原花色素的提取及测定
原花色素及其开发应用
原花色素及其开发应用一、概述在自然界中，存在着一种特殊的物质，被称为原花色素（原始色素）。
原花色素是一种天然有机化合物，它能够给花朵和其他植物组织以独特的颜色。
原花色素多种多样，每种都有其特定的化学结构和色彩表现。
通过对原花色素的深入探索和开发利用，科学家们发现了它在食品、医药、染料等领域的广泛应用价值。
二、原花色素的来源和分类原花色素可以来源于多种植物，包括花朵、水果、蔬菜等。
不同植物中的原花色素种类和含量各不相同。
2.1 花朵中的原花色素花朵是原花色素的一种常见来源。
不同花朵中的原花色素种类丰富多样，例如紫罗兰中的花青素、菊花中的黄酮类黄色素等。
花朵中的原花色素不仅能够赋予花朵各自独特的颜色，还能吸引昆虫、鸟类等动物进行传粉。
2.2 水果中的原花色素水果也是原花色素的常见来源之一。
例如，蓝莓中含有丰富的花青素，赋予了蓝莓深蓝色的外观；胡萝卜中含有的类胡萝卜素则使其呈现出橙色。
水果中的原花色素不仅仅是为了吸引动物食用，也具有对人体健康的积极影响。
2.3 其他植物组织中的原花色素除了花朵和水果，其他植物组织如茶叶、草本植物等也可能含有原花色素。
它们虽然在呈色方面不如花朵和水果那样鲜艳，但是仍然对一些产品的开发具有重要价值。
三、原花色素的应用原花色素的应用非常广泛，涉及食品、医药、染料等多个领域。
3.1 食品领域中的应用原花色素在食品领域中的应用非常常见。
它们能够为食品添加丰富的色彩，增加食物的吸引力和美感。
例如，蓝莓中的花青素被应用于糕点、冰淇淋等食品中，赋予了这些食品深邃的蓝色。
与化学合成的食品色素相比，原花色素不仅色彩更天然，而且对人体健康更有益。
3.2 医药领域中的应用原花色素在医药领域中也有重要的应用。
许多原花色素具有抗氧化、抗炎、抗菌等生物活性，被广泛应用于药物研发和治疗。
例如，一些花青素类物质被发现具有对癌症、心血管疾病等疾病的预防和治疗作用。
原花色素在药物研发中的应用潜力巨大。
3.3 染料领域中的应用原花色素在染料领域中也有一定的应用。
马占相思树皮中原花色素提取工艺及其生物活性的研究
马占相思树皮中原花色素提取工艺及其生物活性的研究许蕊;姜萍;张颖茵;陆婷婷;李根;张萌卫【摘要】The optimum extraction conditions of three extraction methodsof proanthocyanidins from Acacia mangium Bark were investigated by using orthogonal experiment. The extracted results were compared. Then, the vitro antioxidant and anti-tumor activities of different solvent extracts from ultrasonic extracts were studied. The optimum crafts for traditional solvent extraction method were 60% ethanol,70℃,70 min and ratio of material-liquid 1∶18 (g∶mL,the same belo w),and the obtained yield of proanthocyanidin was 7.42%.The optimum crafts for microwave-assisted extraction were 60% ethanol,8 min for microware time, ratio of material-liquid 1∶18, microwave power 200 W, with the yield of proanthocyanidin 7. 05%. And the optimum crafts for ultrasonic-assisted extraction method were 70 % ethanol, ultrasonic time 50 min, ratio of material-liquid 1∶16, extraction temperature 50℃,and the yield of proanthocyanidin was8.57%.Result of ultrasonic-assisted extraction was the best,due to the low extract temperature and high yield.The results of antioxidant test showed that the ethyl acetate extracts from ultrasonic-assisted extracts exhibited the highest antioxidant activity,as well as the inhibitory concentration 50%( IC50 ) of DPPH.radical scavenging was 17. 