实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
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油镜的使用
• 先用低倍物镜寻找被观察物体 • 取下载玻片，在对应位置上滴一滴香柏油，将载 玻片放好 • 将物镜转化到油镜，此时眼睛观察物镜与载玻片 间的距离 • 当物镜浸没在香柏油中后眼睛对目镜进行观察， 此时缓慢放下载物台 • 当物镜离开香柏油时再重复上述步骤3-4，直至观 察到被观察物体 • 移动载物台，选择合适的视野 • 先进后出，由外向内
2
使用油浸系提高分辨率
η=1
η=1.5
接物镜干燥系（A）和油浸系（B）的光线图
分辨率
δ=λ/2NA
•日光的波长λ=0.56μm，如果NA=1.4，则 δ=0.56/（2×1.4）=0.20μm； •如使用波长λ为0.27μm的紫外光，则 δ=0.27/（2×1.4）=0.10μm
•分辨率提高了1倍。
实验报告
• • • • • • • 实验目的 实验原理 实验材料 实验方法（或步骤） 实验结果 实验讨论 思考题
油镜的清洗
• 将载物台放到最低，先用一张擦镜纸将油 镜上的香柏油擦干净，顺一个方向 • 再用擦镜纸沾清洗液擦洗一次 • 再用擦镜纸擦一遍(干净) • 关闭电源，登记
绘图规则 圆、名、倍、注
作业
• 四张片子画图 • 光圈的作用？ • 当成像清晰时，40倍镜和油镜镜头距载玻 片大约分别为多少厘米？
实验一 显微镜油镜的使用以及细菌形态 的观察
实验目的
• 掌握油镜原理和使用方法 • 掌握绘图的规则
光学显微镜基本结构： 1. 照明灯(Lamp) 2. 聚光器(Condenser) 3. 载物台和切片夹 (Mechanical stage and specimen retainer) 4. 推进器(Mechanical stage adjustment knob) 5. 物镜(Objectives) 6. 粗细螺旋(Course and fine focus knob) 7. 目镜(Oculars) 8. 照相机等接口 (Connection to camera, etc.)
显微镜油镜的使用及细菌观察
显微镜油镜的使用及细菌观察一、实训目的能利用显微镜油镜观察细菌的基本形态和特殊结构，并会进行显微镜的保养。
二、实训器材显微镜、香柏油、乙醇乙醚(乙醇与乙醚的比例为3∶7)、擦镜纸、细菌染色标本片。
三、实训内容1．调试（1）将显微镜放置在洁净平稳的实验台上，绸布叠放整齐。
（2）打开电源开关和灯的开关，检查灯的亮度是否可以调节。
（3）尽量升高聚光器，放大光圈。
2．选择油镜（选好后使其正对通光孔）（1）长度最长；（2）放大倍数最大（100×）；（3）白色线圈标志；（4）“油”或“oil”字样标志。
3．放置标本片（1）正面朝上；（2）加油于待检部位滴加一滴香柏油，保持滴状，不要涂开。
4．镜检（1）第一步眼睛从镜筒侧面注视油镜头，转动粗调节器上升载物台，直至油镜头浸入油中，并与玻片相接触。
（2）第二步眼睛观察目镜，转动粗调节器使载物台缓慢下降，待看到模糊物像后，换成细调节器微调（转动1-2圈即可），直至物像完全清晰。
先粗后细观察内容：形态、大小、颜色、排列，尝试手绘或用相机进行拍照。
5．保养（1）灯高度调至最低，关上电源和灯的开关；（2）取下标本片；（3）擦拭镜头 3步走（干→湿→干）：干净擦镜纸擦拭→加少量乙醇乙醚后擦拭→干净擦镜纸擦拭。
每次用2-3片擦镜纸。
（4）擦拭完毕，把低倍镜转至中央，高倍镜和油镜与通光孔成“八”字形。
（5）将电源线折叠好，放在载物台上。
（6）将显微镜用绸布包好，放回原处。
（7）填写使用记录本。
实验报告内容：1．显微镜的使用方法2．画出细菌的形态和排列方式，最好用彩笔或标明细菌颜色。
参考图片：。
实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察目的要求
细菌三型、金黄色葡萄球菌、链球菌、变形 杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、破伤风梭菌、 炭疽杆菌、园褐固氮菌、霍乱弧菌等固定装 片
实验程序Ⅰ（显微镜的使用）
主要是油镜的使用
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。
2.调节光亮度
3.低倍镜观察：粗调、细调
4.
