环境污染微生物检测
用微生物监测环境污染
污染物致突变性检测
Ames实验——组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙 门氏菌（ Salmonella typhimurium ） 原理：组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌 的回复性突变性。 成效：157 种呈阳性反应，吻合率达 90 ％。 将 108 种已知非致癌物进行测定，结果其 中 94 种呈阴性反应，吻合率为 87 ％ 。
污染物生物毒性检测
发光细菌检测法 发光细菌（ lnminescent bacteris.luminousbacteria）是一类G-、长 有极生鞭毛的杆菌或弧菌，兼性厌氧，在 有氧条件下，能发出波长为475~505nm的 荧光，多数为海生。
原理：发光细菌在生长对数期发光能力极 强，当环境条件不良或有毒物质存在时， 发光能力减弱，其程度与毒物的毒性大小 和浓度成一定的比例关系。 优点：利用发光细菌来检测有毒物质，由 于有毒物质仅干扰发光细菌的发光系统， 发光强度的变化可以用发光光度计测出， 费时较少且灵敏度高，操作简便，结果准 确。
用微生物监测环境污染
生物污染监测
生物与其生存环境之间存在着相互影响，相互 制约相互依存的密切关系，生物需要不断地直 接或间接从环境中吸取营养，进行新陈代谢， 维持自身生命。当环境受到污染后，生物在吸 收营养的同时，也吸收了污染物质，并在体内 迁移、累积，从而遭受污染，受到污染的生物， 在生态、生理和生化指标，污染物在体内的行 为等方面会发生变化，出现不同的症状或反应， 利用这些变化来反映和度量环境污染程度的方 法，称生物监测法。
SOS显色实验 原理：致突变物作于DNA所产生的某些 损伤，可诱导细菌的SOS修复系统的反映， 通过检测这些物质所致的细菌SOS修复的 能力，来查明其是否具有致突变性。 优点：SOS 显色试验对各水样的检测结果 与Ames试验基本一致；与Ames 试验相比， SOS显色试验还具有快速、简便、灵敏、 准确等特点 。
环境微生物检测
目录
• 环境微生物检测概述 • 环境微生物的种类与特性 • 环境微生物检测方法 • 环境微生物检测的应用 • 环境微生物检测的挑战与展望
01
环境微生物检测概述
定义与特点
定义
环境微生物检测是对环境中微生 物的数量、种类、分布等进行检 测和分析的过程。
特点
环境微生物检测具有多样性、灵 敏度高、操作简便等优点，能够 快速准确地反映环境中的微生物 状况。
耐受性强
霉菌对干燥、高温等不良环境 条件具有较强的耐受性。
毒素产生
部分霉菌可产生毒素，如黄曲 霉素等，对人体健康造成危害
。
酵母菌
食品中常见
酵母菌在食品中常见，如面包、酒类等，是食品发酵的主要微生 物。
有益作用
酵母菌在食品发酵中起到重要作用，可产生酒精、二氧化碳等。
无害性
大部分酵母菌对人体无害，少数种类可能引起过敏反应。
空气质量检测
检测空气中的细菌、病毒、 霉菌等微生物，评估空气 质量对人类健康的影响。
检测空气中的有害气体和 颗粒物，如二氧化硫、一 氧化碳、PM2.5等，评估 空气污染程度。
ABCD
监测空气中的花粉、尘螨 等过敏原，为过敏体质人 群提供预警。
监测空气中的放射性物质， 为核事故等突发事件提供 科学依据。
展望
新技术应用
随着分子生物学和基因组学技术的不断发 展，下一代测序（NGS）等新技术在环境
微生物检测中具有广阔的应用前景。
标准化与规范化
建立和完善环境微生物检测的标准化和规 范化体系，提高检测结果的准确性和可比
性，是未来发展的重要方向。
自动化与智能化
通过自动化和智能化的手段提高检测效率， 减少人为误差，是未来环境微生物检测发 展的重要方向。
空气中微生物的检测方法
空气中微生物的检测方法空气中微生物的检测对于环境卫生和公共健康至关重要。
微生物污染可以导致空气质量下降，引发过敏反应和传染疾病。
因此，为了保护人们的健康，科学家和卫生专家需要使用可靠和准确的方法来监测和测量空气中的微生物。
以下是一些常用的空气中微生物检测方法：1.空气采样器：空气采样器是一种用于收集空气样本中微生物的设备。
它可以通过空气中的微粒或直接通过气体来捕捉微生物。
常见的空气采样器包括活性气溶胶采样器（ASPs）和生物气溶胶采样器（BASs）。