94 mg/L, and it was lower than that of vitamin C ( Vc ) . Experimental results of antitumor activity of different solvent extracts showed that the ethyl acetate extract possessed highest antitumor activity for human hepatoma cell Bel-7404 with the IC50of 4.86 mg/L,which was similar to antitumor medicine etoposide.%通过正交试验优化了马占相思树皮中原花色素的3种提取方法的最佳提取工艺条件。
原花色素的提取纯化和测定思考题
原花色素的提取纯化和测定思考题引言原花色素是一种天然的有机化合物，广泛存在于植物中的各种花朵中。
由于其具有丰富的颜色和生物学活性，因此在食品、医药和化妆品等领域有重要的应用价值。
本文将探讨原花色素的提取纯化和测定方法，以期为相关领域的研究提供参考。
提取原花色素的方法1.传统提取方法–固液萃取：将花朵样品与适量的溶剂（如乙醇、乙酸乙酯等）混合，静置一段时间，然后使用过滤或离心等方法分离出液相，即为提取得到的原花色素。
–水蒸气蒸馏：将花朵样品置于蒸馏设备中，用水蒸气蒸馏的方式提取原花色素，得到蒸馏液后，经过适当的提取和分离处理，即可得到纯化的原花色素。
2.现代提取方法–超声波辅助提取：将花朵样品与溶剂混合后，利用超声波的作用，加速花色素的释放和溶解，提高提取效率。
–超临界流体萃取：利用超临界流体（如二氧化碳）的特殊性质，对花朵样品进行提取，此方法不仅能高效提取原花色素，还可避免有机溶剂残留的问题。
原花色素的纯化方法1.溶剂萃取–采用不同极性的溶剂进行多次萃取，可以去除掉一部分杂质，提高原花色素的纯度。
–萃取后的溶液通过旋转蒸发、冷冻干燥等方法去除溶剂，得到浓缩的原花色素溶液。
2.色谱技术–薄层色谱：将原花色素溶液均匀涂在薄层色谱板上，然后将色谱板放入移动相中，通过移动相的上升，原花色素在色谱板上形成斑点，根据斑点的迁移距离和色谱板杂质的位置，可进行分离和纯化。
–高效液相色谱：利用色谱柱和液相色谱设备，通过不同溶液的分配比例，控制原花色素的迁移和分离，从而获得高纯度的原花色素。
原花色素的测定方法1.分光光度法–利用原花色素在特定波长下的吸光度特性，通过分光光度计测量花色素溶液的吸光度，进而确定其浓度和纯度。
–需要制备一系列不同浓度的标准溶液，以建立标准曲线，并通过曲线拟合计算未知样品的浓度。
2.高效液相色谱法–利用高效液相色谱仪对原花色素进行定量测定。
–需要事先确定好色谱柱和流动相的适宜条件，并校准设备，以保证测定结果的准确性和可靠性。
原花青素简介
原花青素（Proantho Cyanidins，PC），又名缩合鞣质，可视作花青素( cyanidin)类物质的聚合物，是自然界中广泛存在的一类多酚类化合物。通常将从植物中分离得到的一切无色的、在无机酸存在和加热处理下能产生红色花青素( cyanidin)的一类多酚化合物统称为原花青素（赵平2011）。最初是在20世纪40年代从花生仁的包衣中提取出来，在50年代又被法国科学家从海松树皮中发现并提取出来，并将其提取率提高到达85%。近来，研究证明原花青素是很强的抗氧化剂，可以清除自由基，其抗氧化、清除自由基的能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，能防治80多种因自由基引起的疾病，包括心脏病、关节炎等，还具有改善人体微循环功能（张长贵2009）。目前，原花青素作为营养强化剂、天然防腐剂、天然抗氧化剂、DNA保护剂等，被广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。
4.3 pH示差法
pH示差法是利用原花青素在不同pH下呈色不同的性质进行检测。pH 1.0时，原花青素颜色最深; pH 4.5时，以无色的半缩酮形式存在。pH示差法是基于此反应来快速准确地测量花青素含量的方法（Clifford et al 2000）。pH示差法是一种简便的测定原花青素含量的方法，能很好地消除溶液中杂质对测定结果的影响,可信度较高。
