原花色素的含量测定研究
马占相思树皮中原花色素提取工艺及其生物活性的研究
马占相思树皮中原花色素提取工艺及其生物活性的研究许蕊;姜萍;张颖茵;陆婷婷;李根;张萌卫【摘要】The optimum extraction conditions of three extraction methodsof proanthocyanidins from Acacia mangium Bark were investigated by using orthogonal experiment. The extracted results were compared. Then, the vitro antioxidant and anti-tumor activities of different solvent extracts from ultrasonic extracts were studied. The optimum crafts for traditional solvent extraction method were 60% ethanol,70℃,70 min and ratio of material-liquid 1∶18 (g∶mL,the same belo w),and the obtained yield of proanthocyanidin was 7.42%.The optimum crafts for microwave-assisted extraction were 60% ethanol,8 min for microware time, ratio of material-liquid 1∶18, microwave power 200 W, with the yield of proanthocyanidin 7. 05%. And the optimum crafts for ultrasonic-assisted extraction method were 70 % ethanol, ultrasonic time 50 min, ratio of material-liquid 1∶16, extraction temperature 50℃,and the yield of proanthocyanidin was8.57%.Result of ultrasonic-assisted extraction was the best,due to the low extract temperature and high yield.The results of antioxidant test showed that the ethyl acetate extracts from ultrasonic-assisted extracts exhibited the highest antioxidant activity,as well as the inhibitory concentration 50%( IC50 ) of DPPH.radical scavenging was 17. 94 mg/L, and it was lower than that of vitamin C ( Vc ) . Experimental results of antitumor activity of different solvent extracts showed that the ethyl acetate extract possessed highest antitumor activity for human hepatoma cell Bel-7404 with the IC50of 4.86 mg/L,which was similar to antitumor medicine etoposide.%通过正交试验优化了马占相思树皮中原花色素的3种提取方法的最佳提取工艺条件。
原花色素的提取纯化和测定思考题
原花色素的提取纯化和测定思考题引言原花色素是一种天然的有机化合物，广泛存在于植物中的各种花朵中。