这些设备使用采样头或滤纸等材料来捕获空气中的微生物。
2.培养方法：传统的微生物检测方法通常使用培养基来培养空气样本中的微生物。
通过将空气样本与适当的培养基接触，在适宜的温度和湿度条件下培养微生物。
然后，通过观察和计数可见生长的菌落来确定微生物的存在与数量。
3.聚合酶链式反应（PCR）：PCR是一种用于检测和复制DNA分子的分子生物学技术。
在空气微生物检测中，研究人员可以使用PCR技术来检测和鉴定空气样本中的微生物DNA。
PCR方法具有快速、敏感和特异性高的优点，可以快速确定微生物种类和浓度。
4.测序方法：测序方法可以进一步确定和分析微生物样本中的微生物种类和群落结构。
通过对微生物DNA进行高通量测序，可以获取更详细的信息，包括微生物种类、基因组组成和遗传变异。
综上所述，空气中微生物的检测方法包括空气采样器、培养方法、PCR和测序方法。
这些方法可以帮助科学家和卫生专家了解空气中微生物的种类、浓度和群落结构，从而采取相应的措施来提高空气质量和保护公共健康。
微生物限度检测环境要求
微生物限度检测环境要求
1、空气微生物限度检测环境空气洁净度要求
开展空气微生物限度检测的空气洁净度要求，根据行业标准GMP要求，室内洁净度分为A级（105）和B级（106）。
其中，A级室内洁净度指的
是每立方米空间中有105个以下的细菌数量，由于空气的流动、活动和温
度等因素，细菌数量会不断变化，所以检测时，需要空气微生物限度检测
处于稳定的状态，可以有效控制并消除外来的微生物污染，以达到空气微
生物限度检测标准，有效限定空气中微生物数量。
2、空气微生物限度检测所需要的实验设备
为了进行空气微生物限度检测，需要有足够的实验设备来支持和完成
实验。
实验设备包括：空气微生物清洁柜，可自动控制空气中微生物数量；滤膜式活性炭过滤器，有效去除空气中的细菌；空气微生物检测仪，用于
测量空气中的微生物数量；空气报警器，当检测结果超出空气微生物限度
时可及时发出警报。
此外，还需准备一定数量的金属或塑料容器，用于储
存及运输大量微生物样品。
3、空气微生物限度检测所需的实验步骤
在完成空气微生物限度检测之前，需要进行空气微生物洁净度检测和
等实验。
环境微生物监测标准操作规程
环境微生物监测标准操作规程(一)检测指征1.感染爆发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。
2.监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。
3当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或系统启用时进行检测。
4.目标性监测的需要。
5.循证医学证据支持。
二、空气监测(沉降法)(一)采样时间消毒处理后与进行医疗活动之前。
(二)采样高度距地面垂直高度80~150cm。
(三)采样点设置1.非洁净房间：室内面积≤30m2,在对角线上设里、中、外3点。
里、外两点位置各距墙1m;室内面积>30m2,设东、西、南、北四点均距墙1m。
9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。
2.洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同级别进行布点，9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30min后送检培养。
(四)采样注意事项1.采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。
进入清洁房间采样必须穿洁净服。
2.皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；皿盖应扣放，以防污染。
3.采样结束后，由外向内合上皿盖。
4.采样完毕的培养皿应在6h内培养。
