promegaDNA组织提取试剂盒
分子技术耗材试剂盒种类
分子技术耗材试剂盒种类1. DNA提取试剂盒：DNA提取是分子生物学中的一个重要步骤，用于从细胞或组织中提取纯化DNA。
DNA提取试剂盒包括DNA裂解试剂、蛋白酶K、DNA纯化柱等，常见的品牌有Qiagen、Omega等。
2. RNA提取试剂盒：RNA提取试剂盒用于从细胞或组织中提取纯化RNA。
RNA提取试剂盒包括RNA裂解试剂、DNase、RNA纯化柱等，常见的品牌有Qiagen、Thermo Fisher Scientific等。
3. 反转录试剂盒：反转录试剂盒用于将RNA转录成cDNA，常见的品牌有Thermo Fisher Scientific、Promega等。
4. 荧光定量PCR试剂盒：荧光定量PCR试剂盒用于进行荧光定量PCR（qPCR），可用于分析基因表达水平、检测病原体等。
常见的品牌有Thermo Fisher Scientific、Roche、Bio-Rad等。
5. 真核生物基因组DNA扩增试剂盒：真核生物基因组DNA扩增试剂盒用于扩增真核生物基因组DNA。
常见的品牌有Takara、Thermo Fisher Scientific等。
6. 质粒DNA提取试剂盒：质粒DNA提取试剂盒用于从细菌中提取纯化质粒DNA。
常见的品牌有Omega、Promega等。
7. DNA纯化试剂盒：DNA纯化试剂盒用于从PCR产物或凝胶切片中纯化DNA。
常见的品牌有Omega、Qiagen等。
8. DNA测序试剂盒：DNA测序试剂盒用于进行DNA测序，常见的品牌有Thermo Fisher Scientific、Illumina等。
9. 原位杂交试剂盒：原位杂交试剂盒用于检测基因表达或染色体异常，常见的品牌有Thermo Fisher Scientific、Agilent等。
10. DNA修饰试剂盒：DNA修饰试剂盒用于修饰DNA分子，如甲基化修饰。
常见的品牌有New England Biolabs、Zymo Research等。
PROMEGA逆转录试剂盒说明书
Reverse Transcription System
INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCT A3500.
1. Description..........................................................................................................1 2. Product Components and Storage Conditions ............................................2 3. Reverse Transcription Protocol.......................................................................2
Printed in USA. Revised 3/09 Part# TB099 Page 1
2.
Product Components and Storage Conditions
Size 100 reactions Cat. # A3500
Product Reverse Transcription System
3.A. Reverse Transcri magnesium concentration may be optimized for any given sequence to achieve better yields. **Final concentration of reaction components: 5mM MgCl2; 1X Reverse Transcription Buffer (10mM Tris-HCl [pH 9.0 at 25°C]; 50mM KCl; 0.1% Triton® X-100); 1mM each dNTP; 1u/μl Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor; 15u/μg AMV Reverse Transcriptase (High Conc.); 0.5μg Oligo(dT)15 Primer or Random Primers per microgram RNA; 50ng/μl 1.2kb Kanamycin Positive Control RNA, poly(A)+ mRNA or total RNA.
