重组分泌型人CREG／myc—His融合糖蛋白的表达及功能分析
人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达
人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达
人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达
目的构建重组表达人血清白蛋白(HSA)-C肽(CP)融合蛋白的毕赤酵母表达菌株.方法根据表达系统的.密码子偏好性优化CP基因,酶切连接pBlue-HSA质粒(HSA1 800bp)和CP(100bp)基因,将HSA-CP融合基因双酶切后插入分泌表达栽体pPIC9K中,重组质粒pPIC9K-HSA-CP经SalⅠ线性化后,电击转化毕赤酵母GS115,表型筛选Mut+转化子.PCR鉴定后,用甲醇诱导摇瓶分泌表达.结果融合基因约为1 900bp,序列测定正确.SDS-PAGE分析表明表达融合蛋白的相对分子量约为70kD,摇瓶培养表达量为140mg/L,Western blot鉴定显示表达的融合蛋白为HSA和CP的杂合分子.结论实现了HSA-CP融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,细胞活性研究显示HSA-CP融合蛋白对人胚肾293细胞的生长具有一定的促进作用.
作者：周利苹张莲芬雷楗勇张文婷蔡燕飞金坚 Zhou Liping Zhang Lianfen Lei Jianyong Zhang Wenting Cai Yanfei Jin Jian 作者单位：江南大学医药学院分子药理研究室,江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡,214122 刊名：生物技术通报 PKU 英文刊名：BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年，卷(期)：2008 ""(3) 分类号：Q94 关键词： C肽人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母。
重组人Era蛋白的可溶性表达纯化及生物学活性测定
重组人Era蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定吴元明, 张晓楠, 邢小红, 张俊杰, 陈南春, 陈苏民【摘要】目的: 为了取得可溶性表达的人Era（hEra）蛋白, 并检测其生物学活性。
方式: 把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆入表达质粒pMAL p2x中。
pMAL hEra转化大肠杆菌TB1, 用异丙基硫代βD半乳糖苷（IPTG）诱导表达。
结果: pMAL hEra 载体表达的融合蛋白是以可溶状态存在, 表达量占菌体总蛋白的%。
再利用直链淀粉亲和色谱柱对表达的融合蛋白进行纯化, 接着用因子X 将融合部份切除, 但切除后的hEra蛋白不稳固, 随着时刻的延长而被降解。
活性测定结果说明人Era蛋白能与GTP结合, 并具有GTP酶的活性。
结论: 可溶性表达了人Era蛋白, 并用体外实验证明人Era 蛋白是一种G蛋白, 这对人era基因的功能研究具有重要意义。
【关键词】人Era 可溶性表达生物活性测定[Abstract] AIM: To prepare a soluble human Era(hEra) protein and to measure its bioactivity. METHODS: Human era cDNA gene from pUC19 plasmid was subcloned into the expression plasmid pMAL p2x. pMAL hEra was transducted to TB1 and the strain was induced by isopropyl βD thiogalactopyranoside(IPTG). RESULTS: The expressed MBP fused protein existed in a soluble form. The fused protein made up % of the total cell lysate. It was purified by amylose affinity chromotography and digested with Factor X. Although the fused segment was dissected, the remained hEra protein was unstable in the solution with the passage of time. The activity assay showed that hEra wasa GTPase that could bind GTP and hydrolyze GTP to GDP. CONCLUSION: Human Era protein can be expressed in a soluble form and it has been proved to be a kind of G protein by the experiments in vitro. The study is important to further research into the function of human era gene.