依次再进行中倍、高倍观察
5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光
镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏
油中，细调至看清物象为止。
6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。
7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去
镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残
留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体
二、基本原理
微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段， 个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作 为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或 细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、 平板计数法、光电比浊法等。
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种 特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接 计数的一种简便、快速、直观的方法。
实验六、七
培养基的制备和灭菌
一、目的要求
学习和掌握各种培养基的制备方法，其中包 括培养基的配制，包扎及灭菌技术。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及 操作方法。
二、基本原理
➢培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法 配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、生长因子以及 水分等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适酸碱度范围内才能 表现它们最大生命力，因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH 值范围。培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其组成 可分合成培养基和天然培养基。按其物理状态可分固体培养基，液体 培养基和半固体培养基。按其特殊用途可分加富培养基，选择培养基、 鉴别培养基。
实验01油镜的使用及细菌形态的观察（可编辑）
实验一油镜的使用及细菌形态的观察普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成,而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500?2000倍。
一显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分:一为机械装置,一为光学系统,这两部分很好的配合,才能发挥显微镜的作用。
1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件1镜座 ?镜座是显微镜的基本支架,它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒,它是用来安装光学放大系统部件的基础。
2镜筒 ?镜筒上接接目镜,下接转换器,形成接目镜与接物镜装在转换器下间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化,不仅放大倍率随之变化,而且成像质量也受到影响。
因此,使用显微镜时,不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm,此数字标在物镜的外壳上。
3物镜转换器 ?物镜转换器上可安装3?4个接物镜,一般是三个接物镜低倍、高倍、油镜。
Nikon显微镜装有四个物镜。
转动转换器,可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通,与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
4载物台? 载物台中央有一孔,为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器,其作用为固定或移动标本的位置,使得镜检对象恰好位于视野中心。
5推动器? 是移动标本的机械装置,它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的,好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺,构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分,在第一次检查时,可记下纵横标尺的数值,以后按数值移动推动器,就可以找到原来标本的位置。
6粗动螺旋 ?粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件,老式显微镜粗螺旋向前扭,镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜如Nikon显微镜镜检时,右手向前扭载物台上升,让标本接近物镜,反之则下降,标本脱离物镜。
实验一 显微镜油浸系的使用及细菌形态观察