由于其具有丰富的颜色和生物学活性，因此在食品、医药和化妆品等领域有重要的应用价值。
本文将探讨原花色素的提取纯化和测定方法，以期为相关领域的研究提供参考。
提取原花色素的方法1.传统提取方法–固液萃取：将花朵样品与适量的溶剂（如乙醇、乙酸乙酯等）混合，静置一段时间，然后使用过滤或离心等方法分离出液相，即为提取得到的原花色素。
–水蒸气蒸馏：将花朵样品置于蒸馏设备中，用水蒸气蒸馏的方式提取原花色素，得到蒸馏液后，经过适当的提取和分离处理，即可得到纯化的原花色素。
2.现代提取方法–超声波辅助提取：将花朵样品与溶剂混合后，利用超声波的作用，加速花色素的释放和溶解，提高提取效率。
–超临界流体萃取：利用超临界流体（如二氧化碳）的特殊性质，对花朵样品进行提取，此方法不仅能高效提取原花色素，还可避免有机溶剂残留的问题。
原花色素的纯化方法1.溶剂萃取–采用不同极性的溶剂进行多次萃取，可以去除掉一部分杂质，提高原花色素的纯度。
–萃取后的溶液通过旋转蒸发、冷冻干燥等方法去除溶剂，得到浓缩的原花色素溶液。
2.色谱技术–薄层色谱：将原花色素溶液均匀涂在薄层色谱板上，然后将色谱板放入移动相中，通过移动相的上升，原花色素在色谱板上形成斑点，根据斑点的迁移距离和色谱板杂质的位置，可进行分离和纯化。
–高效液相色谱：利用色谱柱和液相色谱设备，通过不同溶液的分配比例，控制原花色素的迁移和分离，从而获得高纯度的原花色素。
原花色素的测定方法1.分光光度法–利用原花色素在特定波长下的吸光度特性，通过分光光度计测量花色素溶液的吸光度，进而确定其浓度和纯度。
–需要制备一系列不同浓度的标准溶液，以建立标准曲线，并通过曲线拟合计算未知样品的浓度。
2.高效液相色谱法–利用高效液相色谱仪对原花色素进行定量测定。
–需要事先确定好色谱柱和流动相的适宜条件，并校准设备，以保证测定结果的准确性和可靠性。
花青素含量的测定实验报告
花青素含量的测定实验报告目的:花青素是类黄酮类色素中最重要的一种，广泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。
本实验学习花青素的提取及测定方法。
一、实验原理花青素在酸性溶液中呈红色，其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。
花青素酸性溶液的吸收高峰波长是530nm，摩尔消光系数为4.62×10，故可用分光光度法测定其含量。
但是一些提取液中常有叶绿素存在，干扰测定。
因此，需同时测定提取液在620nm（可溶性糖）和650nm（叶绿素的吸收值）波长下的光密度值，并用Greey公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。
二、材料、设备及试剂1.材料：茶叶2.设备分光光度计、电子天平、水果刀、50ml具塞三角瓶、25ml容量瓶。
3.试剂0.1mol·L1的盐酸乙醇溶液（8.3ml浓盐酸用95%乙醇稀释成11）。
三、操作方法1.花青素的提取取0.100g一串红和0.116g红花继木分别放在编号为1、2的三角瓶中，加10ml盐酸乙醇溶液，在60℃水浴中加10ml提取液浸提30min，把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min，把溶液倒入25ml 容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min，把溶液倒入25ml容量瓶中，共浸提1h，最后定溶到25ml。
2.测定以0.1mol·L1的盐酸乙醇溶液做参比液，在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。