2化学结构及分类
原花青素是以黄烷-3-醇为结构单元通过C-C键聚合而形成的化合物，起初称为黄烷醇类或归于缩合鞣质。其结构分类主要取决于五方面：（1）黄烷-3-醇单元的类型；（2）单元之间的连接方式；（3）聚合程度（组成单元的数量）；（4）空间构型；（5）羟基是否被取代（如羟基的酯化、甲基化等）。根据原花青素的聚合程度可分为单倍体（monomer）、寡聚体（oligomer）和多聚体（polymer）（Alan et al 2008）。其中单倍体是基本结构单元，寡聚体由2～10个单倍体聚合而成，多聚体则由10个以上的单倍体聚合而成（张慧文2015）。
葡萄籽原花色素的提取、改性及抗氧化性研究
种 浪费 。近 ２ ￣３ ０ ０年来 ， 随着对 葡萄皮 、 籽化学成
分和功能的研究 ， 发现 葡 萄皮 、 籽具 有很 高 的开 发利 用价值 ， 如从 葡 萄 皮 中提取 花 青 色 素 、 胶 、 石 酸 果 酒 等［ 。在众 多提取成 分 中葡 萄 籽 中的葡 萄 多酚类 化 ３ ］ 合 物如原花色 素等 ， 由于具 有天 然抗 氧 化性 ， 防止 能 动脉粥样硬化 ， 具有抗凝 血 、 清除 自由基 、 癌抗肿瘤 抗 等多种功 效 ， 因而倍 受关 注［ ］ ４ 。因为 酚类 化合 物具
屈 景 年 ， 曾文 良 ，陈 辉 ，李俊 华
（ 阳师 范学 院 化 学与材 料科 学系 ，湖南 衡 阳 衡
摘
４ １０ ） ２ ０ ８
要 ：采 用均 匀设 计 法 对 葡 萄 籽 原 花 色素 的 提 取 工 艺参 数 进 行 了优 化 ，并 用 油 酸 酰 氯 对 葡 萄籽 原 花 色素 进 行
第 ３ １卷 第 ３ 期 ２０ １０年 ６月
衡 阳 师 范 学 院 学 报
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ Ｈｅ ｇ ａ ｇ Ｎｏ ｍａ ｉ ｅ ｓｔ ｏ ｒ ａ ｎ ｙ ｎ ｒ ｌ ｏ Ｕｎ ｖ ｒ ｉ ｙ
ＮＯ ．３Ｖｏ１ １ ．３
Ｊ ｎ ．２０１０ ｕ ｅ
葡萄 籽原 花 色 素 的提 取 、改 性 及抗 氧 化 性 研 究
０ 引 言
１ 实 验 部 分
１ １ 主 要 实 验 材 料 与 仪 器 ．
葡 萄是一 种世界性水果 ， 种植 面积和产量 在水果 中都居世界首位 ＿ ， １ 全世 界葡 萄 产量 的 ９ 用 于酿 ］ ０ 造葡 萄酒 ［ 。在葡 萄酒 的加 工过 程 中， ２ ］ 约有 加 工葡 萄 ２ ￣３ 的废弃 物产 生 ， 去 大部分 酒 厂都 把这 ０ ０ 过 些下 脚料 白白丢失 ， 不 仅污染 了环境 ， 资源 也是 这 对
原花色素的提取和测定思考题
原花色素的提取和测定思考题引言原花色素是一类存在于植物中的天然色素，具有多种生物活性和营养价值，被广泛用于食品、医药、化妆品等领域。
本文将深入探讨原花色素的提取和测定方法以及其应用。
原花色素的提取方法原花色素的提取方法通常分为物理方法和化学方法两大类。
物理方法1.水浸提取法–将鲜花、花瓣等植物组织浸入水中，利用植物组织中的原花色素溶解于水中的特性进行提取。
–该方法简单易行，但提取效率较低。
2.酸碱浸提法–将植物组织浸泡在酸性或碱性溶液中，使原花色素与酸碱反应生成可溶于溶液中的化合物，再通过过滤或分离提取原花色素。
–该方法可以提高提取效率，但需要注意溶液浓度和温度的控制。
化学方法1.有机溶剂提取法–利用某些有机溶剂如乙醚、苯等，可以与原花色素有较好的亲和力，将原花色素从植物组织中提取出来。
–该方法提取效率较高，但需要注意有机溶剂的选择和使用条件。
2.超声波提取法–利用超声波的机械振动作用，可以促使原花色素从植物组织中释放出来。
–该方法提取效果较好，但需要注意超声波的频率、功率和时间的选择。
原花色素的测定方法原花色素的测定方法通常分为光度法、色谱法和质谱法三大类。
光度法1.分光光度法–利用原花色素对特定波长的光的吸收特性，通过测定吸光度来确定原花色素的含量。
–该方法操作简单，结果准确度较高。
2.滴定法–利用一定试剂与原花色素发生化学反应，根据反应的滴定终点来确定原花色素的含量。
–该方法对试剂选择和滴定条件有较高的要求。
色谱法1.薄层色谱法–利用原花色素在薄层色谱板上的分离迁移特性，通过对色谱板上的斑点进行扫描和测定来确定原花色素的含量。
–该方法分离效果较好，但需要注意色谱板的样品施加和显色条件的控制。
2.高效液相色谱法–利用液相色谱柱对原花色素进行分离，并通过检测器测定其峰面积或峰高来确定原花色素的含量。