[Keywords]human Era; soluble expression; bioactivity assayera基因是1986年在大肠杆菌中发觉的, Era与人及酵母的Ras蛋白有部份相似的地方,命名为大肠杆菌Ras样（ Ras like）基因[1]。
特异性检测胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠的方法
特异性检测胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠的方法程萱;滕艳;谭晓红;王剑;孙安娜;杨晓【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2005(16)2【摘要】利用组织特异性分子标志物启动子调控Cre重组酶,研制了6种在不同组织中特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠.这些转基因小鼠的基因型鉴定均使用设计在Cre基因编码区的通用引物.为了特异性检测胰腺组织表达Cre重组酶的转基因小鼠,在大鼠胰岛素RIP启动子上和Cre基因上设计1对引物进行PCR扩增,并通过凝胶电泳进行分析.PCR结果显示,设计在Cre基因上的通用引物可以从6种不同组织特异性Cre重组酶转基因小鼠基因组DNA中扩增获得480 bp产物;利用本研究设计的特异性引物可以从胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠基因组DNA中扩增200 bp的目的条带.这一结果表明,利用特异性引物进行PCR反应,可有效地将胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠与其他多种组织的Cm重组酶转基因小鼠鉴别开来.【总页数】2页(P159-160)【作者】程萱;滕艳;谭晓红;王剑;孙安娜;杨晓【作者单位】军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.睾丸间质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 [J], 刘德鸿;沈丽萍;蔡蕾;王津津;匡颖;孙宁2.胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠的建立及鉴定 [J], 周江;程萱;吕娅歆;黄翠芬;杨晓3.平滑肌细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠Cre重组酶的表达分布 [J], 杨蕾蕾;吴壮;程萱;徐军;杨晓4.肥大软骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 [J], 侯宁;杨冠;范雄伟;吴秀山;杨晓5.Kap147/Kpn杂合启动子引导Cre重组酶在转基因小鼠睾丸组织中特异性表达[J], 刘飞; 孟军; 范立强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组人TGF-β1融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定
重组人TGF-β1融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定姜昌丽;张英起;颜真【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2006(27)3【摘要】目的: 构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)基因的原核表达载体,表达并纯化GST-hTGFβ1. 方法: 应用RT-PCR获得人TGF-β1的基因片段,成功构建人TGF-β1原核表达载体,诱导表达人TGF-β1与GST的融合蛋白;应用亲和层析法纯化重组融合蛋白,对纯化产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western Blot检测分析. 