DNA的提取与保存方法
1．-20度冻存1年是没有问题的，当然越低越好。
但是冻存后，用蛋白酶K法，红细胞不易裂解，必须采用特殊方法裂解。
2．建议裂解红细胞后再冻存于－80度。
因为冻融后红细胞会裂解，而且红细胞会增加蛋白污染，影响DNA抽提3．我们实验室加ACD抗凝血液，保存3年了，抽提DNA没问题（我们是先离心后分层保存，以便后续试验）！血DNA提取技术分离外周血白细胞提取方法：试验步骤：1、取人肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10min。
2、小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。
3、在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15min。
4、2500rpm离心10min，弃上清。
5、加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。
6、3000rpm离心10min，弃上清。
7、倒置离心管，去掉残液。
8、得白细胞，－80?C冻存。
试验要求：血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h，4℃放置不超过5h，以防白细胞自溶。
氯仿法抽提外周血白细胞基因组DNA：试验试剂：Ligsisbuffer：133mMNH4ClNHCl7.12g0.9mMNH4HCO3NH4HCO30.071g0.1mMEDTA0.5mMEDTA0.2ml；最后加灭菌去离子水至1000ml，高压灭菌。
ACD抗凝剂：柠檬酸1.68g柠檬酸钠4.62g葡萄糖5.15g；最后加灭菌去离子水至350ml，高压灭菌。
提取缓冲液（Extractionbuffer）：10mMTrisCl(PH=8.0)1MTris.Cl(PH=8.0)1ml0.1mMEDTA(PH=8.0)0.5mMEDTA(PH=8.0)20ml0 .5%SDS10%SDS0.5ml；最后加灭菌去离子水至100ml，高压灭菌试验步骤：1、在500μl抗凝血中加入ligsisbuffer1000μl，充分颠混至清亮。
以4000rpm，离心5min。
弃上清液。
2、沉淀中加入ligsisbuffer1500μl，充分匀浆。
Promega试剂盒Wizard
按Promega试剂盒Wizard ® SV Genomic DNA Purification System使用说明进行，其具体方法和步骤如下，样品材料消耗体系见表2.1：（1）在上述的1.5 mL Eppendorf管中，分别加入275 μL消化液，具体见表2.1；（2）在55 ℃恒温下，样品消化16–18 h；（3）分别在每管中，加入250 μL Wizard® SV Lysis Buffer，旋涡振荡，混匀。
马上把管中的液体移置准备好的微型器（微型柱+收集管），室温离心13000 r/min，3 min；（4）离心后，弃去收集管中的液体，并向每个微型器中，加入650 μL Wizard® SV Wash Solution，室温离心13000 r/min，1 min；此步骤重复4次；（5）最后一次离心完，弃去收集管中的液体，放好微型柱和收集管，室温离心13000 r/min，2 min；（6）将微型柱转移到一新的Eppendorf管上，在柱中央加入30 μL Nuclease–free Water，室温放置2 min，13000 r/min离心1 min；（7）再向微型柱的柱中央加入30 μL Nuclease–free Water，室温放置2 min，13000 r/min离心2 min；（8）移去微型柱，回收洗脱液，将Eppendorf管内的虫体DNA样品置于–20 ℃冰箱保存备用。
表2.1 样品材料消化体系Table 2.1 Digestion system of samples组分Component 体积（μL）VolumeNuclei Lysis Solution 200 0.5M EDTA (PH 8.0) 50 Proteinase K (20 mg/mL) 20 RNase A Solution (4 mg/mL) 5 总体积275。
promega 组织和毛发提取试剂盒（与DNA IQ TM 系统结合使用）说明书
组织和毛发提取试剂盒（与DNA IQ TM系统结合使用）操作手册本说明书用于产品DC6740所有的技术文献均可从公司网站得到请访问公司网站以证实您所使用的技术手册为最新版本I．介绍 (1)III. 产品组分 (2)III．组织和毛发提取试剂盒与 DNA IQ TM系统结合使用的操作步骤 (2)A．试剂的准备 (2)B．从发囊及发根中纯化DNA (5)C．从新鲜组织、冰冻组织、甲醛固定组织及石蜡包埋组织中纯化DNA (6)IV．疑难解答 (7)V．参考文献 (7)VI．相关产品 (8)I.介绍Promega的 DNA IQ TM系统使用一种新的顺磁性树脂来纯化DNA, 该试剂盒中包含有DNA纯化所需的可用于多种形式样品的高效裂解液。
然而，DNA IQ TM 系统中的裂解液对一些如组织和毛发的样品不能有效地裂解，这些样品需要蛋白酶K的预处理以协助样品的裂解。
组织和毛发提取试剂盒（与DNA IQ TM系统结合使用）中提供的试剂和操作手册可用于大部分组织和毛发的有效裂解，除去样品中的蛋白和其它成分，随后用DNA IQ TM系统对样品中的DNA进行纯化。
基因组和线粒体DNA结合使用组织和毛发提取试剂盒（与DNA IQ TM系统结合使用）及DNA IQ TM系统，可高效地从样品中提取纯化双链或单链基因组DNA及线粒体DNA。
如果待提取的样品被微生物污染，则微生物DNA被一起分离。
可抑制PCR扩增的小于 80bp的 DNA可被选择性地去除，从而使纯化的 DNA更有效地用于 PCR扩增。
组织和毛发提取试剂盒（与DNA IQ TM系统结合使用）可提高 DNA纯化的产量当用DNA IQ TM系统—数据库操作手册（TB297）中涉及的样品进行 DNA纯化时，DNA IQ TM系统所提取的 DNA的量是固定的，约 100ng。
