临床微生物标本处理及操作流程
细菌室标本操作流程
细菌室标本操作流程
细菌室是进行细菌培养和鉴定的重要实验室，操作流程的规范
性和严谨性对于实验结果的准确性至关重要。
下面将详细介绍细菌
室标本操作的流程。
1. 样本接收：首先，接收来自临床的标本，如血液、尿液、脑
脊液等，标本应该在规定时间内送到细菌室，并在接收时进行标记，包括标本来源、送检医生、送检时间等信息。
2. 样本处理：接收到标本后，需要进行处理，包括标本的分装、保存和处理。
不同类型的标本需要采取不同的处理方法，确保标本
的完整性和质量。
3. 样本培养：将处理好的标本进行培养，通常采用琼脂培养基，根据标本的性质选择不同的培养基。
培养条件包括温度、湿度、氧
气含量等，需要根据不同的细菌种类进行调整。
4. 细菌鉴定：培养出的细菌需要进行鉴定，包括形态学特征、
生理生化特性、抗生素敏感性等。
通常采用显微镜观察细菌形态，
进行生化试验和抗生素敏感性试验。
5. 结果记录：对鉴定结果进行记录，包括细菌种类、数量、鉴
定方法、结果等信息。
确保结果的准确性和可追溯性。
6. 报告发放：将鉴定结果整理成报告，发送给临床医生，帮助其进行治疗方案的制定。
7. 清洁消毒：操作结束后，对实验室进行清洁消毒，确保实验室的卫生和安全。
细菌室标本操作流程需要严格遵守操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
同时，操作人员需要具备专业知识和技能，保证操作的规范性和安全性。
只有这样，才能为临床诊断和治疗提供可靠的实验结果。
临床微生物检验标准化操作
临床微生物检验标准化操作临床微生物检验是临床诊断的重要组成部分，其结果直接关系到患者的治疗方案和预后评估。
因此，标准化操作在临床微生物检验中显得尤为重要。
本文将从标本采集、实验操作、结果判读等方面介绍临床微生物检验的标准化操作。
1. 标本采集。
标本采集是临床微生物检验的第一步，也是至关重要的一步。
不规范的标本采集可能会导致检验结果的误差，影响临床诊断。
因此，在进行标本采集时，需要注意以下几点：（1）标本采集时间，标本采集的时间应符合临床需要，并且应在医生的指导下进行。
不同的微生物在不同的时间段内的检出率可能会有所不同，因此需要根据临床情况选择合适的标本采集时间。
（2）标本采集部位，标本采集部位应选择合适的部位，并且在采集前要进行充分的消毒处理，以避免外部微生物的干扰。
（3）标本容器，不同的微生物需要不同类型的容器进行采集，因此需要选择合适的标本容器，并且在采集后要及时送至实验室进行检验。
2. 实验操作。
实验操作是临床微生物检验的核心环节，其准确性和规范性直接关系到检验结果的准确性。
在进行实验操作时，需要注意以下几点：（1）实验操作环境，实验操作应在符合微生物检验要求的环境下进行，避免外部环境对实验结果的干扰。
（2）实验操作流程，实验操作应按照标准化的操作流程进行，严格控制每一个操作步骤，避免操作失误。
（3）实验操作记录，实验操作过程中需要做好详细的记录，包括标本信息、操作步骤、操作人员等信息，以便后续的结果分析和追溯。
3. 结果判读。
结果判读是临床微生物检验的最后一步，也是决定临床诊断的关键环节。
在进行结果判读时，需要注意以下几点：（1）结果解读标准，对于不同的微生物检验结果，需要根据相应的标准进行解读，避免主观因素对结果的影响。
（2）结果报告准确性，结果报告应准确无误，包括微生物的种类、数量、药敏信息等内容，以便医生进行合理的临床诊断和治疗。
（3）结果保存与追溯，检验结果需要进行有效的保存和追溯，以便后续的质控和审查。
