按照室间质评说明书要求妥善保存，并进行温度记录。
4.4 质控品检测：4.4.1 实验室按照室间质评样本说明书上的建议测定日期安排测定日期和人员独立完成检测。
4.4.2 室间质量评价样本应与常规工作放在一起做，技术人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂检测质控品，不能单独操作，应把它当作临床标本同样看待。
4.5 质评结果上报：4.5.1 按照室间质评样本说明书上的建议测定日期，及时测定，及时填写《室间质评标本处理记录》，并上报数据，检测结果须在截止日期前上报。
4.5.2 上报结果步骤：4.5.2.1 进入卫健委临床检验中心或四川省临床检验中心网站，登录科室账号。
4.5.2.2 进入主页，选择要上报的项目，根据系统提示及上报结果要求填写相关数据及资料，核对无误后，提交上报结果。
4.5.2.3 完成“质评试验上报”后，在“已上报数据”处查看上报数据及资料是否填报无误，及时填写《室间质评标本处理记录》，并整理原始记录和上报记录。
PCR实验室室间质量控制操作程序
PCR实验室室间质量控制操作程序
1．目的：室间质评（EQA）是实验室质量控制体系中重要部分，是保证患者检验结果和其报告的准确性和可靠性，以及各实验室
间结果的可比性的重要手段。
2．适用范围：卫生部或省临检中心下发的PCR室间质控血清检测。
3．负责人：操作人：
4．程序：
4.1质控标本的接收和验收：收到质控血清后由相关人员登记、签字，
根据质控标本的有关说明对血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20℃保存于标本制备区。
4.2 质控标本的检测按常规临床标本对待，若需要，检测前先根据说明对质控物进行复溶。
4.3室间质评样本必须按实验室常规工作进行，由进行常规工作的人
员测试，工作人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂，不得特殊对待。
检测结果须在截止日期前上报。
4.4实验室检测EQA样本的次数必须与常规检测病人样本的次数一样（即1次）。
4.5 EQA样本的检测在部或省临检中心规定的时间内进行，检测
结果的上报也必须在截止日期前，通过E-mail或挂号信寄出。
4.6室间质评的检测结果和反馈结果均记录于室间质评记录表，根据
反馈结果分析室间质评的状态，如有出控应查找原因，并采取相应的措施。
4.7 严禁与其它实验室交流室间质评的检测结果。
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PCR室内质量控制标准操作程序
1．目的：随时了解并控制实验室检测的精密度变化。
2．适用范围：核酸扩增荧光定量检测实验室。
3．负责人：操作人：
4．程序：
4．1血清质量控制品制备及操作
4．1．1质控品制备：
收集本室检测的临床样本，HBV DNA定量为106copies/ml 的样本混匀，并分装于0.5ml的离心管中，每支110µl，编号后（如Qb0201-n），-20℃保存。
4．1．2 操作：
每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测，记录此标本的检测结果；计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。
4．1．3如果使用商品化的质控品，按4．１．２要求执行。
4．2 室内质控图的使用方法
4．2．1 描点
a）图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。
对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不
变化。
只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。
b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病
人的标本同时检测。
将日期、检测结果和操作者如实记
录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对
应点，用直线将该点与前一天的点连接。
c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档
案。
4．2．2 图形分析
a）如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关
负责人，迅速查找原因。
必要时复测标本，然后方可发
出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记
录。
b）如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧
等规律变化，均应即使向有关负责人反映，并积极查找
原因。
但当天的检验结果一般可以发出。
4．2．3 通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源
a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性
的向上或向下改变。
这种变化往往是由于一个新的情况
引起的。
如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、
操作人员的变换等。
在找原因时，应重点注意“漂移”
前后发生了那些变动的因素。
b）趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的
准确度发生了渐渐地变化。
这种变化往往是由于一个逐
渐改变的因素造成的。
如质控血清的降解，试剂效价的
降低等。
c）连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6天以上
出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之
回复围绕在靶值随机分布的状态。
因为按照统计学原
理，由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。
连续
6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5％。
因此凡
出现连续6天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在
非随机误差因素。
如结果与靶值偏离并不太大，不会给
临床使用带来太大影响时，一般检验报告可以照常填
发。
d）其他规律变化：（周期性等）
4．2．4 通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源a）每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和
s与该批测定的X和s进行比较。
如果X发生了变化，
说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。
如果当
月s不同则表明检测的精密度发生了变化。
b）将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。
如果X逐月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。
如果各月份X基本一致而s逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。
c）在数年中，把每个月的CV和失控规律列成表，可用作检测质量的历史性回顾及趋势分析。
5. 本文涉及以下图表：
PCR室内质控记录表
室内质控图。