对于不同检材中DNA的定量提取依赖于样品中超量的DNA饱和DNA IQ TM 树脂。
在结合使用组织和毛发提取试剂盒（与DNA IQ TM系统结合使用）及 DNA IQ TM系统时，若用蛋白酶K消化去除竞争结合DNA IQ TM 树脂的物质，则树脂从蛋白酶K处理过的注意：本中文操作手册仅供实验参考，在实际使用中请详细对照原英文技术手册TB307。
Promega试剂盒提取DNA说明
Promega全血DNA小量提取试剂盒DNA抽提SOP1、实验场所：分子生物实验室（暂定）2、实验着装：隔离衣，塑胶手套3、实验准备：耗材：高压灭菌的黄、蓝tip和1.5mL离心管架仪器：已校准移液器（100，200，1000uL）、高速离心机、振荡器试剂：Promega全血DNA小量提取试剂盒、异丙醇、70%乙醇4、实验步骤：1）从4℃冰箱中取出装有全血的抗凝管，上下颠倒3次混匀，静置待上方盖的血液流下。
2）用镊子取N个1.5mL EP管（N=预抽提DNA血样数）垂直放于EP管架上，用防水marker笔按DNA编号在管壁和管盖上做好标记，并在DNA抽提实验记录本上对应记录血样编号、姓名及DNA编号。
保持EP管盖打开。
3）用1mL移液器取900uL cell lysis solution加入已备好1.5mL EP管中。
4）打开抗凝管盖，取300uL全血（注意勿沾血于移液器上），转移到上述1.5mL EP 管中。
每取一个血样，换一个tip头。
5）盖上EP管，室温下孵育10min。
6）室温下13000转/min离心20秒（不可延时）。
7）取出后，观察下方白色小斑块沉淀，如有则继续下一步，没有则再离心20秒。
8）打开EP管盖，手捏EP管底部，倾斜EP管口弃去部分红色上清，因表面张力无法弃去所有红色上清，抬高EP管，注视白色斑块，用100 uL移液器在不碰到白色斑块的前提下，尽量将红色上清吸尽。
9）盖上EP管，用手指弹EP管底物，将白色斑块重悬。
10）加300uL Nuclei Lysis Solution入上述EP管中，盖上EP管，上下颠倒10次混匀。
11）打开EP管，加100uL Protein Precipitation Solution入上述EP管中，盖上EP管，振荡器上振荡20秒。
12）室温下13000转/min离心3min。
13）在离心时，准备N个新的已消毒1.5EP管于管架上，标记DNA编号于管壁和管盖上。
DNA提取方法和试剂作用详解
1试剂的作用氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。
（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。
另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
2 DNA提取分为三个基本步骤每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。
.细胞的破碎细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。
方法有三种;①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法：用SDS处理细胞;③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。
利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。
加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA 结合的组蛋白。
将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。
另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA 的商业化试剂盒。
DNA提取的几种方法(1).浓盐法A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳抽提,得到的DNA粘液与含有少量蛋白质氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNA,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。
山羊脑多头蚴线粒体nad1基因的克隆及序列分析
山羊脑多头蚴线粒体nad1基因的克隆及序列分析汤国祥;刘笛秋【摘要】The objectives of the present study were to examine sequence variation in the mitochondrial NADH dehydrogen-ase subunit 1 (nadl)gene among Coenuruscerebralis isolates in Hunan province,and to reconstruct their phylogenetic relationship using nad sequences. The partial nadl (pnadl) vras amplified from each C. Cerebralis,and pnad1 sequences were aligned using the ClustalX 1. 81. MP and NJ trees of pnadl were constructed using the software Phylip 3. 67 version 4. 0 and Mage version 4.0,and ML tree was also constructed using Puzzle version 5. 