标本采集、运送标准操作规程
4 7
血培养 淋球菌培养
立即 30分钟
1小时 30分钟
阳性结果3天以上，阴性结果7天 2天
8
真菌培养
1小时
2小时
3天后
细菌室项目检验周期表
9 解脲、人型支原体培养及药敏、衣原体培 养 1小时 2小时 2天后
11
一般涂片革兰氏染色
1小时
2小时
5小时
当天下午
12
涂片找抗酸杆菌
1小时
2小时
5小时
当天下午
Байду номын сангаас
查询申请医师，补足标本信息。
仅有申请单而无标本或无菌容器内无标本
与原送检部门联系，退回申请单，要求重送标本
标本外漏及明显受污染（如开塞） 标本收集不符合采集要求 样本混入消毒液 或防腐剂
与原送检部门联系，退回申请单，建议重送标本。 退回申请单，及时通知临床，告知正确收集方法，要求重送标本 退回申请单，及时通知临床，建议重送标本。
13
新型隐球菌墨汁染色
1小时
1小时
5小时
当天下午
• 注： 1. 细菌室正常上班时间为周一至周六
全天、周日上午；其他时间（包括中午、 夜班、周日下午、）常规培养请送急诊化 验室。 • 2．各类血清学检测周一至周五做；支原体、 衣原体检查周一至周六上午做，其余时间 标本一律不接收。 • 3． 空气培养、物表监测周六、周日不做， 于周一至周五打电话给细菌室告之数量。
【标准操作程序】
• 3. 粪便样本
养：
• 5.1采集指征： • 当腹泻患者出现以下任何一种情况时建议采集粪便标本，进行细菌培
粪便涂片镜检白细胞＞5/HP 体温＞38.5℃ 重症腹泻 血便或便中有脓液 未经抗菌药物治疗的持续性腹泻病人
临床微生物标本采集与运送标准操作流程
临床微生物标本采集与运送标准操作流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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尿液标本临床微生物实验室检验操作指南
婴幼儿尿液采集袋采集
由于婴幼儿不能自主控制膀胱收缩，需要用采集袋。此法很难避免会阴部正常菌 群的污染，易出现 假阳性，因此该方法采集的尿液培养结果阴性更有意义。如培养结 果阳性，必要时可用膀胱导尿或耻骨 上膀胱穿刺法采集尿液标本进一步确证有无尿路 感染。
其他采集方法
其他不常用的尿液采集方法还包括回肠导管导尿采集、间歇性导尿管采集、肾盂 造瘘术、输尿管造 口术、膀胱镜检查术采集等。
留置导尿管尿液采集
先消毒导尿管采集部位，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液5 mL～10 mL；如果需要， 将导管夹闭10 min～20 min后在管中采集尿标本。尿液标本不能 通过收集袋引流管口流出的方式采集。 长期留置导尿管的患者，需在更换新的导尿管 后留取尿标本。
膀胱导尿采集
局部消毒后，严格采用无菌技术使用导尿管经尿道插入膀胱收集尿液，弃去最开 始导出的15 mL~30 mL尿液后再收集尿液送检。注意避免将下尿道细菌经导管引入 膀胱，导致继发性感染。
标本拒收
收到不合格标本，建议与临床医师联系，注明拒收的原因并退回，可要求重新留取标本，并做记录。 若不 合格标本无法重新留取但临床要求培养时，应在报告中注明，并强调该培养结果仅供参考。
01 标本标识与申请单不符，标识错误或没有标识
06 导尿管尖端培养
02 未提供采集时间及采集方法
07 标本送检时容器有渗漏