结果: 成功构建了人TGF-β1重组融合表达质粒pGEX-4T-1-TGF-β1, 表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在Mr约为39×103处出现了一条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TGF-β1抗体特异性的结合能力. 结论: 成功构建了人TGF-β1基因的原核表达载体并纯化了该基因的原核表达产物,为下一步的人TGF-β1自体疫苗的研制奠定了基础.【总页数】3页(P193-195)【作者】姜昌丽;张英起;颜真【作者单位】第四军医大学药学系生物技术中心,陕西,西安,710033;第四军医大学药学系生物技术中心,陕西,西安,710033;第四军医大学药学系生物技术中心,陕西,西安,710033【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白原核表达、纯化及鉴定 [J], 苟冶然;龙小滨;白磊;何泉;陈检;张绍城;汪德强;周建中2.重组人抗-HBs单链抗体与白细胞介素2融合蛋白的表达、纯化及活性鉴定 [J], 余宙耀;陈文吟;饶桂荣;粟宽源3.重组人酸性成纤维细胞生长因子-穿膜肽融合蛋白的克隆表达、纯化及活性检测[J], 张睿;王晓杰;王怡;田海山;焦悦;高丽昌;李婷婷;李校堃4.重组人PD-1IgV融合蛋白的克隆、表达、纯化及生物学活性检测 [J], 王伟华;张英起;颜真5.重组人Tum-5融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定 [J], 马楠;张英起;颜真因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Cre重组酶的研究进展
Cre 重组酶的研究进展收稿日期：2008-12-29基金项目：东北农业大学博士启动基金作者简介：吕涛（1982-），男，硕士研究生，研究方向为蔬菜生物技术。
*通讯作者：王勇，副教授，硕士生导师，研究方向为蔬菜生物技术。
E-mail:acaciawy@吕涛1，乔琰2，王勇1*（1.东北农业大学园艺学院，哈尔滨150030；2.沈阳市植物园景观部，沈阳110000）摘要：Cre 重组酶来源于噬菌体P1基因组中的一段DNA 序列编码的蛋白，是一种无需辅助因子即可进行位点特异性重组的生物酶。
它的发现为基因靶位操作创造了有利条件，由于其作用方式高效简单，Cre 定位重组系统已在特定基因的删除、基因功能的鉴定、外源基因的整合、基因捕获及染色体工程等方面得到了有效的利用，文章就Cre 重组酶的结构、功能、突变分析和改造及Cre 重组酶的应用潜力等方面的研究进行了综述。
关键词：Cre 重组酶；定位重组；进展中图分类号：Q55文献标识码：A文章编号：1005-9369（2009）12－0125－05Research progress of Cre recombinase/LV Tao 1,QIAO Yan 2,WANG Yong 1(1.Collegeof Horticulture,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;2.Shenyang Botanical Garden Landscape Division,Shenyang 110000,China )Abstract:The Cre recombinase,a DNA-encoded protein from bacteriophage P1genome sequence,is a kind of enzyme of site-specific reorganization without supporting factor.Its found has created favorable conditions for the operation of the gene target.Because of its simplicity and high efficiency,Cre site-specific recombination system has been widely used in gene deletion and function identification,gene site-specific integration,gene trapping and chromosome engineering,it has been used as a useful tool for biology.In the article,it summarized the study of the structure,function,mutation analysis and modification,and potential applications of Cre recombinase.Key words:Cre recombinase;site-specific reorganization;progress DNA 重组酶是在19世纪90年代被发现的，很多噬菌体和酵母都可以编码这种酶[1-2]，例如来源于噬菌体的重组酶Cre 、来自于酵母的FLP 等[3]，它们都可以在DNA 特定的位点产生作用，造成DNA 序列的插入、删除或反向。
