各种类型氨基酸分析仪性能比较一览表
氨基酸分析仪原理、分类及几种氨基酸分析仪的比较-科邦实验室
氨基酸分析仪原理、分类及几种氨基酸分析仪的比较概述氨基酸分析仪是一种分析仪器，采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法，对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。
工作原理通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸分析系统（锂盐系统），利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。
其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸，速度较快，基线平直度好；锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢，基线一般不如钠盐系统好。
应用全自动氨基酸分析仪主要应用:各种物质中18种氨基酸的定性定量分析。
1.饲料上的应用：质量控制：各种饲料必需氨基酸的含量和它们之间的比例必须恰当，测定原料和产品中的氨基酸含量，以达到保证质量的目的。
真伪鉴别：鱼粉氨基酸组成特点是赖氨酸、蛋氨酸含量高，氨基酸分析结果很容易就可以区别它的真伪。
2.农业、食品、饮料及玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测；对果汁、饮料进行真伪的鉴别；检验测定茶氨酸来鉴别真伪茶叶；对酱油级别的认定。
分类氨基酸分析仪按其分离和检测方法的不同可分为两大类型。
第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生光度法测定的经典方法（IEC）。
此类方法于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。
第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）以及阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法（IC）。
选型指南1、原理。
基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。
此类方法由Stein和Moore两人1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。
2、重要指标。
满足分析需要的技术指标如分离度、重复性等要求，而其中的分离度又是更为重要的指标，因为，色谱理论一般以分离度达到1.2作为两峰基本分离的判定前提，只有峰分开了，才有意义去讨论定性和定量的重复性。
氨基酸自动分析仪
氨基酸自动分析仪氨基酸分析仪是进行氨基酸分离、衍生和检测的自动化分析系统，广泛用于制药、食品、饲料、农业、育种、医学研究、临床诊断和地质考察等领域。
仪器类别：仪器仪表 /成份分析仪器 /氨基酸分析仪指标信息：分辨率：THR-Ser Ile-leu ≥98% 保留时间重现性：RSD≤0.5% (水解，所有峰) 峰面积重现性：RSD≤1% (水解，所有峰)1．原理测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将它们分离，采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于一定温度下（通常为115～120℃）进行显色反应，形成在570nm 有最大吸收的蓝紫色产物。
其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大吸收在440nm。
这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系符合比耳定律，可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。
2．操作方法①样品处理：测定样品中各种游离氨基酸含量，可以除去脂肪杂质后，直接上柱进行分析。
测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解，使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。
②样品分析：经过处理后的样品上柱进行分析。
上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵敏度来确定。
一般为每种氨基酸0.1μmol 左右（水解样品干重为0.3mg 左右）。
测定必须在pH5～5.5、100℃下进行，反应进行时间为10～15min，生成的紫色物质在570nm 波长下进行比色测定。
而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。
做一个氨基酸全分析一般只需1h 左右，同时可将几十个样品一起装入仪器，自动按序分析，最后自动计算给出精确的数据。
仪器精确度在±1～3%。
