无菌检验隔离器系统验证
USP30_1208-无菌实验----隔离系统的验证(摘译)
USP30-NF25（1208）STERILITY TESTING— VALIDATION OF ISOLATOR SYSTEMS无菌实验----隔离系统的验证（摘译可供全自动无菌检查系统参考的部分）Performance Qualifications (PQ)性能确认The PQ phase verifies that the system is functioning in compliance with its operator requirement specifications. At the completion of the PQ phase, the efficacy of the decontamination cycle and, if appropriate, the adequacy of decontaminating chemical venting are verified. All PQ data are adequately summarized, reviewed, and archived.PQ阶段要确认的是系统的运行功能符合操作人员所要求的标准。
PQ完成时，净化循环的效验以及在适当的情况下化学物品通风净化的适用性被确认。
所有的PQ数据应该进行充分地总结、回顾及归档。
Cleaning Verification— In general, cleaning is not critical for sterility testing applications. However, residual products are a concern in multiproduct testing, particularly for aggressive antimicrobial agents, because these materials could interfere with the ability of subsequent tests to detect low levels of contamination in the product.清洁确认—一般而言，清洁对于无菌检测的实施并不关键。
浅谈无菌检查用隔离器
浅谈无菌检查用隔离器摘要：通过参照《中国药典》三部（2015版），利用无菌检查法对药品，医疗器械，原材料进行无菌检查，综合检查制品的安全。
通过参照实验培养基中是否含有微生物，来断定样品中的无菌性能，在实验开展初级阶段，通过对无菌培养皿进行取样调查，利用酒精灯保护等操作方法，保证整个过程的无菌性。
在之后的发展过程中，可定向转移到干净无菌的工作台，保证整个工作室操作干净整洁。
确定整体操作符合国家标准，无菌操作应在B级背景下进行定向操作，按照A级系统中所规定的要求完成隔离器系统的定向处理。
在指定区域进行准确操作，防止出现交叉感染等状况或者出现假阴性假阳性的问题。
通过参照《中国药典》三部（2015版）中所说的要求，利用B级背景来提高实验室整体净化效率，根据系统所规定，要求重点检查实验室环境，在此过程中需要投入大量资金费用。
对于实验区域，需要与背景间进行隔离，防止出现污染风险。
无菌检查室是为实验提供无菌环境，能够较好的降低微生物污染的风险，防止实验试剂和设备出现污染，更好的增强无菌检查室试验结果的准确性，在全球范围内得到有效利用。
基于此，本篇文章对无菌检查用隔离器进行研究，以供参考。
关键词：无菌检查；隔离器；应用分析引言无菌检查用隔离器能够将检验环境与外部的人员和环境完全隔离开来。
它不只配备单独的高效过滤器和空气处理单元，还配备过氧化氢灭菌系统，能对舱体内表面和设备表面进行灭菌，可达到生物指示剂下降6个对数级甚至更低水平的效果，因此可以避免实验用物品和辅助设备被污染，提高无菌试验结果的准确性。
汽化过氧化氢的灭菌循环包括预处理、充气、保压灭菌和通风4个阶段。
①预处理阶段：对管道、蒸发器和舱体进行预热去湿，防止过氧化氢气体冷凝；②充气阶段：往舱体内注入汽化过氧化氢，直至达到饱和状态，对微生物有杀灭作用；③保压阶段：维持汽化过氧化氢的饱和状态，以实现对灭菌表面的持续覆盖和对微生物的杀灭作用；④通风阶段：将残留的汽化过氧化氢通过催化过滤器排至室外，直至其浓度小于1×10-9并无异味。