–该方法分离效果更好，且能够对不同种类的原花色素进行定量分析。
质谱法1.毛细管电泳质谱法–利用毛细管电泳将原花色素分离出来，再通过质谱仪器进行检测和定量分析。
植物原花青素(OPC)含量检测试剂盒说明书 微量法
植物原花青素（OPC）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1355规格：100T/48S产品内容：提取液：60%乙醇，自备，4℃保存。
试剂一：11%盐酸8mL，自备,4℃保存。
即2.4mL盐酸溶于5.6mL蒸馏水试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加8mL提取液溶解。
工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。
标准品：粉剂×1支，10mg原花青素。
产品说明：原花色素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。
在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。
自备实验用品及仪器：天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、11%盐酸和60%乙醇。
操作步骤：一、OPC提取:将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入1mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，提取，30min，12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。
二、测定操作表:1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2、用提取液将原花青素配制成10mg/mL标准液，用提取液梯度稀释为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078、0.039、0.02、0.01mg/mL的标准溶液。
3、操作表对照管测定管标准管空白管样本（μL）4040标准溶液（mg/mL）40工作液（μL）160160160HO（μL）160402混匀，30℃水浴30min，立即于微量石英比色皿/96孔板中检测500nm处吸光值，计算∆A测定=A测定管-A对照管，∆A标准=A标准管-A空白管。
花色素的提取分离
一、实验目的1.了解原花色素及其分离提纯的常用方法。
2.学会用乙醇抽提法提取分离花色素和比色法测定其含量。
二、实验目的原花色素，也称原花青素（proanthocyanidins）,是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。
也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。
原花色素属于生物类黄酮（flavonoids）,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。
依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。
从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。
其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligomeric proanthocyanidins,简称OPC）。
三．实验仪器1.试剂：花色素标准样品；甲醇；0.1%HCL-95%乙醇（V:V=70:30）；无水乙醇；石油醚；乙酸乙酯；HCL-正丁醇（浓HCL5.0ml加入正丁醇95.0ml，混合即可）；2%硫酸铁氨（硫酸铁氨2.0g溶于2.0mol/L HCL 100.0ml即可）2.器材：冷冻干燥机；旋转蒸发仪；分光光度计；水浴锅；电炉；电子分析天平3.材料：新鲜勒杜鹃花四、实验操作(一)勒杜鹃原花色素的提取1.材料处理：称取新鲜勒杜鹃10.0g，剪碎，置于锥形瓶中，加入3倍体积的石油醚，室温浸泡，脱去脂质物质和叶绿素，过滤，将勒杜鹃样品晾干，备用。
a)花色素的提取：提取剂0.1%HCL-95%乙醇（V：V=70:30）料液比（m：V=1:150），提取时间30分钟，控制提取温度60℃，提取次数2次，即提取液分2次加入。
2.花色素的纯化：由于样品中还是会含有其他杂质，如：蛋白质，维生素（水溶性维生素易溶于水而不易溶于非极性有机溶剂；脂溶性维生素易溶于非极性有机溶剂，而不易溶于水。