尿液干化学分析（与尿路感染相关指标） ➢ 白细胞酯酶：在中性粒细胞被破坏或形态改变时，尿液中仍能够检测到 白细胞酯酶，可补充显微镜检查的不足。 ➢ 亚硝酸盐：阳性常见于大肠埃希菌等革兰阴性杆菌引起的尿路感染。 ➢ 尿蛋白：参考值为阴性，尿路感染时可为阳性。
尿液有形成分分析（与尿路感染相关指标） ➢ 仪器检测 ➢ 显微镜检查
微生物标本操作流程
微生物标本操作流程一、采集标本1.根据需要使用的微生物种类，选择采集适当的标本类型，如血液、尿液、呼吸道分泌物、伤口分泌物等。
2.采集前洗手，戴好手套，保证操作无菌。
3.根据标本类型选择适当的采集方法，如穿刺、切开、吸引等。
4.采集标本时避免污染和损伤，采集的标本量要充足，确保后续实验的需要。
5.采集后立即将标本放入合适的容器中，并用合适的保存液固定标本。
二、保存标本1.封闭保存a.无菌标本应尽快处理。
b.根据需要，选择适当的保存方式：常温、4℃、-20℃，-80℃等。
c.使用密封标本袋、离心管等避免样本污染。
d.根据需求添加保存液，如生理盐水、甘油、琼脂糖等。
2.运输保存a.标本运输前应按照需要将标本进行适当保存。
c.标本运输时需要严格遵守相关的运输规定和防护措施，避免标本在运输过程中受到污染或损坏。
三、处理标本1.无菌条件下进行标本处理。
2.打开封闭的标本容器时，应尽量减小环境污染。
3.首先进行外部检查，检查标本是否完整，有无明显破损或渗漏。
4.根据需要，将标本分为不同的试管或培养皿中，避免不同菌种相互干扰。
5.针对具体需求，对标本进行不同的处理，如离心、稀释、加酶处理等。
四、传递标本1.打开封闭的标本容器时，应尽量减小环境污染。
3.准备适当的传递容器和传递材料，避免标本在传递过程中受到损坏或污染。
4.标本传递时应尽快送至指定的实验室，避免标本在传递过程中受到温度变化、时间延误等因素的影响。
五、清洗操作区域和工具1.实验完成后，需要对操作区域进行清洁2.清洗操作区域可以使用含有消毒剂的清洁剂，如含有氯己定的漂白粉或消毒液。
3.清洗使用过的工具，如采集器具和传递容器等，使用适当的清洁剂和消毒液进行清洗和消毒，保证无菌状态。
微生物标本操作流程的重点是保持标本的无菌状态，避免标本的污染和损伤。
在每一步操作中，都要严格遵守操作规程和消毒措施，以确保标本的质量和准确性。
此外，还需要根据具体实验需求，选择适当的保存液、保存条件和传递方法。
临床微生物标本采集与运送
临床微生物标本采集与运送LG GROUP system office room 【LGA16H-LGYY-LGUA8Q8-LGA162】临床微生物标本采集与运送一、血培养标本采集、运送与报告标准操作规程一、血培养指征患者出现寒战，体温超过38℃或低体温，怀疑血流感染时，尤其存在以下情况时，应抽血做细菌和真菌培养：医院内肺炎；留置中心静脉导管超过72 h；感染性心内膜炎；骨髓炎；有严重基础疾病、免疫缺陷伴全身感染症状；临床医生怀疑有血流感染可能的其他情况。
二、采血时机一旦怀疑有血流感染可能，应立即采血做血培养，最好在抗菌治疗前或停用抗菌药物24 h后，以寒战、发热时采集为宜。
三、采血流程(一)消毒1．培养瓶消毒程序：用消毒液消毒培养瓶橡皮塞，待干燥后使用。
2．皮肤消毒程序：用消毒液从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达5 cm以上，待消毒液挥发干燥后(常需30 s以上)穿刺采血。
(二)静脉穿刺和培养瓶接种成人用注射器无菌穿刺取血后，排尽针头内空气，直接注入血培养瓶，勿换针头(如果行第二次穿刺或用头皮针取血时，应换针头)，先注于厌氧培养瓶，避免注入空气，然后注入需氧培养瓶，轻轻混匀以防血液凝固。