实验一显微镜油浸系的使用及细菌基本形态观察一、几点说明（五个方面）1、点名、分组、确定每组的负责人。
第一次微生物实验，点名认一下人，点到谁的名字，举手答一个到。
每人有一个实验编号，编号都写在桌子上，是几号就坐在几号座位上。
分发实验物品时由每组的负责人分发。
另外一共30个人，共分成五组，分组情况写在黑板上。
2、值日安排。
实验结束后值日的组打扫卫生，一次轮一组，今天是第一组值日。
3、预习实验内容：上课前预习实验内容，要求至少提前十分钟到实验室，抄写板书（实验内容和作业），并为上课做准备。
4、本学期的微生物学试验的内容：共分七次试验分别为：实验一（油镜使用及细菌基本形态观察），实验二：细菌抹片染色。
实验三：培养基制备。
实验四、五：细菌分离培养、结果观察。
实验六：青贮料微生物或病料采集、包装和运送。
实验七：主要病原菌的认识。
5、交实验报告：学习委员每次收作业的时间是实验后的第二天，确认在第二天下午上班时间交到畜牧楼212许老师办公室，如果办公室没有人，就放在门头上，稍微露出一点儿以便老师及时发现。
二、实验须知。
1、防病原微生物传播。
咱们这间实验室有一点儿是跟其它实验室是不同的，就是安全要求特别严格，咱们这里是微生物实验室，由于实验需求，里面存在一定的病原微生物是难免的，也是必要的，所以同学们每次上课都要穿上白大褂，进入实验室以后，不要吃东西，不要用手揉眼，有咬笔杆儿习惯的同学在这里头也要控制一下自己。
这不是对咱同学们要求苛刻，而是为同学们自身的安全着想。
（1）实验室中宜着工作衣帽，如沾有可传染的材料，应脱下浸于消毒药水中（如5%石炭酸等）过夜或高压灭菌后再进行清洗。
如果出现菌液污染实验台的情况，也要用四层次5%石炭酸纱布盖住过夜。
（2）沾有病原微生物的器皿及废弃培养物，应置于指定的地点，先消毒后再进行洗涤；检查用过的动物尸体、脏器、血液等，应严加高压灭菌消毒、掩埋处理，防止病原微生物的散播。
（3）接种环、接种针用前用后必须置火焰中灼烧灭菌以免使用过程中的不同种细菌之间的混杂，导致试验操作的污染。
实验一-显微镜油镜的使用和细菌形态和构造的观察
数目，不规则地堆在一起的形态
2024/4/16
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• ②杆菌：包括单杆菌、双杆菌、链杆菌 • 短杆菌：又称球杆菌，如大肠杆菌
• 链杆菌：注意其成链状排列，链的长短 ，菌体的外形、大小，菌端的形态，如 乳酸链杆菌、炭疽杆菌
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• 2、油镜的认识、使用原理和使用方法 • 油镜的认识 • 油镜的使用原理 • 晶片细小，进入的光线有限 • 光线因折射而损失 • 加入折射率相等的油，避免折射， 减少光线损失，使视野明亮
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• 油镜的使用方法 • 低倍镜对光：包括 升高聚光镜，开大光
圈，调好反光镜 • 将标本片置载物台上，在标本片上滴加
实验一 显微镜油镜的使用和细菌形 态和构造的观察
• 一、目的要求
• 1．认识细菌的基本形态和一些构造 • 2．通过细菌标本片观察，进一步熟悉光学
显微镜的使用，特别是显微镜油镜的使用 原理、使用方法及保护。
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二、内容
• （一）显微镜的构造和使用 • 1、显微镜的构造
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一滴香柏油 • 转换油镜头，使其侵入油滴中 • 转动粗螺旋至看到物象 • 转动细螺旋至物象清晰
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• 油镜的保护 • 油镜使用过后，用擦镜纸蘸少许二甲
苯溶解并擦拭去油渍，然后再用干净 的擦镜纸拭净镜头。
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（二）细菌的形态
• ①球菌：包括链球菌、葡萄球菌 • 链球菌：注意其链状排列，链的长短，
光镜下大肠杆菌
光镜下链杆菌
spor
芽胞
es
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枯草芽胞杆菌
实验一显微镜的使用及细菌形态观察
人眼的分辨能力在0.2 mm左右，因此光学显微 镜的最大有效放大倍数（使用油镜）是1,000×到 1,500×。
奥林巴聚光器)升至最高 ②光圈打至最大 2.在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区
域，然后将油镜转到工作位置。 3.在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面 注视，用粗调节器使油镜浸在镜油中并几 乎与标本相接。
用显微镜油镜观察操作方法
香柏油
乙醚乙醇 混合液
用显微镜油镜观察操作方法
4.然后用细调节器调节，在目镜下找到最合 适的观察点进行观察。 5.油镜使用后：上升镜筒，取下标本片。本 组同学都观察完毕后，用吸水纸将标本片 上的香柏油擦拭干净。
显微镜油镜观察操作方法
6.油镜观察完毕后要“三擦”： 首先用擦镜纸擦掉油镜头上的香柏油； 用擦镜纸蘸取少许乙醇乙醚混合液拭去油镜头 上的油渍； 再用擦镜纸拭净镜头上的乙醇乙醚混合液； 7.最后在载玻片上先滴上醇醚混合液，再用吸水 纸将香柏油、醇醚混合液擦拭干净。
画图注意事项
1.以圆圈表示视野； 2.注意菌体大小比例合适； 3.标出菌体颜色，显示典型排列方式； 4.特殊结构标出菌体和特殊结构所在位置。
大肠杆菌 （革兰氏阴性菌）
葡萄球菌（革兰氏阳性）