用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图自动分析仪氨基酸分离图谱3.结果计算带有数据处理机的仪器，各种氨基酸的定量结果能自动打印出来，否则，可用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。
全自动氨基酸分析仪的技术指标及特性
全自动氨基酸分析仪的技术指标及特性全自动氨基酸分析仪的技术指标及特性一、仪器配置全自动氨基酸分析仪:包括自动进样器、泵、检测器、分析软件、带电子制冷功能的溶液存放单元，所有缓冲液及茚三酮都有惰性气体隔离保护。
溶剂输液单元有集成四通道真空脱气装置。
分析柱或反应器具有泄漏保护、压力过高保护性能。
二、技术参数1( 分析柱电子恒温(制热或制冷)温度梯度可编程 20?,99?准确度 0.1?安全保护过热保护2( 自动进样器进样模式100μl体积可变循环进样进样体积可变; 1μl,5000μl，0.1μl增量重现性10μl 变体积进样时变异低于1% 温度控制 +5?(?1?),70?(电子恒温) 3( 分析时间蛋白质水解产物 30分钟,50分钟，自动时间控制生理体液 90分钟,180分钟，自动时间控制 4( 缓冲泵(溶剂递送单元)活塞双活塞流速 0.01ml/min,2.00ml/min 压力波动低于0.1%最大压力 40MPa (400bar，6000psi) 材料 PEEK5 检测系统检测波长 570nm, 440nm(可同时检测) 流动池体积8μl检测极限茚三酮(可见光度计)10pmol 荧光光度计3pmol6( 系统控制和数据处理软件(2软件，4通道，2接口板)用户可配置的工作站，用于数据采集和系统控制操作系统Windows 98以上，输出报告兼容Excel 软件有预置的不同格式的打印模板根据美国药典(USP)和欧洲药典(ESP)标准自动地对峰参数和数值进行计算根据预先设置，系统可多次自动进行基线校正测量过程中可以随时进行基线校正故障诊断系统，可诊断缓冲压和流速的高低等异常可支持严格的GLP要求。
全自动氨基酸分析仪法测定不同年份黄酒中游离氨基酸的含量
Table 1
时间 (min) 0 10 11 30 41 63 68 78 81 83 95 102 102.1 106.4 106.5 129.8
、气相色谱法
[15] [18]
、比色法
[16]
、高效液相色谱法
[17]
和毛细管泳法
等。这些方法在黄酒中氨基酸检
测存在定量不准确、操作繁琐等问题。 本文采用全自动氨基酸分析仪对不同年份黄酒中 游离氨基酸进行测定, 该方法可靠、准确, 并且重现性 好。 通过测定结果掌握贮藏时间对黄酒中氨基酸含量的 影响, 为黄酒的营养价值评价提供一定的参考资料。
脯氨酸全自动氨基酸分析仪法测定不同年份黄酒中游离氨基酸的含量1157各氨基酸检出限定量限精密度和回收率tabledetectionquantificationprecisionaminoacids序号中文名称英文名称检出限mg100ml定量限mg100ml相对标准偏差回收率磷酸丝氨酸phosphatidylserine001003449977牛磺酸taurine001003007969磷乙醇胺ophosphorylethanolamine001003045953尿素urea001003天冬氨酸asparticacid001003000967羟脯氨酸hydroxyproline001003苏氨酸threonine001003001978丝氨酸serine001003000982天冬酰胺asparagine00100301998310谷氨酸glutamate00100300899911氨基已二酸aminoadipicacid001003101212脯氨酸proline0010033389813甘氨酸glycine00100302796414丙氨酸alanine00100303297515瓜氨酸citrulline001003100616氨基丁酸aminobutyricacid00100397617缬氨酸valine00100300099418胱氨酸cystine00100303798319蛋氨酸methionine00100301099920异亮氨酸isoleucine00100310299521亮氨酸leucine00100319799522酪氨酸tyrosine00100300199323苯丙氨酸phenylalanine00100301292924丙氨酸alanine00100392925氨基异丁酸aminoisobutyricacid00100300290726氨基丁酸aminobutyricacid00100300498527组氨酸histidine001003213988283甲基组氨酸3methyllhistidine001003991291甲基组氨酸1methyllhistidine00100399130肌肽carnosine00100396631色氨酸tryptophan00100301999932鸟氨酸ornithine001003001100933赖氨酸lysine00100300198534精
仪器名称氨基酸分析仪
仪器名称：氨基酸分析仪数量：1套，进口用途：用于蛋白水解氨基酸和游离氨基酸的快速检测。