重组人+GALECTIN-1蛋白的表达、纯化及生物活性检测
分类号密级国际十进分类号(UDC)重组人Galectin-1蛋白的表达、纯化及生物活性的检测(题名和副题名)李晶(作者姓名)指导教师姓名张英起教授指导教师单位第四军医大学药学系生物制药学教研室申请学位级别硕士专业名称生物化学与分子生物学论文提交日期2010.04答辩日期2010.05论文起止时间2008年10月至2010年4月学位授予单位第四军医大学独创性声明秉承学校严谨的学风与优良的科学道德，本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢。
申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。
论文作者签名： 日期：保护知识产权声明本人完全了解第四军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第四军医大学。
本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为第四军医大学。
学校可以公布论文的全部或部分内容(含电子版，保密内容除外)，可以采用影印，缩印或其他复制手段保存论文。
学校有权允许论文被查阅和借阅，并在校园网上提供论文内容的浏览和下载服务。
论文作者签名： 导师签名： 日期：重组人Galectin-1蛋白的表达、纯化及生物活性检测研 究 生：李 晶学科专业：生物化学与分子生物学所在单位：第四军医大学药学系生物制药学教研室导师：张英起教授辅导老师：张伟副教授关键词：人Galectin-1；表达；纯化；活性检测中国人民解放军第四军医大学2010年 05目录缩略语表 (1)中文摘要 (6)英文摘要 (9)前言 (12)文献回顾 (13)1半乳凝集素 (13)2 Galectin-1的生物化学特征 (13)3 Galectin-1的生物学作用 (15)正文 (24)实验一重组Galectin-1表达载体的构建 (24)1 材料 (24)2 方法 (29)3 结果 (35)4 讨论 (43)实验二重组Galectin-1蛋白的表达、纯化及鉴定 (45)1 材料 (45)2 方法 (46)3 结果 (49)4 讨论 (55)实验三重组Galectin-1蛋白的生物活性检测 (57)1 材料 (57)2 方法 (58)3 结果 (59)4 讨论 (60)小结 (62)参考文献 (63)个人简历和研究成果 (75)致谢 (76)缩略语表缩略词 英文全称 中文全称Amp Ampicillin 氨苄青霉素ALS amyotrophic lateral sclerosis肌萎缩性脊髓侧索硬化 AP-1 assembly-associated protein-1 装配相关性蛋白1bp base pair 碱基对BCR B cell receptor B 细胞受体 BDNF Brain-Derived Neurotrophic Factor脑源性神经营养因子 BSA bovine serum albumin牛血清白蛋白cDNA Complementary DNA 互补DNA CIA Collagen induced Arthritis胶原诱导的关节炎ConA Concanavalin A伴刀豆球蛋白ACRD Carbohydrate recognition domain 糖类识别结构域Da Dalton 道尔顿DMSO dimethylsμlfoxide 二甲基亚砜DNA deoxyribonucleicacid 脱氧核糖核酸DTT dithiotheitol 二巯基苏糖醇EAE Experimental autoimmuneencephalomyelitis实验性自身免疫性脑脊髓炎EAU Experimental autoimmuneuveoretinitis实验性自身免疫性葡萄膜炎ECM extracellμlar matrix 细胞外基质 E.coli Escherichia coli 大肠杆菌EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二胺四乙酸ERK extracellμlar signal-regμlated kinase 细胞外信号调节激酶FCS fetal calf serum 胎牛血清FGF-2 Fibroblast Growth Factor 2 成纤维细胞生长因子-2GVHD graft versus host disease 移植物抗宿主病HNSCC head and neck squamous cellcarcinomas头颈鳞状上皮细胞癌HRP HorseradishPeroxidase 辣根过氧化物酶HRP-ECL Horseradish Peroxidase electrochemiluminescence辣根过氧化物酶电化学发光His