四、实验结果依据公式1.计算花青素的光密度值ODA=（OD530-OD620）-0.1（0D650-OD620）2.计算花青素含量0D元花青素含量（mmol/g）=V×1000000cm ODx：花青素在530nm波长下的光密度E：花青素摩尔消光系数4.62×106v：提取液总体积（ml）m：取样质量（g）1000000：计算结果换算成nmol的倍数由一串红测得结果则有：ODA=（1.360-0.024）-0.1（0.043-0.024）=1.3341 所以，花青素含量（nmol/g）=1.3341/4.62/101×25/0.100×106-7219.156 由红花继木测得结果则有：ODx=（0.370-0.062）-0.1（0.183-0.062）=0.2959 所以，花青素含量（nmol/g）=0.2959/4.62/101×25/0.116×105=1380.337 五、结果分析与讨论从实验实验可以看出，一串红的花青素含量比红花继木的花青素含量高很多。
原花青素简介
原花青素（Proantho Cyanidins，PC），又名缩合鞣质，可视作花青素( cyanidin)类物质的聚合物，是自然界中广泛存在的一类多酚类化合物。通常将从植物中分离得到的一切无色的、在无机酸存在和加热处理下能产生红色花青素( cyanidin)的一类多酚化合物统称为原花青素（赵平2011）。最初是在20世纪40年代从花生仁的包衣中提取出来，在50年代又被法国科学家从海松树皮中发现并提取出来，并将其提取率提高到达85%。近来，研究证明原花青素是很强的抗氧化剂，可以清除自由基，其抗氧化、清除自由基的能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，能防治80多种因自由基引起的疾病，包括心脏病、关节炎等，还具有改善人体微循环功能（张长贵2009）。目前，原花青素作为营养强化剂、天然防腐剂、天然抗氧化剂、DNA保护剂等，被广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。
4.3 pH示差法
pH示差法是利用原花青素在不同pH下呈色不同的性质进行检测。pH 1.0时，原花青素颜色最深; pH 4.5时，以无色的半缩酮形式存在。pH示差法是基于此反应来快速准确地测量花青素含量的方法（Clifford et al 2000）。pH示差法是一种简便的测定原花青素含量的方法，能很好地消除溶液中杂质对测定结果的影响,可信度较高。
2化学结构及分类
原花青素是以黄烷-3-醇为结构单元通过C-C键聚合而形成的化合物，起初称为黄烷醇类或归于缩合鞣质。其结构分类主要取决于五方面：（1）黄烷-3-醇单元的类型；（2）单元之间的连接方式；（3）聚合程度（组成单元的数量）；（4）空间构型；（5）羟基是否被取代（如羟基的酯化、甲基化等）。根据原花青素的聚合程度可分为单倍体（monomer）、寡聚体（oligomer）和多聚体（polymer）（Alan et al 2008）。其中单倍体是基本结构单元，寡聚体由2～10个单倍体聚合而成，多聚体则由10个以上的单倍体聚合而成（张慧文2015）。
原花青素在不同酸度条件下的稳定性研究
原花青素在不同酸度条件下的稳定性研究原花青素是一种天然的花色素，广泛存在于植物中，具有丰富的生物活性和营养保健作用。
然而，在不同的酸度条件下，原花青素的稳定性可能会发生变化，影响其在食品加工和储存中的应用。
因此，对原花青素在不同酸度条件下的稳定性进行研究非常重要。
以下是可能采取的一些研究方法和技术：1.pH值调节：可以通过改变溶液的pH值来模拟不同的酸度条件，一般采用稀酸溶液来模拟食品酸度环境。
2.分析方法：可以采用紫外-可见光谱、高效液相色谱、质谱等方法来测定样品中原花青素的含量和稳定性。
3.试样制备：将原花青素与不同的食品基质混合，制备成试样，并存放在不同酸度条件下。
4.稳定性评价：通过测定不同酸度条件下试样中原花青素的含量变化、颜色变化、光谱特征变化等来评价其稳定性。
5.影响因素研究：研究不同因素对原花青素稳定性的影响，如光照、温度、氧气、金属离子等。
综上所述，研究原花青素在不同酸度条件下的稳定性需要采用多种方法和技术，以评价其在食品加工和储存中的应用前景，并为其进一步开发和利用提供科学依据。
再写一个针对原花青素在不同酸度条件下的稳定性研究，以下是另一些可能的研究方法和技术：1.不同酸度条件下原花青素的降解动力学：可以通过测定原花青素在不同酸度条件下的降解速率常数，来比较不同酸度条件下的降解动力学，以确定最适宜的pH值范围。