技术指标（标注有*的部分为重要技术条款，不能有负偏离）：*1.功能要求：采用离子交换分离、茚三酮柱后衍生法，可一次进样分离检测18种及以上蛋白水解氨基酸、和一次进样分离40种以上游离氨基酸；*2.峰分离度2.1水解标样氨基酸：全部大于1.2；2.2游离标样氨基酸：全部大于1.0；*3.检出限：天冬氨酸Asp≤3pmol（信噪比=2）；*4.重现性4.1保留时间重现性：精氨酸 CV≤0.3%；4.2 峰面积重现性：甘氨酸、组氨酸CV≤1%；5.输液系统5.1 可实现在线脱气功能；5.2 最大耐压≥30MPa；5.3 流速稳定性：RSD≤0.1%；5.4 溶液可方便稳定存放一段时间；6.自动进样器6.1样品位≥90位；6.2进样准确度：≤±1%；6.3进样范围：0.1～100.0 uL；6.4温度控制：4.0～40℃；7. 柱温箱7.1温控范围：室温～90℃；7.2温度精度：0.1℃；8衍生及检测系统8.1 570nm和440nm可同时检测；8.2 温度范围：室温～150℃；8.3衍生泵流速稳定性：RSD＜0.1%8.4安全保护功能：过热、泄漏、压力过高等9. 系统控制和数据处理软件原装进口一体化软件，可由色谱图追溯色谱条件，符合21CFR规范；三、售后服务1. 免费协助开发特殊方法；2. 公开配方，可自配试剂；也提供进口固体茚三酮及茚三酮溶液套装、进口成品试剂、国产成品试剂；3. 只要分离柱内外完整，保修期内免费重填；提供终身有偿重填服务；四、主要配置1、主机1台；2、仪器正常运行所必须的其他配件和耗材及维护包一套，至少包括水解氨基酸、游离氨基酸的分析柱各1套，进样瓶500支（含瓶盖和瓶垫），各标样2支，分析溶液及茚三酮溶液各2套，工具箱1套，各种圈\垫等。
3、市场主流品牌电脑2台、打印机1台；4、高纯氮、钢瓶、减压阀1套；5、与主机匹配的山特UPS 1台，可维持至少1小时电量。
S433D氨基酸分析仪特点介绍
茚三酮与氨基酸的衍生反应
茚三酮 + 伯胺型氨基酸 还原茚三酮 + 仲胺型氨基酸
兰紫色化ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ物 黄绿色化合物
O OH
OH O O
OH
OH O
水合茚三酮
O
R CH COOH NH2
还原茚三酮
H OH O
RCHO
O
O
H NH3
HO
O
兰紫色化合物
N O
CO2 O O
NH3
伯 胺 型
O OH
OH O
O
仲
COOH N
➢配缓冲液更简单即使所配缓冲液的pH值或离子强度略有偏差，也只
需简单的调整梯度程序。而传统的等度洗脱则必须重新配液
➢可获得更佳的分离度如果某峰附近出现干扰峰，可针对此峰进行
局部梯度调整使其不受干扰，而传统的等度洗脱只能重新配缓冲液才可分 离干扰峰，但重新配液后又会影响其它峰的分离
➢优异的定性定量重复性理论上等度的重复性更好。然而，得益于
短 繁琐 18－26种 低
高
柱后(专用仪) 高
高
长 简单 40种以上
高
低
S-433D原理图
S-433D特点介绍
带制冷功能长时间连
续分析不受环境温差影响
全部溶液惰性保护
溶液存放期更长
溶液瓶带独立阀门
可在使用过程中加液
S-433D特点介绍
内置在线脱气消除溶
液中微小气泡的不良影响
高精度梯度混合缓冲
液种类只需2－3种，配液更 简单；可获得最佳分离度； 可调整出峰顺序及保留时间， 便于研究
义仪器的最佳工作状态
谢 谢！
出类拔萃的设计和加工，sykam采用梯度洗脱时，其重复性仍优于(至少不 低于)所有竞争对手，因而sykam会采用此成本较高但却方便用户的设计
Biochrom 30+ 全自动氨基酸分析仪
蛋白水解法的两个国家标准
▪ GBT 5009.124-2003 食品中氨基酸分析 酸水解法：测定天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨 酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸 、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、 精氨酸、脯氨酸
▪ GBT 18246-2000 饲料中氨基酸的测定 酸水解法：同上 氧化水解法：测定半胱氨酸和蛋氨酸 碱水解法：色氨酸
请参看/coa/） ▪ 中国计量器具认证
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COA认证
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COA17029
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目录
1. 水解蛋白标准谱图 2. 原理及特点 3. 仪器特点介绍 4. 技术参数 5. 仪器配置 6. 仪器配套设备 7. 图谱实例 8. 总结
保留时间重复性：≤0.05% CV （精氨酸） ≤0.07% CV （丙氨酸） ≤0.1% CV （全部氨基酸平均）
峰面积重复性： ≤0.2% CV （甘氨酸） ≤0.4% CV （组氨酸） ≤0.5% CV （全部氨基酸平均）
分离度：全部氨基酸 >1.4; 平均值3.3