ZW无菌检验隔离系统再确认方案
ZW-SV1800型无菌检验隔离系统再确认方案拟定人：日期：审核人：日期：日期：批准人：日期：目录一、概述 (3)二、目的 (4)三、范围 (4)四、依据 (4)五、确认小组成员及职责 (4)六、确认前准备 (5)1、文件起草及培训 (5)2、文件确认 (5)3、仪器、仪表的确认 (5)4、文件管理规范 (5)5、风险评估 (6)七、确认内容 (9)1、ZW-SV1800型无菌检验隔离系统安装确认 (9)2、ZW-SV1800型无菌检验隔离系统运行确认 (9)3、ZW-SV1800型无菌检验隔离系统性能确认 (11)八、偏差分析处理要求 (21)九、确认结果评价与结论 (21)十、附件 (21)一、概述本公司化验室洁净区安装有ZW-SV1800型无菌检验隔离系统，该仪器由温州维科生物实验设备有限公司生产。
主要用于我司产品等无菌检查相关的检验。
ZW-SV1800无菌检验隔离系统采用屏蔽的双门隔离技术，配置的自动灭菌系统，能对无菌检验隔离系统进行有效灭菌，可创造动态的、持续有效的高洁净度空间；完全隔离的舱体屏障对操作人员提供了安全有效的防护，并将操作人员彻底地从传统的洁净室里解放出来；无需庞大的净化系统支持，从而大大降低运行成本；无菌检验隔离系统内外完全的隔离，可使隔离舱在一般清洁环境中随意移动，创建了一个“可移动的微型实验室”。
隔离舱可广泛应用于药品、生物制品的无菌检查；无菌分装。
无菌隔离器主要由舱体、高效过滤器、离心风机、高压风机、手套、灭菌支架、温湿度传感器、压差表、集菌仪、显示屏、PLC控制系统、软件程序、针式打印机、微差压传感器、报警装置、照明装置及控制部分等组成。
主要技术参数：环境温度：18～26℃相对湿度：30%～ 70%安装位置：无菌室设备编号：QC-09-03电源：AC220V±22V/50Hz±1Hz额定功率：2500W温度分辨率：0.1℃湿度分辨率：0.1%RH高效过滤器过滤效率：99.995% 小时泄漏率：Q/V≤0.5%舱内净化级别：A级（静态）压差分辨率：0.1Pa隔离器内压力控制范围：10～80Pa物料门直径：415mm灭菌剂：过氧化氢溶液（30%分析纯）杀灭率：对嗜热脂肪芽孢杆菌的杀灭能力达到6-logZW-SV1800无菌检验隔离系统工作原理（图1-1）：隔离舱在密闭的条件下，除湿系统使舱内形成一个低湿度的环境，通过过氧化氢发生器向舱内注入过氧化氢蒸汽，在一定浓度与时间的条件下进行灭菌，使舱内形成无菌环境。
全封闭式无菌检测系统验证
五、性能确认
性能确认内容3 无菌性确认 • 目的 –无菌薄膜过滤器的无菌保证水平，需通过确认过的灭菌工艺 来完成。 –验证方除了要求无菌薄膜过滤器制造商提供每批培养器出厂 无菌检验结果的证明外，重点对过滤器制造的灭菌工艺进行 验证，保证采用经过确认过的灭菌程序使整批封闭式薄膜过 滤器无菌保证水平不大于10-6，达到无菌保证。 • 验证过程及准备工作、结果判断 –同微生物恢复生长试验的阴性对照
五、性能确认
性能确认内容1
验证项目 检查内容
合格标准
验证方法
一次性使用 全封闭集菌 培养器与供 试品化学相 容性试验
要求
外观检查
（某些供试品一接触滤膜, 滤膜即发生溶解、破碎、膨 胀曲皱、收缩断裂等现象， 与杯体透明材料接触，发生 应力裂纹、腐蚀等现象）
» LRV表示截留效率; » N0为供试液中的粘质沙雷菌数; » N为供试液除菌后的微生物数量
–可接受标准: –每cm2有效过滤面积的LRV值应符合制造商的规范
验证报告及结论
Add your company slogan
二、系统说明
系统组成
由集菌仪、集菌培养器两部分组成，如图
二、系统说明
系统操作方法
检测环境要求 • 用户按照批准的操作规程清洁无菌室、净化工作台、和 阳性对照菌接种区域 • 在清洁过程中充分考虑集菌仪、一次性使用全封闭集菌 培养器产品的化学相容性。如果在无菌隔离系统中进行 测试，需执行经过批准的灭菌程序
五、性能确认
