表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用课件
表观遗传学在肿瘤干细胞研究中的应用

表观遗传学在肿瘤干细胞研究中的应用肿瘤是一组异质性疾病,由多个细胞类型组成,随着肿瘤发生、进展和转移,这些细胞会逐渐转化成肿瘤干细胞(tumor-initiating cells, TICs)。
肿瘤干细胞具有自我更新和多向分化的能力,是肿瘤生长和转移的关键驱动力。
近年来,表观遗传学在肿瘤干细胞研究中的应用引起了广泛关注。
本文将介绍表观遗传学的基本概念、肿瘤干细胞的特征和表观遗传学在肿瘤干细胞研究中的应用。
一、表观遗传学的基本概念表观遗传学是研究基因表达调控机制的学科,其中表观遗传信息是指影响基因表达的非编码DNA序列信息。
这些信息包括DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA等。
表观遗传信息除了能够影响基因的表达,还能够影响DNA复制和修复、染色质结构和修饰等过程。
因此,它在多种疾病的发生和进展中都起到了至关重要的作用。
二、肿瘤干细胞的特征肿瘤干细胞是肿瘤组织中从正常组织细胞分化而来的干细胞,具有自我更新和多向分化能力,是肿瘤生成、进展和耐药的重要因素。
肿瘤干细胞具有以下特征:1.卓越的自我更新能力。
肿瘤干细胞能够进行无限次的自我更新,维持其存在和增殖。
2.多向分化能力。
肿瘤干细胞具有分化成各种细胞类型的能力,因此可以形成组成肿瘤的各种细胞类型。
3.抗癌药物耐药性。
肿瘤干细胞具有更强的抗癌药物耐药性,能够存活和繁殖在化疗或放疗的环境中。
4.微环境适应性。
肿瘤干细胞能够在多种微环境中生存和扩张,包括低氧环境和免疫选择环境。
三、表观遗传学在肿瘤干细胞研究中的应用主要是通过以下几个方面来实现:1.识别和鉴定肿瘤干细胞特异性表观遗传标记。
研究者可以通过对肿瘤干细胞和非干细胞的表观遗传信息进行比较,来寻找干细胞特异性的表观遗传标记。
2.研究肿瘤干细胞的自我更新和分化调控机制。
通过调节肿瘤干细胞特异性表观遗传标记的表达,研究者能够探究其自我更新和分化的调控机制,从而了解肿瘤干细胞的发生和发展机制。
3.研究肿瘤干细胞的耐药机制。
肿瘤表观遗传学ppt课件

• 在结构基因的调控区段,CpG二联核苷常常以成簇串联的形式排列。结 构基因5’端附近富含CpG二联核苷的区域称为CpG岛(CpG islands)。
• CpG岛是CG二核苷酸含量大于50%的区域。CpG岛通常分布在基因的启 动子区域。
CpG岛的甲基化会稳定核小体之间的紧密结合而抑制基 因的表达。
对基因表达控制的方式: (1)DNA 甲基化; (2)组蛋白修饰; (3)染色质重塑; (4)非编码RNA。
等4 种调控来。
DNA甲基化
DNA甲基化
DNA甲基化(DNA methylation)是研究得最清楚、 也 是最重要的表观遗传修饰形式,主要是基因组 DNA 上的胞嘧啶第5位碳原子和甲基间的共价结合,胞嘧 啶由此被修饰为5甲基胞嘧啶(5-methylcytosine, 5mC)。
没有DNA序列的改变或不能用DNA 序列变化来解释。
拉马克
1809年发表的《动物哲学》:用进废退这种后天获得 的性状是可以遗传的
表观遗传学变化具有可遗传性
Natt D, Rubin CJ, Wright D et al. Heritable genome-wide variation of gene expression and promoter methylation between wild and domesticated chickens. BMC genomics 2012;13:59.