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Biochrom 30+特点介绍
氮气保护系统： • 防止缓冲液、衍生试剂被氧化，延长试剂寿
命 • 防止氧气进入缓冲液，导致样品中易氧化组
分被破坏，影响分析结果 • 用而不耗，节约成本 • 氮气过压保护，防止由于氮气阀没有调节好
而引起缓冲液、衍生试剂瓶发生爆炸的危险
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茚三酮： • 特殊配方生试剂无需混合，无需低温保存即可在常温氮气保护下
保存一年 柱温箱二次加热功能 • 柱温箱有预热模块，可将缓冲液在进入分离柱之前预热，使之达
氨基酸分析仪操作规程
菏泽市食品药品检验检测中心仪器设备相关记录作业指导书氨基酸分析仪操作规程文件编号：ZY(GC)-1012版次：A/O分发号：编制：日期：审核：日期：批准；日期：生效日期：年月日1、技术参数1.1 性能（以蛋白质水解液标准分析为例，共进样5次）（1）净分析时间约30分钟（2）保留时间重现性CV0.3%（精氨酸）（3）峰面积重现性CV11.0%（甘氨酸，组氨酸）（4）检出限3Pmol（信噪比=2，天冬氨酸）1.2 氨基酸分析仪主机（1）色谱柱尺寸：4.69mmID×60mm粒度：3μm树脂：日立专用离子交换树脂（2）输液泵方式：微量型串联式双柱塞往复泵压力：0-20Mpa流量：0.000-0.999ml/min(增量：0.001ml/min) (3)自动进样器进样方式：直接进样样品瓶容积：1500μl样品瓶数量：200（选配：带制冷装置，200）进样量：0.1-100μl（4）柱温箱方式：半导体制冷加热温度设定：20-85℃（增量：1℃）有断电和散热器过热保护装置（5）反应单元方式：反应柱尺寸：4.6mmID×40mm填充材料：金刚砂惰性材料温度范围：50-140℃（增量：1℃）有过热断电保护装置（6）可见光度计：单色器：消象差凹面衍射光栅波长：570nm 440nm(700nm参比)1.3 自动支持功能：（1）N2自动鼓入（2）N2压力控制（3）茚三酮回流保护装置1.4 系统管理（1）环境温度：15-35℃（2）电源 100-115V AC/220-240V,≥800VA，W/in 50/60Hz±0.5Hz2、操作步骤1．联机（1）打开电脑。
（2）打开L-8900主机电源。
（3）双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。
1-1（4）在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击联机。
大约两分钟，初始化完毕。
中Uninitialized变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。
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各种类型氨基酸分析仪性能比较一览表
常规氨基酸分析是指20种蛋白水解氨基酸和40余种游离氨基酸的分析。
氨基酸分析仪自1958年问世以来，不断借助现代化的硬件和软件更新换代，现已发展成为现代食品、饲料、生物技术、医药卫生和生命科学等行业氨基酸分析必不可少的自动化常规检测设备。
氨基酸分析仪按其分离和检测方法的不同可分为两大类型。
第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生光度法测定的经典方法（IEC）。
此类方法于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。
第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）以及阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法（IC）。
两类方法的特性比较见表1。
表1：氨基酸分析方法的分类和特性比较表[1]
说明：IEC离子交换色谱；PITC异硫氰酸苯酯；OPA邻苯二甲醛；FMOC 9-芴基甲氧羰酰氯；AQC 6-氨基-喹啉基-N-羟基琥贝酰亚胺-氨基甲酸酯；DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯
由表1可见，IEC标准方法优于HPLC非标准方法，且此类仪器为专用型自动氨基酸分析仪器。
国外氨基酸分析仪器中，基于I EC标准方法原理并按照国家计量法规规定迄今业已正式通过国家技术质量监督总局型式认证的，有日立公司的L-8800，安玛西亚公司的30系列和安米诺西斯公司的A200型三种氨基酸分析仪。
尚待通过计量认证的有Sykam和Jeol。
而提供HPLC型氨基酸分析仪器的外国厂家有沃特斯、安捷伦、岛津和戴安等。
但此类仪器用做氨基酸分析仪器时，还须首先通过氨基酸分析的计量认证。
上述三家IEC型仪器的性能和技术参数见表2。
表2：三种IEC型氨基酸分析仪主要性能和技术参数对比一览表[2]
[1] J.Fontaine, Feed Additives Division, Degussa AG, Hanau, Germany
[2]上述性能和技术资料取自国家计量认证评价报告、注册表和公司样本资料。