2.抗氧化性评价：由于氧气可以促进原花青素的降解，因此可以采用不同的抗氧化评价方法来评估原花青素在不同酸度条件下的稳定性，如DPPH自由基清除能力、还原能力等。
3.复合物的形成：在食品加工和储存过程中，原花青素可能会与其他成分形成复合物，这可能会影响其稳定性。
因此，可以研究原花青素与其他成分的相互作用和复合物的形成，以评估其对稳定性的影响。
4.模拟胃肠道消化：可以通过模拟胃肠道消化过程来研究原花青素在不同酸度条件下的稳定性。
这可以帮助我们更好地了解原花青素在人体内的吸收和代谢过程。
原花青素的研究进展
原花青素的研究进展原花青素是一种天然生物活性物质，在植物中广泛分布。
近年来，原花青素因其独特的化学组成和多种生物活性而备受。
本文将综述原花青素的研究现状、研究方法及未来研究方向。
一、原花青素概述原花青素（Proanthocyanidins，简称PAs）是天然酚类化合物中的一种，由不同数量的儿茶素或表儿茶素通过C-C键连接而成。
原花青素在植物中主要分布于种子、果实、花瓣和叶片等部位，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、降血脂等多种生物活性。
二、原花青素的研究现状随着人们对原花青素的度不断提高，其研究已经涉及多个领域。
目前，研究者们主要原花青素的抗氧化、抗炎、抗肿瘤等生物活性。
研究表明，原花青素能够清除自由基、抑制脂质过氧化，具有明显的抗氧化作用。
此外，原花青素还具有明显的抗炎作用，能够抑制炎症因子的表达，减轻炎症反应。
抗肿瘤方面，原花青素能够抑制癌细胞增殖、诱导癌细胞凋亡，对多种癌症具有治疗和预防作用。
三、原花青素的研究方法原花青素的提取方法有多种，包括溶剂提取法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法等。
其中，溶剂提取法是最常用的方法，以乙醇、甲醇等有机溶剂为主。
原花青素的分离方法包括高速逆流色谱、高效液相色谱等。
对于原花青素的结构测定，常用的方法有核磁共振、质谱等。
另外，为了明确原花青素的生物活性，研究者们还采用了细胞生物学、分子生物学等技术手段。
四、结论与展望原花青素作为一种天然活性物质，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多重生物活性，在预防和治疗多种疾病方面具有潜在的应用价值。
然而，目前关于原花青素的研究仍然存在一些不足之处，如提取纯度不高、体内代谢机制不明等问题。
未来研究方向之一是优化原花青素的提取纯度和方法，以提高其在实践中的应用效果。
另外，深入研究原花青素的体内代谢机制和生物活性也是非常重要的方向，有助于揭示其作用机理和实际应用效果。
同时，开展原花青素的构效关系研究，明确其作用的关键结构和活性基团，对于发现新的原花青素类药物和功能食品具有重要意义。
原花色素的提取和测定思考题
原花色素的提取和测定思考题引言原花色素是一类存在于植物中的天然色素，具有多种生物活性和营养价值，被广泛用于食品、医药、化妆品等领域。
本文将深入探讨原花色素的提取和测定方法以及其应用。
原花色素的提取方法原花色素的提取方法通常分为物理方法和化学方法两大类。
物理方法1.水浸提取法–将鲜花、花瓣等植物组织浸入水中，利用植物组织中的原花色素溶解于水中的特性进行提取。
–该方法简单易行，但提取效率较低。
2.酸碱浸提法–将植物组织浸泡在酸性或碱性溶液中，使原花色素与酸碱反应生成可溶于溶液中的化合物，再通过过滤或分离提取原花色素。
–该方法可以提高提取效率，但需要注意溶液浓度和温度的控制。
化学方法1.有机溶剂提取法–利用某些有机溶剂如乙醚、苯等，可以与原花色素有较好的亲和力，将原花色素从植物组织中提取出来。
–该方法提取效率较高，但需要注意有机溶剂的选择和使用条件。
2.超声波提取法–利用超声波的机械振动作用，可以促使原花色素从植物组织中释放出来。
–该方法提取效果较好，但需要注意超声波的频率、功率和时间的选择。
原花色素的测定方法原花色素的测定方法通常分为光度法、色谱法和质谱法三大类。
光度法1.分光光度法–利用原花色素对特定波长的光的吸收特性，通过测定吸光度来确定原花色素的含量。