DNA低甲基化 vs. 癌症
• 1. DNA低甲基化/去甲基化对癌症细胞发育 的作用:
– A. 产生染色体的不稳定性 – B. 激活转座元件 – C. 印记的缺失
• 2. 甲基化水平较低的DNA区域在有丝分裂 过程中容易发生重组,从而产生删除或者 移位,或者染色体重排
表观遗传学在肿瘤发生和进展中的作用

表观遗传学在肿瘤发生和进展中的作用表观遗传学(epigenetics)是一门研究基因表达和细胞命运调控的学科,它通过研究遗传物质之外细胞内部和外部环境对基因表达的调控机制,揭示了基因的表达是如何受到环境因素的影响。
近年来,随着先进技术的发展,我们对于表观遗传学在肿瘤发生和进展中的作用有了更深入的理解。
肿瘤是一类恶性疾病,其发生和进展的机制非常复杂,涉及许多遗传和表观遗传因素。
传统上,研究人员主要关注肿瘤发生和发展的遗传突变,如基因突变、染色体异常等。
然而,近年来的研究表明,表观遗传调控也在肿瘤的发生和进展中发挥着重要作用。
表观遗传调控主要涉及DNA甲基化和组蛋白修饰两种机制。
DNA甲基化是指在DNA分子中加入甲基基团,通过甲基化酶对基因组DNA进行甲基化修饰。
DNA甲基化在细胞命运决定、基因沉默、基因转录调控等方面发挥着重要作用。
在肿瘤中,DNA甲基化异常是常见现象。
许多肿瘤相关的基因和DNA修复机制的基因在肿瘤中发生异常的DNA甲基化,从而导致基因的异常表达,甚至基因沉默,进而促进肿瘤的发生和进展。
组蛋白修饰是另一种重要的表观遗传调控机制。
组蛋白是细胞核中最主要的蛋白质组分,可以通过翻译调节基因的转录活性。
组蛋白修饰包括甲基化、乙酰化、泛素化等,其中乙酰化修饰是最为常见的一种形式。
组蛋白乙酰化修饰能够促进染色质结构的松弛,改变 DNA的可及性,从而影响基因的转录活性。
在肿瘤中,许多组蛋白修饰酶的异常表达或功能缺陷与肿瘤的发生和进展密切相关。
例如,组蛋白乙酰转移酶P300的缺失会导致肿瘤抑制基因的沉默,从而促进肿瘤的发生。
此外,表观遗传修饰与肿瘤干细胞的特性也密切相关。
肿瘤干细胞是肿瘤中的一小部分细胞群体,具有自我更新和多向分化的能力。
它们在肿瘤的发生、重复和治疗抵抗中起着关键作用。
表观遗传调控能够改变肿瘤干细胞的命运调控途径和细胞命运标记物的表达,从而影响肿瘤干细胞的自我更新和分化能力。
研究发现,许多组蛋白修饰因子和 DNA 甲基化酶在调控肿瘤干细胞命运中发挥着重要作用。
表观遗传在肿瘤治疗中的应用研究

表观遗传在肿瘤治疗中的应用研究随着现代医学的不断发展,人们对于肿瘤的认知也在不断加深。
近年来,越来越多的研究表明,表观遗传学在肿瘤治疗中的应用研究具有重要的意义。
本文将从表观遗传学的概念、表观遗传与肿瘤的关系以及表观遗传在肿瘤治疗中的应用等方面进行探讨。
一、表观遗传学的概念表观遗传学是指影响基因表达而不改变DNA序列的基因表达调控机制。
它是指外显子基因表达和表观遗传修饰之间的关系。
表观遗传是DNA发生化学变化进而影响基因表达的重要因素。
表观遗传修饰对于基因表达具有重要的影响,其中包括DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA等。
二、表观遗传与肿瘤的关系众所周知,癌症是一种由基因突变或表达改变引起的疾病,因此表观遗传的异常对于肿瘤的形成具有重要的影响。
表观遗传异常可以影响某些肿瘤抑制基因和致癌基因的表达,从而导致肿瘤的发生。
以下是表观遗传与肿瘤的具体关系:1. DNA甲基化异常:DNA甲基化是一种表观遗传修饰形式,它是指在DNA序列上加上甲基基团,从而调节基因表达。
研究表明,DNA甲基化异常与肿瘤的发生密切相关。
肿瘤细胞中存在着大量的DNA甲基化异常,从而导致许多肿瘤抑制基因的失活和致癌基因的过度表达,这也是肿瘤形成的一个重要因素。