(五)实验室检验1.培养皿在37℃培养48H后，进行菌落计数和致病菌检验，普通营养琼脂培养基的配置按照gb/t4789.11-2003;菌落计数方法gb/t7918.2-1987;致病菌检验；溶血性链球菌检验按照gb/t4789.11-2003,沙门菌按照检验gb/t4789.4-2003,铜绿单胞检验按照gb/t7981.4-1987,金黄色葡萄球菌检验按照gb/7981.5-1987.2.计算结果：非洁净房间以100c㎡的平皿在空气中暴露5min即相当于10L空气中的细菌数，计算公式为：细菌数(cfu/m³)=1000÷(A/100某t某10/5)某n=50000n/att-平皿暴露空气中的时间(min);n-培养后平皿上的菌落数(cfu/平皿);a-所用平皿的面积(c㎡)(六)结果判断参照GB15982-1995(医院消毒卫生标准)三、物体表面监测(一)采样时间消毒处理后4H内。
微生物检测技术在环境监测中的应用及使用技巧
微生物检测技术在环境监测中的应用及使用技巧摘要：环境监测中的微生物检测技术在近年来得到了广泛的应用，并且取得了显著的成果。
本文将重点讨论微生物检测技术在环境监测中的应用场景，并介绍了相关的使用技巧，旨在提高环境监测的效率和准确性。
引言：微生物检测技术在环境监测中的应用已逐渐成为研究热点，因为微生物是环境中最常见的生物存在形式之一，对环境质量的评估具有重要意义。
环境微生物监测可以提供关于环境健康和安全方面的信息，例如水体、土壤和空气中的微生物含量和种类分布，从而指导环境保护和污染治理工作。
1. 微生物检测技术的应用场景1.1 水体监测水体是微生物生长和繁殖的理想环境之一，因此水体监测是微生物检测技术的重要领域之一。
微生物检测可以用于评估水体的微生物污染程度、确定潜在的病原体污染源，并监测水体中的藻类和细菌等微生物群落的变化。
1.2 土壤监测土壤是微生物的重要栖息地，微生物检测技术在土壤监测中也有广泛的应用。
微生物检测可以帮助评估土壤中的微生物多样性、微生物活性以及土壤中的病原微生物含量，进而确定土壤的健康状况和土壤质量。
1.3 空气监测空气中存在着丰富的微生物，包括细菌、真菌和病毒等。
微生物检测技术可以用于监测空气中微生物的类型和数量，进而评估空气质量和检测空气传播的病原体。
2. 微生物检测技术的使用技巧2.1 样本采集与保存样本的采集与保存是微生物检测技术的重要环节，直接关系到后续检测结果的准确性。
在采集水体、土壤和空气等样本时，应遵循相关的采样规范，使用无菌工具和容器，避免污染。
对于采集到的样本，应及时冷藏或冷冻，以避免微生物的活性变化。
2.2 检测方法选择微生物检测技术包括传统培养和分子生物学方法两大类。
传统培养方法需要将样本在培养基上培养，然后观察和计数可生长的微生物。
分子生物学方法则利用特定的基因序列特征检测微生物的存在和数量。
在实际应用中，根据检测的目的和需求，选择合适的检测方法。
2.3 数据分析与解释微生物检测后产生的数据需要进行进一步分析和解释，以得到准确的结果。
空气微生物污染检验方法
空气、物表、器械、医务人员手微生物检测参考标准一、空气微生物污染检验方法采用平板暴露法操作结果计算：按平均每皿的菌落数报告：CFU/(皿·暴露时间)。
结果判断：Ⅱ环境： 手术室、供应室、计生手术室、产房、眼科治疗室 、婴儿室、≤4.0cfu/皿（15min ）Ⅲ环境 各科治疗室、处置室、ICU 、胃肠镜室、儿科病房、妇科检查室、急救室、化验室血库、口腔科。
≤4.0cfu/皿（5min ）二、物体表面微生物污染检查方法检测方法：把采样管充分震荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml ，接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20ml,36℃±1℃恒温培养箱48h ，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。
（采样面积都为100cm 2）结果计算：物体表面菌落总数（CFU/cm 2）=结果判断：Ⅱ环境： 手术室、供应室、计生手术室、产房、眼科治疗室 、婴儿室。
≤5.0cfu/cm 2平均每皿菌落数×采样液稀释倍数采样面积（cm 2)Ⅲ环境各科治疗室、处置室、ICU、胃肠镜室、儿科病房、妇科检查室、急救室、化验室血库、口腔科。
≤10.0cfu/cm2三、消毒医疗器材的检验方法检验方法：把采样管充分震荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml，接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20ml,36℃±1℃恒温培养箱48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。