histidine 组氨酸IFN-γ interferon-γγ干扰素IL-1 interleukin-1 白细胞介素1 IL-10 interleukin-10 白细胞介素10IPTG isopropyl-β-D-thiogalactoside 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷kD kilodalton 千道尔顿LB Luria-Bertanimedium LB培养基MAPK mitogen-activated protein kinase 促分裂原活化蛋白激酶mRNA MessengerRNA 信使RNAMTT 3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-3,5-二苯基溴化四唑NC nitrocellμlose 硝酸纤维素NFAT nuclear factor of activated T cells 激活性T细胞的细胞核因子NTA nitrilotriaceticacid 氮基三乙酸OD Optical Density 光密度值ORF Open Reading Frame 开放阅读框PBSphosphate buffered solution 磷酸盐缓冲液PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应PEG polyethyleneglycol 聚乙二醇pI isoelectricpoint 等电点RAF1 receptor accessory factor 1 受体辅助因子1 RNA RiboNucleicAcid 核糖核酸rpm revolutions per minute 每分钟转速SDS Sodium dodecyl s μlfate 十二烷基磺酸钠 SDS-PAGEsodium dodecyl s μlphate- polyacrylamide gel electrophoresis 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳TEMEDN,N,N',N'-Tetramethyl ethylene diamineN,N,N',N'-四甲基二乙胺 TGF-βtransforming growth factor β转化生长因子-β Th1 helper T lymphocyte 11型辅助T 淋巴细胞Th2 helper T lymphocyte 22型辅助T 淋巴细胞TNF tumor necrosis factor肿瘤坏死因子Tris Tris(Hydroxymethyl)aminomethane三羟甲基氨基甲烷 VLA-4 Integrin alpha4beta1整合素a4β1VLA-5 Integrin alpha5beta1 整合素a5β1重组人Galectin-1蛋白的表达、纯化及生物学活性检测硕士研究生：李 晶导师：张英起 教授第四军医大学药学系生物制药学教研室，西安 710032中文摘要Galectin-1 为半乳糖凝集素(galectin)家族的重要成员之一 ，由135个氨基酸组成，与β-半乳糖苷具有特殊亲和力，常以单体和同源二聚体形式存在，表达于多种类型的细胞，在胸腺、平滑肌、肾脏、心肌、骨骼肌中含量丰富，具有重要的生物学功能。
重组人血红蛋白在哺乳动物中的表达与纯化
重组人血红蛋白在哺乳动物中的表达与纯化随着生物技术的不断进步，我们可以利用现代基因工程技术进行重组蛋白的制备和生产，其中重组人血红蛋白的制备成为了人们广泛关注的研究对象。
重组人血红蛋白的表达和纯化是重组蛋白制备的重要环节。
本文将讨论重组人血红蛋白在哺乳动物中的表达和纯化技术。
一、重组人血红蛋白血红蛋白是人体内重要的蛋白质，它负责将氧气从肺部输送到身体各个器官。
重组人血红蛋白（rHb）是采用重组DNA技术，将人体血红蛋白的基因重组进入真核细胞中表达制备得到的人工合成蛋白。
相对于自然血红蛋白，rHb具有良好的理化性质和稳定性，可用于医学和生物工程领域。
二、重组人血红蛋白的表达表达系统是制备重组蛋白的重要环节。
目前有多种表达系统可以用于rHb的表达，如大肠杆菌、酵母菌、昆虫细胞以及哺乳动物细胞等。
在这些表达系统中，哺乳动物细胞是具有重要优势的表达系统之一，因为哺乳动物细胞主要用于生物制药品的生产，可以生产高品质的产品并免除免疫问题。
常用的哺乳动物细胞包括CHO、HEK293和NS0等细胞系。
1. CHO细胞CHO细胞表达系统是目前常用的rHb表达系统之一。
CHO细胞是常用的哺乳动物细胞，其细胞核含有较高的DNA含量，能够保证高量表达。
CHO细胞经过多年的改良和优化，可以保持正常的有丝分裂周期，能够保证高效的蛋白表达和稳定的遗传修饰。
因此，CHO细胞是生产高品质rHb的理想选择。
2. HEK293细胞HEK293细胞也是一种常用的哺乳动物细胞，其主要优势在于，它们可以快速、高效地表达外源蛋白，并且表达的蛋白质具有高度的稳定性。