2. 组蛋白修饰异常:组蛋白修饰是一种影响染色质结构和功能的表观遗传修饰。
研究表明,组蛋白修饰异常在肿瘤的发生中也起着重要的作用。
肿瘤细胞中组蛋白修饰异常可以导致染色质结构的改变,进而影响基因的表达,从而诱导肿瘤的形成。
3. 非编码RNA异常:除了编码蛋白质的RNA外,还存在一类不编码蛋白质的RNA,它们被称为非编码RNA。
研究表明,非编码RNA在肿瘤中也发挥着重要的作用。
某些非编码RNA的异常表达与肿瘤的形成和发展密切相关,这种异常表达也会影响肿瘤抗药性的形成。
三、表观遗传在肿瘤治疗中的应用随着对表观遗传的研究逐渐加深,表观遗传在肿瘤治疗中的应用也变得越来越重要。
下面是几种表观遗传在肿瘤治疗中的应用研究:1. DNA甲基转移酶抑制剂:DNA甲基转移酶(DNMT)是负责DNA甲基化的关键酶。
表观遗传学研究在肿瘤治疗中的应用

表观遗传学研究在肿瘤治疗中的应用随着生物学研究的深入,表观遗传学作为一门新兴的分子生物学学科,成为了研究生物发育、分化以及疾病发生发展的重要领域之一。
表观遗传学研究的主要内容是通过对DNA表观修饰、组蛋白修饰、非编码RNA等各种表观遗传标记及其解读过程的研究,探索这些标记与基因表达、细胞命运等生物学现象之间的关联。
在人类疾病领域中,表观遗传学已经证实在肿瘤发生发展过程中起着重要的作用。
本文将就表观遗传学研究在肿瘤治疗中的应用进行探讨。
肿瘤发生与表观遗传标记的关联肿瘤细胞是一类具有突变基因、失调信号途径、不连续稳态等多种特征的细胞,肿瘤的发生、发展以及转移都是多种因素复杂作用的结果。
在肿瘤细胞中,表观遗传标记的变化是不可避免的,即在DNA序列不发生改变的情况下,某些特定的DNA序列上可能存在某些变化(如DNA甲基化、组蛋白修饰)影响细胞的基因表达、染色体稳定性、细胞命运等生物学现象,进而导致肿瘤发生。
这也导致了人们对肿瘤表观遗传学的广泛关注。
以全基因组分析技术研究表观遗传标记和癌症之间的关系,就发现了很多具有重要意义的发现。
例如,在DNA甲基化领域,胚胎发育和癌症发生过程中均存在巨大的DNA甲基化调整,揭示了DNA甲基化对人类发育和健康的影响。
另外,在组蛋白修饰领域,也发现了一些特定的组蛋白修饰如H3K27me3及H3K9me3涉及到肿瘤细胞命运的改变。
这些结果表明了表观遗传标记是与肿瘤发生、发展密切相关的。
因此,人们将其引入到肿瘤治疗的研究中,探索表观遗传学在临床肿瘤治疗中的应用前景。
表观遗传学和肿瘤治疗的关联现代医学的治疗策略基本上是围绕着用化疗、放疗和手术切除等手段杀死肿瘤细胞的方法,但是这些方法的通病是治愈率不高,复发率高,毒副作用大等问题。
由于表观遗传标记与肿瘤发生、发展之间的紧密联系,表观遗传学的研究在肿瘤治疗领域成为了前沿研究的热点。
下面我们从表观遗传学在肿瘤治疗中的应用方面进行探讨。
表观遗传学课件(带目录)

表观遗传学课件一、引言表观遗传学是研究基因表达调控机制的一门学科,它涉及到基因序列不发生变化,但基因表达却发生了可遗传的改变。
这种调控机制对于生物体的生长发育、细胞分化、疾病发生等过程具有重要作用。
本文将对表观遗传学的基本概念、调控机制及其在疾病中的应用进行详细阐述。
二、表观遗传学的基本概念1.基因表达调控:基因表达调控是指生物体通过一系列机制,控制基因在特定时间和空间的表达水平。
基因表达调控是生物体生长发育、细胞分化、环境适应等生命现象的基础。
2.表观遗传修饰:表观遗传修饰是指在基因的DNA序列不发生改变的情况下,通过DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑等机制调控基因表达的过程。
3.表观遗传学的研究内容:表观遗传学主要研究基因表达调控的分子机制,包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、非编码RNA调控等。