近年来，临床普遍采用负压血培养瓶，将血从患者静脉直接吸入血培养瓶，减少污染环节。
(三)注意事项1．检验单需注明抗菌药物使用情况、血液采集时间和部位、临床诊断等患者信息。
2．采血部位通常为肘静脉，疑为细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜，切忌在静滴抗菌药物的静脉处采血。
除非怀疑有导管相关的血流感染，否则不应从留置静脉或动脉导管取血，因为导管易被皮肤正常菌群污染。
3．采血次数：对于成年患者，应该同时分别在两个部位采集血标本，在两个不同部位分离到同样菌种才能确定是病原菌。
4．细菌性心内膜炎：在24 h内取血3次，每次间隔不少于30 min；必要时次日再做血培养2次。
5．采血量：以培养基与血液之比10：1为宜，以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。
临床微生物实验室标本处理流程详细
微生物实验室标本处理流程涂片革兰染色，其他形
态：1.弧形菌属根据标本种类标本接种后油镜下观察染色 2.弯
曲菌3.酵母菌上显板挑选可疑菌落，35°C培养，情况和细菌形
态4其他菌：鉴定参照《全国必要时可做18~24h 检验操作规
程3版》） CO2，厌氧培养 G+球菌G-球菌：主要奈瑟G-杆菌 G+
杆菌（分芽菌属和布兰汉菌属（多为污为主孢和无染，结合
临芽孢）床）触酶（+）触酶试验氧化酶触酶（-）：链球菌属
氧化酶（+）：氧化酶(-): 血浆凝固酶非发酵菌（不动，嗜肠杆
菌属麦除外）血浆凝固酶血浆凝固酶（+）（-）参照《全国
检验操作规一般采用肠杆菌属鉴定板程3版》鉴定，并做链条，
沙门志贺加做血清学球菌属药敏鉴定葡萄糖O/F F（+）：金F （-）：新生霉新生霉素参照《全国检验操作规程按照肠杆菌属
做药敏微球菌试验并报告黄色葡萄素（+）：（-）：腐生3版》
鉴定按照非发酵菌球菌葡萄球菌属做药敏试验并报告表皮葡萄
球菌备注：此图为粗略图，以全国检验操作规程3版为准按照
葡萄球标本处理：1.痰液：血板+麦康凯（插管痰注明）菌属做
药敏 2.大便：血板+麦康凯+SS平板（稀便注明）试验，报
告 3.尿：血板+麦康凯（中段尿注明，用大环取样）
4.棉签取样的标本: 血板+麦康凯(最好以生理盐水湿润后接种)
5.带菌量少的标本：需要增菌处理注意事项：接种标本后平板
注意注明接种时间和标本编号，性病衣原体筛查要留标本于冰
箱中。
支原体标本避免干燥和高温，及时处理为宜。
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细胞内微生物 成块的小的灰白的染色不规则的阳性成链的球菌 很细小的革兰氏阴性杆菌
微生物鉴定
微生物鉴定（1）
• • • • • • • • • •
血平皿上的菌落形态 革兰阳性细菌 所有的链球菌 β-溶血链球菌 α-溶血链球菌与肺炎链球菌 葡萄球菌属 肠道革兰阴性杆菌 沙门菌属，志贺菌属 假单胞菌属 嗜血杆菌属
下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimens
下呼吸道感染
Lower Respiratory Tract Infections
急性支气管炎
社区获得性肺炎 院内获得性肺炎 免疫妥协患者肺炎
下呼吸道标本
Lower Respiratory Tract Specimen
自然咳痰
诱导痰 气管内吸取物 肺部组织
支气管肺泡灌洗液 保护性毛刷
支气管灌洗液
标本质量
脓痰
粘液样痰
唾液or诱导痰 (?)