检验标准1、高度危险性医疗器材应无菌2、中度危险性医疗器材的菌落数应≤20 CFU/件（CFU/g或CFU/100cm2）,不得检出致病性微生物。
3、低度危险性医疗器材的菌落数应≤200 CFU/件（CFU/g或CFU/100cm2）,不得检出致病性微生物。
（1）、高度危险性物品：手术器械、穿刺针、腹腔镜、活检钳、心脏导管、植入物等。
（2）、中度危险性物品：胃肠道内镜、气管镜、喉镜、肛表、口表、呼吸机管、麻醉机管道、压舌板、肛门压力测量导管、直肠压力测量导管等。
空气环境微生物检测报告
空气环境微生物检测报告引言空气中的微生物是指一种微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们存在于我们周围的空气中，并且常常对人类的健康产生重要的影响。
因此，对空气环境中的微生物进行检测和监测是非常重要的。
本报告旨在通过空气环境微生物的检测结果，为建筑物、办公室和其他公共场所的环境卫生提供科学依据和参考。
本报告将介绍所采用的检测方法、检测结果和相应的解读。
检测方法在本次空气环境微生物检测中，我们采用了常用的空气采样和实验室检测方法。
具体步骤如下：1.空气采样：采用空气采样仪器，在被检测的场所中进行空气采样。
采样仪器能够捕集空气中的微生物颗粒，并将其固定在采样器中。
2.样品处理：将采集到的空气样品送往实验室进行处理。
处理过程包括样品的过滤、培养基的准备等步骤。
3.培养和鉴定：将处理后的空气样品接种在适当的培养基上，并在适当的温度和湿度条件下培养。
培养一段时间后，观察培养基上是否有微生物生长。
4.结果记录：对培养基上生长的微生物进行鉴定和计数，并记录相关信息。
检测结果菌落总数菌落总数是指在特定培养条件下，培养基上形成的微生物菌落的总数。
菌落总数是评估空气环境微生物污染程度的重要指标。
根据本次检测结果，空气中的菌落总数为XXX CFU/m³。
根据卫生标准，空气中的菌落总数应该控制在合理的范围内，超过规定的限值可能对人体健康产生潜在风险。
病原微生物病原微生物是指能够引起疾病的微生物。
在空气环境中存在的病原微生物有很多种类，包括细菌、真菌和病毒等。
根据本次检测结果，我们未检测到空气中存在的病原微生物。
这说明被检测场所的空气环境相对较为安全，对人体的健康风险较低。
常见微生物类型除了菌落总数和病原微生物外，还存在许多其他常见的微生物类型。
这些微生物在空气环境中广泛存在，并且对人体的健康也有一定的影响。
根据本次检测结果，我们检测到了以下常见的微生物类型：1.细菌：XXX (例：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等)2.真菌：XXX (例：霉菌、酵母菌等)3.病毒：XXX (例：流感病毒、冠状病毒等)结论与建议根据本次空气环境微生物检测结果，空气中的菌落总数控制在合理的范围内，未检测到病原微生物，并且检测到了常见的微生物类型。
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环境微生物学
Environmental Microbiology
郑州大学生物工程系 席宇
第十章 环境污染的微生物检测
主要内容
环境污染的指示微生物 污染物生物毒性的微生物学检测方法 污染物致突变的微生物学检测方法
微生物的存在离不开环境，而微生物的数量分 布和种群组成、理化性状、遗传变异等，又是 环境状况的综合而客观的反映。
生物发光是某些生物的一种生理现象，海洋生物 中更为多见。
上世纪70年代至80年代初，国外科学家首次从海 鱼体表分离和筛选出对人体无害，对环境敏感的 发光细菌，用于检测水体生物毒性，现已成为一 种简单、快速的生物毒性检测手段。
Coliforms are several different types of bacteria that exist in the intestines of warm blooded animals and are found in bodily waste, animal droppings, and naturally in soil.