三、表观遗传学的调控机制1.DNA甲基化:DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶的催化下,将甲基基团转移至DNA分子的过程。
DNA甲基化通常发生在基因的启动子区域,抑制基因表达。
2.组蛋白修饰:组蛋白修饰是指在组蛋白分子上发生的一系列化学修饰,如乙酰化、磷酸化、甲基化等。
这些修饰可以改变组蛋白与DNA的结合状态,从而调控基因表达。
3.染色质重塑:染色质重塑是指染色质结构发生变化,使基因的表达状态发生改变的过程。
染色质重塑可以通过改变核小体结构、DNA甲基化、组蛋白修饰等方式实现。
4.非编码RNA调控:非编码RNA是指不具有编码蛋白质功能的RNA分子,包括miRNA、lncRNA、circRNA等。
这些RNA分子可以通过与mRNA结合、调控转录因子活性等方式调控基因表达。
四、表观遗传学在疾病中的应用1.癌症:表观遗传学在癌症研究中的应用主要涉及肿瘤发生、发展和治疗。
研究发现,癌细胞的表观遗传修饰模式发生改变,导致肿瘤相关基因的表达异常。
通过研究这些表观遗传修饰,可以为癌症的早期诊断、预后评估和治疗提供新靶点。
肿瘤与遗传PPT演示课件

肿瘤基因组学研究
全基因组测序
通过对肿瘤细胞全基因组进行测 序,发现肿瘤细胞中存在的基因
突变和染色体异常。
基因表达谱分析
通过对肿瘤细胞基因表达谱进行分 析,了解肿瘤细胞中基因表达的差 异和特点。
基因突变筛查
通过对特定基因进行突变筛查,发 现与肿瘤发生相关的突变基因,为 肿瘤的早期诊断和治疗提供依据。
遗传性肿瘤基因检测是通过检 测个体的基因突变,评估其患 肿瘤的风险。
基因检测可以帮助确定家族性 肿瘤综合征的基因突变类型, 为患者及家族成员提供针对性 的预防和治疗建议。
常见的遗传性肿瘤基因检测包 括BRCA1/2基因检测、结直肠 癌基因检测、乳腺癌基因检测 等。
遗传咨询与预防
遗传咨询是指专业医生为患者及家族成员提供关于遗传性肿瘤的知识、风险评估、 治疗方案和预防措施等方面的咨询。
未来研究方向与技术发展
未来肿瘤遗传学的研究方向包括深入了解肿瘤异质性、肿瘤进化与耐药性的机制,以及寻找 新的治疗靶点和策略。
技术发展方面,基因组学、蛋白质组学、表观遗传学等领域的新技术将为肿瘤遗传学研究提 供更多工具和方法,有助于更深入地揭示肿瘤的本质和发现新的治疗策略。
跨学科合作也是未来研究的重要方向,通过整合生物学、医学、化学等领域的知识和方法, 可以更全面地了解肿瘤的本质和开发更有效的治疗方法。
肿瘤进化与耐药性
肿瘤进化是指肿瘤在生长和扩散过程中, 不断适应环境变化,产生新的变异和进
化。
耐药性是指肿瘤细胞对治疗药物产生抵 抗,导致治疗失败。耐药性产生的原因 包括基因突变、细胞凋亡机制的改变、
药物代谢和排泄的改变等。
了解肿瘤进化和耐药性的机制,有助于 预测肿瘤的发展趋势和制定个性化的治
表观遗传学和肿瘤课件

06
展望
表观遗传学在肿瘤研究中的未来方向
深入研究表观遗传学机制
随着表观遗传学研究的深入,未来将进一步揭示肿瘤发生 发展的表观遗传学机制,为肿瘤的预防、诊断和治疗提供 更多理论依据。
开发新型表观遗传学药物
基于对表观遗传学机制的深入理解,未来将开发出更多针 对肿瘤的表观遗传学药物,为肿瘤治疗提供新的治疗策略。
要点二
免疫细胞的表观遗传学调控
表观遗传学机制可以调控肿瘤抗原的表达,影响免疫细胞 对肿瘤细胞的识别和攻击。通过表观遗传学手段调控肿瘤 抗原的表达,可以提高免疫治疗的效果。
表观遗传学机制可以影响免疫细胞的发育和功能,从而影 响免疫治疗的效果。通过表观遗传学手段调控免疫细胞的 发育和功能,可以提高免疫治疗的疗效和持久性。
此,表观遗传学在肿瘤的诊断、治疗和预后评估等方面具有重要意义。
02