性能确认内容4 集菌培养器样品过滤膜完整性确认 • 气泡点测试 –采用过滤器完整性测试仪进行测试，气泡点数值应符合制造商 的规范，但此数值需通过细菌挑战试验来确认。
无菌隔离器验证安全操作及保养规程
无菌隔离器验证安全操作及保养规程前言无菌隔离器是分离和培养微生物时必不可少的工具。
在使用无菌隔离器时，必需严格遵守安全操作规程以避免意外伤害和污染。
此外，无菌隔离器需要定期维护和保养，以确保其正常工作。
验证安全操作规程在使用之前在使用无菌隔离器之前，确保做好以下准备：•保持室内环境干燥，避免在潮湿环境下使用•检查无菌隔离器的电源及光照，确保工作正常且操作者能够清楚地看到工作区域•准备好消毒杀菌剂、无菌医用手套、面罩、护目镜等个人防护用品及消毒用品操作规程1.确保无菌隔离器工作区域外没有杂物、较高的物品和过多的人员等，以免产生安全隐患。
2.进入工作区域后，戴上无菌医用手套、面罩、护目镜等个人防护用品，同时用消毒杀菌剂清洁双手并擦干。
3.打开无菌隔离器，灯光打开并调节至合适亮度，启动UVC杀菌灯。
4.将待处理的菌落直接置于工作台上或在无菌医用手套内操作，通过操作孔以及可能的缓冲区等确保无菌条件。
5.将需要开启的仪器，如移液器，环钳等通过 UVC 杀菌灯及操作孔紫外线消毒 5-10 分钟，方可进入无菌区域。
6.操作完成后，消毒工作台表面，用消毒剂消毒工作区域。
保养规程1.建议每周对无菌隔离器进行彻底清洁和消毒。
2.将无菌隔离器内的混合沟、内部工作面板、观察口、养菌箱体等部位用消毒剂彻底清洗。
3.对无菌隔离器的各项系统进行测试，确保其正常运行。
4.记录每次保养的时间和内容，以便及时维护和更换易损件。
结语遵守无菌隔离器安全操作规程和定期维护保养无菌隔离器，是保证工作安全和提高实验效果的必要手段。
因此，操作者需深刻理解并严格遵守上述安全操作规程和保养规程。
无菌检验隔离器
所有传入隔离器的物品使用汽化过氧化氢迚行表
无菌检查隔离器发展至今已经超过了40年，对于中 国，无论从法规角度还是制药企业自身的发展来看， 隔离器已经成为无菌检查的应用趋势。 如下图为无菌检验隔离器的发展趋势图
谢谢
成的污染
在容器表面存在的污染 测试环境与设施造成的污染 使用受到污染的试剂和设备 取样的产生的污染
使用隔离器优势
随着隔离器应用于无菌检查，由于受到更可控环境 的保护，加强了微生物的控制，并且降低了假阳性 的发生，从而提高了测试性能。
罗氏公司-假阳性: 隔离器 VS 洁净室
使用隔离器 平均假阳性产生率 未通过审查的药品 率
根据灭菌循环工艺参数，能在较短的时间内实现6 log杀灭，幵且灭菌过程能具有重演性。如下图为 上海继伟制药设备有限公司对隔离器的灭菌曲线
操作者通过隔离器的手套对无菌检查迚行操作，
在使用前后都要对手套的完整性迚行检查，在隔 离器中应当避免使用注射器这类尖锐物 面灭菌，要确保表面灭菌效果的同时，还要考虑 过氧化氢在包装表面造成的渗透和吸附问题。
每年的损失
传统洁净室 0.5%-1.0% 1%-2%
$200,000-500,000
0% 0%
0%
使用隔离器优势
从使用成本角度考虑，在ISPE的《无菌产品生 产设施基础指南》中提到，在使用隔离器时， 运行成本大约低于传统洁净室运行成本的75%， 主要是与HVAC有关的运行成本。其他成本， 如更衣、厂房设施布局、环境监测方面也节省 了花费。
国外法规对无菌检查的相关说明
USP <1208> 无菌检查 – 隔离器系统验证 [2] “用于实施药典所规定无菌检查的隔离器从 1980年代中期就开始使用了。…… 使用隔离 器的操作者无需穿着特殊的洁净服来操作无菌 检查，标准的实验室服就足够了。…… 无菌检 查隔离器不一定要放置于定级的洁净室中，重 要的是放置隔离器的区域要对非必要人员的进 出限制管理。……房间里无需进行环境监 控。……”
无菌检验-隔离器系统验证
无菌检验——隔离器系统验证USP <1208>Sterility Testing—Validation of Isolator System/General informance这部分是用于无菌检验隔离器系统的简明验证指南（注意：在这个章节中，“已灭菌”指的是物品或者表面的微生物被清除的状态）在19世纪80年代中期，建立一个无菌检验环境的隔离器就已经开始使用。