–该方法操作简单，结果准确度较高。
2.滴定法–利用一定试剂与原花色素发生化学反应，根据反应的滴定终点来确定原花色素的含量。
–该方法对试剂选择和滴定条件有较高的要求。
色谱法1.薄层色谱法–利用原花色素在薄层色谱板上的分离迁移特性，通过对色谱板上的斑点进行扫描和测定来确定原花色素的含量。
–该方法分离效果较好，但需要注意色谱板的样品施加和显色条件的控制。
2.高效液相色谱法–利用液相色谱柱对原花色素进行分离，并通过检测器测定其峰面积或峰高来确定原花色素的含量。
–该方法分离效果更好，且能够对不同种类的原花色素进行定量分析。
质谱法1.毛细管电泳质谱法–利用毛细管电泳将原花色素分离出来，再通过质谱仪器进行检测和定量分析。
植物原花青素(OPC)含量检测试剂盒说明书 微量法
植物原花青素（OPC）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1355规格：100T/48S产品内容：提取液：60%乙醇，自备，4℃保存。
试剂一：11%盐酸8mL，自备,4℃保存。
即2.4mL盐酸溶于5.6mL蒸馏水试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存，临用前加8mL提取液溶解。
工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照1:1混合。
标准品：粉剂×1支，10mg原花青素。
产品说明：原花色素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。
在酸性条件下，植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在500nm处有特征吸收峰，测定500nm光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。
自备实验用品及仪器：天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、11%盐酸和60%乙醇。
操作步骤：一、OPC提取:将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.1g，加入1mL提取液，用超声提取法进行提取，超声功率300W，破碎5s，间歇8s，提取，30min，12000rpm，25℃，离心10min，取上清，用提取液定容至1mL，待测。
二、测定操作表:1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2、用提取液将原花青素配制成10mg/mL标准液，用提取液梯度稀释为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.156、0.078、0.039、0.02、0.01mg/mL的标准溶液。
3、操作表对照管测定管标准管空白管样本（μL）4040标准溶液（mg/mL）40工作液（μL）160160160HO（μL）160402混匀，30℃水浴30min，立即于微量石英比色皿/96孔板中检测500nm处吸光值，计算∆A测定=A测定管-A对照管，∆A标准=A标准管-A空白管。
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关键 词 ： 原花色素； 含量测定 ； 分光光度法； 香草醛
Ｄｅｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ Ｃｏ ｔｎ ｆＰ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ｓ、ｉｈ Ｓ ｅ ｔ ｏ ｈ ｔ ｍｅ ｉ ｅ ｈ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｅ ｔｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ ｖｔ ｐ ｃ ｒ ｐ ｏ ｏ ｒｃ Ｍ ｔ ｏ ｏ