油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光线由反光 镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空 气与玻片的密度不同，使光线受到曲折， 发生散射，降低了视野的照明度。若中间 的介质是一层油（其折射率与玻片的相 近），则几乎不发生折射，增加了视野的 进光量，从而使物象更加清晰。
油镜使用的原理
香柏油与玻璃的折射率相近。很多原 来由于在透镜及载片表面的反射和折射而 损失的光线可以进入物镜，使照明亮度提 高，改善观察效果。
若中间的介质是一层油其折射率与玻片的相近其折射率与玻片的相近则几乎不发生折射增加了视野的进光量从而使物象更加清晰
实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
实验一显微镜油镜的使用和细菌形态的观察本次实验主要介绍了显微镜油镜的使用以及细菌形态的观察。
显微镜是生物科学中最基本最必要的仪器，也被称为生命科学研究的窗口。
而观察细菌形态则是微生物学重要的研究内容之一，对于深入了解微生物的特性和分类十分关键。
一、显微镜油镜的使用1、准备工作在使用显微镜前，需要对仪器做一些准备工作，具体如下：（1）检查显微镜是否清洁干净。
使用棉花棒和无水酒精擦拭镜头和接口。
（2）插入镜片，拧紧螺丝。
注意，平光镜的凹面朝上。
（3）透镜的高度应调整至最高点，油镜周围涂上润滑油。
（4）在准备好玻片后，使用无菌针将样本划到玻片上。
2、操作步骤（1）将玻片插入载置物台。
调整光源，使其在镜片下方成圆形状。
（2）使用低倍放大的物镜，在载置物台下调整样本位置，然后转动焦点，调整到最清晰的位置。
（3）切换到高倍物镜。
在不移动载置物台的情况下，调整焦距直至视野内的细胞详细可见。
（4）将油镜轻轻接触载置物台上的镜片，调节光源以得到最佳观察效果。
（5）旋转调节管，使细胞从上到下等比例进入视野，观察细菌的形态、大小、数量等。
二、细菌形态的观察1、细菌分类根据细菌的细胞形态、大小、结构和移动方式等特征，可以将细菌分为不同的分类。
细菌形态既包含单细胞长条状物、圆球体等基本形态，又包括复杂的细胞、菌株组成的群体等。
常见的细菌形态有以下几种：（1）球菌（cocci）：球形或椭圆形的细胞。
（2）杆菌（bacilli）：棒状或柱状的细胞。
在实验过程中，使用显微镜观察样本，发现细菌形态上虽然存在一定的差异，但一般表现为以下情况：（1）球菌或细圆菌：呈球形，直径一般在0.5-2μm之间。
（3）螺旋菌：呈螺旋形，长度几乎无限制，直径0.5-1μm左右。
然而，即使细菌大小、形态有所不同，它们的细微结构也存在着明显的相似性，这种结构相似性在分类学上具有相当的意义。
细菌形态的观察是微生物学中非常重要的基础工作，通过观察细菌的形态、大小、数量等，能够更好地了解微生物的生长繁殖规律，对于深入研究微生物的特性、分类以及对环境的影响等方面具有非常重要的价值。
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目的要求 显微镜油镜使用的原理 实验材料 实验程序 思考题
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1
目的要求
学习并掌握显微镜油镜的使用技术及维 护的基本知识
使用油镜观察细菌的几种基本形态
用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的 运动
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2
显微镜油镜使用的原理
普通光学显微镜 欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜 欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜
15. 放入保存箱中。
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14
欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜Ⅰ
相差显微镜的工作原理
相差显微镜具有一个特殊的 由环状光圈与聚光镜组合的 转盘聚光镜，通过这个特殊 的装置，就可把光波的相位 差异变为振幅差异，从而使 人们肉眼即能观察到活细胞 的细微结构，并有立体感。 常用来观察活细胞结构，鞭 毛的运动等。
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微
镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。
：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
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实验程序Ⅲ
细菌运动性的观察（示范）： 一般采用水浸片法、悬滴法、 半固体培养法，常用水浸法 和悬滴法来观察细菌的运动 性。 1. 水浸片法
2. 悬滴法
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11
欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜Ⅰ
OLYMPUS生物显微镜是由日本进口 的一种双筒光学显微镜，它使用方便， 分辨率高，并且有立体感。是目前研 究微生物的良好工具。
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3
普通光学显微镜Ⅰ
显微镜的构造
1.光学部分:接目镜 、
接物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它 使检视物放大,造成物象.