隔离器可以通过密封的方法或者采用过滤除菌空气保持正压的方法，创造一个无菌的环境。
当隔离器处于密闭状态时，仅仅能够在隔离器内部和快速传递仓传递物品；当隔离器打开时，允许通过一个特殊设计的并经过验证可以避免污染物进入的开口递出物品。
隔离器采用柔软的塑料（例如聚氯乙烯）、硬塑料、玻璃或不锈钢制造。
由于隔离器系统从根本上避免了分析人员与物品的直接接触，因此在无菌检验操作时可以避免物品和辅助设备被污染。
当隔离器内部与环境完全隔离时，隔离器内部的物品是无菌条件下的传递。
操作者穿着半身衣在隔离器内部进行无菌操作，半身衣是连接在隔离器墙体上的柔软的部分，操作者穿着半身衣有足够的范围在隔离器内部进行操作，操作者也可以通过连接在隔离器墙体上的袖子和手套进行操作。
在隔离器中，不要求操作者穿着特殊的无菌衣进行操作，允许操作者穿着标准的实验室服装进行操作。
为确保隔离器内部无菌。
使用杀孢子剂对隔离器内部进行灭菌处理。
隔离器设计和建造空气处理系统用于无菌检验的隔离器需要配备除菌过滤器（HEPA过滤器是被要求的）。
静态时，要求隔离器尘埃粒子符合美国联邦标准209E的100级空气质量要求（看洁净室微生物评价和其他环境控制《1116》）。
动态时，不要求隔离器符合100级空气质量要求，不要求隔离器内部的空气流速或者空气交换频率。
隔离器系统是要求防止泄漏的，然而，它不是通常意义上的防止隔离器与外界环境进行的空气交换。
当与外界环境直接相连的门打开时，隔离器内部的正压保证隔离器内部的无菌环境不被污染。
隔离器在无菌检验中的应用分析
隔离器在无菌检验中的应用分析摘要：无菌检查是无菌药品质量控制的关键项目，对检测环境和检测人员操作都有相当高的要求。
由于供试品在无菌生产过程中被污染为小概率性事件，因此供试品的无菌检查对检测环境的洁净级别提出了相当严格的要求。
为避免人员带来的污染，许多单位都选择无菌隔离器来规避污染风险。
本文对隔离器在无菌检验中的应用进行了阐述。
关键词：隔离器；无菌检验；应用1导言在即将颁布的中国药典2015年版中，首次提到了无菌检查隔离器。
本文结合了国内的技术条件，详述了无菌检查隔离器的相关验证要求。
在这样的法规背景下，无菌检查隔离器越来越受到制药企业的关注，而无菌检查隔离器在可控、先进、低能耗的QC无菌检查实验室中的应用也将成为趋势。
2隔离器的类别和使用范围隔离器系统（Isolator system）是无菌制药领域的关键设备。
隔离器系统最早从二十世纪八十年代开始使用以来，逐渐完善和发展。
在近十年中，获得长足技术进步。
在2002年5月，USP微生物方面的开放会议中，仅有两项无菌技术被冠予“高级的（advanced）”名号来进行讨论：隔离器技术（Isolator technology）和吹-填-封技术（Blow-fll-sealtechnology）。
由此可见，隔离器技术在无菌制药领域的地位。
目前，在无菌制药领域中，主要有如下几种隔离器在使用，分别是无菌取样隔离器、无菌分装隔离器，无菌检验隔离器等。
3隔离系统的结构3.1屏护装置屏护装置一般采用柔韧性塑胶薄膜或刚性材质，柔韧性塑胶薄膜材质的屏护装置主要用于无菌检测隔离系统，以透明聚氯乙烯（PVC）居多。
刚性屏护装置主要用于无菌生产过程，主要材质有聚碳酸酯（PC）、丙烯酸树脂/亚克力、钢化玻璃或不锈钢。
3.2传递/转移技术常见的传递/转移技术主要有简易门、鼠洞、闸室—舱口—传递箱、装袋口、快速传输端口（RTP）以及服务系统，隔离器通常所需的服务有电源、水、气、真空、压缩空气、灭菌排水等。
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无菌检验——隔离器系统验证
USP <1208>Sterility Testing—Validation of Isolator System/General informance
这部分是用于无菌检验隔离器系统的简明验证指南（注意：在这个章节中，“已灭菌”指的是物品或者表面的微生物被清除的状态）在19世纪80年代中期，建立一个无菌检验环境的隔离器就已经开始使用。
隔离器可以通过密封的方法或者采用过滤除菌空气保持正压的方法，创造一个无菌的环境。