表观遗传学与肿瘤的发生
DNA甲基化与肿瘤
高甲基化
在肿瘤细胞中,某些基因由于 DNA高甲基化而沉默,如抑癌基 因。这会导致细胞增殖失控和肿 瘤发生。
低甲基化
某些基因的DNA低甲基化可导致 基因过度表达,增加肿瘤风险。 低甲基化还与染色体重塑和基因 组不稳定有关,促进肿瘤进展。
跨学科合作与整合
表观遗传学与肿瘤学、分子生物学、生物信息学等多个学 科密切相关,未来将加强跨学科的合作与整合,推动表观 遗传学在肿瘤研究中的应用。
表观遗传学在肿瘤临床实践中的前景
个体化治疗
预防与筛查
基于表观遗传学的检测和诊断方法, 未来将实现肿瘤的个体化治疗,根据 患者的表观遗传学特征制定针对性的 治疗方案。
通过研究表观遗传学在肿瘤发生发展 中的作用,未来将开发出更有效的肿 瘤预防和筛查方法,降低肿瘤的发病 率和死亡率。
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表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
3
DNA甲基化
胞嘧啶
DNA甲基转移酶
5-甲基胞嘧啶
S-腺苷甲硫氨酸
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用 S-腺苷高半胱氨酸
4
正常人的甲基化状态
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
5
GRØNBÆ K,APMIS 2007:115
组蛋白乙酰化与去乙酰化
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
血浆
CDKN2A(INK4A)
5/35(14%)
N/A
血浆
CDKN2A(INK4A)
诊断标志(诊断率)
预后标志
p15INK4B (>70%)、SOCS1 (>50%)
p15INK4B (>50%)
DAPK (>80%) 、 SHP1 (~100%) 、 DBC1 (~ 100%)
SYK、BOB.1/ORF
LHX6(>60%)、RASSF1A(>80%) 、 DAPK(>70%) 、 RARβ(>70%)
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
8
异常的表观遗传修饰会导致肿 瘤发生
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
9
Galm, blood Review 2006:20
异常的表观遗传修饰会导致肿瘤 发生
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
10
Vaissie`re Mutation Research 2008:659
APC(>90%)、TIMP3(>50%)
p15INK4B、CDH1 p15INK4B、CDH1、HIC1 LMNA 、 MGMT
RPRM、MGMT、MINT31 APC、TIMP3
CDH1(>50%) SST(>80%) p16INK4A(>50%)、RASSF1A(>80%) CDH1(>70%) 、RASSF1A(>80%)
例:MGMT甲基化变化可
化可作为神经胶质
作为神经胶质瘤患者替 莫唑胺治疗效果的评价 标准
瘤患者替莫唑胺治 疗效果的评价标准
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
15
Esteller, N Engl J Med 2008:358
甲基化检测的优点
取材方便:尿沉淀,血浆,痰,血液,等
检测的是DNA,稳定不易降解。
表观遗传学修饰在肿瘤 诊断和治疗中的应用
邱 林 MD.PhD
哈尔滨血液病肿瘤研究所
.