因此利用微生物我们可以指示环境状况，监测 环境污染,评价污染物毒性。
第一节 环境污染的指示微生物
指示微生物（indicator microorganism）:也称 为指示菌（indicator bacteria）是指在常规的 环境监测中，用于指示环境样品污染程度，并 评价环境污染状况的具有代表性的微生物。
绝对致死剂量：Absolute Lethal Dose ,LD100 半数致死剂量：Median Lethal Dose ,LD50 最小致死剂量：Minimum Lethal Dose ,MLD 最大耐受剂量：Maximum Lethal Dose ,LD0
半数效应浓度（Median Effect Concentration,EC50）
能够影响微生物某种正常生理指标值50%所需 的待测物质浓度,有时候也指能够引起50%的受 试生物的某种效应变化的浓度.
半数抑制浓度 （Median Inhibition Concentration,IC50） 能够引起受试生物的的某种效应50%抑制的浓度。
二、原核微生物检测方法
（一）发光细菌-生物发光抑制试验
2.粪大肠菌群（fecal coliform）
指能够在44.5 ℃(44-45℃)发酵乳糖的大肠菌群， 亦称耐热性大肠菌群(thermotolerant coliform)。
粪大肠杆菌也包括同样的4个属，但以埃希氏菌 属为主。 粪大肠菌群与粪便中大肠杆菌数目直接相关，在 外界环境中不易繁殖，作为粪便污染指示菌意义 更大
我国目前水质标准中规定的大肠菌群数（cfu/L）：
饮用水≤3
游泳池水< 100
地表水 第一级≤500 第二级≤10000 第三级≤50000
***
第二节 污染物生物毒性的微生物学检测方法
一、生态毒理学的基本概念 1.毒性的概念与检测
毒性（toxicity）:指外源化合物与肌体接触或进 入体内的易感部位后，能引起损害作用的相对 能力，毒性越强的物质造成损害所需的剂量和 浓度越低。
一、一般污染指示微生物
1.细菌总数（total bacteria count）:指环境中被测 样品，在一定条件下培养后所得的1ml或者1g检 样中所含的细菌菌落总数。
细菌总数主要反映环境中异养型细菌的的污染 度，也间接反映一般营养性有机物的污染程度
微生物总数的表 或cfu/g来表 示。
我国在食品、药品和化妆品都规定了检出标准(p387)
二、粪便污染指示菌
1.总大肠菌群（total coliform）也称为大肠菌群 (coliform 或者 coliform group)。
大肠菌群是一群需氧和兼性厌氧的，能在37℃培 养24h内使乳糖发酵产酸产气的革兰氏阴性无芽 胞杆菌，包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆 菌属、克雷伯氏菌属等。
Coliform bacteria are described and grouped, based on their common origin or characteristics, as either total or fecal coliforms.
The group of total coliforms includes faecal coliform bacteria, such as Escherichia coli (E.coli), as well as other types of coliform bacteria that can survive in soil and vegetation.
毒性的检测一般有动物试验和微生物试验
当我们以微生物为检测手段时多称为生物毒 性（biotoxicity）
微生物检测方法的原理是选择微生物的某一项或 几项生理指标作为指征，根据待测物质影响或者 抑制这些指征的程度来判断毒性的强度。
2.毒性试验的常用参数
致死剂量或致死浓度：Lethal Dose，LD或者 Lethal Concentration，LC.
cfu(colony forming unit)是指单位体积、单
位表面积或单位质量检样中菌落形成单位。
pfu(plaque formation unit ):空斑形成单位，用
于病毒、蛭弧菌的效价测定。
2.霉菌和酵母菌总数(fungi and yeast count)
指环境中被测样品经过处理，在一定条件下培养 后所得的1ml或者1g检样中所含的霉菌和酵母菌 菌落总数。 检测霉菌和酵母菌，是从另一生物学层次，反 映环境的一般污染。