由于HEK293细胞存在乳酸酶和其他细胞代谢产物，可能会影响rHb的表达和纯化。
因此，需要进行一定的优化和改良，才能更好地表达和纯化rHb。
3. NS0细胞NS0是一种经过改良的小鼠骨髓发育成熟的B淋巴细胞，它们的表达系统也是rHb表达的理想选择之一。
NS0细胞具有较高的分泌能力和稳定性，可以在较短的时间内产生大量的rHb，而且在表达过程中不会发生多糖化，这对于rHb的纯化非常有利。
融合His标签的HCV包膜糖蛋白E2的真核表达及意义
融合His标签的HCV包膜糖蛋白E2的真核表达及意义杜德伟;贾战生;秦鸿雁;孙强;刘秋平;聂青和;周永兴;韩骅【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2004(29)10【摘要】目的构建HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合的真核表达载体并在CHO细胞中表达,为研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定基础.方法利用PCR技术从HCV基因组序列中扩增出编码HCV包膜糖蛋白E2的基因,将其插入原核表达载体pET28(a)载体中,构建pET28(a)-HCVE2,从pET28(a)-HCVE2上获得His-HCVE2融合基因,插入pcDNA3.1,构建表达HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1-His-E2.用脂质体介导法将pcDNA3.1-His-E2转染CHO 细胞,通过间接免疫荧光、Western blot检测融合蛋白在CHO细胞内的表达.结果转染HCV E2与His融合基因的真核表达载体的CHO细胞内有融合蛋白的表达.结论与His标签融合的HCV包膜糖蛋白E2能够在CHO细胞内表达.【总页数】3页(P904-906)【作者】杜德伟;贾战生;秦鸿雁;孙强;刘秋平;聂青和;周永兴;韩骅【作者单位】710038,西安,第四军医大学唐都医院;710038,西安,第四军医大学唐都医院;第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室;第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室;710038,西安,第四军医大学唐都医院;710038,西安,第四军医大学唐都医院;710038,西安,第四军医大学唐都医院;第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室【正文语种】中文【中图分类】R512.6【相关文献】1.HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达[J], 谢尧;陶其敏2.HCV包膜糖蛋白基因真核表达载体的构建及其在HepG2中的瞬时表达 [J], 张建敏;姚敏;吕欣;黄小军;杨敬;雷迎峰;兰海云;汪爱勤;尹文3.猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及抗E2蛋白单克隆抗体的制备 [J], 许信刚;胡建和;张彦明;张海棠;陈永耀4.逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及动物免疫试验初报[J], 许信刚;胡建和;张彦明5.HCV包膜糖蛋白E2基因的克隆、蛋白表达及纯化 [J], 杜德伟;贾战生;秦鸿雁;刘秋平;周永兴;韩骅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组融合人血清白蛋白-人白介素-2 C125A突变体在毕赤酵母中的表达
食 品 与 生 物 技 术 学 报
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ｏ ｄ Ｓ ｉｎ ｅ ａ ｄ Ｂｉ ｔｃ ｎ ｌｇ ｏ ｒ ａ ｏ ｃ ｅ ｃ ｎ ｏ ｅ ｈ ｏ ０ ｙ ｏ Ｆ
Ｖ０１ ２ ＮＯ． ．９ ４
Ｊ １ ２ １ ｕ． ００
ｃ ｓ ｒ ｃ ｈｅｅｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｐｌ ｓ ｉ ＰＨ Ｉ ｂ ｅ ｔ ｉｔｖ ｉ ｓ ｉ ｎｄ ｌｇ ｔｏｎ Ｒｅ ｏ ｂｉ ｎ ａ ｔ ｏｎ ｔ ｕ ｔｔ ｐ ｅ ｓｏ ａ ｍ ｄ ｐ ｍ ｙ ｒ ｓ ｒｃ ｉ ｅ ｄ ｇｅ ｔｏｎ ａ ｉ ａ ｉ ． ｃ ｍ ｎａ ｔｙｅ ｓ
盐、 冻干 制备 的粗蛋 白的 Ｉ － Ｌ ２生物 学 活性 为 １ ５ ｘ１ 。 Ｕ／ 。结论 ： Ｐ．ｐ ｓ ｒｓ １ ５中成 ． １ ０ Ｉ ｍｇ 在 ａｔ ｉ ＧＳ １ ｏ
功表 达 了具有人 白介素一 物 学活性 的 Ｈｓ Ｉ２ 融合 蛋 白 。 ２生 Ａ—Ｌ ｍ
关键 词 ：突变 型入 白介 素一 ； ２ 人血 清 白蛋 白； 赤酵 母 ； 毕 融合 蛋 白