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原花色素的提取及测定
一、实验原理
原花色素，也称原花青素，是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。
也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。
原花色素属于生物类黄酮,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。
依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。
从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。
其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（OPC）。
原花色素具有很强的抗氧化作用，能清除人体内过剩的自由基，提高人体的免疫力，可作为新型的抗氧化剂用于医药、保健、食品等领域。
利用低聚原花色素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花色素，再用大孔吸附树脂吸附、洗脱得到原花色素。
D101树脂是一种球状、非极性交联聚合物吸附剂，具有相当大的比表面和适当的孔径，对皂甙类、黄酮类、生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取类似性质的有机物质。
原花色素（I）的4~8连接键很不稳定，易在酸作用下打开。
反应过程（以二聚原花色素为例）是：在质子进攻下单元C8（D）生成碳正离子（II），4~8键裂开，下部单元形成（-）-表儿茶素（III），上部单元成为碳正离子（IV），失去一个
质子成为黄-3-烯-醇（V），在有氧条件下失去C2上的氢，被氧化成花色素（VI），反应还生成相应的醚（VII）。
若采用正丁醇溶剂可防止醚的形成。
（如下图所示）
在一定浓度范围内，原花色素的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的原花色素含量。
但盐酸-正丁醇法受原花色素的结构影响较大，对于低聚度原花色素及儿茶素等单体反应不灵敏。
二、实验器材
新鲜山楂，烧杯，玻璃层析柱，大孔吸附树脂D-101，具塞试管*9，移液枪，紫外分光光度计，水浴锅；
三、实验试剂
60%乙醇，95%乙醇，原花色素标准品(1.0mg/mL)，HCl-正丁醇，2%硫酸铁铵，
2.0mol/L HCl；
四、实验步骤
Ⅰ原花色素的制备
1、称取新鲜山楂10.0g，剪成块状，置入锥形瓶中，加入40.0mL蒸馏水，沸水浴30min，间期混匀。
冷却后加入20mL蒸馏水，过滤（或离心），滤液备用。
2、取一根层析柱（1.5*20cm），洗净，竖直装好，关闭出口，加入蒸馏水约1cm 高，用烧杯取一定量已处理好大孔吸附树脂D-101，搅匀，沿管内壁缓慢加入，待柱底沉积约1cm高时，缓慢打开出口，积蓄装柱至高度10cm，液面高于树脂约3cm。
3、平衡：用蒸馏水洗2倍柱床体积，控制流速在1mL/min左右，至洗出液的pH 呈中性。
4、滤液上样，上样时控制流速在2mL/min。
上完样后，先用蒸馏水洗两倍柱床体积，然后换60%乙醇进行洗脱，控制流速在1mL/min。
待有红色液体流出时开始收集，直到收集到无红色为止。
5、将收集液用60%乙醇定容至50mL，作为下次测定的样品。
Ⅱ原花色素的测定
1、制作标准曲线：
取干净试管7支，按表1进行操作，以吸光度为纵坐标，各标准液浓度为横坐标作图得标准曲线。
2、样品含量测定
分别吸取样液0.10mL，0.20mL置于两支试管中，按表1操作。
表1
五、实验结果
表2
由于（300，0.885）一点明显偏差较大，在作图时剔除这一点，得到以上标准曲线，根据标准曲线计算得到以下结果：
表3
六、分析与讨论
1、本次实验测得原花色素的百分含量为0.329%，两份样品的平行性较好。
剔除最后一个点以后作出的标准曲线的线性也较好，实验较为成功。
2、作标准曲线时，最后一点偏离直线原因可能是此时色素浓度太大，与Lambert-Beer定律出现了负偏差，导致浓度过大时与吸光度不再呈线性关系。
3、山楂的原花色素主要存在于果皮中，果肉中也含有部分，但含量较少。
实验中部分同学在取材时只使用了山楂皮，故最终测得的原花色素含量较高。
这启发我们如果在生产中以山楂为原料提取原花色素，为求产量高，应尽量多用山楂皮。