带血痰
用革兰氏染色来评估 呼吸道标本是否合格
痰标本>10鳞状上皮细胞/每低倍视野=拒收
有PMN的痰标本，中性粒细胞多，且鳞状上皮细胞特别少= 接受，进行培养
粘液丝
胞内细菌 ——提示感染
淋病奈瑟氏菌感染
挤压尿道或直接获取尿道
口分泌物；
直接涂片
如果培养，须直接接种温暖
的筛选性平板，保温并即刻 送微生物室培养。
任何不能及时送检的生殖道标本，都应采 用运送培养基采样保存。
禁止冷藏
标本采样和送检
临床常常送检脓液和渗出液的拭子给实验室做检查。风 险 标本不足量
拭子干燥
你看见多少种形态？
呼吸道标本中未被染色的，有折射的杆菌=抗酸杆菌
呈链排列的革兰阳性球菌？或革兰阳性分枝杆菌？
肺中的结节吸出物，不规则“球菌”，分叉，无短链，链的末端的呈尖状，都 证明是分枝状的革兰阳性杆菌，可能是放线菌或诺卡菌（通常来自脑或肺组织 的标本）
呼吸道标本的涂片评估模式
肺炎-可接受的 很少的鳞状上皮细胞 <10个每低倍视野 很多的中性粒细胞 不合格标本 许多鳞状上皮 >10个/低倍视野 很少有或没有中性粒细胞 免疫抑制的病人也会出现 中性粒细胞减少 评述 可以在玻片上看到许多鳞状上皮细胞，说明在 采集时受到了上呼吸道分泌物的污染或口水的 污染。 中性粒细胞和上皮细胞都很少的标本需要培养
评价尿培养的标准
病人 无症状者 有症状者，不固定的 有症状，性活跃女性 男性 标本特征 清洁留取 清洁留取 清洁留取 清洁留取 有意义菌落形成单位/ml（非皮肤污染） 100,000 10,000 1-2种机会致病菌。若多于2种则认为尿 液被污染 100个纯菌落肠杆菌科菌 1000个，机会致病菌
任何人
圈内菌落
致谢：
Ms Ellen Jo Baron
(Stanford Univ.Dept.Pathology)
Ms Janet Hindler
(UCLA Medical Center Los Angeles ,California)
提供“临床微生物实验室基本操作流程”图片资料。
谢谢!
1.
在孕期35～37周时的普查培养
a. b. c. d. 阴道和直肠拭子 肉汤过夜增菌 接种于血平板上 再孵育过夜和鉴定可疑菌落
2. 3.
任何有GBS菌尿的患者需要在分娩期做好预 防 分娩时快速检测敏感性不够
男性生殖道标本送检
男性的生殖道致病菌与女性绝大部分一致； 尿道炎通常由淋病奈瑟氏菌或非淋病奈瑟氏菌引起； 可能并发于生殖器溃疡；
微生物鉴定（2）
• 奈瑟菌属、莫拉菌属 • 不动杆菌属 • 布氏杆菌属、巴斯德菌属 • 芽胞杆菌属 • 产单核李斯特菌 • 酵母菌属
药敏试验
• 纸片扩散法药敏试验 • 特殊药敏试验
MRSA 克林霉素耐药的葡萄球菌 VISA或VRSA 青霉素耐药的葡萄球菌 超广谱β-内酰胺酶
尿液运输方法
如不能及时送检，需冷藏。
4小时延迟送检，须废弃标本。
自然排尿 是 过夜培养 否
继续培养； 随后观察；发送初步的培养阴性报告
> 105 CFU/ml
< 105 CFU/ml
24小时后仍不生长则发出 最终的生长阴性报告
纯培养的机会致病菌 （查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）
1 organism 一种以上细菌生长
临床微生物室标本处理及检验流程
Infection Control Team
The Role of the Clinical Bacteriology Lab
临床微生物检验流程示意
分 析 前
门诊 病房 诊所
不合格
留取
临床标本
SOP
环节一 环节二 环节三
+
SOP
运送
合格
IQ
标本合格 判定
标本合格？ 接种
早发B群链球菌病
1%的新生儿因母亲定植 （10-30%的孕妇）发展为 EOD 50%病死率 25%的美国女性在L&D期间 得到IV预防 长期病症包括：在30%以上的 新生儿中产生严重精神运动 发展障碍
Adriaanse et al. Neonatal early onset group B streptococcal infection: a nine-year retrospective study in a tertiary care hospital. J Perinat Med. 1996;24:531–538
三种或以上的机会致病 菌包括酵母菌
ID & Suscept.鉴定&药敏
多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本