2.机械部分:镜座、镜
臂、镜筒、物镜转换器、 载物台、载物台转移器、 粗调节器、细调节器等部 件.它起着支持 调节 固定 等作用.
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4
普通光学显微镜Ⅱ
6. 旋转相差转盘 7. 中心调节 8. 相差观察
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思考题
油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？ 应特别注意些什么？
使用油镜时，为什么必须用镜头油？
镜检标本时，为什么先用低倍镜观察， 而不是直接用高倍镜或油镜观察？
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实验一
结束
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可单手拿，更不可倾斜拿。
6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而
腐蚀镜片。
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实验程序III
细菌三种基本形态的观察：
菌落形态观察和个体形态观察，这里主要指 个体形态的观察。 1. 结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球 状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。 2. 看示范镜：观察双球菌、四联球菌，并绘图。
显微镜的结构
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录像演示
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欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜Ⅱ
（显微镜的使用方法 ）
1. 接通电源。 2. 打开主开关。 3. 移动电压调整旋，使亮度 适中。
4. 把标本固定在再物台上。 5. 放松粗调锁挡。 6. 用低倍物镜，旋转粗调和 微控制钮来进行对焦。
7. 调节双目镜筒间距和视度 差。
油中，细调至看清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去 镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残
留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体
全部复原。
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实验程序Ⅱ（显微镜的使用）
显微镜保养和使用中的注意事项：
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。
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普通光学显微镜Ⅲ
油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当 光线由反光镜通过玻片与 镜头之间的空气时，由于 空气与玻片的密度不同， 使光线受到曲折，发生散 射，降低了视野的照明度。 若中间的介质是一层油 （其折射率与玻片的相 近），则几乎不发生折射， 增加了视野的进光量，从 而使物象更加清晰。
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实验材料
显微镜（显微镜灯）、香柏油、二甲苯、 擦镜纸、吸水纸等。
细菌三种形态的染色标本。
培养12—18h的枯草杆菌（B.subtilis)
盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。
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实验程序Ⅰ（显微镜的使用）
主要是油镜的使用
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光 镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏
2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证
光洁度
3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用
油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可
使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。
4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，
以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼，左手托镜座，不
相差显微镜的装置
1. 环状光圈 2. 相差物镜（具有环状 相板） 3. 定中心望远镜（亦称 辅助目镜） 4. 辅助固定扳手 5. 绿色滤光片
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欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜Ⅱ
相差显微镜的使用方法
1. 相差装置的安装 ：转盘聚光镜 绿色滤光片 2. 相差物镜的安装 3. 安放标本 4. 对光 5. 调焦：用粗调控制钮和微调控制钮调节焦，看清 物象时为止
8. 再适当调节照明度。 9. 使焦点正确地对准标本。
10. 锁紧粗调锁挡。 11. 调节孔径光栏。 12. 依次用低、中、高倍镜 观察。 13. 油镜观察：与普通光学 显微镜方法一致。 14. 观察完毕，复原：先将 电压调节旋钮复原，关闭主 开关，切断电源，放开粗调 锁挡。油镜的处理与普通光 学显微镜方法一致。