文 章编 号 ： ６ ３ １ ８ （ ０ ０ ０ — ５ ５０ １ ７ —６ ９ ２ １ ） ４０ ９ — ７
重组融合人血 清 白蛋 白一 白介素一 １ 突变体 人 ２Ｃ ２Ａ ５ 在毕赤酵 母中的表 达
金 光 泽 段 作 营 张 莲 芬 金 坚 李 华钟 ¨ ， ， ， ，
Ｃ ２ Ａ 突 变的 Ｉ 一 １５ Ｌ ２编 码基 因 Ｉ 一ｍ， Ｌ ２ 通过 酶 切 连 接 方 法将 其 与人 血 清 白蛋 白（ Ａ） 编码 基 因 ＨＳ 的 连 接 为融合 蛋 白 ＨＳ Ｉ ２ 的 编 码 基 因。 克 隆 到 表 达 质 粒 ｐ Ｉ ９ 中， 击 转 化 Ｐ．ｐ ｓｏｉ Ａ—Ｌ ｍ ＰＣ Ｋ 电 ａｔｒｓ
Cre重组酶结构与功能的研究进展
收稿日期 :2002206207 ,修回日期 :2002207201 。 基金项目 :国家 863 高技术研究项目基金资助 (No. 010204203201) 。 3 通讯作者 。 Tel :86210262753062 ;Fax :86210262759652 ; E2mail :linzp @pku. edu. cn
112 Cre 重组酶的结构 在研究 Cre 重组酶的结构与功能的过程中 , Guo 等[9] 发
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韩雅玲等
重组分 泌型人 Ｃ Ｅ ／ ｖ． ｉ融合糖蛋白的表达及 功能分 析 Ｒ Ｇ ｍ ｃＨｓ
第 ８期
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６５ ・ ８
重 组 分 泌型 人 Ｃ Ｅ ／ ｃＨ ｓ 合糖 蛋 白的表 达 及 功 能分 析① Ｒ Ｇ ｍｙ ． ｉ 融
韩雅玲 孙鸣宇 郭 亮 郭 鹏 栾 波 康 建 闫承慧
并转染人 ２３ 细胞株 ， ９Ｆ 筛选稳定转染 细胞克 隆 ， 鉴定 重组 的分 泌型 ｈＲ Ｇ ｍ ｃ ｉ融合 蛋 白的糖 基修饰 和生 物学 功能 。方 Ｃ Ｅ ／ ｙ． ｓ Ｈ
法 ： Ｒ －Ｃ 用 ＴＰ Ｒ技术 扩增 终止密码突变 的 ｈ Ｒ Ｇ开放读 码框并 构建 ｐＤ Ａ ｙ． ｉ ｈ Ｒ Ｇ真核表 达载体 ；ｉ ｆ ｔ ｉｅ ０ ＣＥ ｅ Ｎ ４ｍ ｃＨｓ Ｃ Ｅ ／ Ｌｐ ｅ ａ ｎ ００ ｏｃ ｍ ２ 转染人 ２ ３ ９Ｆ细胞株并筛选稳定表达细胞克 隆 ， 去血清法诱导重组蛋 白表 达 ； 应用 Ｗｅｔ ｏ 方法鉴定 分泌型 ｈ Ｒ Ｇ ｍ ｃＨｓ ｓｒ Ｈ ｔ ｅ ｎ Ｃ Ｅ ／ ｙ－ ｉ 融合蛋 白的表达 ， 糖苷酶法及 Ｗｅｔ ｌ 行 ｈ Ｒ Ｇ ｍ ｃＨｉ融合 蛋 白的糖基化分析 ； ｓ ｒ ｂ ｔ Ｃ Ｅ ／ ｙ． ｓ ｅ ｏ ｎ 用流 式细胞周 期分析分泌型 ｈ Ｒ Ｇ ｍ ｃ Ｃ Ｅ ／ ｙ—
（ 沈阳军 区总医院全军心血管病研 究所 ， 沈阳 １０１） １ ６ ０
中国图书分 类号 Ｏ １ ． Ｒ ４ ｓ３ ２ ３ 文献标识码 Ａ 文章编号 １０－８ Ｘ（０ ）８０８ －４ ００４４ ２￣ ０－６￥０
［ 摘
要 ］ 目的 ： 构建人 Ｅ Ａ激 活基因阻遏子（ ｕ ａ ｅｕａ ｒｐ ｓ ｒ ｆ １ － ｉｌ ｔ ｅｅ ｈ Ｒ Ｇ） 因的真核表 达载体 １ Ｈ ｍ ｎｃｌｌ ￣ ｓ Ａ ｓｍｕ ｅ ｇｎ ，Ｃ Ｅ 基 ｌ ｒｅ ｏ ｏＥ ｔ ａｄ
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分泌型 ｈ Ｒ Ｇ ｍ ｃ ｉ Ｃ Ｅ ／ ｙ． ｓ Ｈ 糖蛋 白上清的 ＨＴ Ｓ Ｉ Ｙ细胞出现明显的 Ｇ 期细 胞周期 阻滞现象 （８８％ ｖ ６ ． ％， ００５ 。结 Ａ １ ５ ．８ ８ ２８ ９ Ｐ＜ ． ） ０
论： 构建 了 ｐＤ Ａ ｙ． ｍ ｃＨｓ ｃ Ｎ ４ｍ ｃＨ ｓ Ｃ Ｅ ／ Ｃ Ｅ ／ ｙ． ｉ糖蛋 白。 ［ 关键词 ］ 腺病毒 Ｅ Ａ蛋 白（ １ ） 阻遏子 ； Ｉ ＥＡ ； 真核 表达载 体 ； 糖蛋 白
Ｈｓ ｉ 融合 蛋 白对体 外 培 养 的人 胸 廓 内动 脉平 滑 肌 细胞 （ Ｉ Ｓ ） 殖 能力 的影 响。结 果 ：ＴＰ Ｒ扩 增 含终 止 密 码 突 变 的 ＨＴ Ｙ 增 Ａ Ｒ －Ｃ
ｈ Ｒ ＧｃＮ Ｃ Ｅ Ａ片段 ， Ｂｍ－ Ｉ和 Ｅ ｏ Ｄ 经 ａ Ｉ Ｉ ｃＲ Ｉ双酶切构建 了 ｐＤ Ａ ｙ．ｉ ｈ Ｒ Ｇ真核表达载体 ， ｅ Ｎ ４ｍ ｃＨｓ Ｃ Ｅ ／ 酶切及测序结果证实构建 的重 组质粒 正确； ｓ ｒ ｌ 证实转染 ｐＤ Ａ ｙ．ｉ ｈ Ｒ Ｇ的 ２３ Ｗｅ ｅ ｂｏ ｔ ｎ ｔ ｃ Ｎ ４ｍ ｃＨｓ Ｃ Ｅ ／ ９ Ｆ细胞克 隆可以稳定 表达并分泌 ｈ Ｒ Ｇ ｍ ｃＨｉ融合蛋 白； Ｃ Ｅ ／ ｙ． ｓ 糖 苷酶分 析证实分泌型 ｈ Ｒ Ｇ ｍ ｃＨｉ融合蛋 白是糖基化蛋 白； Ｃ Ｅ ／ ｙ． ｓ 流式细胞周期分析证实与正常培养 ＨＴ Ｓ ＩＡ Ｙ细胞 比较 ， 添加含有