2, sequence homology analysis was performed using the Megalign program of the software DNAStar version 5. 0. The results showed that the lengths of pnadl sequences were 430 bp. The constructed phylogenetic tree revealed that the Hunan isolates and the Taenia multiceps available in GenBank were clustered in the same clade. There is no significant variation in pnadl sequences within C. Cerebralis, while inter-species difference is obvious. It is concluded that pnadl sequences can be used as genetic marker for population genetic studies of cestodes. The results of the present study provided foundation for further studies of molecular epidemiology of C. Cerebralis,and for diagnosis of the resultant disease.%本研究旨在阐明脑多头蚴湖南分离株线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位1基因(nad1)部分序列(pnad1)的遗传变异情况,并用pnad1序列重构脑多头蚴与其他带科绦虫的种群遗传关系.利用聚合酶链反应(PCR)扩增脑多头蚴的pnad1,应用ClustalX 1.81程序对序列进行比对,再用Phylip3.67程序MP法和Mage4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle5.2程序构建最大似然树,同时利用DNAStar 5.0中的Megalign程序进行同源性分析.结果显示,所获得的pnad1序列长度分别均为430 bp,湖南分离株与已知多头带绦虫位于同一分枝.由于脑多头蚴pnad1序列种内相对保守,种间差异较大,故均可作为种间遗传变异研究的标记,从而为脑多头蚴的分子流行病学和其相关疾病的诊断奠定基础.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)009【总页数】4页(P87-90)【关键词】脑多头蚴;线粒体DNA;nad1基因;种系发育关系【作者】汤国祥;刘笛秋【作者单位】湖南省益阳市赫山区畜牧水产局,湖南益阳413000;湖南省益阳市赫山区畜牧水产局,湖南益阳413000【正文语种】中文【中图分类】Q78脑多头蚴（Coenurus cerebralis）又称脑包虫，是多头带绦虫（Taenia multiceps）的中绦期幼虫，主要寄生于牛、羊等反刍兽的大脑、脊髓等中枢神经系统，可引起致死性的脑多头蚴病，人也可感染此病（Avcioglu等，2011）。
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PromegaDNA提取试剂盒的使用方法
一、使用前的准备工作
Proteinase k solution:用无核酸酶的水把蛋白酶K稀释成20mg/ml，按照自己的每次平均使用量分装，储存在-20℃，融化时要在冰上融化，反复冻融会降低Proteinase K的活性
消化液配制：在tube中混合下面各种反应物，使用前放在冰上。
Wizard SV Wash solution（洗脱液）的配制：按照瓶子标签上要求的量，添加95%的乙醇到Wizard sv solution 中，做上标记，室温保存。
PromegaDNA提取试剂盒的使用方法步骤（离心机法）
0、将Nuclease-Free Water 放在65℃的水浴锅中
1、剪取动物组织20mg，分成相同的2份，放在1.5ml的离心管中，
样品中决不能含有软骨组织，否则会阻塞柱子
2、每份样品中添加275ul先前准备的消化液，确保消化液能够完
全覆盖样品，如果不能覆盖，将样品再剪得小点
3、把样品放到55℃的水浴锅或加热块中孵育16-18小时（过夜），
蛋白酶K消化过夜后2000g离心，取上清液到1.5ml的离心管
中。
4、向样品中添加250ul的Wizard SV Lysis Buffer,漩涡混匀
5、处理后的产物尽快进行下面的操作，如果不能进行下面的操作，
应该把它放在-70℃下保存，使用时应该冻融或者放在55℃温
和解冻
6、将收集管做上标记，将柱子放在收集管上，把整个1.5ml离心
管内的溶解产物转移到柱子中。
13000g离心3分钟，目的是让
基因组吸附在柱子中，如果仍有残留液体，可以重新13000g
离心一分钟
7、倒掉收集管中的液体，把柱子重新放回收集管上
8、检查一下乙醇是否已经添加到Wizard SV Wash Solution中
9、每个样品中添加650ul的Wizard SV Wash Solution（真空抽
滤要加800ul），13000离心1分钟
10、去除溶液，将柱子重新放置在集合管中
11、重复9-10步3次，（一共需要洗4次）
12、洗剂结束后，清空收集管中的水13000g离心2分钟
13、去掉收集管，取相同数量的1.5ml的离心管做上标记，将柱子
将在 1.5ml的离心管上，添加250ul65℃的Nuclease-Free
Water 到柱子中，室温孵育2分钟，13000g离心1分钟（要溶液，勿扔）
14、再在柱子中添加250ul的Nuclease-Free water，室温孵育2
分钟，13000g离心1分钟
15、扔掉柱子，将收集的纯化的DNA储存在-20℃至-70℃。