多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清洁标本
)1-2种机会致病菌 （查阅凝固酶阴性葡萄球菌的注释）
若为腐生葡萄球菌，则处理与其他致病菌相同； 其他的凝固酶阴性葡萄球菌则视为污染
进行鉴定和药敏，若数量< 105CFU/ml， 仍然对可能的致病菌进行操作
细胞内细菌
柱状纤毛上皮细胞
肺泡巨噬细胞
滑石颗粒
见于迁延长时间的呼吸道疾病
淀粉样小体
弹性纤维
库什曼螺旋体
呈链排列的革兰阳性球菌和革兰阴性球杆菌。缺乏鳞状上 皮细胞提示混合厌氧菌感染
几种细菌的混合形态，缺乏鳞状上皮细胞=混合厌氧菌感染。 如果是呼吸道标本可能是吸入性肺炎。报告临床医生“提示 吸入性肺炎”
严格无菌操作
soap
脑脊液
CEREBROSPINAL FLUID
无菌操作，腰椎穿刺采样
最少1 mL，最好>5 mL
打入3个小管中，以第二根小管送检培养 分枝杆菌培养标本需要2 mL以上，置于4℃保存
Upper Respiratory Tract Specimens
拭子吸附细菌，难于释放到平板培养 尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样深部 伤口和特殊原因造成的伤口，如动物咬伤，应考虑厌氧培 养；
组织和抽吸物涂片检查
发现 出现鳞状上皮细胞 大量的中性粒细胞 大量的中性粒细胞染色多样染色阳性和阴性，小的细 菌 出现少量破碎的中性粒细胞和比较大的面包车样的染 色不定的杆菌 很少有中性粒细胞，但是有其他体细胞 评述 提示标本采集技术不过关；培养出来的可能是 皮肤正常菌群 如果查见细胞内的细菌，则更有意义。 混合有厌氧或兼性厌氧菌感染 可能是梭菌引起的组织坏死，紧急外科手术， 产气荚膜梭菌引起的气性坏疽 患者不能产生足够的免疫反应或微生物不能趋 化中性粒细胞（如球菌）。仍然高度怀疑细菌 病因。 细菌感染 如果分离自脓肿，提示咽峡炎链球菌（米勒链 球菌）感染。 特别是从淋巴结或组织中分离的，可能是生物 恐怖试剂（布鲁氏杆菌，耶尔森，弗朗西斯） 要在风厨中操作。平板用胶条密封在生物安全 柜中操作，不可以嗅标本。
许多不着色的有折射的杆状细 菌
尿道感染
每年850万例尿路感染, 90%为女 性 1/2.5个妇女在一生中会得UTI 下行性感染：血流肾脏膀胱 （金黄色葡萄球菌，酵母菌，结 核分枝杆菌） 上行性感染：尿道膀胱肾盂 血流
用于尿液培养的标本
肾活检或肾抽吸物（外科） 耻骨上膀胱抽吸物
鉴定&药敏
多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛；重新采集清 洁标本
1-2种机会致病菌（查阅凝固酶阴性葡萄球菌的以上相同注释
多种肠道细菌或混杂的皮肤菌丛； 重新采集清洁标本.
进行鉴定和药敏，若数量< 104CFU/ml， 仍然对可能的致病菌进行操作
若为腐生葡萄球菌， 则处理与其他致病菌相同； 其他的凝固酶阴性葡萄球菌则视为污 染
纸片扩散法-测量抑菌圈（1）
使用透射光观察 ：
Staphylococcus spp. 葡萄球菌属 linezolid利奈唑烷 oxacillin苯唑西林 vancomycin万古霉素 任何生长均有意义 Enterococcus spp.肠球菌属 vancomycin万古霉素
Light光线
纸片扩散法-测量抑菌圈（2）
计数 > 105 培养出一种致病菌 计数 > 105 培养出大于两种致病菌 计数 > 105 培养出大于两种致病菌
女性生殖道标本送检
女性下生殖道标本采集
宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣 原体，人乳头瘤病毒
肛门或直肠拭子：淋病奈瑟菌，B群链球 菌（+阴道拭子）
阴道高位拭子：酵母菌，阴道毛滴 虫，细菌性阴道感染
（孕妇，婴儿，全膀胱）
微导管尿（内部导管和外部导管）-老年人
中段尿，清洁留取——急诊成年人
留置导尿管中采集的标本（经常被三种以上细菌污染）
尿液标本
采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外
生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗
长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。