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
1
遗传学在肿瘤诊断和治 疗中的应用
Ph染色体
RT-PCR FISH 伊马替尼
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
2
表观遗传学
表观遗传学
在不改变基因序列的基础上,通过基因 修饰及蛋白质与蛋白质、DNA和其他分子 的相互作用而影响和调节基因的表达和功 能,这种影响是可遗传的,也是可逆的。 主要包括:基因组印记、DNA甲基化、组 蛋白修饰和RNA干扰等。
肿瘤
早期诊断
检测血清或组织液中 CpG岛的超甲基化
例:尿液中GSTP1的 甲基化可用于前列腺 癌的诊断
治疗
预后
通过去甲基化或去乙酰 化转移酶抑制剂,间挨 计划CpG岛超甲基化可作
CpG岛超甲基化可作 为化疗、激素治疗 和靶向治疗疗效评
为化疗、激素治疗和靶
价的标准
向治疗疗效评价的标准
例:MGMT甲基化变
正常组织与肿瘤组织的甲基化有质区别, 而非量的区别,检测具有高度的特异性和 敏感性
抑癌基因的甲基化早于肿瘤的发生,适合 早期诊断。
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
16
DNA甲基化与肿瘤诊断及预后
肿瘤类型
AML MDS 非何杰金氏淋巴瘤
何杰金氏淋巴瘤 头颈癌
食管癌 胃癌 大肠癌 肝癌 乳腺癌 非小细胞肺癌 膀胱癌 前列腺癌
6
Kim,Epigenetic 2006:1
异常的表观遗传修饰会导致 肿瘤发生
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
7
Vaissie`re Mutation Research 659 (2008)
异常的表观遗传修饰会导致肿瘤
发生
抑癌基因 沉默
调控基因表达
原癌基因 活化
DNA甲基化
组蛋白修饰
表观遗传学修饰
CDH1 p16INK4A和p14ARF
CDH1
PCDH20 (>50%) RUNX3 (>70%)
FHIT、PCDH20、TSLC1/IGSF4 CDH1、 FHIT、TIMP3
GSTP1(>70%)、APC(>70%)、
GSTP1、APC
PTGS2(>70%)
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
肿瘤细胞中常见异常甲基化导 致基因沉默
Pathway 细胞周期
Genes Rb, p14, p15, p16, p73
细胞侵润和黏附
E-cadherin, APC, TIMP-3, VHL
凋亡调节
DAP kinase 1, caspase 8, TMS-1
DNA 损伤修复
O6MGMT, hMLH1, BRCA1, GSTπ
+ + + + + + + + + + + +
表观遗传学改变
基因组低甲基化 miRNAs高甲基化 组蛋白修饰异常
+
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+ 表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
+ 14
GRØNBÆ K,APMIS 2007:115
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治 疗中的应用
12
表观遗传学与癌症的进展
癌症
正常上皮细胞
发育异常
原位癌
全基因组甲基化水平
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
转移癌
CpG岛甲基1化3 水平 组蛋白修饰失平衡
肿瘤中异常的表观遗传学改变
肿瘤类型
结肠癌 乳腺癌 肺癌 神经胶质瘤 白血病 淋巴瘤 膀胱癌 肾癌 前列腺癌 食管癌 胃癌 肝癌
CpG岛高甲基化
生长因子
RARβ2, CRBP1, SOCS-1, SOCS-3,
ER
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
11
Galm, blood Review 2005
DNA的甲基化的检测
1. 甲基化芯片
2. 甲基化特异 性PCR
3. 亚硫酸氢盐 序列分析
4. 限制性酶切 扫描技术
表观遗传学修饰在肿瘤诊断和治疗中的应用
17
GRØNBÆ K,APMIS 2007:115
检测血浆和血清中DNA甲基化标志物
疾病 DNA来源
标志
敏感度
特异性
膀胱癌
乳腺癌 结肠癌 胃癌 肝癌 肺癌
血浆 检测CDK血N2A浆(AR和F) 血清中DNA甲1基3/15化(87标%) 志N物/A
血清
CDKN2A(INK4A)
12/14(86%) 31/31(100%)