当隔离器处于密闭状态时，仅仅能够在隔离器内部和快速传递仓传递物品；当隔离器打开时，允许通过一个特殊设计的并经过验证可以避免污染物进入的开口递出物品。
隔离器采用柔软的塑料（例如聚氯乙烯）、硬塑料、玻璃或不锈钢制造。
由于隔离器系统从根本上避免了分析人员与物品的直接接触，因此在无菌检验操作时可以避免物品和辅助设备被污染。
当隔离器内部与环境完全隔离时，隔离器内部的物品是无菌条件下的传递。
操作者穿着半身衣在隔离器内部进行无菌操作，半身衣是连接在隔离器墙体上的柔软的部分，操作者穿着半身衣有足够的范围在隔离器内部进行操作，操作者也可以通过连接在隔离器墙体上的袖子和手套进行操作。
在隔离器中，不要求操作者穿着特殊的无菌衣进行操作，允许操作者穿着标准的实验室服装进行操作。
为确保隔离器内部无菌。
使用杀孢子剂对隔离器内部进行灭菌处理。
隔离器设计和建造
空气处理系统
用于无菌检验的隔离器需要配备除菌过滤器（HEPA过滤器是被要求的）。
静态时，要求隔离器尘埃粒子符合美国联邦标准209E的100级空气质量要求（看洁净室微生物评价和其他环境控制《1116》）。
动态时，不要
求隔离器符合100级空气质量要求，不要求隔离器内部的空气流速或者空气交换频率。
隔离器系统是要求防止泄漏的，然而，它不是通常意义上的防止隔离器与外界环境进行的空气交换。
当与外界环境直接相连的门打开时，隔离器内部的正压保证隔离器内部的无菌环境不被污染。
用于无菌检验的隔离器内部空气流可以是单向流或者湍流。
传输仓和门
隔离器有一个附属的“传递通路”杀菌器，通过传输通道杀菌器可以直接将无菌的培养基、无菌的稀释液、无菌的装备等传递进隔离器系统。
一般设计成快速传递仓或门（RTPs），通过快速传递仓或门可以把两个隔离器彼此相连，无菌的物品就能够从一个隔离器传递到另一个隔离器。
通过快速传递仓，两个隔离器或者一个隔离器和一个容器就可以在普通环境中连接。
通过密封圈或法兰，将传递仓的非无菌表面连接。
用垫圈压紧来保证气密性，避免微生物进入。
当两个传递仓法兰连接形成一个密封通道时，存在一个狭长的垫圈带，这个部位可能存在微生物污染。
因此一旦连接完，在使用传递仓传递物品之前，必须立即用杀孢子剂对垫圈暴露部分进行处理。
并且在传递物品时，应当注意无菌技巧的使用，避免物品或手套接触垫圈。
将垫圈装配在法兰上时，应当按照传递仓生产商的建议进行预防性的维护和润滑。
传递仓垫圈应当按照（生产商的）的要求定期更换并且定期检查，破损的垫圈不能够保证真正的密封。
隔离器安装位置的选择
用于无菌检验的隔离器不需要安装在洁净区，但是安装在一个限制非授权人员进入的区域仍然是重要的。
安装时，应当使隔离器周围有足够的
范围，以便移动隔离器，传递物料，以及通常的维护。
隔离器所在的房间不要求进行环境监测。
隔离器房间温度和湿度对于操作者的安全和舒适是重要的，温湿度对于除菌和净化技术的影响效果也很关键。
如果隔离器位于空气补给窗的气流通道中，当隔离器采用蒸汽灭菌时，空气气流会使隔离器个别部位温度较低形成冷凝水。
当采用对温度敏感的灭菌方法时，隔离器房间的温度应当是均一的。
隔离器系统的验证
无菌检验合格与否是产品放行的前提时，在进行无菌检验之前，隔离器系统的验证必须完成。
为了核实隔离器及其辅助设备能够用于进行无菌检验，隔离器系统的验证可以分成三个部分：安装验证、性能验证、操作验证。
在进行无菌检验隔离器系统验证过程中，应当考虑到下面的观点。
在验证程序的特定阶段（例如IQ、OQ、PQ），各个阶段试验的任务是不被确定的，在隔离器用于确定的检测前，隔离器的功能应当被验证并且有文字记录。
安装确认
IQ阶段包括隔离器系统详细的外观描述，例如隔离器尺寸、内部结构、所用的材料。
关于接触面和传递系统，要清晰的画图并标注尺寸。
设计的隔离器是否符合使用的规格需要被核实，例如空气补给、真空、外部排气、温湿度控制等。
其他与隔离器系统一起使用的设备也要详细描述；任何设计规格的修订都应当详细描述。
设备指南和复印件应当编成目录并保存，在需要的时候，操作者可以得到并重新查阅。
一旦设计规格符合性被核实，所有的图纸、方法和设备图要编成目录，保存并能够重新得到。