Ｋｅ ｒ ｓ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ ；ｄ ｔｒ ｉ ａｉ ｎ；ｓ ｅ ｔ ｐ ｏ ｏ ｒ ｙ ｗｏ ｄ ：ｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ｓ ｅ ｅ ｎ ｔ ｍ ｏ ｐ ｃｒ ｈ ｔｍｅ ｉ ｏ ｃ；ｖ ｉ ｉ ｎ ｌ ａ ｌｎ
葡萄籽提取 物中最重要 的也是 迄今研究 最为广 泛的成分 是 原 花色 素 ， 它是儿茶素 、 表儿茶 素及 其没食子 酸脂 的一系列 聚合 体 ， 对 人 体 由 于 氧 化 引起 的 疾 病 具 有 治 疗 和 预 防 作 它 用 。由于其组分是多 种成 分 的混合 物 ， 用薄 层层 析法 只 能对其进行简单 的定性 分析 ， 光光度 法用 于测定 原花 色素 含 分 量 已有报道 ， 不同的显色条件对 含量 的计算影 响较大 Ｊ 所 但 ， 以进行进一步 的研究 ， 定合 理的显色条件具有重要 的意义 。 确 本文研究 了以香草醛 一盐酸溶 液为显色 剂 。确定 了合理 的 显 色条件 ， 具有显色时间较短 ， 操作 简易 ， 结果可靠等优点 。
表 １ 正 交实验因素 一水平表
１ 实验部分
甲醇 一盐酸体系 ， 最佳浓度 配比为 ： 香草醛 ０ １ ｇ ｌｍ （ ．５ ／Ｏ Ｌ 甲醇 ） 盐酸 ４ ５ Ｌ １ ｍ （ ， ． ｍ ／ ０ Ｌ 甲醇） 最佳显 色反应 温度 为（ Ｏ±１ ℃ ， ， ２ ） 显色时间
为 １ ｍｎ 在该条件下得 到标 准曲线 ， ５ ｉ， 线性范 围 ０ ５ ．０—３Ｏ ｍ ／ ， ．Ｏ ｇｍＬ 线性相关 系数 ０ ９ ８ 。本方法测定时间短 、 ．９ ７ 结果重现 性好 、 操作 简 便。
ＺＨＥＮＧ ｏ ｇ —ｌ Ｙｎ ｉ ，Ｌ ｅ ｇ —ｑｎ ＩＭ ｎ ｉｇ
（ ｉ ｊ ｏ ａ Ｖ ｃｔ ｎｌ ｅｈｉａ Ｃ ｌ ｇ ， ｉ ｊ ０４２ ２Ｈ ｂｉ ｎｖｒ ｔ ｏ ｅｈ ｏ ｇ ， ｉ ｊ ０３ ， ｈｎ ） １ ａ ｉ Ｂ ｈｉ ｏａｏ ａ Ｔ ｃｎｃ ｏ ｅｅ Ｔａ ｉ ３０ ０ ； ｅｅ Ｕ ｉ ｓ ｙ ｆ ｃｎｌ ｙ Ｔ， ｉ ３ １０ Ｃ ｉ Ｔ ｎｎ ｉ ｌ ｌ ｎｎ ｅ ｉ Ｔ ｏ ｍｎ０ ａ
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度 一波长 曲线 。 Ｉ２ ２ 显色条件 的确定 ．． 显色剂 的配制采用一定浓度 的香草醛 一甲醇 和盐 酸 一甲醇
溶液混合而成 ， 实验设 计了香草醛浓度 （ 、 本 Ａ） 盐酸的浓度 （ 、 Ｂ） 显色剂用量 （ 和反 应温度 （ 四个 主要 因素对 显色 时问 的影 Ｃ） Ｄ） 响， 实验设计见 表 １ 。
．ห้องสมุดไป่ตู้
ｔ ｎ ｗ ｓｄ ｔｒ ｎ ｄ ｂ ｒ ｏ ｏ ａ ｉ ｘ ｅ ｍｅ ｔ Ｔ ｅ ｐ ｏ ｅ ｒ ｐ ｎ ｏ ｆ ｖ ｎ ｌ ｎ — ｍｅ ｈ ｎ ｌ ａ ｄ ｈ ｄ ｏ ｈ ｏ ｃ ａ ｉ — ｉ ａ ｅ ｅ ｍｉ ｅ ｙ ｏ ｔ ｇ ｎ ｌ ｙ ｅ ｐ ｒ ｎ ． ｈ ｒ ｐ ｒ ｐ ｏ ｏ ｉｎ ｏ ａ ｉ ｉ － ｔ ａ ｏ ｎ ｙ ｒ ｃ ｌｒ ｃｄ — ｏ ｈ ｔ ｉ ｌ ｉ
２１ 年 ３ ００ ８卷第 ５期
广州化工
・９ ・ ｌ ７
原 花 色素 的含 量 测 定 研 究
郑永丽 李梦青 ，
（ Ｉ天津渤海职业技术学院 生物工程 系， 天津 ３００ ； ０ ４２ ２河北工业大学 化工学院， 天津 ３０ ３ ） ０ １０
摘 要 ： 对分光光度法测定原花色素含量的方法进行了深入的研究。通过正交实验确定了最佳显色条件。显色剂为香草醛 一
ｍ ｔａｌ ａ ．５ ／ ０ Ｌ ａｄ４ ５ ｍＬ １ ｍ ｔｅｒａｔ ｎｔ ｐ ｒｔｒ ｗ ｓ（ ０±１ ｏ ａ ｄｔｅｐｏ ｅ ａｔ ｎｔ ｅ ｅ ｏ ｗ ｓ １ ｍｇ １ ｍ ｎ ．０ ／ ０ Ｌ， ｈ ｅｃ ｏ ｍ ｅａｕｅ ａ ２ ｈ ０ ｉ ｅ ）Ｃ， ｎ ｒｐｒｒ ｃｉ ｍ ｈ ｅ ｏ ｉ